一、端粒酶hTR反义寡核苷酸对K562细胞端粒酶活性的影响（论文文献综述）
樊祥奎[1]（2014）在《端粒酶催化亚基和PinX1基因在食管癌治疗中的生物学意义》文中研究表明研究背景：食管癌是一种常见的恶性肿瘤,中国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家之一。食管癌的发生发展涉及多因素、多基因、多阶段,确诊时多为中晚期,预后极差,5年生存率仅为5%-20%。因此,探索食管癌的发病机制及安全有效的治疗方法成为食管癌治疗的关键。端粒、端粒酶在肿瘤细胞的永生化和演进过程中扮演重要角色。端粒酶的激活可以导致细胞无限制地增殖及肿瘤的发生。端粒（telomere）作为分子钟控制着人类细胞的生长与衰老,与细胞寿命密切相关。正常细胞每次分裂,端粒DNA的长度会缩短55～200bp,经历多次分裂缩短至下限时,细胞最终凋亡。端粒酶（telomerase）是一种以自身RNA为模板的逆转录酶,其核心组分之一端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase, hTERT）是细胞呈现端粒酶活性的决定因素。大量研究发现,在恶性肿瘤的发展中存在有端粒DNA长度的缩短,端粒酶的激活维持了癌细胞的端粒长度,抵消了细胞分裂导致的端粒DNA的消耗,说明端粒酶在恶性肿瘤的演变中起重要作用。已有研究表明,人体除外少量细胞如精原细胞、胚胎细胞、干细胞,大多数细胞的端粒酶都是无活性的,与之相反在绝大多数恶性肿瘤中端粒酶活性高表达,表达率高达90%以上。因此端粒酶的活化在恶性肿瘤发生发展中起到了至关重要的作用,并且可以作为具有普遍性和特异性的肿瘤分子标记物,在肿瘤的诊断中具有重要的地位。而抑制端粒酶的活性,则有可能阻止肿瘤细胞恶性增殖,这使端粒酶成为当今肿瘤诊治研究的热点。端粒酶是由端粒酶RNA （hTR）,端粒酶催化亚基（hTERT）和端粒酶相关蛋白I （TEPI）三个亚单位组成。我们曾将互补于hTR模板区的反义寡核苷酸（ASODN）作用食管癌细胞（ECA109）,结果显示可抑制端粒酶活性,阻止细胞生长,但由于hTR广泛表达于正常组织细胞,针对hTR的反义治疗对正常组织细胞可能带来一定危害。新近的研究表明,hTERT是端粒酶的催化亚单位,在组织细胞中的表达量与端粒酶活性相平行,是影响端粒酶活性的最重要部分,也是端粒酶活性的限速因子,针对hTERT的反义治疗比对hTR治疗可能更有效,靶向hTERT基因治疗显然更为理想。其中重要的方法有反义核酸技术封闭、锤头状核酶切割和抑制hTERT的转录等。我们针对hTERT基因合成一段长19个碱基的反义寡核苷酸,硫化磷酸修饰（PS-ASODN）,脂质体包裹,转染食管癌细胞,研究其对食管癌端粒酶活性及癌细胞生长的影响。PinX1基因作为端粒酶的内源性基因,近几年来被认为是一种潜在的抑癌基因,其表达可能与多种肿瘤的发生发展有关。有实验证实在胃癌、大肠癌及白血病患者中PinX1表达水平明显下降,端粒酶活性增强。但到目前为止,PinX1基因在食管癌中的生物学意义、作用机理国内外的报道很少,并且没有适合研究PinX1基因的食管癌细胞模型。由于基因转染已经成为治疗肿瘤有效手段,那么通过外源性过表达PinX1基因能否抑制食管癌细胞增殖?是否可以抑制端粒酶活性?本实验研究采用RT-PCR,TRAP眼染法、MTT及流式细胞仪研究转染PinX1基因前后癌细胞增殖凋亡情况和端粒酶的变化,初步了解该基因对食管癌细胞的生物学影响。进一步探讨PinX1基因与端粒酶的关系。以此证明PinX1基因是一个潜在的端粒酶活性抑制剂,可能通过靶向抑制端粒酶活性来影响肿瘤的发生发展,为食管癌的靶向基因治疗开辟新领域。目的：我们采用针对hTERT基因的全硫代修饰型反义寡核苷酸（PS-ASODN）转染于Eca-109人食管癌细胞,研究其对食管癌端粒酶活性及癌细胞生长的影响,探讨其对食管癌细胞的抑制作用及机理,寻找食管癌基因治疗的新方法。本实验成功构建PinX1基因表达载体pEGFP-C3-PinX1,将其转染有高转移潜能的Eca-109人食管癌细胞,观察转染PinX1对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡以及端粒酶活性的影响,同时应用TRAP-银染法检测转染前后Eca109细胞端粒酶活性的变化,研究PinX1基因与端粒酶的关系,初步了解该基因对食管癌细胞的生物学影响。为食管癌的基因治疗提供理论依据。方法：1.端粒酶催化亚基hTERT反义寡核苷酸对食管癌细胞抑制作用；采用MTT比色法测定PS-ASODN对Eca-109细胞的生长抑制率；采用倒置显微镜观察5μmol/L的PS-ASODN作用于Eca-109癌细胞10d后的细胞形态学改变；端粒酶活性检测采用半定量TRAP-银染法2基因转染PinX1对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡以及端粒酶活性的影响；利用分子生物学技术构建针对PinX1基因的表达载体pCDNA3.1-PinX1,采用脂质体LipofectamineTM2000包装形成的脂质体-RNA复合物,转染食管癌细胞Eca109,建立稳定表达PinX1的Eca109细胞模型,应用激光共聚焦方法测定转染效率,MTT方法检测转染前后细胞增殖、FCM方法检测细胞生长周期和细胞凋亡。RT-PCR方法检测检测PinX1基因及蛋白的表达,TRAP-银染法检测转染前后各组细胞端粒酶活性,阐明PinX1基因与端粒酶活化关系。结果：1.端粒酶催化亚基hTERT反义寡核苷酸对食管癌细胞抑制作用；PS-ASODN对Eca-109细胞的生长抑制作用具有剂量及时间依赖性和序列特异性。PS-ASDON作用后,Eca-109细胞的生长速度缓慢,细胞间连接疏松,细胞变圆漂起,细胞体积缩小。随时间延长,PS-ASODN对Eca-109细胞端粒酶活性的抑制作用逐渐增强,呈时间-依赖性；随药物浓度增加,PS-ASODN对Eca-109细胞端粒酶活性的抑制作用逐渐增,呈浓度-依赖性。2基因转染PinXl对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡以及端粒酶活性的影响；应用脂质体转染方法,将pCDNA3.1-PinX1重组质粒成功转染入Eca109细胞中,并应用G418成功筛选出稳定转染细胞, MTT法测定增殖情况结果显示,转染PinX1基因后,Eca109细胞生长明显减慢（P<0.05）；而Eca109细胞与仅转染入空载体的Eca109细胞生长比较,两者无明显差异（P>0.05）。表明pCDNA3.1-Pinx1对Eca109细胞增殖呈显着的抑制作用,以细胞在不同时间点（oh!24h!48h!72h）的OD490值绘制细胞生长曲线,并计算出的生长抑制率,说明转染PinX1基因后,细胞发生早期凋亡改变。RT-PCR、TRAP-银染法和FCM检测结果显示,Eca109/PinX1细胞中PinXl mRNA和蛋白表达水平较pCDNA3.1组、空白细胞组显着升高（P<0.05）。细胞端粒酶活性的检测结果显示,转染PinX1基因后,细胞端粒酶活性明显降低（P<0.05）。转染前后Eca109中端粒酶活性表达与细胞增殖指数（PI）表达呈正相关性（rs=0.451,P=0.000）。结论：针对hTERT的反义寡核苷酸能诱导食管癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,抑制端粒酶合成端粒,从而抑制食管癌细胞的生长,说明端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能有效地抑制肿瘤细胞的生长,为抗端粒酶的肿瘤基因治疗提供了实验基础。Eca109细胞转染PinX1基因后,外源PinX1基因可显着下调食管癌细胞中端粒酶活性及其hTERTmRNA表达,抑制肿瘤细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。表明PinX1基因是一个潜在的端粒酶活性抑制剂,考虑在食管癌细胞中PinX1基因通过降低端粒的活性,减弱细胞的增殖,有望成为食管癌治疗的分子靶点。
陈晓鹏,袁青,安宁,穆士杰,张献清,安群星[2]（2014）在《反义hTERT基因对K562细胞凋亡及周期的影响》文中进行了进一步梳理目的:探讨反义hTERT基因抑制K562细胞端粒酶活性对其细胞周期及增殖的影响。方法:用脂质体介导反义hTERT基因和空载体质粒转染K562细胞株,绘制生长曲线,MTT法检测细胞活性,血清饥饿法同步化细胞周期,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率变化。结果:反义hTERT基因转染后,细胞生长明显受到抑制。细胞同步化后,流式细胞仪检测显示:KA组细胞出现早期凋亡峰,细胞阻滞于S期。但正常培养48h,各组细胞无明显凋亡,周期无显着差异。结论:反义hTERT基因可明显抑制K562的增殖,细胞同步化后具有促凋亡作用。
王菲[3]（2012）在《hTERT pre-mRNA选择性剪接在调控胶质瘤端粒酶活性中作用的研究》文中研究说明研究目的:端粒是控制细胞增殖与衰老凋亡的生物钟,分化成熟的正常人体细胞不表达端粒酶,因次端粒随细胞分离次数增加逐渐缩短。端粒酶异常再表达及活化与细胞恶性转化密切相关,约90%以上恶性肿瘤有端粒酶再表达及活化。人端粒酶逆转录酶（hTERT）是人端粒酶的催化亚单位及决定其活性的关键因素。hTERT对端粒酶活性的调控分为转录水平调控和hTERT pre-mRNA选择性剪接调控,即转录后水平调控。α和β两个位点的缺失是目前hTERT pre-mRNA剪接调控中研究较多的位点。hTERT pre-mRNA序列上存在着外显子剪接增强子（ESE）序列,反义寡核苷酸与之相结合可诱导外显子跳跃,改变选择性剪接模式。本研究应用反义寡核苷酸与hTERT pre-mRNA中的外显子剪接增强子结合,调控其剪接模式,减少全长型hTERT mRNA的表达,抑制端粒酶活性,从而影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭。旨在探讨hTERT pre-mRNA的选择性剪接对端粒酶活性的调节作用,为新一代端粒酶抑制剂研发提供新思路及参考依据。研究方法:第一部分:以胶质瘤细胞系和胶质瘤组织标本为研究对象,采用RT-PCR方法检测hTERT选择性剪接变异体,用TRAP方法检测端粒酶活性,分析hTERT选择性剪接变异体和端粒酶活性的关系。第二部分:应用ESEfinder3.0软件分析hTERT pre-mRNA序列上外显子剪接增强子（ESE）的位点,特别是对外显子5～外显子9之间的序列进行预测分析,以获得分值较高,即ESE概率较大的位点。根据ESE序列设计并合成与其互补的反义寡核苷酸,将其转染U251胶质瘤细胞,探讨不同化学修饰结构对胶质瘤细胞端粒酶活性及端粒长度的影响。第三部分:应用TRAP法、TRF法检测经反义寡核苷酸长时程处理后U251细胞的端粒酶活性及端粒长度;应用MTT法、平板克隆形成实验、PI染色细胞周期测定、单细胞凝胶电泳、DNALadder实验、Annexin V/PI双染色细胞凋亡检测法、2DMatrigel实验、3DMatrigel实验、Transwell实验等,分析经反义寡核苷酸长时程处理后U251细胞的增殖、凋亡和侵袭能力的变化;应用Western blot技术检测与肿瘤细胞恶性表型相关的蛋白表达变化情况;观察经反义寡核苷酸长时程处理后U87细胞干细胞神经球的形成情况,及用TRAP法、TRF法检测U87干细胞的端粒酶活性及端粒长度。结果:第一部分:胶质瘤组织中及胶质瘤细胞系内均存在hTERT选择性剪接变异体表达。端粒酶活性和全长型hTERTmRNA表达相对量存在相关性,而总hTERT mRNA与端粒酶活性无相关性。第二部分:设计合成的2’-氧-甲基硫代磷酸酯寡核苷酸可调节hTERT pre-mRNA的剪接作用,产生外显子跳跃;使hTERT外外显子7和外显子8丢失,减少了全长型hTERT mRNA的表达,而增加了 β缺失型hTERT mRNA的表达;降低了 U251胶质瘤细胞的端粒酶活性。第三部分:经反义寡核苷酸长时程处理的U251细胞端粒酶活性降低,端粒长度缩短,增殖活性受到抑制,细胞凋亡显着增加,侵袭能力明显减弱,肿瘤细胞恶性表型相关的蛋白表达明显下调;经反义寡核苷酸长时程处理的U87细胞干细胞神经球形成不良,干细胞的端粒酶活性降低,端粒长度缩短。结论:1.hTERT pre-mRNA存在选择性剪接现象,可生成多种剪接变异体。总hTERT mRNA的表达水平与端粒酶活性并不是一一对应的关系,只有全长型hTERT蛋白具有促端粒酶活性。2.hTERT pre-mRNA序列上存在ESE位点,与之互补的2’-氧甲基硫代磷酸酯反义寡核苷酸可调控hTERT pre-mRNA选择性剪接模式,介导hTERT pre-mRNA外显子跳跃,减少全长型hTERT mRNA的表达,增加β缺失型hTERT mRNA的表达,从而抑制胶质瘤细胞的端粒酶活性。3.反义寡核苷酸通过改变hTERT pre-mRNA的选择性剪接模式抑制端粒酶活性,缩短端粒长度,使细胞增殖能力减弱,使肿瘤细胞凋亡明显,抑制肿瘤细胞的侵袭迁移能力。使胶质瘤干细胞的增殖能力减弱,端粒酶活性降低、端粒长度变短。4.本研究可为新一代端粒酶抑制剂研发提供新思路及参考依据,为胶质瘤基因治疗提供新的靶点及重要线索,可能成为将来胶质瘤治疗的有效策略之一。
肖扬,钱玉红,李力,庞妍,蒋祖军,李勇华[4]（2011）在《参芪扶正注射液联合hTR反义核酸对白血病小鼠骨髓细胞端粒酶活性及凋亡的影响》文中指出目的观察参芪扶正注射液联合hTR反义核酸对急性白血病小鼠骨髓细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法选取近交系8～12周龄DBA-2雄性小鼠尾静脉注射L1210淋巴细胞白血病株建立白血病小鼠模型,随机分为空白对照组及治疗组,治疗组分别给予参芪扶正注射液、参芪联合放射、参芪联合hTR反义核酸、参芪联合hTR反义核酸及放射治疗,疗程结束后活杀部分小鼠,采用端粒重复扩增（TRAP）-ELISA方法检测治疗后小鼠骨髓细胞的端粒酶活性,采用AnnexinV-FITC及PI双染,FACScan流式细胞术定量检测细胞凋亡率,观察各组小鼠骨髓细胞端粒酶活性、细胞凋亡率的变化。结果成功建立L1210/DBA-2白血病小鼠模型,检测到白血病小鼠的骨髓细胞端粒酶活性较正常小鼠明显升高,细胞凋亡率较正常小鼠下降;经参芪扶正注射液以及联合治疗后,各组小鼠骨髓细胞端粒酶活性明显下降,细胞凋亡率升高,以参芪联合hTR反义核酸及放射治疗组疗效最为显着,与其他各组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论急性白血病骨髓细胞端粒酶活性高表达可能是其治疗的靶点;参芪扶正注射液联合hTR反义核酸可通过下调端粒酶活性水平,促进白血病细胞的凋亡,对白血病小鼠放疗有一定增敏效应。
应晓杨,方美云,王一[5]（2010）在《反义寡核苷酸对K562细胞增殖和端粒酶活性的影响》文中研究表明目的研究靶向封闭端粒酶反转录酶（hTERT）mRNA的反义硫代寡核苷酸（ASPSODN）对K562细胞目的基因的抑制及其对端粒酶活性及细胞增殖周期和凋亡的影响。方法 ASPSODN转染到人类红白血病细胞株K562,采用MTT法、酶联免疫吸附（ELISA）法和流式细胞术（FCM）检测K562细胞的增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变,RT-PCR检测hTERT mRNA的表达。结果 0.6μmol/L的ASPSCODN（0.42±0.16）能明显下调hTERT表达（P<0.05）,端粒酶相对活性降至52%;MTT法检测显示明显抑制K562细胞增殖活性;FCM显示细胞凋亡率为10.31%,PI染色显示细胞被阻止在G1/G0期,S期及G2/M期的细胞减少,但无特征性的凋亡峰。结论 ASPSODN靶向hTERT能特异性抑制K562细胞hTERTmRNA的表达,明显下调端粒酶活性,抑制K562细胞增殖,并通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞凋亡。
闫华超,李林尉[6]（2009）在《抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展》文中认为综述了近年来抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡作用机制的研究进展.抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制主要有:阻滞肿瘤细胞增殖周期、影响细胞凋亡信号的转导途径、调控癌基因和抑癌基因的表达、降低端粒酶的活性、激活活性氧途径、线粒体途径及调节细胞内pH诱导凋亡等.
李沐纯,唐静波[7]（2009）在《白蛋白纳米载体介导的反义核酸对肝癌细胞端粒酶活性的抑制》文中指出目的利用纳米载体增强端粒酶反义寡核苷酸对肝脏肿瘤细胞端粒酶活性的抑制作用。方法实验设6组:空白对照组、纯纳米粒组、游离正义寡核苷酸组、游离反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸-纳米粒组和反义寡核苷酸-纳米粒组。用TRAP-ELASA法检测端粒酶反义寡核苷酸对肿瘤细胞端粒酶活性的影响,以MTT法测定端粒酶反义寡核苷酸对肝脏肿瘤细胞（HepG2）生长的抑制作用。结果①纯纳米粒组、游离端粒酶正义核苷酸组和端粒酶正义核苷酸-白蛋白纳米粒处理组的端粒酶活性与空白对照组差异无显着性（P>0.05）。②游离端粒酶反义核苷酸和端粒酶反义核苷酸-白蛋白纳米粒处理的肿瘤细胞的端粒酶活性与空白对照相比明显下降（P<0.05）,且两者之间差异存在显着性（P<0.05）。③纯纳米粒组、游离端粒酶正义核苷酸和端粒酶正义核苷酸-白蛋白纳米粒对肿瘤细胞的抑制作用很小。游离端粒酶反义核苷酸的抑制作用明显,端粒酶反义核苷酸-白蛋白纳米粒的抑制作用最强,两者之间差异有显着性（P<0.05）。结论白蛋白纳米粒可作为反义技术治疗的有效载体,增强端粒酶反义核苷酸的抑制作用。
钱玉红[8]（2009）在《参芪扶正注射液联合化疗对急性白血病患者骨髓细胞端粒酶活性的影响》文中进行了进一步梳理目的:观察hTR反义核酸对白血病小鼠骨髓细胞端粒酶活性、细胞凋亡的影响,探讨是否增加放射治疗的疗效;观察参芪扶正注射液对急性白血病患者骨髓细胞端粒酶活性的影响及疗效,以探求参芪扶正注射液治疗急性白血病的机制。方法:动物实验研究:建立急性白血病小鼠模型,随机分为空白对照组、hTR反义核酸组、放射组、hTR反义核酸联合放射组;疗程结束后活杀部分小鼠,采用端粒重复扩增（TRAP）-ELISA方法检测治疗后小鼠骨髓细胞的端粒酶活性,采用AnnexinV-FITC及PI双染,应用FACScan进行流式细胞术定量检测细胞凋亡率,观察治疗前后各组小鼠骨髓细胞端粒酶活性及细胞凋亡率的变化。临床研究:以我科初诊及复发的急性白血病住院患者为研究对象,采用随机单盲的方法将36例急性白血病患者分为治疗组及对照组,治疗组给予参芪扶正注射液联合化疗治疗,对照组给予单纯化疗治疗,治疗一个疗程后抽取患者骨髓,检测治疗前后2组急性白血病患者骨髓细胞端粒酶活性、细胞凋亡率的变化,检测方法同动物实验。结果:动物实验结果:成功建立L1210/DBA-2急性淋巴细胞白血病小鼠模型,治疗前各组急性白血病小鼠骨髓端粒酶活性较正常均明显增高,差异有统计学意义（P<0.05）,各组之间无统计学差异,细胞凋亡率较正常略有下降,无统计学差异（P>0.05）;治疗后空白对照组小鼠骨髓端粒酶活性有上升趋势,与治疗前相比无统计学意义;各治疗组小鼠骨髓细胞端粒酶活性明显下降,细胞凋亡率升高,与治疗前及空白对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;以hTR反义核酸联合放射组端粒酶活性下降最为显着,细胞凋亡率升高明显,与各组相比有统计学差异（P<0.05）;hTR反义核酸组与放射组端粒酶活性下降无明显差异,放射组在细胞凋亡率方面优于hTR反义核酸组;hTR反义核酸联合放射组小鼠生存时间较各组明显延长（P<0.05）。临床研究结果:36例急性白血病患者治疗前检测到端粒酶阳性者27例,阳性率为75%,端粒酶活性为3.852±1.879;其中ANLL 19例,阳性率为73.1%,ALL 8例,阳性率为80%,ANLL与ALL患者端粒酶阳性表达率无显着性差异（P>0.05）;其中治疗组患者端粒酶阳性表达14例,阳性率77.8%,端粒酶活性为3.88±1.797;对照组阳性表达13例,阳性率72.2%,端粒酶活性为3.823±2.009;两组治疗前端粒酶阳性表达率及端粒酶活性无明显差异（P>0.05）;治疗后两组急性白血病患者骨髓细胞端粒酶活性均明显下降,细胞凋亡率明显升高,较治疗前有统计学差异（P<0.05）;参芪联合化疗组优于单纯化疗组,差异有统计学意义（P<0.05）;两组在完全缓解率及总有效率方面无统计学差异（P>0.05）;参芪联合化疗组与化疗组相比较,骨髓抑制、恶心、呕吐等化疗药物毒副反应明显减轻。结论:端粒酶活性升高可能是急性白血病发生的机制之一;hTR反义核酸可抑制白血病小鼠的端粒酶活性,诱导细胞凋亡,联合放疗有协同作用,有放射增敏效应。参芪扶正注射液可通过下调急性白血病患者体内骨髓细胞端粒酶活性水平,促进细胞的凋亡,从而达到抗白血病效应,联合化疗有减毒增效作用。
刘学,单伟,曾瑞霞,房艳,李德华,秦书俭[9]（2009）在《全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用》文中提出目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸（antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN）对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代正义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorathioatesense oligodeoxy nucleotides,PS-SODN）组和不同剂量的全硫代反义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorat-hioate an-tisense oligodeoxy nucleotides,PS-ASODN）组;②脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于卵巢癌HO-8910细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）、吖啶橙染色法、四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）、流式细胞术检测HO-8910细胞的端粒酶活性、细胞形态、体外增殖、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果ELISA法检测结果显示端粒酶PS-ASODN作用卵巢癌HO-8910细胞72h后端粒酶活性表达为阴性,说明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性;②吖啶橙染色观察细胞形态:PS-ASODN作用的卵巢癌HO-8910细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩,说明PS-ASODN能够促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡;③MTT实验:PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖（P<0.0l）,并呈一定剂量和时间依赖关系;④流式细胞仪检测细胞凋亡和周期:与空白对照组比较,PS-ASODN组G0/G1期细胞明显增多,差异显着（P<0.01）;在G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰,表明细胞被阻止在G1/S期。结论PS-ASODN作用于卵巢癌HO-8910细胞后,卵巢癌HO-8910细胞增殖受到明显抑制,并出现凋亡;②PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大;③以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,PS-ASODN对卵巢癌的治疗具有重要价值。
刘学,单伟,曾瑞霞,房艳,李德华,秦书俭[10]（2009）在《全硫代反义寡核苷酸对肺癌细胞生长及端粒酶活性的影响》文中提出目的将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸（PS-ASODN）作用于肺癌细胞NCI-H292,探讨其对肺癌的治疗价值。方法PS-ASODN经lipotap脂质体转染作用于NCI-H292细胞,采用MTT法、ELISA法和流式细胞术检测NCI-H292细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果①MTT法检测,1.0μmol/LPS-ASODN处理后24h细胞生长抑制率为12.86%,且随着时间的延长,抑制作用逐渐增强。②ELISA法检测结果,0.5～1.5μmol/L的PS-ASODN对NCI-H292细胞作用72h后端粒酶皆为阴性,对照组阳性。③流式细胞仪检测结果:端粒酶PS-ASODN转染NCI-H292细胞培养72h后,检测到细胞早期凋亡率增加,凋亡率为15.3%,与对照组相比有极显着意义（P<0.01）。PI染色结果细胞被阻止在G1/G0期,S期比率有所降低,降为14.5%。结论①端粒酶PS-ASODN对NCI-H292细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用具有浓度、时间依赖性。②端粒酶PS-ASODN能明显地抑制NCI-H292的端粒酶活性。
二、端粒酶hTR反义寡核苷酸对K562细胞端粒酶活性的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、端粒酶hTR反义寡核苷酸对K562细胞端粒酶活性的影响（论文提纲范文）
（1）端粒酶催化亚基和PinX1基因在食管癌治疗中的生物学意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 端粒酶催化亚基hTERT反义寡核苷酸对食管癌细胞抑制作用的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 端粒酶抑制因子PinX1基因在食管癌细胞中的表达及作用效应分析 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
（2）反义hTERT基因对K562细胞凋亡及周期的影响（论文提纲范文）
| 1材料与方法 |
| 1. 1材料 |
| 1. 2方法 |
| 1. 3统计学分析 |
| 2结果 |
| 2. 1重组质粒的酶切鉴定 |
| 2. 2测序结果 |
| 2. 3细胞生长曲线 |
| 2. 4 MTT法测定细胞酶活力 |
| 2. 5流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 2. 6流式细胞仪检测细胞周期 |
| 3讨论 |
（3）hTERT pre-mRNA选择性剪接在调控胶质瘤端粒酶活性中作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、胶质瘤端粒酶活性与hTERT剪接变异体表达的相关性研究 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.1.1 主要仪器设备 |
| 1.1.2 材料 |
| 1.1.3 方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 胶质瘤组织HE染色的病理特点 |
| 1.2.2 胶质瘤细胞系hTERT ASVs表达及端粒酶活性检测结果 |
| 1.2.3 胶质瘤细胞系hTERT ASVs表达与端粒酶活性的相关性 |
| 1.2.4 胶质瘤组织中hTERT ASVs表达与端粒酶活性的相关性 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 端粒及端粒酶的结构和功能 |
| 1.3.2 hTERT及hTERT pre-mRNA的选择性剪接 |
| 1.3.3 hTERT ASVs表达与端粒酶活性的关系 |
| 1.4 小结 |
| 二、反义寡核苷酸的设计合成及对hTERT剪接和端粒酶活性的调控作用 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 主要仪器设备 |
| 2.1.2 材料 |
| 2.1.3 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 ESEFinder3.0预测hTERT pre-mRNA外显子剪接增强子 |
| 2.2.2 反义寡核苷酸转染U251胶质瘤细胞转染效率的评估 |
| 2.2.3 不同寡核苷酸对U251胶质瘤细胞生长的影响 |
| 2.2.4 反义寡核苷酸转染U251细胞对hTERT剪接变异体的影响 |
| 2.2.5 反义寡核苷酸转染U251细胞对端粒酶活性的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 ESEFinder预测外显子剪接增强子 |
| 2.3.2 反义寡核苷酸介导的外显子跳跃 |
| 2.3.3 反义寡核苷酸影响hTERT pre-mRNA选择性剪接调控端粒酶活性 |
| 2.4 小结 |
| 三、反义寡核苷酸对胶质瘤细胞增殖凋亡侵袭及其干细胞的影响 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 主要仪器设备 |
| 3.1.2 主要实验试剂和材料 |
| 3.1.3 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 端粒酶活性检测结果 |
| 3.2.2 端粒长度检测结果 |
| 3.2.3 MTT法细胞增殖能力检测结果 |
| 3.2.4 平板克隆形成实验检测结果 |
| 3.2.5 流式细胞仪分析细胞周期结果 |
| 3.2.6 单细胞凝胶电泳检测结果 |
| 3.2.7 DNA ladder检测结果 |
| 3.2.8 流式细胞仪检测细胞凋亡结果 |
| 3.2.9 细胞体外粘附实验结果 |
| 3.2.10 细胞体外基质降解实验结果 |
| 3.2.11 细胞体外侵袭实验结果(Transwell实验) |
| 3.2.12 Western blot检测蛋白表达的结果 |
| 3.2.13 反义寡核苷酸对胶质瘤干细胞的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 反义寡核苷酸对胶质瘤细胞增殖的调控 |
| 3.3.2 反义寡核苷酸对胶质瘤细胞凋亡的调控 |
| 3.3.3 反义寡核苷酸对胶质瘤细胞侵袭迁移的调控 |
| 3.3.4 反义寡核苷酸对胶质瘤干细胞的影响 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 端粒与端粒酶及其在干细胞中的作用研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（4）参芪扶正注射液联合hTR反义核酸对白血病小鼠骨髓细胞端粒酶活性及凋亡的影响（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 细胞株 |
| 1.3 药物与试剂 |
| 1.4 仪器 |
| 1.5 造模、分组与给药 |
| 1.6 检测指标 |
| 1.6.1 小鼠外周血象及骨髓象 |
| 1.6.2 |
| 1.6.3 小鼠骨髓细胞端粒酶活性检测 |
| 1.6.4 小鼠骨髓细胞凋亡率检测 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 L1210细胞株生长曲线及倍增时间 |
| 2.2 造模后一般情况 |
| 2.3 分组治疗后一般情况 |
| 2.4 体重变化和存活时间 |
| 2.5 治疗前与治疗后各组端粒酶活性及细胞凋亡率 |
| 3 讨论 |
（6）抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制 |
| 1.1 阻滞肿瘤细胞的增殖周期 |
| 1.2 影响细胞凋亡信号的转导途径 |
| 1.3 调控癌基因和抑癌基因的表达 |
| 1.4 降低端粒酶的活性 |
| 1.5 激活活性氧途径及线粒体途径 |
| 1.6 调节细胞内pH诱导凋亡 |
| 2 结束语 |
（8）参芪扶正注射液联合化疗对急性白血病患者骨髓细胞端粒酶活性的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一节 端粒酶及HTR与急性白血病关系的研究 |
| 第二节 HTR反义核酸与白血病治疗的研究 |
| 第三节 辐射对端粒酶活性的调节作用及细胞凋亡的研究 |
| 第四节 中医药对端粒酶活性的影响及在肿瘤治疗方面的应用研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 HTR反义核酸联合辐射对白血病小鼠骨髓细胞端粒酶活性及凋亡的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 参芪扶正注射液联合化疗对急性白血病患者端粒酶活性及疗效的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 结语 |
| 附录一 英文缩略词 |
| 附录二 彩图部分 |
| 致谢 |
四、端粒酶hTR反义寡核苷酸对K562细胞端粒酶活性的影响（论文参考文献）
- [1]端粒酶催化亚基和PinX1基因在食管癌治疗中的生物学意义[D]. 樊祥奎. 山东大学, 2014(04)
- [2]反义hTERT基因对K562细胞凋亡及周期的影响[J]. 陈晓鹏,袁青,安宁,穆士杰,张献清,安群星. 现代肿瘤医学, 2014(01)
- [3]hTERT pre-mRNA选择性剪接在调控胶质瘤端粒酶活性中作用的研究[D]. 王菲. 天津医科大学, 2012(08)
- [4]参芪扶正注射液联合hTR反义核酸对白血病小鼠骨髓细胞端粒酶活性及凋亡的影响[J]. 肖扬,钱玉红,李力,庞妍,蒋祖军,李勇华. 中药新药与临床药理, 2011(05)
- [5]反义寡核苷酸对K562细胞增殖和端粒酶活性的影响[J]. 应晓杨,方美云,王一. 白血病·淋巴瘤, 2010(05)
- [6]抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展[J]. 闫华超,李林尉. 聊城大学学报(自然科学版), 2009(03)
- [7]白蛋白纳米载体介导的反义核酸对肝癌细胞端粒酶活性的抑制[J]. 李沐纯,唐静波. 中国现代医学杂志, 2009(11)
- [8]参芪扶正注射液联合化疗对急性白血病患者骨髓细胞端粒酶活性的影响[D]. 钱玉红. 广州中医药大学, 2009(11)
- [9]全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用[J]. 刘学,单伟,曾瑞霞,房艳,李德华,秦书俭. 中国实用医药, 2009(08)
- [10]全硫代反义寡核苷酸对肺癌细胞生长及端粒酶活性的影响[J]. 刘学,单伟,曾瑞霞,房艳,李德华,秦书俭. 医学综述, 2009(06)