一、A study of apoptotic proteins TNFα、TNFR、Fas、FasLandBcl-2 family in chronic liver disease（论文文献综述）
Fatemeh Zahedipour,Seyede Atefe Hosseini,Neil C.Henney,George E.Barreto,Amirhossein Sahebkar[1]（2022）在《Phytochemicals as inhibitors of tumor necrosis factor alpha and neuroinflammatory responses in neurodegenerative diseases》文中研究指明Inflammatory processes and proinflammatory cytokines have a key role in the cellular processes of neurodegenerative diseases and are linked to the pathogenesis of functional and mental health disorders. Tumor necrosis factor alpha has been reported to play a major role in the central nervous system in Alzheimer’s disease, Parkinson’s disease and amyotrophic lateral sclerosis and many other neurodegenerative diseases. Therefore, a potent proinflammatory/proapoptotic tumor necrosis factor alpha could be a strong candidate for targeted therapy. Plant derivatives have now become promising candidates as therapeutic agents because of their antioxidant and chemical characteristics, and anti-inflammatory features. Recently, phytochemicals including flavonoids, terpenoids, alkaloids, and lignans have generated interest as tumor necrosis factor alpha inhibitor candidates for a number of diseases involving inflammation within the nervous system. In this review, we discuss how phytochemicals as tumor necrosis factor alpha inhibitors are a therapeutic strategy targeting neurodegeneration.
Ioanna Koniari,Eleni Artopoulou,Dimitrios Velissaris,Mark Ainslie,Virginia Mplani,Georgia Karavasili,Nicholas Kounis,Grigorios Tsigkas[2]（2021）在《Biomarkers in the clinical management of patients with atrial fibrillation and heart failure》文中进行了进一步梳理Atrial fibrillation（AF） and heart failure（HF） are two cardiovascular diseases with an increasing prevalence worldwide. These conditions share common pathophysiologiesand frequently co-exit. In fact, the occurrence of either condition can ‘cause’ the development of the other, creating a new patient group that demands different management strategies to that if they occur in isolation. Regardless of the temproral association of the two conditions, their presence is linked with adverse cardiovascular outcomes, increased rate of hospitalizations, and increased economic burden on healthcare systems. The use of lowcost, easily accessible and applicable biomarkers may hasten the correct diagnosis and the effective treatment of AF and HF. Both AF and HF effect multiple physiological pathways and thus a great number of biomarkers can be measured that potentially give the clinician important diagnostic and prognostic information. These will then guide patient centred therapeutic management.The current biomarkers that offer potential for guiding therapy, focus on the physiological pathways of mi RNA, myocardial stretch and injury, oxidative stress, inflammation, fibrosis, coagulation and renal impairment. Each of these has different utility in current clinincal practice.
朱海萍[3]（2021）在《CCN3在LPS诱导的急性肺损伤中的作用及其机制的研究》文中研究说明研究背景急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）/急性呼吸窘迫综合征（Acute respriatary distress syndrome,ARDS）是临床上一种常见的急危重综合症,主要由严重的肺部感染、脓毒症、误吸、创伤等非心源性肺内外疾病引起肺泡上皮和毛细血管内皮基底膜损伤,造成弥漫性肺间质及肺泡水肿,临床上主要表现为顽固性低氧血症和呼吸衰竭。据统计,目前社区罹患ARDS的发生率为（（1-5）/10000）,但其死亡率高达30%-40%,严重威胁着人类的生命健康。其病理生理特征主要表现为肺容积减少、顺应性下降、通气/血流比例失调。其发病机制异常复杂,迄今为止尚未清楚阐明。弥漫性内皮和肺泡上皮损伤（Diffuse alveolar damage,DAD）是ARDS的经典组织病理学特征。Ⅱ型肺泡上皮细胞（Alveolar epithelial cells type Ⅱ,AEC Ⅱ）作为呼吸膜的主要组成部分,具有屏障保护功能。虽然目前对ALI/ARDS的病理生理特点和机制有了深入的了解,机械通气、限制液体和对症支持是目前治疗ALI的主要手段,但目前尚无特效药可有效控制炎症进展、改善预后。因此寻找有效的靶向药物成为治疗ALI的热点问题。既往研究表明ALI时上皮细胞损害比内皮细胞损害更严重,且呼吸膜损伤与AEC Ⅱ的凋亡密切相关,因此探讨影响AEC Ⅱ细胞存活或凋亡的可能机制将有助于改善ALI/ARDS患者的预后,以期探索抑制ALI/ARDS疾病进程的新机制和防治的新策略。肾母细胞瘤过度表达蛋白（Nephroblastoma overexpressed,NOV）,又称CCN3,属于CCN蛋白家族中的一员,其命名源于前三个成员Cyr61/CCN,CTGF/CCN2和NOV/CCN3首字母的简称。CCN3最早是在1992年由Joliot等学者从感染myeloblastosis-associatedvirus-1（MAV,鸟类逆转录病毒）的新生雏鸡肾母细胞瘤组织中分离得到的,后来在心、肝、肾、神经系统、以及肺等组织器官中发现其高表达。CCN3通过其不同模块结构域与细胞表面的整合素受体、硫酸类肝素蛋白多糖、蛋白激酶、激素等结合,参与调节细胞的粘附、迁移、增殖、凋亡与分化等生命活动,从而在胚胎发育、肿瘤发生发展、组织修复、创口愈合等发挥重要的作用。CCN3与CCN1和CCN2在结构上有50%的同源相似性,被作为炎症反应精细调节中的一个新兴家族。已证实CCN蛋白家族参与机体许多急慢性炎症性疾病的发生与发展,如肾小球肾炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、炎症性肠病、神经系统以及肺组织疾病如慢性阻塞性肺疾病,机械通气相关性肺部感染（VAP）等,然而关于CCN3在ALI中炎症反应的作用知之甚少。目前临床上尚无高效的血清分子标志物来早期诊断ALI并准确预测病情的严重度,而本课题组前期一项关于ALI的前瞻性队列临床研究中通过基因芯片技术结合临床信息学筛选出NOV/CCN3、IL-6、IGFBP-4等十几种蛋白在ALI时表达升高,尤其在重度ARDS患者中表现明显,并与疾病的死亡率密切相关,提出血清中高表达的NOV/CCN3、IL-6、IGFBP-4等可作为判断ARDS患者病情严重度的重要生物学标志物。基于这项发现,提示高表达的CCN3可能与ALI的急性炎症反应有关。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）作为革兰氏阴性菌细胞壁外膜内毒素的主要成分,是引起脓毒症和ALI的主要致病因素。目前已建立一系列内毒素的动物模型来模拟ALI的发病机制,如静脉注射、气管内注入和腹腔注射,其中LPS气管内注入诱导的直接肺损伤模型最常用。体外研究证实NF-κB和TGF-β介导的信号通路是调节ALI炎症、凋亡和纤维化等作用的重要枢纽。故CCN3是否参与LPS诱导的ALI的炎症和凋亡过程,是否通过NF-κB和或TGF-β介导的信号通路进行调控,有待我们进一步探讨研究,对预防和治疗ALI具有重要的临床和社会意义。研究目的1.探讨CCN3在LPS诱导的ALI动物模型肺组织中的表达。2.探究CCN3在A549细胞中的表达及其对A549细胞炎症和凋亡作用的影响。3.探讨CCN3促进ALI疾病进程可能的信号通路,为临床上的靶向治疗提供新的理论支持。研究方法一、体内动物实验1.C57BL/6野生型小鼠,随机分为PBS组和LPS组,气管内直接滴注0.5 mg/kg的LPS 24 h,构建ALI的小鼠动物模型。2.获取各组小鼠的肺泡灌洗液（BALF）,取上清液用瑞氏-吉姆萨染色,计算中性粒细胞百分比;BCA法检测BALF液中总蛋白浓度。3.ELISA法检测BALF和血清中炎症因子如TNF-α,IL-1β,IL-6的表达水平。4.小鼠肺组织石蜡包埋切片,H&E染色观察肺损伤的形态学变化,肺损伤病理学评分来评估疾病严重度,来评价小鼠ALI模型建立的有效性。5.运用免疫荧光染色和Western blot法分别检测CCN3蛋白在小鼠肺组织中的表达。二、体外细胞实验1.人肺泡Ⅱ型上皮细胞株（A549细胞株）在不同浓度（0 μg/mL、0.01 μg/mL、0.1μg/mL、1 μg/mL）的LPS孵育12h,选取最佳浓度的LPS孵育A549细胞株0h、3h、6 h、12 h及24 h,模拟体外ALI的细胞模型,Western blot法检测CCN3蛋白的表达,筛选出LPS的最佳浓度和最佳时间,作为后续研究的前提条件。2.运用基因转染技术将CCN3-siRNA转染至A549细胞,qPCR法和Western blot法检测CCN3的转染效果。3.实验分四组:NC-siRNA 组、NC-siRNA+LPS 组、CCN3-siRNA 组和CCN3-siRNA+LPS组。ELISA法检测CCN3-siRNA对各组细胞中炎症因子（IL-1β、TNF-α、TGF-β1）表达水平的变化;4.流式细胞术和Western blot法检测CCN3表达下调后对A549细胞凋亡率、细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3表达的变化。5.构建CCN3过表达载体,细胞分三组:A549细胞组（空白对照组）,pLVX-Puro组（空白质粒转染组）和pLVX-Puro-CCN3组（CCN3过表达质粒）,qPCR法和Western blot法检测转染效率。6.运用ELISA法检测CCN3过表达后对IL-1β和TNF-α表达水平的变化。7.流式细胞术检测检测CCN3过表达后的细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax蛋白的表达。8.实验分四组:NC-siRNA组、NC-siRNA+LPS组、CCN3-siRNA组和CCN3-siRNA+LPS 组。9.Western blot 法检测 TGF-β1、TGF-βRⅡ和p-Smad 2/3蛋白的表达。10.激光共聚焦检测NF-κB荧光强度的变化,Western blot法检测胞浆和胞核内的NF-κB p65蛋白的水平。研究结果1.LPS组BALF中的细胞总数、总蛋白水平显着升高,BALF和血清中炎症因子IL-6,TNF-α和IL-1β的表达亦显着上调。2.H&E染色示LPS组肺泡完整性破坏,肺泡腔及肺泡间隔内有大量炎性细胞浸润,肺损伤病理学评分显着升高。3.免疫荧光显示LPS组的CCN3荧光强度增强,Western blot示CCN3蛋白表达在LPS组显着增高。4.Western blot 结果示不同浓度（0 μg/mL、0.01 μg/mL、0.1 μg/mL、1 μg/mL）的LPS作用于A549细胞12 h后,CCN3的表达随着LPS浓度的增加而显着增加。0.1μg/mL 的 LPS 孵育 A549 细胞 0h、3h、6h、12h、24h,CCN3 的表达随着时间的延长而增加,至12h达高峰,之后迅速下降。5.qPCR和Western blot结果显示,CCN3-siRNA转染组的CCN3mRNA、CCN3蛋白的表达明显降低。6.ELISA法结果显示,LPS处理后IL-1β、TGF-β1和TNF-α的表达显着升高,而CCN3-siRNA转染组的IL-1β和TGF-β1的表达均显着下降。7.流式细胞术示,LPS刺激后A549细胞的凋亡率显着增加,而CCN3-siRNA转染组的细胞凋亡率显着降低;Western blot结果示与对照比较,CCN3-siRNA转染组的Bcl-2表达显着升高,Caspase-3表达明显下降。8.qPCR 法和 Western blot 法结果显示 pLVX-Puro-CCN3 转染组中 CCN3 mRNA和CCN3蛋白的表达明显上调。9.ELISA法结果显示,与空白转载组相比,pLVX-Puro-CCN3转染组的IL-1β和TNF-α的表达水平显着升高。10.流式细胞术结果显示,与A549空白组和pLVX-Puro组比较,pLVX-Puro-CCN3组的细胞凋亡率显着增加;Western blot示pLVX-Puro-CCN3组的促凋亡蛋白Bax表达显着增多,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降。11.激光共聚焦显示,LPS刺激后NF-κB核转位荧光强度较对照组显着增加,而CCN3-siRNA转染组的荧光强度明显减弱;Western blot结果示,CCN3-siRNA抑制胞核中的NF-κB p65的表达,促进胞浆中NF-κB p65的表达。12.Western blot 结果显示,与 NC-siRNA组相比,LPS 刺激后 TGF-β1、TGF-βRⅡ和p-Smad2/3的表达均显着上升;而CCN3-siRNA则抑制了 TGF-β1、TGF-βR Ⅱ和p-Smad2/3的表达。研究结论:CCN3通过TGF-β/p-Smad和NF-κB信号通路,促进炎症因子的分泌和AECⅡ细胞的凋亡,参与ALI/ARDS疾病进程。
贾步云[4]（2021）在《基于lncRNA GAS5/miR-23a/Apaf-1通路研究藤黄酸B对胃癌细胞caspase-3依赖凋亡及焦亡的影响及机制》文中研究指明背景胃癌作为消化系统常见的恶性肿瘤,发病率在各种癌症当中位居前列。藤黄中蕴藏着多种氧杂蒽酮类抗肿瘤活性物质,其中藤黄酸B（morellic acid,MA）具有潜在的抗胃癌的活性,其体内外抗胃癌的作用及作用机理值得深入的探讨。长链非编码RNA（Long non-coding RNAs,lncRNAs）作为细胞中重要的调控因子,与包括肿瘤在内的多种疾病有着密切的关系。lncRNAs能够作为caspase上游信号分子影响肿瘤细胞程序性死亡过程。因此,本研究首次尝试从lncRNAs调控caspase介导的肿瘤细胞凋亡及焦亡的角度探讨MA体内外抗胃癌作用的机制。目的观察MA对于胃癌的体内外的抗癌活性;以lncRNA GAS5/miR-23a/Apaf-1信号通路促进胃癌细胞caspase-3依赖的凋亡和焦亡为切入点,探讨MA抗胃癌作用的分子机制。方法（1）MA提取分离纯化与含量测定乙醇超声提取、中压制备色谱分离及高压色谱纯化的方法对藤黄中MA进行分离;高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）法对MA进行含量测定及有机溶剂（甲醇,乙醇,二甲亚砜）中放置稳定性的考察。（2）MA抗胃癌活性及其诱导胃癌细胞caspase-3依赖凋亡及焦亡体外研究。MTT实验观察梯度浓度的MA对不同胃癌细胞体外抑制作用;划痕实验观察胃癌细胞迁移。Annexin V-PI双染法检测胃癌细胞凋亡率;Western blot法测定胃癌细胞中凋亡相关蛋白cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、Bcl-2以及Bax的表达水平;荧光倒置显微镜观察胃癌细胞焦亡形态;乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）试剂盒检测胃癌细胞LDH释放率;测定胃癌细胞焦亡相关蛋白GSDME N端肽段（GSDME N terminal,GSDME-NT）以及IL-18的蛋白表达水平。（3）MA抗胃癌活性及其诱导胃癌细胞caspase-3依赖凋亡及焦亡体内研究。采用小鼠胃癌MFC细胞制备BALB/c小鼠胃癌皮下移植瘤模型,实验动物随机的分为:模型组（Model）,MA低剂量组（MA-L）,MA中剂量组（MA-M）,MA高剂量组（MA-H）和阳性药5-氟尿嘧啶组（5-FU）,另设正常对照组（Normal）;选择肿瘤体积、肿瘤重量、肿瘤抑制率、以及动物体重经时变化作为指标,观察MA对小鼠皮下移植瘤生长的影响;HE染色观察肿瘤病理形态的影响;免疫组化法测定MA胃组织中Ki67表达量。测定胃癌组织中凋亡相关蛋白cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、Bcl-2以及Bax的表达水平,焦亡相关蛋白GSDME-NT以及IL-18的蛋白表达水平,研究MA对体内胃癌细胞caspase-3依赖凋亡及焦亡的影响。（4）MA促进胃癌细胞caspase-3依赖凋亡及焦亡的分子机制研究。RT-qRCR法测定不同浓度MA对胃癌细胞以及动物实验中各组动物胃癌组织中lncRNA GAS5的表达水平的影响。采用siRNA构建lncRNA GAS5低表达细胞,实验细胞分为:非靶序列siRNA对照组（NC-siRNA组）、非靶序列siRNA给药组（NC-siRNA+MA组）,lncRNA GAS5低表达对照组（GAS5-siRNA组）,lncRNA GAS5低表达给药组（GAS5-siRNA+MA组）。检测lncRNA GAS5低表达胃癌细胞的凋亡率、焦亡形态、LDH释放,检测lncRNA GAS5低表达胃癌细胞中lncRNA GAS5、miR-23a和Apaf-1mRNA水平以及cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、GSDME-NT、Apaf-1和IL-18蛋白表达。采用shRNA慢病毒包装构建lncRNA GAS5低表达细胞稳转细胞株,用得到的稳转株制备lncRNA GAS5低表达胃癌动物模型,实验动物分为:非靶序列shRNA对照组（NC-shRNA组）、非靶序列shRNA给药组（NC-shRNA+MA组）,lncRNA GAS5低表达对照组（GAS5-shRNA组）,观察MA对lncRNA GAS5低表达胃癌动物体内肿瘤生长的影响;测定lncRNA GAS5低表达胃癌组织中lncRNA GAS5、miR-23a和Apaf-1 mRNA水平以及cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、GSDMENT、Apaf-1和IL-18蛋白表达。结果（1）藤黄酸B提取分离与稳定性成功分离得到MA,经HPLC色谱峰的面积归一化方法测定及计算纯度为98.3%;MA在DMSO溶液中45 d内稳定性良好。（2）藤黄酸B在体外具有较强的抗胃癌活性,并能够诱导MKN-45以及MFC细胞发生caspase-3依赖的凋亡及焦亡。MA对于胃癌BGC-823,SGC-7901,HGC-27 MKN-45以及MFC细胞的IC50值分别为6.216±0.23μM,3.859±0.11μM,4.518±0.17μM,2.964±0.25μM和1.81±0.16μM。其中,对于MKN-45和MFC细胞的抑制活性最强。MA（1μM、2μM和4μM）处理组的胃癌细胞的迁移能力被显着的抑制（P<0.05或P<0.01）。MA（1μM、2μM和4μM）处理组胃癌细胞凋亡率显着升高,细胞中cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和Bax的表达显着上调,Bcl-2的表达显着下调（P<0.05或P<0.01）。MA（1μM、2μM和4μM）处理胃癌细胞,均出现了明显的焦亡形态。MA（1μM、2μM和4μM）处理组胃癌细胞LDH释放率,显着增加,细胞中GSDME-NT以及IL-18表达显着上调（P<0.05或P<0.01）。（3）藤黄酸B具有体内抗胃癌活性,并能在体内诱导胃癌细胞发生caspase-3依赖凋亡及焦亡。在小鼠胃癌皮下移植瘤模型中,MA及阳性药5-FU对小鼠皮下肿瘤生长均有显着的抑制作用。疗程第15天,MA（1、2和4mg/kg）各剂量组以及阳性药5-FU（100mg/kg）对于小鼠体内肿瘤的抑制率分别为:79.32±7.69%,92.36±4.21%,92.18±2.99%和87.64±6.30%。肿瘤组织病理形态观察发现,模型组肿瘤组织中肿瘤细胞细胞核完整,细胞排列相对致密。MA（1、2和4mg/kg）各剂量组及阳性药5-FU（100mg/kg）组肿瘤组织中可见散在分布的凋亡以及坏死的肿瘤细胞,胞间出现裂隙,细胞核出现固缩和破裂的形态。MA（1、2和4mg/kg）各剂量组以及阳性药5-FU（100mg/kg）组动物肿瘤组织中的Ki67蛋白的表达量均显着降低,胃癌组织中cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、Bax、GSDME-NT和IL-18的表达显着上调,Bcl-2的表达显着下调（P<0.05或P<0.01）。（4）MA通过调控lncRNA GAS5/miR-23a/Apaf-1通路促进胃癌细胞caspase-3依赖凋亡及焦亡。在体外,MA（1μM、2μM和4μM）处理的MKN-45细胞和MFC细胞中lncRNA GAS5的水平显着提高（P<0.05或P<0.01）。在小鼠皮下移植瘤模型中,MA（1、2和4mg/kg）各剂量组及阳性药组动物肿瘤组织中lncRNA GAS5水平均显着提高（P<0.05或P<0.01）。MA（2μM）组胃癌细胞凋亡率显着提高,细胞出现了显着的焦亡形态,LDH的释放率显着增加,敲低lncRNA GAS5水平后,MA（2μM）诱导胃癌细胞凋亡、焦亡及增加LDH释放率的作用被部分逆转（P<0.05或P<0.01）。MA（2μM）组胃癌细胞中lncRNA GAS5和Apaf-1 mRNA水平显着上调,miR-23a水平显着下调,敲低lncRNA GAS5水平后,MA（2μM）上调lncRNA GAS5和Apaf-1 mRNA以及下调miR-23a的作用被部分逆转（P<0.05或P<0.01）。MA（2μM）组胃癌细胞中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、GSDME-NT、Apaf-1以及IL-18蛋白表达显着上调,敲低lncRNA GAS5水平后,MA（2μM）对于这些蛋白水平的上调作用被部分逆转（P<0.05或P<0.01）。在lncRNA GAS5低表达胃癌动物模型中,MA（2 mg/kg）组动物肿瘤体积和重量明显减小,敲低lncRNA GAS5水平后,MA（2 mg/kg）对于动物肿瘤生长的抑制作用被部分逆转（P<0.05或P<0.01）。MA（2 mg/kg）组胃癌组织中lncRNA GAS5和Apaf-1 mRNA水平显着上调,miR-23a水平显着下调,敲低lncRNA GAS5水平后,MA（2 mg/kg）上调lncRNA GAS5和Apaf-1 mRNA以及下调miR-23a的作用被部分逆转（P<0.05或P<0.01）。MA（2 mg/kg）组胃癌组织中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、GSDMENT、Apaf-1以及IL-18蛋白表达显着上调,敲低lncRNA GAS5水平后,MA（2mg/kg）对于这些蛋白水平的上调作用被部分逆转（P<0.05或P<0.01）。结论MA具有体内外抗胃癌的作用,其作用机制可能与其上调胃癌MKN-45及MFC细胞中lncRNA GAS5水平,靶向吸附miR-23a,拮抗miR-23a对Apaf-1的抑制作用,进而激活caspase-9及caspase-3,促进胃癌MKN-45及MFC细胞发生凋亡和焦亡相关。
李永红[5]（2020）在《空间阻滞寡核苷酸调控Mcl-1可变剪接诱导胃癌细胞凋亡的研究》文中认为研究目的以手术及放化疗为主的胃癌治疗已经进入平台期。过去三十年中,以凋亡蛋白为靶标的新型抗肿瘤药物研发取得了一定的进展,但受凋亡蛋白高频可变剪接、肿瘤异质性等因素的影响,凋亡相关靶向药物在临床应用特别是在胃癌等实体肿瘤中疗效欠佳。因此,基于凋亡因子可变剪接调控的抗肿瘤研究引起广泛关注,但在胃癌中的相关研究尚未见相关报道。Mcl-1分子是Bcl-2凋亡基因家族的核心成员,Mcl-1 pre-mRNA可通过可变剪接表达抗凋亡蛋白Mcl-1L和促凋亡蛋白Mcl-1S两种剪接异构体。基于Mcl-1可变剪接的干预有望通过改变肿瘤细胞抗凋亡状态、促进肿瘤细胞凋亡而成为胃癌治疗的新策略和新靶点。本研究通过临床研究,明确凋亡因子Mcl-1可变剪接与胃癌病理分级、临床分期、生存预后的相关性;通过细胞学实验,探讨空间阻滞寡核苷酸（SBOs）调控Mcl-1可变剪接进而促进胃癌细胞凋亡,抑制胃癌细胞增殖的生物学效应;通过裸鼠移植瘤实验,在体内验证SBOs治疗对肿瘤组织Mcl-1可变剪接的调控作用及其促进肿瘤组织细胞凋亡、抑制肿瘤生长增殖的作用。研究方法临床研究:应用基因表达谱交互分析软件GEPIA分析来源于TCGA数据库的408例胃癌组织以及36例正常胃粘膜组织中Mcl-1 mRNA表达情况及其与胃癌病理分级、临床分期、生存预后之间的相关性;收集59例胃腺癌患者新鲜胃癌组织和31例胃炎患者胃黏膜组织,应用荧光定量PCR技术定量检测Mcl-1可变剪接产物Mcl-1L及Mcl-1S的mRNA表达;利用Western blotting技术对Mcl-1L及Mcl-1S蛋白表达水平进行半定量检测;Mcl-1L及Mcl-1S表达水平与胃癌病理分级、临床TNM分期、生存预后的相关性分析。体外实验:合成Mcl-1特异性SBOs,应用Endo-Porter系统转染至不同分化程度的胃癌细胞系（MKN-28（高分化）、SGC-7901（中分化）、MKN-45（低分化））;RT-q PCR及Western blotting技术检测转染不同浓度SBOs细胞的Mcl-1L及Mcl-1S mRNA和蛋白的表达;应用流式细胞术检测转染不同浓度SBOs胃癌细胞的凋亡率;Western blotting检测细胞凋亡关键标志物（Bak、cleaved caspase 9和cleaved caspase 3）,评价转染不同浓度SBOs胃癌细胞的凋亡活化状态;CCK8增殖实验评价转染不同浓度SBOs胃癌细胞的增殖能力。体内实验:应用胃癌细胞系种植裸鼠背前壁皮下部位建立MKN-45和HGC-27两种胃癌移植瘤模型;通过瘤体局部多点注射不同剂量Mcl-1特异性SBOs,注射3天后处死裸鼠;记录裸鼠移植瘤体积治疗前后变化并组间比对分析;RT-q PCR及Western blotting技术检测不同浓度SBOs治疗后癌组织Mcl-1L及Mcl-1S mRNA和蛋白的表达;HE染色后计算SBOs治疗后肿瘤组织细胞死亡面积;免疫荧光技术原位观察肿瘤组织细胞凋亡;组织研磨后制备组织细胞悬液,应用流式细胞术检测肿瘤组织细胞凋亡率,同时应用Western blotting检测细胞凋亡关键标志物（Bak、cleaved caspase 9和cleaved caspase 3）,评价不同剂量SBOs治疗的胃癌组织的肿瘤凋亡活化状态;应用免疫组化技术检测细胞增殖指标Ki-67表达。研究结果临床研究:与正常胃粘膜组织相比,肿瘤组织中Mcl-1L mRNA表达显着升高（p<0.05）,与之相反,Mcl-1S mRNA表达则显着降低（p<0.01）,Mcl-1S/Mcl-1L mRNA亦明显降低（p<0.001）;与mRNA表达水平差异相一致,在胃癌组织中,Mcl-1L蛋白表达明显升高,Mcl-1S蛋白表达水平显着降低;同时,Mcl-1S与Mcl-1L mRNA表达水平的比值与胃癌T分期呈负相关,与N分期无明显关联性;Kaplan Meier生存分析显示,低Mcl-1S/Mcl-1L mRNA水平胃癌患者的总生存期低于Mcl-1S/Mcl-1L mRNA高水平胃癌患者。体外实验:相对GES-1正常细胞,不同分化程度的胃癌细胞系MKN-28、SGC-7901、MKN-45中Mcl-1L表达明显升高,Mcl-1S表达显着降低,但胃癌细胞株组间无显着差异;转染不同浓度SBOs 48 h后,Mcl-1L mRNA表达水平呈SBOs剂量依赖性降低,而Mcl-1S mRNA表达水平呈SBOs剂量依赖性增加;与mRNA水平的定量变化相似,SBOs处理的胃癌细胞系中,Mcl-1L蛋白表达水平下降,Mcl-1S蛋白表达水平升高;流式细胞术检测SBOs处理的胃癌细胞系显示三株细胞凋亡率均呈SBOs剂量依赖性升高;SBOs处理的胃癌细胞系中,细胞凋亡关键标志物（Bak、cleaved caspase 9和cleaved caspase 3）表达显着升高;转染不同浓度SBOs胃癌细胞的CCK8 OD值呈SBOs剂量依赖性升高。体内实验:SBOs治疗后,MKN-45和HGC-27两种小鼠移植瘤组织中Mcl-1S mRNA及蛋白表达上调,而Mcl-1L表达显着下调;肿瘤组织HE染色显示,相对于对照组,SBOs治疗组移植瘤组织细胞死亡面积呈SBOs剂量依赖性增加;免疫荧光原位检测显示,治疗后癌组织原位肿瘤细胞凋亡数量亦呈SBOs剂量依赖性增加;流式细胞术定量检测细胞凋亡显示,MKN-45异种移植模型中Con-SBO、6.25和12.5 mg/kg SBOs治疗组肿瘤细胞凋亡率分别为2.76%、14.44%和28.75%,在HGC-27异种移植模型中肿瘤细胞凋亡率分别为2.49%、31.26%和50.57%;SBOs治疗后,肿瘤组织中细胞凋亡关键标志物Bak、cleaved caspase9和cleaved caspase 3表达水平明显升高;SBOs治疗组肿瘤体积基本保持稳定,而对照组肿瘤体积增长超过30%;免疫组化检测显示,SBOs治疗组肿瘤生存能力和增殖的指标Ki-67表达率呈SBOs剂量依赖性下降。研究结论1.凋亡因子Mcl-1可变剪接异构体Mcl-1L和Mcl-1S在胃癌中表达不平衡,与胃癌临床进展及预后不良密切相关。2.Mcl-1特异性SBOs可以调控Mcl-1 pre-mRNA可变剪接从Mcl-1L转换为Mcl-1S mRNA剪接模式,抑制抗凋亡可变剪接异构体Mcl-1L的表达,诱导促凋亡异构体Mcl-1S的表达;这种干预能有效促进不同分化程度胃癌细胞的凋亡并抑制胃癌细胞增殖。3.在活体肿瘤组织内Mcl-1特异性SBOs亦可靶向调控Mcl-1 pre-mRNA可变剪接,使剪接模式从Mcl-1L向Mcl-1S mRNA转换,进而诱导胃癌移植瘤组织细胞凋亡并抑制移植瘤增殖和生长。4、以Mcl-1可变剪接为靶标的细胞凋亡调控,具有较高的特异性和有效性可作为抗胃癌治疗的新方向。
Angeliki Katsarou,Ioannis I Moustakas,Iryna Pyrina,Panagiotis Lembessis,Michael Koutsilieris,Antonios Chatzigeorgiou[6]（2020）在《Metabolic inflammation as an instigator of fibrosis during nonalcoholic fatty liver disease》文中进行了进一步梳理Non-alcoholic fatty liver disease（NAFLD） is characterized by excessive storage of fatty acids in the form of triglycerides in hepatocytes. It is most prevalent in western countries and includes a wide range of clinical and histopathological findings, namely from simple steatosis to steatohepatitis and fibrosis, which may lead to cirrhosis and hepatocellular cancer. The key event for the transition from steatosis to fibrosis is the activation of quiescent hepatic stellate cells（qHSC） and their differentiation to myofibroblasts. Pattern recognition receptors（PRRs）,expressed by a plethora of immune cells, serve as essential components of the innate immune system whose function is to stimulate phagocytosis and mediate inflammation upon binding to them of various molecules released from damaged, apoptotic and necrotic cells. The activation of PRRs on hepatocytes,Kupffer cells, the resident macrophages of the liver, and other immune cells results in the production of proinflammatory cytokines and chemokines, as well as profibrotic factors in the liver microenvironment leading to qHSC activation and subsequent fibrogenesis. Thus, elucidation of the inflammatory pathways associated with the pathogenesis and progression of NAFLD may lead to a better understanding of its pathophysiology and new therapeutic approaches.
于秋丽[7]（2020）在《Fas/FasL凋亡途径在氟致PC12细胞损伤中的作用及L-型钙通道拮抗剂的影响》文中研究说明氟是与人体健康密切相关的微量元素之一,适量摄入有益于机体的生长发育及维持骨骼、牙齿的正常结构和生理机能;一旦被过量摄入,就会通过血液循环进入全身各处,并在体内蓄积,引起机体急性或慢性氟中毒效应,称为地方性氟中毒,简称地氟病。地氟病致病机制复杂,涉及氧化应激、线粒体改变、内质网应激、信号转导通路改变等。研究表明,氟暴露致细胞凋亡异常可能也是氟致细胞损伤的机制之一。细胞凋亡是一种由基因调控的程序性死亡,真核细胞主要通过内部线粒体途径、内质网途径和外部死亡受体途径介导细胞凋亡发生。我们前期的研究提示,内质网和线粒体途径参与了氟暴露致细胞凋亡异常,但氟暴露致细胞凋亡的死亡受体途径鲜见报道,Fas/Fas L信号通路是主要死亡受体通路之一,在细胞凋亡过程中起重要作用。且在许多细胞凋亡进程中,常伴随Ca2+浓度异常增加,特别是在凋亡早期,细胞内Ca2+浓度异常升高,提示Ca2+可能是启动细胞凋亡的早期信号之一。而在对氟中毒动物模型和体外细胞毒性试验中均检测到细胞内钙离子超载的现象,并证实其与活性氧水平升高以及细胞凋亡密切相关。前期在体动物神经电生理研究表明,细胞内钙超载可能是氟暴露后细胞膜上L-型钙通道活性改变导致的。L-型钙通道拮抗剂是Ca2+进入细胞的阻滞剂,可以有效减少细胞内的Ca2+浓度,抑制凋亡起始信号。但L-型钙通道拮抗剂是否对氟化物诱导的Fas/FasL信号通路依赖性凋亡具有干预作用及其保护机制的研究鲜有报道。本研究通过体外试验探讨Fas/FasL信号通路在氟诱导PC12细胞凋亡中的作用及分子机制,并探究L-型钙通道拮抗剂Nifedipine在上述过程中的干预效果。1.Fas/FasL凋亡途径在氟致PC12细胞损伤中的作用为探讨Fas/FasL信号通路在氟致PC12细胞凋亡中的作用及分子机制,实验采用含20、40、80、160 mg/L NaF培养液处理PC12细胞12、24、36、48小时后,检测细胞活性;用上述不同剂量梯度NaF培养液处理PC12细胞24小时后,检测细胞内活性氧水平、细胞凋亡率、细胞内Fas/FasL信号转导通路Fas、FasL、FADD、Caspase 8、Caspase 3和Bid基因/蛋白表达水平。实验结果如下:（1）细胞活性检测结果:氟暴露12、24、36 h后,各剂量组细胞存活率均呈下降趋势,且呈氟暴露剂量依赖性,其中在160F氟暴露时,PC12细胞存活率均呈极显着下降（P<0.01）;自染氟24 h后开始,80F组PC12细胞存活率呈极显着下降（P<0.01）,染氟48 h后,各氟暴露组细胞剂量-存活率曲线经历了先极显着升高（P<0.01）,然后再极显着下降（P<0.01）的过程。（2）细胞内活性氧水平检测结果:不同剂量氟暴露24 h后,与对照组比,40F组PC12细胞活性氧水平显着增加（P<0.05）,80F与160F组PC12细胞活性氧水平呈极显着增加（P<0.01）,且各组PC12细胞活性氧水平呈氟暴露剂量依赖性。（3）细胞凋亡率检测结果:各剂量氟暴露组早期和晚期凋亡细胞数目较对照组均极显着增加（P<0.01）,氟化钠剂量越高,细胞凋亡率（早、晚期细胞凋亡率之和）越高,且晚期凋亡细胞数目所占比例也逐渐增加。（4）Fas/FasL信号通路相关分子基因/蛋白表达结果:PC12细胞不同剂量氟暴露24 h后,与对照组比,随氟暴露剂量的增加,Fas、FasL、FADD、Caspase 8、Caspase 3基因和蛋白表达水平均呈上升趋势（P<0.05）,且与氟暴露剂量呈依赖性;而各氟暴露剂量组Bid基因和蛋白表达水平逐渐下降,其中80F和160F组呈显着或极显着下降（P<0.05或P<0.01）。综上所述,氟暴露引起PC12细胞内活性氧水平升高,导致Fas/FasL信号通路中各分子表达水平显着上升（P<0.05）,Bid表达水平显着下降（P<0.05）,诱导细胞异常凋亡,最终影响细胞活性,且以上指标均呈氟暴露剂量依赖性。结果提示Fas/FasL信号通路在氟暴露致PC12细胞凋亡中起重要作用,其中FADD可能是Fas/FasL信号通路中的重要靶分子。2.L-型钙通道拮抗剂对氟诱导的PC12细胞凋亡的影响为探讨L-型钙通道拮抗剂Nifedipine对氟诱导PC12细胞通过Fas/FasL信号通路凋亡的干预效果,实验采用剂量效应明显的80 mg/L NaF分别与0.5、1.0、2.0、4.0μM的L-型钙通道拮抗剂Nifedipine联合处理PC12细胞24 h后,检测PC12细胞内活性氧和钙离子水平、细胞凋亡率、细胞膜L-型钙通道Cav1.2及Fas/FasL信号通路相关基因/蛋白表达水平、细胞周期分布情况。实验结果如下:（1）细胞内活性氧水平检测结果:与对照组比,F组与F+4.0N组细胞内活性氧水平极显着上升（P<0.01）。与F组比,F+0.5N组、F+1.0N组、F+2.0N组与F+4.0N组活性氧水平均极显着下降（P<0.01）。不同剂量Nifedipine处理组活性氧水平呈现先降低后升高的趋势。（2）细胞内钙离子水平检测结果:各处理组细胞内钙离子水平较对照组显着升高（P<0.05）;与F组比,F+1.0N组与F+2.0N组细胞内钙离子浓度极显着降低（P<0.01）,F+0.5N组和F+4.0N组虽无显着性差异,但有下降的趋势。（3）细胞凋亡率检测结果:与对照组比,各处理组早期和晚期凋亡细胞数目均极显着增加（P<0.01）;与F组比,F+0.5N组、F+1.0N组和F+2.0N组凋亡细胞数目呈Nifedipine剂量依赖性减少（P<0.01）,而F+4.0N组凋亡细胞数目出现上升趋势。晚期凋亡细胞比例先减少而后增加。（4）基因/蛋白表达结果:与对照组比,F组与F+0.5N组Cav1.2和Fas/FasL信号通路相关基因/蛋白表达水平显着升高（P<0.05）或有升高趋势,各处理组Bid基因和蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;与F组比,F+1.0N组和F+2.0N组Cav1.2以及上述Fas/FasL信号通路相关基因/蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,F+2.0N组Bid基因和蛋白表达水平极显着升高（P<0.01）。（5）细胞周期检测结果:与对照组比,F组与F+4.0N组G1期细胞数量极显着增加（P<0.01）,S期细胞极显着减少（P<0.01）;与F组比,F+0.5N组、F+1.0N组和F+2.0N组G1期细胞极显着减少（P<0.01）,S期细胞极显着增加（P<0.01）,G2期细胞显着增加（P<0.05）或有增加趋势,而F+4.0N组G1期细胞极显着增加（P<0.01）,S期细胞极显着减少（P<0.01）。综上所述,L-型钙通道拮抗剂Nifedipine通过抑制过量ROS产生、细胞内钙超载、Fas/FasL信号通路的激活以及影响细胞周期,有效调控PC12细胞凋亡异常。表明Nifedipine对氟致钙超载诱导的细胞异常凋亡具一定干预作用,可能是一种新型有效的抗氟药物。
Shi-Tong Wang,Wen-Qi Cui,Dan Pan,Min Jiang,Bing Chang,Li-Xuan Sang[8]（2020）在《Tea polyphenols and their chemopreventive and therapeutic effects on colorectal cancer》文中研究表明Colorectal cancer（CRC）, a multifactorial disease, is usually induced and developed through complex mechanisms, including impact of diet and lifestyle,genomic abnormalities, change of signaling pathways, inflammatory response,oxidation stress, dysbiosis, and so on. As natural polyphenolic phytochemicals that exist primarily in tea, tea polyphenols（TPs） have been shown to have many clinical applications, especially as anticancer agents. Most animal studies and epidemiological studies have demonstrated that TPs can prevent and treat CRC.TPs can inhibit the growth and metastasis of CRC by exerting the anti-inflammatory, anti-oxidative or pro-oxidative, and pro-apoptotic effects, which are achieved by modulations at multiple levels. Many experiments have demonstrated that TPs can modulate several signaling pathways in cancer cells,including the mitogen-activated protein kinase pathway, phosphatidylinositol-3 kinase/Akt pathway, Wnt/β-catenin pathway, and 67 kDa laminin receptor pathway, to inhibit proliferation and promote cell apoptosis. In addition, novel studies have also suggested that TPs can prevent the growth and metastasis of CRC by modulating the composition of gut microbiota to improve immune system and decrease inflammatory responses. Molecular pathological epidemiology, a novel multidisciplinary investigation, has made great progress on CRC, and the further molecular pathological epidemiology research should be developed in the field of TPs and CRC. This review summarizes the existing in vitro and in vivo animal and human studies and potential mechanisms to examine the effects of tea polyphenols on CRC.
Ramouna Voshtani[9]（2019）在《颗粒体蛋白前体通过抑制肿瘤微环境中的自然杀伤细胞促进黑色素瘤进展》文中提出生长因子颗粒体蛋白前体（PGRN）（又名acrogranin、颗粒蛋白/上皮蛋白前体蛋白、上皮蛋白前体、PC细胞衍生生长因子）由基因Grn编码的,人源PGRN包含593个氨基酸,为分泌型糖蛋白。通常情况下,PGRN过度表达于免疫细胞、神经元细胞和高度增殖的上皮细胞,而成纤维细胞和内皮细胞不表达。PGRN在多种类型癌症中具有重要的生物学功能,主要是通过促进细胞增殖、迁移、侵袭、血管生成和转化影响肿瘤的发生发展。然而,PGRN在黑色素瘤中的作用尚未有明确报道。在本研究中,我们首先分析了公共临床数据集,结果显示PGRN的高表达与黑色素瘤患者的不良预后相关;在晚期恶性黑素瘤患者中,PGRN表达上调,同时PGRN高表达患者存活率下降。随后,我们通过Grn敲除小鼠皮下移植B16-F10黑色素瘤模型证明肿瘤来源的而非宿主来源的PGRN可以促进黑色素瘤的生长和转移;在Grn敲除的肿瘤细胞中回补PGRN表达,则肿瘤细胞的生长完全恢复至野生型水平,此结果进一步支持了肿瘤来源的PGRN可以促进黑色素瘤的生长和转移。此外,为研究PGRN在肿瘤转移中的作用,我们对细胞进行迁移和侵袭实验,结果表明肿瘤来源的PGRN敲除可导致B16-F10体外和体内的运动性降低。进一步研究发现,与对照组相比Grn敲除的肿瘤和脾脏组织中,自然杀伤（NK）细胞而非T淋巴细胞的浸润增强。为进一步检测自然杀伤（NK）细胞在PGRN控制B16-F10生长的调节作用,通过NK细胞体内抗体中和实验证实NK细胞在限制PGRN调节的B16-F10肿瘤生长中的发挥了关键作用。肿瘤解剖组织样本的RNA-seq分析发现,较野生型黑色素瘤而言,Grn敲除黑色素瘤18个信号通路显示被富集。在表达量变化的基因中,表达差异最大的蛋白组分与免疫应答通路相关;两个独立肿瘤样本热图分析显示B16-F10/Grn敲除组有22个基因显着上调。值得注意的是,包括CCL5在内多种趋化因子的表达量在Grn敲除的B16-F10肿瘤均显着上调,提示PGRN可能调节其表达。CCL5是募集NK细胞至肿瘤微环境过程中最为相关的趋化因子之一。对Grn敲除肿瘤同时沉默CCL5后,发现NK细胞在肿瘤中募集减少并使肿瘤生长回复到对照水平。此外,无论是否使用IFN-γ激活,在Grn敲除的B16-F10肿瘤中回补mPGRN可在mRNA和蛋白质水平抑制CCL5的表达,证明PGRN在调节Ccl5基因的转录中发挥作用。B16-F10细胞中瞬时转染带有荧光素酶报告基因的Grn启动子实验也证实了这一观点。综上所述,本研究发现了 PGRN在黑色素瘤生长和转移中的关键作用,并表明PGRN可能作为黑色素瘤的治疗靶点及早期诊断的新标志物。
殷骏[10]（2019）在《低氧诱导精母细胞凋亡导致精子生成减少的机制》文中研究指明研究背景:高原低张性缺氧（低氧）对男性生殖功能有显着负面影响,其中,精子生成减少是高原男性生殖功能低下的中心环节。精子生成减少的形成是一个复杂的病理生理过程,体内研究表明,在生精细胞中,精母细胞对低氧最为敏感,但是低氧引起体内精母细胞凋亡的机制还不明确。缺氧引起细胞凋亡有两条重要途径:死亡受体凋亡途径和线粒体凋亡途径,这两条凋亡途径在肿瘤中被广泛研究,然而这两条凋亡途径是否参与低氧引起的精母细胞凋亡还不清楚。在体内缺血性缺氧所引起的精子生成减少的疾病模型中,HIF-1α与精索静脉曲张、睾丸扭转、寡精症发生发展密切相关,但是HIF-1α是否参与高原低氧所引起的精母细胞凋亡,以及HIF-1α与两条凋亡途径间的调控机制更无从知晓。巨自噬（简称自噬）开始形成于以Beclin-1连接的自噬起始复合物,复合物相互连接形成双层膜结构,双层膜进一步延长形成闭合环装的自噬小体,自噬小体包裹细胞内破坏的细胞器和损伤的蛋白并与溶酶体融合,最终细胞得以存活。自噬与凋亡是两个紧密联系的病理生理学过程,自噬先于凋亡出现,当外界刺激出现时,自噬出现并抑制凋亡;当外界刺激超过一定限度时,凋亡反过来抑制自噬并正反馈加强凋亡。阐明低氧下精母细胞自噬与凋亡相互作用的分子机制,对于研究低氧引起的精子生成减少有着重要的现实意义。本研究旨在查明低氧引起精母细胞凋亡的内在机制,明确低氧对精母细胞自噬的影响,以及探讨自噬和凋亡在精母细胞中相互作用的分子机制。为防治低氧引起的精子生成减少提供新策略和新靶点。研究方法与内容:1.建立低氧（1%氧浓度）诱导小鼠精母细胞系GC-2凋亡模型,并使用TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡。2.缺氧处理GC-2细胞48h后,酶标法检测LDH含量、Caspase-8含量;WesternBlot法检测DR5、c-FLIP、DcR2、TRAIL、Fas等死亡受体（Death Receptor/DR）凋亡途径相关基因表达,RT-qPCR法检测DR凋亡途径各相关基因mRNA表达。低氧下加入caspase-8特异性抑制剂Z-IETD-FMK,酶标法检测细胞增殖活性。探讨DR凋亡途径在低氧诱导GC-2细胞凋亡模型中的作用。3.低氧结束后,酶标法检测Caspase-3/9含量;JC-1探针法检测线粒体跨膜电位;检测p53、Bcl-2、Bax等线粒体凋亡途径相关基因蛋白表达,RT-qPCR法检测线粒体凋亡途径各相关基因mRNA表达。低氧下特异性抑制caspase-9和同时抑制caspase-8和caspase-9后,酶标法检测细胞增殖活性。探索线粒体凋亡途径在低氧诱导GC-2细胞凋亡模型中的作用。4.低氧条件下转染HIF-1α特异性siRNA,采用流式细胞术检测GC-2凋亡,酶标法检测caspase-3/8/9含量,Western Blot法检测DR5、c-FLIP、DcR2、TRAIL、Fas、p53、Bcl-2、Bax等凋亡途径相关基因蛋白表达;研究HIF-1α在低氧激活DR凋亡途径和线粒体凋亡途径中的作用。5.建立低氧抑制小鼠精母细胞系GC-2自噬模型,并使用mCherry-GFP-LC3B法标记自噬小体与自噬性溶酶体并观察自噬流;流式细胞术检测自噬;Western Blot法检测Beclin-1、ATG5、BNIP-3、VPS34、LC3-II、p62、mTOR、LAMP2、VMA等自噬途径相关基因蛋白表达。6.低氧下转染Caspase-8特异性siRNA,采用酶标法检测GC-2细胞Caspase-3/8含量;mCherry-GFP-LC3B法观察自噬流;Cyto-ID法和吖啶橙法检测自噬;Western Blot法检测caspase-3/8、cleaved caspase-8、Beclin-1、ATG5、BNIP-3、VPS34、LC3-II、p62、mTOR、LAMP2、VMA等蛋白表达。7.低氧下过表达Beclin-1,运用Cyto-ID法检测GC-2细胞自噬;TUNEL法和Annexin V-FITC法检测凋亡;JC-1法检测线粒体跨膜电位;Western Blot法检测DR5、c-FLIP、DcR2、TRAIL、Fas、p53、Bcl-2、Bax蛋白表达。8.睾丸注射Puro-Beclin 1慢病毒,模拟海拔5000米低压低氧暴露30天,建立小鼠精子生成减少模型;HE染色和透射电镜观察生精小管结构变化;TUNEL法检测生精细胞凋亡。研究结果:1.与常氧对照组比较,1%氧暴露24h可诱导GC-2细胞凋亡增加,并且凋亡增加呈时间依赖性。2.低氧处理48h后,GC-2细胞DR5、TRAIL、Fas的mRNA水平和蛋白表达均显着增加,c-FLIP和DcR2的mRNA水平和蛋白表达均显着减少,DcR1的mRNA水平显着下降;LDH和caspase-8含量显着升高;与低氧对照组比较,特异性抑制caspase-8后,细胞增殖活性显着增加。3.低氧处理后,GC-2细胞Bax和p53的mRNA水平和蛋白表达均显着增加,Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达均显着下降;caspase-3/9含量显着增加;线粒体去极化占极化比例显着增加;与低氧对照组比较,特异性抑制caspase-8后,细胞增殖活性显着增加;与常氧对照组比较,同时特异性抑制caspase-8和caspase-9后,细胞增殖活性无显着差异。4.低氧暴露下转染HIF-1α特异性siRNA后,GC-2细胞凋亡和caspase-3/8/9含量显着下降;DR5、TRAIL、Fas、Bax和p53的蛋白表达显着下降,c-FLIP、DcR2和Bcl-2的蛋白表达显着增加。5.与常氧对照组GC-2细胞比较,1%氧暴露24h可抑制自噬,并且自噬呈时间依赖性降低;GC-2细胞Beclin-1、ATG5、BNIP-3、VPS34、LC3-II、LAMP2、VMA蛋白表达显着下降,p62和mTOR的蛋白表达显着增加。6.低氧暴露48h和60h后,转染GC-2细胞caspase-8特异性siRNA,caspase-3/8含量显着下降;GC-2细胞自噬显着增加;Beclin-1、ATG5、BNIP-3、VPS34、LC3-II、LAMP2、VMA蛋白表达显着升高,caspase-8、p62和mTOR的蛋白表达显着降低。7.1%氧暴露48h和60h后,过表达Beclin-1的GC-2细胞自噬显着升高,细胞凋亡显着下降,线粒体去极化占极化比例显着下降;caspase-3/8、cleaved caspase-8、DR5、TRAIL、Fas、Bax和p53的蛋白表达显着下降,c-FLIP、DcR2和Bcl-2的蛋白表达显着增加。8.模拟海拔5000米低压低氧暴露小鼠30天后,Puro-Beclin 1慢病毒转染后的小鼠睾丸中自噬流显着增加,生精小管病损程度减轻,生精细胞凋亡率显着降低。研究结论:1.低氧通过DR凋亡途径和线粒体凋亡途径诱导GC-2细胞凋亡。2.在低氧诱导的GC-2细胞凋亡中,DR凋亡途径和线粒体途径可能是由HIF-1α调控的。3.低氧通过促进caspase-8的活化,抑制GC-2细胞自噬,使低氧诱导的GC-2细胞凋亡进一步增强。4.低氧下过表达Beclin-1可降低线粒体外膜通透和精母细胞凋亡,并且缓解精子生成减少。5.精母细胞中的Beclin-1和caspase-8基因在精子生成减少的形成中发挥重要作用,有望成为治疗精子生成减少的有效靶点。
二、A study of apoptotic proteins TNFα、TNFR、Fas、FasLandBcl-2 family in chronic liver disease（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、A study of apoptotic proteins TNFα、TNFR、Fas、FasLandBcl-2 family in chronic liver disease（论文提纲范文）
（2）Biomarkers in the clinical management of patients with atrial fibrillation and heart failure（论文提纲范文）
| MICRO RNAS (mi RNAS) |
| Role of mi RNA in the Development and Pathophysiology of AF |
| Electrical Remodeling |
| Structural Remodeling |
| Autonomic nerve remodeling |
| Ca2+handling abnormality |
| Inflammatory mediators |
| Single nucleotide polymorphisms (SNPs) of miRNA |
| Micro RNAs as the biomarker for cardiovascular diseases |
| NATRIURETIC PEPTIDES |
| BNP and ANP:Biosynthesis and Biological Characterictics |
| Clinical Utility |
| Screening Biomarker |
| Diagnosis of HF |
| Prognosis of HF |
| NP-Guided Therapy |
| The role of NPs in the management of AF |
| NPs as a marker in AF recurrence after cardioversion or pulmonary vein isolation |
| NPs in the management of stroke in AF patients |
| ANP as a biomarker in AF management |
| NPs in the clinical management of AF and HF:coexisting conditions and useful biomarker |
| OXIDATIVE STRESS RELATED BIOMARK-ERS |
| Galectin-3 (GAL-3) |
| A1-Antitrypsin (AAT),A1-protein (A1-Pr) |
| Lectin-like oxidized low-density-lipoprotein receptor-1 (LOX-1) |
| INFLAMMATION RELATED BIOMARK-ERS (TABLE 2) |
| Ferritin |
| C-reactive protein (CRP) |
| Cytokines |
| Interleukin-6 |
| TNF-α |
| Interleukin-8 (IL-8) |
| Interleukin-10 (IL-10) |
| Soluble growth-stimulated expression gene 2(s ST2) |
| CYTOKINES IN HF MANAGEMENT |
| Chemokines |
| Erythrocyte Sedimetation rate (ESR) |
| Biomarkers Associated with Renal Function and Injury |
| Glomerular filtration rate |
| Cystatin C |
| Albuminuria |
| Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin(NGAL) |
| Kidney Injury Molecule 1 (KIM-1) |
| N-Acetyl-β-D-Glucosaminidase(NAG) |
| Interleukin-18 (IL-18) |
| Adrenomedullin (ADM) |
| Cardiac Troponins as Markers of Myocardial Injury |
| Extracellular matrix (ECM)-fibrosis markers |
| Markers of coagulation-D-dimers |
| CONCLUSION |
（3）CCN3在LPS诱导的急性肺损伤中的作用及其机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ENGLISH ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 一、实验方法 |
| 三、统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 展望 |
| 创新性与局限性 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述: CCN3蛋白在炎症性疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文答辩和评阅情况 |
| Paper 1 |
| Paper 2 |
（4）基于lncRNA GAS5/miR-23a/Apaf-1通路研究藤黄酸B对胃癌细胞caspase-3依赖凋亡及焦亡的影响及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 实验材料与仪器 |
| 1.1 药物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 细胞 |
| 1.4 动物 |
| 1.5 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 MA的提取分离纯化、含量测定及稳定性考察 |
| 2.1.1 MA的提取分离纯化及含量测定 |
| 2.1.2 MA的稳定性考察 |
| 2.2 MA抗胃癌活性及其对caspase-3依赖凋亡及焦亡影响的体外研究 |
| 2.2.1 受试药物配制 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 MTT法检测MA对不同胃癌细胞株体外增殖的抑制作用 |
| 2.2.4 划痕实验观察胃癌细胞迁移 |
| 2.2.5 Annexin V-PI双染法测定胃癌细胞凋亡率 |
| 2.2.6 Western-blot测定胃癌细胞中caspase-3依赖凋亡相关蛋白表达 |
| 2.2.7 荧光倒置显微镜观察胃癌细胞的焦亡 |
| 2.2.8 乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定胃癌细胞LDH释放率 |
| 2.2.9 Western-blot测定胃癌细胞中caspase-3依赖焦亡相关蛋白表达水平 |
| 2.3 MA抗胃癌活性及其对caspase-3依赖凋亡及焦亡影响的体内研究 |
| 2.3.1 受试药物配制 |
| 2.3.2 BALB/c小鼠胃癌皮下异位移植模型的制备 |
| 2.3.3 动物分组、给药与处理 |
| 2.3.4 小鼠胃癌皮下异位移植模型中观察MA对肿瘤生长的影响 |
| 2.3.5 HE染色法观察肿瘤组织病理形态 |
| 2.3.6 免疫组化检测胃癌模型小鼠胃癌细胞增殖 |
| 2.3.7 Western-blot测定胃癌组织中caspase-3依赖凋亡相关蛋白表达水平 |
| 2.3.8 Western-blot测定胃癌组织中caspase-3依赖焦亡相关蛋白表达水平 |
| 2.4 MA促进胃癌细胞caspase-3依赖凋亡及焦亡的分子机制研究 |
| 2.4.1 受试药物配制 |
| 2.4.2 细胞培养 |
| 2.4.3 RT-qRCR检测MA对于胃癌细胞及肿瘤组织中lncRNA GAS5表达的影响 |
| 2.4.4 siRNA建立lncRNA GAS5低表达胃癌瞬转细胞株 |
| 2.4.5 lncRNA GAS5低表达胃癌瞬转细胞分组与给药 |
| 2.4.6 Annexin V-PI双染法测定lncRNA GAS5低表达胃癌细胞凋亡率 |
| 2.4.7 荧光倒置显微镜观察lncRNA GAS5低表达胃癌细胞焦亡 |
| 2.4.8 乳酸脱氢酶(LHD)试剂盒测定lncRNA GAS5低表达胃癌细胞LDH释放率 |
| 2.4.9 RT-qPCR测定lncRNA GAS5低表达胃癌细胞中lncRNA GAS5/mi R-23a/Apaf-1通路相关RNA水平 |
| 2.4.10 Western-bolt实验测定lncRNA GAS5低表达胃癌细胞中lncRNA GAS5/miR-23a/Apaf-1通路相关蛋白表达 |
| 2.4.11 shRNA构建lncRNA GAS5低表达胃癌稳转细胞株 |
| 2.4.12 lncRNA GAS5低表达胃癌动物模型的制备 |
| 2.4.13 lncRNA GAS5低表达动物分组与给药 |
| 2.4.14 lncRNA GAS5低表达胃癌动物模型中观察MA对皮下移植瘤生长的影响。 |
| 2.4.15 RT-qPCR测定lncRNA GAS5低表达胃癌组织中lncRNA GAS5/miR-23a/Apaf-1通路相关RNA水平 |
| 2.4.16 Western-bolt实验测定lncRNA GAS5低表达胃癌组织中lncRNA GAS5/miR-23a/Apaf-1通路相关蛋白表达 |
| 2.5 数据结果分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 MA的提取分离纯化、含量测定及稳定性考察 |
| 3.1.1 MA提取分离纯化及含量测定 |
| 3.1.2 MA的稳定性考察 |
| 3.2 MA抗胃癌活性及其对caspase-3依赖凋亡及焦亡影响的体外研究 |
| 3.2.1 MA对不同胃癌细胞株体外增殖的抑制作用 |
| 3.2.2 MA对胃癌MKN-45及MFC细胞迁移能力的影响 |
| 3.2.3 进一步研究中受试细胞系的选择 |
| 3.2.4 MA对胃癌MKN-45及MFC细胞凋亡率的影响 |
| 3.2.5 MA对胃癌MKN-45及MFC细胞中凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.2.6 MA对胃癌MKN-45及MFC细胞焦亡形态的影响 |
| 3.2.7 MA对胃癌MKN-45及MFC细胞LDH释放的影响 |
| 3.2.8 MA对胃癌MKN-45及MFC细胞中焦亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.3 MA抗胃癌活性及其对caspase-3 依赖凋亡及焦亡影响的体内研究 |
| 3.3.1 MA对胃癌模型小鼠体内肿瘤生长的影响 |
| 3.3.2 MA对于胃癌模型小鼠体内肿瘤组织病理形态的影响 |
| 3.3.3 MA对胃癌模型小鼠体内肿瘤细胞增殖的影响 |
| 3.3.4 MA对胃癌组织中凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.3.5 MA对胃癌组织中焦亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.4 MA通过lncRNA GAS5/miR-23a/Apaf-1通路促进胃癌细胞caspase-3依赖凋亡和焦亡 |
| 3.4.1 MA对胃癌细胞及肿瘤组织中lncRNA GAS5表达的影响 |
| 3.4.2 MA对lncRNA GAS5低表达胃癌细胞凋亡率的影响 |
| 3.4.3 MA对lncRNA GAS5低表达胃癌细胞焦亡形态的影响 |
| 3.4.4 MA对于lncRNA GAS5低表达胃癌细胞LDH释放的影响 |
| 3.4.5 MA对lncRNA GAS5低表达胃癌细胞中lncRNA GAS5,miR-23a以及Apaf-1 mRNA水平的影响 |
| 3.4.6 MA对lncRNA GAS5低表达胃癌细胞中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、GSDME-NT、Apaf-1以及IL-18 蛋白表达的影响 |
| 3.4.7 lncRNA GAS5低表达稳定转染细胞株构建的最优条件 |
| 3.4.8 MA对lncRNA GAS5低表达胃癌皮下移植瘤生长的影响 |
| 3.4.9 MA对lncRNA GAS5低表达胃癌组织中lncRNA GAS5,miR-23a以及Apaf-1 mRNA水平的影响 |
| 3.4.10 MA对lncRNA GAS5低表达胃癌组织中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、GSDME-NT、Apaf-1以及IL-18 蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 MA抑制胃癌细胞增殖和迁移 |
| 4.2 MA体外诱导胃癌细胞caspase-3依赖凋亡 |
| 4.3 MA体外诱导胃癌细胞caspase-3依赖焦亡 |
| 4.4 小鼠胃癌皮下异位移植模型的制备 |
| 4.5 MA抑制胃癌模型小鼠体内肿瘤的生长 |
| 4.6 MA体内诱导胃癌细胞caspase-3依赖凋亡及焦亡 |
| 4.7 MA上调胃癌细胞及肿瘤组织中lncRNA GAS5水平 |
| 4.8 MA通过lncRNA GAS5/miR-23a/Apaf-1通路促进胃癌细胞caspase-3依赖凋亡及焦亡,抑制小鼠体内肿瘤的生长 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足之处与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 Antitumor effects and mechanisms related to the induction of programmed tumor cell death by active components in Resina Garciniae |
| Reference |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（5）空间阻滞寡核苷酸调控Mcl-1可变剪接诱导胃癌细胞凋亡的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 研究背景 |
| 1.2.1 细胞凋亡与肿瘤治疗 |
| 1.2.2 可变剪接与肿瘤治疗 |
| 1.2.3 凋亡因子Mcl-1可变剪接与肿瘤 |
| 1.2.4 空间阻滞寡核苷酸应用现状 |
| 1.2.5 小结 |
| 1.3 主要研究内容与研究方案 |
| 1.4 研究意义 |
| 第二章 Mcl-1可变剪接与胃癌的相关性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 实验仪器和设备 |
| 2.2.2 主要实验试剂 |
| 2.2.3 实验对象 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.2.5 统计方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 Mcl-1表达与胃癌的相关性 |
| 2.3.2 Mcl-1 可变剪接异构体mRNA在胃癌组织中的表达 |
| 2.3.3 Mcl-1S和 Mcl-1L mRNA表达与胃癌临床进展的相关性 |
| 2.3.4 胃癌组织Mcl-1L与 Mcl-1S表达的蛋白水平验证 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 SBOs调控Mcl-1 可变剪接诱导胃癌细胞凋亡的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 实验仪器和设备 |
| 3.2.2 主要实验试剂 |
| 3.2.3 实验对象 |
| 3.2.4 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 胃癌细胞株 Mcl-1L 及 Mcl-1S 基础表达 |
| 3.3.2 空间阻滞寡合苷酸(SBOs)转染效率评价 |
| 3.3.3 SBOs 对 Mcl-1L 及 Mcl-1S 表达的调控作用 |
| 3.3.4 SBOs对胃癌细胞凋亡的诱导作用 |
| 3.3.5 SBOs对胃癌细胞增殖的抑制作用 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 SBOs调控Mcl-1 可变剪接诱导凋亡的体内实验研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 实验仪器和设备 |
| 4.2.2 主要实验试剂 |
| 4.2.3 研究对象 |
| 4.2.4 实验方法 |
| 4.3 研究结果 |
| 4.3.1 SBOs对裸鼠的毒性反应 |
| 4.3.2 SBOs 治疗对移植瘤体 Mcl-1L 及 Mcl-1S 表达的调控作用 |
| 4.3.3 SBOs 治疗对移植瘤体细胞凋亡的诱导作用 |
| 4.3.4 SBOs 对移植瘤增殖生长的抑制作用 |
| 4.4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（6）Metabolic inflammation as an instigator of fibrosis during nonalcoholic fatty liver disease（论文提纲范文）
| INTRODUCTION |
| THE MULTIPLE HIT HYPOTHESIS IN NAFLD TO NASH PROGRESSION |
| INNATE IMMUNE PATHWAYS AND MEDIATORS LEADING TO METABOLISM-RELATED LIVER FIBROSIS |
| TOLL-LIKE RECEPTORS |
| TLR2 |
| TLR4 |
| ΤLR9 |
| NOD-LIKE RECEPTORS STRUCTURE AND FUNCTION |
| NLR in NASH |
| CYTOKINES |
| TNF-α |
| IL-1α/IL-1β |
| IL-6 |
| TGF-β |
| PDGF |
| GUT MICROBIOME AND NAFLD |
| CONCLUSION |
（7）Fas/FasL凋亡途径在氟致PC12细胞损伤中的作用及L-型钙通道拮抗剂的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1 氟化物毒性作用的研究现状 |
| 1.1 氟对骨项器官的毒性作用 |
| 1.2 氟对非骨项器官的毒性作用 |
| 2 氟诱导细胞凋亡机制的研究进展 |
| 2.1 线粒体介导氟诱导细胞凋亡的途径 |
| 2.2 内质网应激介导氟诱导细胞凋亡的途径 |
| 2.3 死亡受体介导的氟诱导细胞凋亡途径 |
| 3 抗氟药物研究现状 |
| 4 钙与氟中毒 |
| 4.1 钙的生理特性 |
| 4.2 氟中毒对机体Ca~(2+)代谢的影响 |
| 4.3 L-型钙通道与氟中毒的研究进展 |
| 5 钙与Fas/FasL信号通路 |
| 6 研究意义 |
| 第二章 Fas/FasL凋亡途径在氟致PC12细胞损伤中的作用 |
| 1 引言 |
| 2 材料与设备 |
| 2.1 实验细胞株 |
| 2.2 实验试剂与仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 PC12细胞的培养及分组 |
| 3.2 CCK-8检测细胞活力 |
| 3.3 DCFH-DA检测细胞内活性氧 |
| 3.4 Annexin V-FITC检测细胞凋亡 |
| 3.5 RT-PCR检测m RNA表达 |
| 3.6 Western Blot检测蛋白表达 |
| 3.7 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 氟暴露对PC12细胞活性的影响 |
| 4.2 氟暴露对PC12细胞活性氧水平的影响 |
| 4.3 氟暴露对PC12细胞凋亡率的影响 |
| 4.4 氟暴露对PC12细胞内Fas/FasL信号转导通路分子基因表达水平的影响 |
| 4.5 氟暴露对PC12细胞内Fas/FasL信号转导通路分子蛋白表达水平的影响 |
| 5 讨论 |
| 第三章 L-型钙通道拮抗剂对氟诱导的PC12细胞凋亡的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与设备 |
| 2.1 实验细胞株 |
| 2.2 实验试剂与仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 PC12细胞的培养及分组 |
| 3.2 DCFH-DA检测细胞内活性氧 |
| 3.3 Fluo-4检测细胞内钙离子水平 |
| 3.4 Annexin V-FITC检测细胞凋亡 |
| 3.5 RT-PCR检测mRNA表达 |
| 3.6 Western Blot检测蛋白表达 |
| 3.7 细胞周期检测 |
| 3.8 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 氟与Nifedipine联合暴露对PC12细胞内活性氧水平的影响 |
| 4.2 氟与Nifedipine联合暴露后对PC12细胞内钙离子的影响 |
| 4.3 氟与Nifedipine联合暴露对PC12细胞凋亡率的影响 |
| 4.4 氟与Nifedipine联合暴露对PC12细胞Cav1.2及Fas/FasL信号通路相关基因/蛋白表达的影响 |
| 4.5 氟与Nifedipine联合暴露对PC12细胞周期的影响 |
| 5 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
（9）颗粒体蛋白前体通过抑制肿瘤微环境中的自然杀伤细胞促进黑色素瘤进展（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| List of Abbreviations |
| Chapter 1:Introduction |
| 1.1.Melanoma |
| 1.1.1.A brief introduction about melanoma |
| 1.1.2.The genome-wide study of malignant melanoma |
| 1.1.3.Cancer immunology |
| 1.1.4.Immunosuppressive strategies in tumor |
| 1.1.5.Melanoma therapy |
| 1.2.Overview of growth factors and their receptors |
| 1.2.1.The epidermal growth factor(EGF)family |
| 1.2.1.1.Epidermal growth factor |
| 1.2.1.2.Transforming growth factor |
| 1.2.1.3.EGFR and its signaling pathway |
| 1.2.2.Transforming growth factor(TGF)- βfamily |
| 1.2.2.1.Transforming growth factor(TGF)- β |
| 1.2.2.2.TGF-βreceptors and signaling pathway |
| 1.2.3.Insulin-Like growth factor family |
| 1.2.3.1.Insulin-like growth factor-I |
| 1.2.3.2.Insulin-like growth factor-II |
| 1.2.3.3.IGF receptors and signaling pathways |
| 1.2.4.Vascular Endothelial Growth Factor family |
| 1.2.5.Platelet-derived growth factor family |
| 1.2.6.Fibroblast growth factor family |
| 1.3.Progranulin/Proepithelin growth factor family |
| 1.3.1.General introduction to progranulin |
| 1.3.2.The progranulin gene |
| 1.3.3.The protein structure of progranulin |
| 1.3.4.Roles of progranulin |
| 1.3.4.1.Role of progranulin in development |
| 1.3.4.2.Role of progranulin in chondrogenesis |
| 1.3.4.3.Role of progranulin in wound healing |
| 1.3.4.4.Role of progranulin in inflammation |
| 1.3.4.5.Role of progranulin in the brain |
| 1.3.4.6.Role of progranulin in cancer |
| 1.3.4.6.1.Cell growth and malignant transformation |
| 1.3.4.6.2.Tumor angiogenesis |
| 1.3.4.6.3.Cell proliferation |
| 1.3.4.6.4.Cell migration and invasion |
| 1.3.4.6.5.Resistance to anticancer drugs |
| 1.3.4.6.6.Immune evasion |
| 1.3.5.Progranulin receptor and its signaling pathways |
| 1.4.Significance of the study |
| Chapter 2:Materials and methods |
| 2.1.Experimental materials |
| 2.1.1.Mice |
| 2.1.2.Cell line |
| 2.1.3.Experimental Reagents |
| 2.1.4.The main experimental instruments |
| 2.2.Experimental methods |
| 2.2.1.Generating Grn knock-out B16-F10 cells by using CRISPR/Cas9 |
| 2.2.2.Reconstitution of Grn gene expression to the knock-out B16-F10 cells |
| 2.2.3.Ccl5 gene knockdown by using lentiviral vector |
| 2.2.4.Tumorigenesis studies |
| 2.2.5.Cell proliferation assay |
| 2.2.6.Preparation of single-cell suspensions from mouse tumor and spleen |
| 2.2.7.Stimulation of isolated tumor cells for analysis of intracellular cytokine |
| 2.2.8.Standard cell staining protocol for FACS |
| 2.2.9.In vivo NK and CD8 T cells depletion |
| 2.2.10.Wound healing assay |
| 2.2.11.Invasion transwell assay |
| 2.2.12.Soft agar colony formation assay |
| 2.2.13.Western blot |
| 2.2.14.ELISA |
| 2.2.15.RNA extraction and qPCR assay |
| 2.2.16.Luciferase reporter assay |
| 2.2.17.Bioinformatics analysis |
| 2.2.18.Pathway enrichment analysis |
| 2.2.19.Statistics |
| Chapter 3:Bioinformatic analysis of PGRN expression in patients with melanoma |
| 3.1.PGRN expression in normal human and melanoma patients |
| 3.2.High PGRN expression in human melanoma patients correlates with poor prognosis |
| Chapter 4:The study of progranulin's function in melanoma by using mouse tumor model |
| 4.1.CRISPR/Cas9-mediated Grn gene knock-out in B16-F10 cells |
| 4.1.1.Verification of B16-F10 Grn-/-clones at DNA level |
| 4.1.2.Verification of B16-F10 Grn-/-clones at protein level |
| 4.2.Tumor-derived,not host-derived PGRN regulates melanoma tumor growth |
| 4.3.progranulin plays a key role in tumor metastasis to the lung |
| 4.4.Reconstitution of PGRN expression restores tumor growth and metastasis |
| 4.4.1.PGRN deficiency results in reduced B16-F10 motility |
| Chapter 5:The study of PGRN's role in tumor-infiltrating immune cells in melanoma |
| 5.1.PGRN deficiency causes immunological changes in the TME |
| 5.2.Control of PGRN-regulated B16-F10 growth by NK cells is dependent on CD69 and IFN-γexpression |
| 5.3.NK cells are crucial in controlling PGRN-regulated B16-F10 growth |
| 5.4.Control of PGRN-regulated B16-F10 growth is independent of T cells activity |
| Chapter 6:How progranulin inhibits NK cells recruitment to the B16-F10 melanoma tumor |
| 6.1.PGRN inhibits CCL5 expression NK cell recruitment |
| 6.2.PGRN inhibits Ccl5 transcription in tumor cells |
| Chapter 7:Discussion |
| Chapter 8:Summary and future direction |
| 8.1.Summary of results |
| 8.2.Future work |
| References |
| Acknowledgements |
| The List of Publications |
（10）低氧诱导精母细胞凋亡导致精子生成减少的机制（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 低氧通过HIF-1α介导的死亡受体凋亡途径和线粒体凋亡途径诱导精母细胞凋亡 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 低氧经死亡受体凋亡途径caspase-8 抑制精母细胞巨自噬 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 过表达Beclin-1 促进精母细胞巨自噬、缓解凋亡,促进精子生成 |
| 4.1 实验方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 自噬在精子生成减少中的作用及机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 自噬与细胞死亡的对话 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的研究结果 |
| 致谢 |
四、A study of apoptotic proteins TNFα、TNFR、Fas、FasLandBcl-2 family in chronic liver disease（论文参考文献）
- [1]Phytochemicals as inhibitors of tumor necrosis factor alpha and neuroinflammatory responses in neurodegenerative diseases[J]. Fatemeh Zahedipour,Seyede Atefe Hosseini,Neil C.Henney,George E.Barreto,Amirhossein Sahebkar. Neural Regeneration Research, 2022(08)
- [2]Biomarkers in the clinical management of patients with atrial fibrillation and heart failure[J]. Ioanna Koniari,Eleni Artopoulou,Dimitrios Velissaris,Mark Ainslie,Virginia Mplani,Georgia Karavasili,Nicholas Kounis,Grigorios Tsigkas. Journal of Geriatric Cardiology, 2021(11)
- [3]CCN3在LPS诱导的急性肺损伤中的作用及其机制的研究[D]. 朱海萍. 山东大学, 2021(11)
- [4]基于lncRNA GAS5/miR-23a/Apaf-1通路研究藤黄酸B对胃癌细胞caspase-3依赖凋亡及焦亡的影响及机制[D]. 贾步云. 安徽中医药大学, 2021(01)
- [5]空间阻滞寡核苷酸调控Mcl-1可变剪接诱导胃癌细胞凋亡的研究[D]. 李永红. 兰州大学, 2020(04)
- [6]Metabolic inflammation as an instigator of fibrosis during nonalcoholic fatty liver disease[J]. Angeliki Katsarou,Ioannis I Moustakas,Iryna Pyrina,Panagiotis Lembessis,Michael Koutsilieris,Antonios Chatzigeorgiou. World Journal of Gastroenterology, 2020(17)
- [7]Fas/FasL凋亡途径在氟致PC12细胞损伤中的作用及L-型钙通道拮抗剂的影响[D]. 于秋丽. 浙江师范大学, 2020(01)
- [8]Tea polyphenols and their chemopreventive and therapeutic effects on colorectal cancer[J]. Shi-Tong Wang,Wen-Qi Cui,Dan Pan,Min Jiang,Bing Chang,Li-Xuan Sang. World Journal of Gastroenterology, 2020(06)
- [9]颗粒体蛋白前体通过抑制肿瘤微环境中的自然杀伤细胞促进黑色素瘤进展[D]. Ramouna Voshtani. 上海交通大学, 2019(06)
- [10]低氧诱导精母细胞凋亡导致精子生成减少的机制[D]. 殷骏. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019(03)