一、高原急性低氧对大鼠脑中枢内AVP含量的影响（论文文献综述）
蒲小燕[1]（2021）在《医学地理视角下高海拔环境对机体肺损伤机制的研究》文中提出青海省五分之四以上的地区为高原,高海拔低氧环境是引发高原肺水肿的重要地理环境因素。仅从医学角度分析肺水肿的发生过程,不利于明确地理环境对该疾病的影响;而仅从地理学角度分析肺水肿的诱发因素,又无法深入明确高原肺水肿的发病机制。因此,利用医学研究的相关技术和方法,从医学地理角度分析高原肺水肿的发病机制以及地理环境因子对其的影响,有针对性地找到治疗和预防高原肺水肿的有效药物,是更好地解决高原肺水肿的途径之一。为了明确不同海拔地理环境因子对机体肺功能的影响及其分子机制,并根据肺损伤的分子机制,准确地选择有效的预防药物,本文通过分析青海省海拔相差1 000 m的三个旅游胜地（西宁、门源、玛多）地理环境因子的相关性;以SPF级雄性SD大鼠为研究对象,分析了三个地区的气温、降水量、归一化植被指数、氧含量和海拔等地理环境因子与大鼠动脉血氧分压、氧饱和度、肺动脉压和肺组织含水量的相关性;在4 200 m低氧胁迫不同时间后,应用转录组学方法,筛选差异表达的基因,并进行了验证;应用分子生物学等实验方法,检测了不同海拔各组大鼠肺组织中内质网应激相关蛋白、炎症因子和肺组织细胞凋亡因子的表达;通过构建Fdft 1沉默的sh-Fdft 1腺病毒载体和阴性对照载体,利用腺病毒载体和维生素D3对大鼠进行预处理后,研究低氧对它们的血氧分压、血氧饱和度和肺动脉压、肺组织含水量变化以及肺组织细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响。研究结果表明,（1）大气中氧浓度与温度、归一化植被指数呈强正相关性（r值分别为0.967,1.000）,与海拔呈强负相关性（r=-0.994）,海拔每上升1 000m,气压下降10 Kpa,氧浓度下降约28 g/m3。（2）在4 200 m低氧环境中,持续低氧胁迫导致肺动脉压极显着升高（P<0.01）,和氧饱和度极显着下降（P<0.01）,肺组织中抗氧化酶（GSH-Px和SOD）活力极显着下降（P<0.01）,丙二醛含量极显着升高（P<0.01）,肺组织含水量极显着升高（P<0.01）,肺组织病理形态损伤明显,大量炎症因子浸润,随着胁迫时间的延长,损伤明显加重;在3 200 m海拔环境中,持续低氧胁迫造成大鼠上述生理和形态学指标轻度改变,损伤较轻;在2 200 m海拔环境中,大鼠以上指标变化不显着（P>0.05）。（3）环境地理因素中,海拔与血氧饱和度呈显着负相关（P<0.05）,海拔与肺含水量和肺动脉压显着正相关（P<0.05）,而空气氧浓度与血氧饱和度显着正相关（P<0.05）,空气中的氧浓度与肺含水量和肺动脉压显着负相关（P<0.05）。（4）转录组测序分析发现,4 200 m低氧损伤的大鼠肺组织差异基因主要富集在免疫、炎症和代谢相关通路中,其中NOD样受体及下游相关信号通路关键基因和类固醇激素合成通路的Fdft 1等基因极显着高表达（P<0.01）;在低氧损伤的大鼠肺组织中,NOD样受体下游p38 MAPK/NF-κB信号通路中的CARD9、MYD88、p-p38 MAPK和p-p65蛋白,以及内质网应激调控蛋白GRP78、PERK、IRE1、ATF6、CHOP和Caspase-12的表达水平显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）;低氧损伤的大鼠肺组织中细胞凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白表达显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）。（5）沉默Fdft 1后,低氧胁迫导致大鼠血氧分压和血氧饱和度极显着下降（P<0.01）,肺动脉压和肺组织含水量极显着升高（P<0.01）,肺组织中Bcl-2蛋白表达极显着降低（P<0.01）,而PCNA、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达极显着增加（P<0.01）。（6）维生素D3能极显着提高低氧胁迫组和Fdft 1沉默组大鼠血氧分压和饱和度,极显着抑制肺动脉压和肺组织含水量的增加以及肺中PCNA和凋亡相关蛋白表达水平（P<0.01）。上述结果提示,大气中氧浓度与归一化植被指数和温度呈正相关性,与海拔高度呈负相关性,海拔是影响大气氧浓度的最主要因素。随着海拔的升高,大鼠肺组织损伤逐步加重,当海拔升高到4 200 m时可导致大鼠肺动脉高压和高原肺水肿的发生。地理环境因素中,海拔高度是影响肺功能的主要因子。在高海拔环境中,大鼠肺组织中p38 MAPK/NF-κB通路和内质网应激介导的肺上皮细胞凋亡和炎症反应导致高原肺水肿的发生。沉默维生素D3合成过程中的关键基因（Fdft 1）可加剧大鼠低氧性肺动脉高压和高原肺水肿的发生。外源性补充维生素D3对缺氧性肺损伤的发生发展具有显着的预防和保护作用。
常宇飞[2]（2021）在《高压氧预处理和后处理对低压低氧环境造成的大鼠认知功能障碍的保护作用研究》文中研究指明目的:本实验拟探究高压氧预处理与后处理能否有效保护因低压低氧环境所致大鼠认知功能障碍,并探讨Nrf2,HO-1蛋白在其产生保护作用过程中的部分可能机制。方法:预处理组:采用雄性SD大鼠40只（体重180-220g）,随机分为4组:空白对照组（D组）10只（不接受高压氧或低压氧处理）;高压氧对照组（HBO组）10只（只接受每天一次连续五天的高压氧预处理,不接受低压氧处理）;低压低氧组（S组）10只（接受连续2天的低压低氧处理）;高压氧预处理+低压低氧组（Pre HBO组）10只（接受每天一次连续五天的高压氧预处理,处理结束后第二天开始接受连续两天的低压低氧处理）。后处理组:采用雄性SD大鼠40只（体重180-220g）,随机分为4组:空白对照组（D组）10只（不接受高压氧或低压氧处理）;高压氧对照组（HBO组）10只（只接受每天一次连续五天的高压氧预处理,不接受低压氧处理）;低压低氧组（S组）10只（接受连续2天的低压低氧处理）;高压氧后处理+低压低氧组（Post HBO组）10只（先接受连续两天的低压低氧处理,处理结束后接受每天一次连续五天的高压氧后处理）。预处理组与后处理组的高压氧条件为2.5ATA,氧浓度要超过80%,CO2浓度<0.05%;预处理组与后处理组的低压氧条件为350 mm Hg,6%-7%O2。低压低氧处理后第八天开始利用Morris水迷宫及Y迷宫评价大鼠认知功能。低压低氧处理后不同时间点采用ELISA法分别测定各组大鼠血清促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α含量,各组大鼠海马组织Nrf2,HO-1蛋白表达情况。结果:1、低压低氧处理组大鼠处理后Y迷宫实验交替得分率相比对照组明显降低,高压氧预处理+低压低氧处理组大鼠和高压氧后处理+低压低氧处理组大鼠在Y迷宫实验中交替得分率均比低压低氧处理组大鼠明显升高。2、ELISA结果:实验动物经低压低氧处理后定时检测血清促炎因子,在不同时间点完成,明确IL-6、IL-1β、TNF-α含量,结果显示单纯低压低氧处理组高于高压氧预处理和后处理组。3、高压氧预处理和后处理组大鼠海马组织Nrf2,HO-1蛋白表达明显高于单纯低压低氧处理组。4、单独高压氧处理组与空白对照组相比,大鼠认知功能无显着差异。结论:急性低压低氧环境对大鼠可能存在一定伤害性,使得其早期认知功能下降,而进行高压氧预处理和后处理,可以缓解其认知功能下降的程度。对其机制进行探讨,考虑经高压氧处理后促炎因子释放减少,引起适度氧化应激,提高海马组织内Nrf2蛋白的表达,从而产生神经保护作用。
刘鹏飞,胡艳婷,姜静雯,赵晟,邓会,薛新颖,潘磊,崔磊,王勇,乔辉,李天佐,赵斌江[3]（2021）在《通心络胶囊对大鼠低压低氧暴露后炎症反应和脑组织水肿及认知功能的影响》文中研究表明目的探讨通心络胶囊对急性低压缺氧暴露大鼠认知功能损伤的神经保护作用及其相关机制。方法64只雄性Sprague-Dawley大鼠随机均分为四组,包括正常组（C）,通心络组（TXL）,低压低氧组（HH）,和低压低氧+通心络组（TXL+HH）。在低压低氧暴露前,所有大鼠进行5 d水迷宫训练。然后在低压低氧环境下暴露7 d。7 d后,采用旷场实验,水迷宫实验测定认知功能,然后处死取海马组织,Western blot检测海马组织TLR-4、MyD88、IκB-α,NF-κB p65,AQP4,MMP-9的表达,ELISA检测血清和海马组织中IL-1β、TNF-α、IL-6的水平,HE染色观察海马组织病理学变化,并测定大鼠的脑水含量。结果 （1）行为学实验:四组大鼠旷场实验结果无统计学差异（P>0.05）;但在水迷宫空间探索实验中发现,与C组比较,HH组大鼠原平台所在象限停留时间及穿越平台次数明显降低（P<0.05）; TXL干预后,大鼠原平台所在象限停留时间及穿越平台次数较低压低氧组明显升高,（P<0.05）;（2）炎症指标比较:与C组比较,HH组大鼠血清及海马组织IL-1β、TNF-α、IL-6水平,海马TLR-4、MyD88、NF-κB p65蛋白水平明显升高（P<0.05）,TXL干预后,炎症指标相关蛋白水平均下降（P<0.05）;（3）海马组织损伤比较:HH组大鼠海马AQP4及MMP-9表达及脑水含量明显高于C组（P<0.05）,海马区细胞排列紊乱,肿胀明显,边界模糊;而TXL干预后,AQP4,MMP-9表达及脑水含量均明显下降（P<0.05）。结论急性低压缺氧暴露可导致认知功能障碍和脑组织水肿,通心络干预可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路活化,减轻海马炎症,改善认知损伤和脑组织水肿。
马倩倩[4]（2021）在《急性低压低氧对大鼠血脑屏障相关连接蛋白和通透性的影响》文中研究指明目的:通过研究急性低压低氧对大鼠脑组织HIF-1α、AQP4和紧密连接Claudin-5、Occludin、ZO-1的表达和形态学变化,探讨急性低压低氧对大鼠血脑屏障相关连接蛋白和通透性的影响。方法:选取雄性SD大鼠48只,将其随机分成4组,具体包括:对照组、7000 m低压低氧24 h组、48 h组和72 h组。各低氧组于低压舱中模拟海拔7000m（305 mm Hg,PO2 63.7 mm Hg）持续行低压低氧处理。通过观察大鼠精神状态、体重变化及脑组织含水量（干湿重法）和血脑屏障通透性（伊文思蓝法）的变化,通过q RT-PCR检测大鼠脑组织中HIF-1α、AQP4、Claudin-5、Occludin、ZO-1m RNA的表达量,通过Western blot检测大鼠脑组织中AQP4、Occludin、ZO-1蛋白的表达水平,结合脑组织形态学变化,探讨急性低压低氧对大鼠血脑屏障通透性的影响。结果:（1）大鼠进入低压舱（7000 m）后表现为活动度降低、进食饮水减少,逐渐出现背毛竖立、体重减少等现象。（2）伊文思蓝（evens blue,EB）染色结果显示7000 m低压低氧24 h组大鼠血脑屏障通透性增加（p<0.05）。（3）大鼠脑组织AQP4 m RNA的表达量在各组无显着性差异;紧密连接Claudin-5 m RNA的表达量在7000 m低压低氧48 h组明显增加（p<0.05）;紧密连接Occludin、ZO-1m RNA的表达量在7000 m低压低氧48 h组和72 h组明显增加（p<0.05）;HIF-1αm RNA的表达量随着低氧时间延长而逐渐升高。（4）大鼠脑组织AQP4和Occludin蛋白的表达水平在7000 m低压低氧72 h组明显上升（p<0.05）,ZO-1蛋白的表达水平在7000 m低压低氧48 h组明显上升（p<0.05）。（5）脑组织形态学观察显示,模拟7000 m低压低氧行不同时间处理,低压低氧各组神经元形态学均有改变,表现为不同程度的细胞核深染和细胞间隙、血管周间隙增大。与对照组相比,低压低氧24 h组形态变化不显着;低压低氧48 h组偶见细胞空泡化;低压低氧72 h组大鼠脑组织细胞空泡化增多、水肿明显,胶质细胞增生显着。结论:急性低压低氧状态下,脑组织HIF-1α表达增高,可能通过影响AQP4、Claudin-5、Occludin和ZO-1的表达,引起BBB功能和结构的改变,从而影响了BBB的通透性,这些变化可能参与了HACE的发生、发展过程。
沈慧萍[5]（2021）在《“井穴”放血预处理对西宁地区急性低氧大鼠肺损伤AQP-1、AQP-5的影响》文中研究指明目的:观察“井穴”放血预处理对西宁地区（海拔2261米）急性低氧模型大鼠动脉血气分析、肺湿干重比、肺组织病理学及肺组织中TNF-α含量及AQP1、AQP5m RNA表达的影响,为临床应用针灸防治急性低氧肺组织损伤提供新的思路与实验依据。方法:将成年雄性SD大鼠共72只按随机数字表法分为3组:空白对照（A）组、低氧模型（D）6h、24h、48h、72h组、“井穴”放血预处理（C）6h、24h、48h、72h组。C组大鼠使用刺血针点刺井穴（按少商、商阳、中冲、关冲、少冲、少泽顺序）放血预处理5天,同时每日对A、D组大鼠进行与C组大鼠相同的方式抓取并轻按压刺激双前爪一次。于第6d将C、D组大鼠置于西宁地区（海拔2261米）低氧模拟舱以制备急性低氧大鼠肺组织损伤模型,在舱内暴露相应时间后出舱,同时将A、C、D三组大鼠麻醉,腹主动脉采血,检测各组大鼠动脉血气分析,开胸取肺组织,计算肺湿干重比、观察各组大鼠肺组织病理变化、ELISA法检测肺组织TNF-α含量,RT-PCR技术检测肺组织中AQP1、AQP5m RNA表达。结果:（1）血气分析:与A组相比,C、D组各时间段大鼠动脉血氧分压（Pa O2）、氧饱和度（Sa O2）均降低（P<0.01）,同时间段C、D两组大鼠血气分析比较,C组Pa O2、Sa O2较D组升高。（2）肺组织湿干重比:与A组相比,C、D组各时间段肺组织湿干重比均升高;同时间段C、D两组相比,C组比值较D组均降低（P<0.01）。（3）肺组织病理学:与A组相比,C、D组各时间段大鼠肺组织病理学显示大鼠肺组织结构均出现损伤破坏,同时间段两组大鼠肺组织病理学相比,C组肺组织损伤程度较D组减轻。（4）肺组织TNF-α含量:与A组相比,C、D组各时间段大鼠肺组织TNF-α含量均升高（P<0.01）,同时间段两组大鼠表达相比,C组TNF-α含量较D组降低（P<0.01）（5）肺组织AQP1、AQP5m RNA表达:与A组大鼠相比较,C、D组各时间段大鼠肺组织AQP1表达均升高,AQP5表达均降低（P<0.05）,同时间段两组大鼠表达相比,除72h外C组AQP1表达均较D组降低（P<0.05）,AQP5表达较D组升高（P<0.05）。结论:1.急性低氧能导致大鼠动脉血氧分压、氧饱和度减低,肺组织中TNF-α含量及AQP1表达升高,AQP5表达降低,肺组织损伤。2.“井穴”放血预处理能够在一定程度上升高动脉血氧分压、氧饱和度,调节大鼠肺组织内AQP1、AQP5m RNA的表达,降低肺组织内TNF-α含量,减少肺组织的含水量,改善急性低氧导致的肺组织损伤。
麻海英[6]（2021）在《“井穴”放血预处理对大鼠急性高原肺损伤AngⅡ、ACE、ET-1的影响》文中进行了进一步梳理目的:观察“手十二井穴”放血预处理对急性高原缺氧大鼠肺组织AngⅡ含量、血浆AngⅡ含量、肺组织ACEm RNA表达、肺组织ET-1含量的影响,为临床应用针灸疗法防治急性高原肺损伤提供一定的实验依据。方法:将SD雄性大鼠随机分组:空白A（n=8）,缺氧对照D,井穴放血干预组C。缺氧对照D（D6、D24、D48、D72）、井穴放血干预组C（C6、C24、C48、C72）。比较D组,C组均用采血针操作,先扎左前肢,再扎右前肢,计12穴。取穴:肺经少商穴,大肠经商阳穴,心包经中冲穴,三焦经关冲穴,心经少冲穴,小肠经少泽穴。空白组与缺氧对照组每日均施以与井穴放血干预组相同的刺激方式只抓取不针刺。5天后,C、D组同时入人工低压模拟舱,舱内海拔匀速升至7000m高度,暴露不同时间段以制备高原肺损伤大鼠模型。计算肺组织湿干重比W/D;HE观察肺组织病理改变。Elisa检测Ang II、ET-1含量变化;Real time PCR对比肺组织ACE m RNA的表达。结果:1.肺组织W/D:与A对照,D组W/D在各个时间段均显着增高,该数值随时间变化,48h达到峰值,表明低压低氧可以使肺组织W/D增加。2.HE结果:与A对照,D组病理切片均发生不同程度损伤,72h时损伤最严重。表明低压低氧会诱导大鼠肺组织发生损伤,随缺氧时间逐渐加重。同时间段针刺各组较模型各组肺组织损伤均呈现不同程度好转。3.Elisa结果:与A对照,D组Ang II、ET-1含量在各个时间段均显着增高,且随缺氧时间延长逐渐升高,提示低压低氧可以使肺部Ang II含量、ET-1的含量上升;同时间段针刺各组较模型各组Ang II含量、肺组织ET-1含量均呈下降趋势。4.Real time PCR结果:与A对照,D组ACEm RNA的表达在各个时间段均呈上调趋势,提示低压低氧可以使肺组织ACEm RNA表达上调。除72h外,其余3组不同时间段针刺干预后ACEm RNA表达均呈下降趋势。结论:1.通过本次实验,验证了人工所设低压氧舱设备会诱导正常大鼠发生肺部损伤。2.研究可知:模拟7000米、暴露72小时,能较好建立肺损伤大鼠模型。3.井穴放血预处理能够影响大鼠AngⅡ含量、ET-1含量及ACE m RNA表达,进而对大鼠急性高原缺氧肺组织损伤起到防治作用,为针灸防治高原低氧急性肺组织损伤提供实验依据。
黄尚勇[7]（2021）在《运用DCE-MRI技术结合醋甲唑胺负荷实验探讨慢性高原环境下SD大鼠脑血流储备能力及血脑屏障改变》文中研究指明目的:通过动态对比度磁共振成像技术（DCE-MR）结合醋甲唑胺负荷试验研究SD大鼠长期在高原低压低氧环境下脑血流量（CBF）、脑血流储备能力（CVR）以及血脑屏障（BBB）的改变情况。方法:将40只六周龄无特定病原体（SPF）雄性健康SD大鼠随机分为高原组和平原组,各20只,将高原组和平原组大鼠分别在玉树藏族自治州人民医院动物实验室（海拔约3700米）和达硕实验动物公司（海拔约500米）饲养3个月后用7.0T磁共振扫描仪对大鼠进行头颅磁共振DCE扫描,然后给大鼠灌喂醋甲唑胺盐水混浊液,两小时后再次进行头颅行磁共振DCE扫描,最后灌注取脑,对感兴趣区域组织进行病理检查。后续将DCE数据进行后处理得到半定量参数脑血流量（CBF）及定量参数容积转运常数（Ktrans）,将醋甲唑胺刺激前后CBF代入相应公式得到CVR。结果:（1）醋甲唑胺负荷试验前高原组及平原组大鼠不同感兴趣区CBF未见明显区别,不具有统计学差异（p>0.05）;（2）醋甲唑胺负荷试验前后,高原组及平原组大鼠不同感兴趣区CBF明显升高,具有统计学差异（p<0.05）;（3）高原组大鼠脑不同感兴趣区CVR较平原组大鼠增高,具有统计学差异（p<0.05）;（4）高原组及平原组大鼠不同感兴趣区域Ktrans未见明显区别,不具有统计学差异（p>0.05）。结论:长期慢性高原环境下,大鼠BBB、CBF改变不明显,CVR增高。
王艺博[8]（2021）在《大株红景天胶囊对高原缺氧致疲劳、情绪及认知损伤的作用研究》文中研究指明我国高原面积广阔,不仅具有重要的经济、政治地位,更具有重要的军事战略地位,是国家社会稳定的关键点。然而高原缺氧环境对机体运动及认知功能产生重要影响,导致缺氧暴露人群体能下降、焦虑抑郁及认知功能下降,严重威胁高原部队官兵军事作业效能,然而目前还没有理想的防治高原缺氧脑-体功能损伤的有效药物。随着高原边防、高原救援等短期急进高原任务的逐渐增加,寻找一种既可以增强高原运动耐力,又有助于改善高原缺氧暴露致情绪及认知功能损伤的药物对于提高高原部队官兵的战斗力和作业能力具有重要意义。大株红景天胶囊由大株红景天干燥根的水提物制得,临床用于冠心病、心绞痛等心血管疾病的治疗,然而大株红景天胶囊对高原缺氧致脑-体功能障碍的影响未见系统报道。复方丹参滴丸是我军装备的抗高原缺氧药物,其对高原缺氧的保护作用获得美军关注。本研究首先评价了大株红景天胶囊对小鼠耐常压缺氧能力和抗疲劳的作用影响,然后模拟急性高原缺氧暴露,观察小鼠体能、情绪及认知功能的改变,在此基础上观察大株红景天胶囊对模拟急性高原缺氧暴露引起的疲劳、焦虑抑郁及认知功能损伤的影响,最后探讨大株红景天胶囊改善高原缺氧致焦虑、抑郁及认知功能损伤的作用机制,以期揭示大株红景天胶囊在改善高原缺氧相关脑-体功能障碍方面的潜在应用价值。一、大株红景天胶囊提高小鼠常压耐缺氧能力和抗疲劳作用6～8周龄雄性BALB/c小鼠按体重和自主活动性随机分为对照组、复方丹参滴丸0.122 g·kg-1组（临床人用剂量换算）、大株红景天胶囊0.35 g·kg-1,0.7 g·kg-1（临床人用剂量换算）和1.4 g·kg-1组、红景天苷0.120 g·kg-1组（根据临床人用剂量中红景天苷的含量换算）,每组10只。灌胃给药7 d后,采用低氧混合气体缺氧和密闭缺氧模型观察大株红景天胶囊耐缺氧作用;采用负重游泳实验、转棒实验观察大株红景天胶囊抗疲劳作用。采用比色法检测小鼠非负重游泳力竭后肝和腓肠肌组织中糖原含量以及血清中疲劳相关指标尿素氮（BUN）、乳酸（BLA）含量及乳酸脱氢酶（LDH）活性、氧化应激相关指标超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性及丙二醛（MDA）含量的变化。1、大株红景天胶囊提高小鼠常压耐缺氧和抗疲劳作用与对照组相比,大株红景天胶囊0.7和1.4 g·kg-1组小鼠低氧混合气体缺氧存活时间和负重游泳时间显着延长;大株红景天胶囊1.4 g·kg-1组小鼠转棒实验学习期和测试期在棒时间显着延长。以上结果提示,大株红景天胶囊具有提高耐常压缺氧能力和抗疲劳作用。2、大株红景天胶囊对力竭游泳小鼠疲劳相关指标的影响大株红景天胶囊组小鼠非负重力竭游泳后肝和腓肠肌组织中的糖原含量及血清中的LDH、SOD和GSH-PX活性显着升高,而血清中BUN,BLA和MDA含量显着降低。与对照组相比,复方丹参滴丸0.122g·kg-1组仅显着延长小鼠负重游泳时间,升高肝糖原含量和GSH-PX活性。二、模拟高原缺氧不同暴露时间对小鼠体能、情绪及认知功能的影响6-8周龄雄性BALB/c小鼠按体重和自主活动性随机分为常氧对照组、高原缺氧3天组（HAH-3）和高原缺氧7天组（HAH-7）,每组20只。将模拟高原缺氧组小鼠放置于多因素复合环境模拟医学科学实验舱内,以5 m/s的速度匀速减压直至海拔高度到达6100 m,缺氧处理3天、7天。常氧对照组在常压常氧条件下饲养。缺氧结束后,立即对小鼠进行体能、情绪及认知功能评价。1、模拟高原缺氧对小鼠体重和体能的影响各组小鼠体重变化趋势结果显示,与常氧对照组比较,模拟高原缺氧暴露1天,HIA-3和HAH-7组小鼠体重均显着下降,缺氧暴露3天后体重下降到最低;此后小鼠体重无明显变化但仍显着低于常氧对照组。自主活动结果显示,对常氧对照组相比,HAH-7小鼠自主活动距离显着增加。2、模拟高原缺氧对小鼠物体识别记忆的影响新物体识别实验结果显示,与常氧对照组相比,HAH-3组小鼠学习后1 h测试新物体偏好指数明显下降,HAH-7组小鼠新物体偏好指数无显着变化;HAH-3组和HAH-7组小鼠学习后24 h测试新物体偏好指数均显着下降。上述结果提示,模拟高原缺氧3天、7天均可造成小鼠认知功能损伤。3、模拟高原缺氧对小鼠焦虑样行为的影响旷场实验结果显示,与常氧对照组相比,HAH-3组和HAH-7组小鼠旷场中心区域进入次数显着减少,中心区域停留时间显着缩短。高架十字迷宫实验结果显示,与常氧对照组相比,HAH-3小鼠开臂进入次数有减少趋势,HAH-7小鼠开臂进入次数明显减少;HAH-3和HAH-7小鼠开臂停留时间显着缩短。上述结果提示,模拟高原缺氧3天和7天小鼠均可出现焦虑样行为,且随暴露时间延长焦虑症状加重。4、模拟高原缺氧对小鼠抑郁样行为的影响强迫游泳实验结果显示,与常氧对照组相比,HAH-3组和HAH-7组小鼠不动时间均显着延长。悬尾实验结果表明,与常氧对照组相比,HAH-3组小鼠不动时间有延长趋势,HAH-7组小鼠不动时间显着延长。上述结果提示,模拟高原缺氧暴露3天和7天小鼠均可出现抑郁样行为,且随暴露时间延长抑郁症状加重。以上实验表明,模拟6100 m高原缺氧暴露可导致小鼠自主活动异常增加,出现焦虑、抑郁样行为及认知功能损伤。6100 m缺氧暴露7天可作为药效评价的模型。三、大株红景天胶囊对模拟高原缺氧所致疲劳、焦虑抑郁及认知功能损伤的影响小鼠适应饲养7 d后,根据体重、自主活动性和糖水偏好基线随机分为7组,分别为常氧对照组（CON）、模拟高原缺氧组（HAH）、复方丹参滴丸0.122 g·kg-1组（临床人用剂量换算）、红景天苷0.120g·kg-1组根据临床人用剂量中红景天苷的含量换算)、大株红景天胶囊0.35 g·kg-1,0.7 g·kg-1（临床人用剂量换算）和1.4 g·kg-1组。采用多因素复合环境模拟医学科学实验舱模拟海拔6100 m高原缺氧7天构建高原缺氧小鼠模型,造模期间给予受试药物,常氧对照组和模拟高原缺氧组给予相同体积的生理盐水,观察大株红景天胶囊对模拟高原缺氧所致疲劳、焦虑抑郁及认知功能损伤的影响。1、大株红景天胶囊对模拟高原缺氧小鼠体重和体能的影响结果显示,与常氧对照组比较,模拟高原缺氧暴露第1天,各缺氧组小鼠体重均显着下降,随着缺氧时间延长,从第3天起小鼠体重无显着变化但仍显着低于常氧对照组组。模拟高原缺氧组小鼠在棒时间显着缩短,负重游泳时间有减少趋势。大株红景天胶囊组小鼠在棒时间显着长于HAH组;大株红景天胶囊组和复方丹参滴丸组小鼠负重游泳时间显着延长。上述结果提示,大株红景天胶囊具有提高高原缺氧小鼠疲劳耐力的作用。2、大株红景天胶囊对模拟高原缺氧小鼠焦虑样行为的影响结果显示,与常氧对照组相比,HAH组小鼠旷场运动总距离无显着变化,旷场中心区域停留时间显着缩短,中心区域进入次数显着减少。各给药组对模拟高原缺氧小鼠旷场运动总距离无明显影响;大株红景天胶囊0.35和1.4 g·kg-1组和复方丹参滴丸0.122 g·kg-1组小鼠旷场中心区域停留时间显着长于HAH组;大株红景天胶囊1.4 g·kg-1组小鼠旷场中心区域进入次数显着增加。上述结果提示,大株红景天胶囊具有改善高原缺氧小鼠焦虑样行为的作用。3、大株红景天胶囊对模拟高原缺氧小鼠抑郁样行为的影响采用糖水偏好实验结果观察小鼠抑郁样行为。与常氧对照组相比,HAH组小鼠糖水偏好率显着下降。大株红景天胶囊0.7和1.4 g·kg-1组小鼠糖水偏好率显着高于HAH组。上述结果提示,大株红景天胶囊可改善高原缺氧小鼠抑郁样行为。4、大株红景天胶囊对模拟高原缺氧小鼠物体识别记忆的影响结果显示,与常氧对照组比较,HAH组小鼠于学习后1 h和24 h对新物体的偏好指数显着降低。与HAH组小鼠比较,复方丹参滴丸0.122 g·kg-1组小鼠于学习后1 h新物体的偏好指数显着升高;大株红景天胶囊1.4 g·kg-1组小鼠于学习后1 h和24 h新物体的偏好指数均显着升高,且显着高于红景天苷组。上述结果提示,大株红景天胶囊具有改善高原缺氧小鼠短时和长时记忆的作用。四、大株红景天胶囊改善模拟高原缺氧所致焦虑抑郁及认知功能损伤的作用机制突触可塑性是神经元的动态特征,是学习记忆的生物学基础,主要包括长时程增强（LTP）。突触可塑性受多种内外环境的影响,脑源性神经影响因子（BDNF）是影响突触可塑性的重要因素。BDNF与神经细胞膜上的受体结合可引起LTP的改变。血管生长因子（VEGF）和促红细胞生成素（EPO）均可参与BDNF的神经保护信号通路。VEGF和EPO又是缺氧诱导因子-1α（HIF-1αα）的主要靶基因,HIF-1αα是缺氧应答的全局性调控因子。因此本研究探讨了大株红景天胶囊对缺氧小鼠海马突触可塑性、神经元凋亡、HIF-1α信号通路以及记忆相关蛋白的影响。1、大株红景天胶囊对模拟高原缺氧小鼠海马前穿通纤维-齿状回（PP-DG）通路LTP的影响采用在体电生理实验以群峰电位（PS）为指标,观察小鼠海马区长时程增强（LTP）的变化。结果显示,与常氧对照组比较,HAH组小鼠海马LTP明显损伤;大株红景天胶囊1.4 g·kg-1和红景天苷明显改善高原缺氧所致小鼠海马LTP损伤。上述结果提示,大株红景天胶囊具有改善高原缺氧致小鼠海马突触可塑性损伤的作用。2、大株红景天胶囊对模拟高原缺氧小鼠海马神经元数目的影响采用尼氏染色方法观察小鼠海马神经元损伤程度和尼氏小体数目。结果显示,常氧对照组小鼠海马区神经细胞排列整齐,核大而圆,核仁明显,可见较多尼氏小体。HAH组小鼠海马区可见神经元固缩增加,出现深染,尼氏小体数量减少,细胞结构受损,上述病理改变在CA1区较为明显。与HAH组相比,大株红景天胶囊组和复方丹参滴丸组小鼠海马神经元数量降低明显减轻。上述结果提示,大株红景天胶囊对急性模拟高原缺氧暴露导致的脑组织病理学损伤具有保护作用。3、大株红景天胶囊对模拟高原缺氧小鼠海马中BDNF-Trk B信号通路及突触相关蛋白的影响免疫印迹结果显示,与常氧对照组相比,模拟高原缺氧组小鼠海马中TrkB蛋白水平显着增加,BDNF、PSD-95蛋白水平有降低趋势。复方丹参滴丸组和大株红景天胶囊(0.35和1.4 g·kg-1)组小鼠海马组织中BDNF蛋白水平显着增加。大株红景天胶囊组小鼠海马组织中TrkB、PSD-95的蛋白表达有增加趋势,红景天苷组小鼠海马组织中PSD-95的蛋白表达有增加趋势,复方丹参滴丸组无明显变化。上述结果提示,大株红景天胶囊对缺氧所致情绪及认知损伤的保护作用可能与记忆相关蛋白、突触结构和功能的变化有关。4、大株红景天胶囊对模拟高原缺氧小鼠海马HIF-1α信号通路相关蛋白的影响免疫印迹实验结果显示,与常氧对照组组比较,HAH组小鼠海马中HIF-1α蛋白水平无显着变化,PHD-2蛋白水平显着降低,FIH蛋白水平有降低趋势,但无显着性差异。与HAH组相比,大株红景天胶囊组小鼠海马组织中HIF-1α?和EPO蛋白水平有增加趋势,FIH和VEGF蛋白水平有降低趋势,对PHD-2蛋白水平无显着影响。上述结果提示,大株红景天胶囊提高机体耐缺氧能力可能与抑制FIH蛋白表达,增加HIF-1α?蛋白聚积,恢复VEGF水平并促进EPO表达有关。由以上结果得出结论:（1）大株红景天胶囊具有提高常压耐缺氧能力和抗疲劳作用,该作用可能与提高肝糖原、肌糖原含量,减轻疲劳产物堆积,增强抗氧化活性有关。（2）模拟高原缺氧可导致疲劳、焦虑抑郁样行为及认知功能损伤,且与缺氧暴露时间有关。大株红景天胶囊可改善模拟高原缺氧所致疲劳、情绪及认知功能损伤,提示其有望成为改善高原缺氧致脑-体功能障碍的防治药物。（3）大株红景天胶囊对高原缺氧小鼠海马神经突触可塑性具有改善作用、对脑神经细胞具有保护作用,且机制可能与调节HIF-1α信号通路、BDNF-Trk B、PSD-95蛋白表达等有关。
黄河[9]（2020）在《急性高山病和高原红细胞增多症的microRNA表达特征及其病理生理学意义研究》文中研究指明研究背景我国是世界上高原面积最大,常住人口最多的国家,有6000多万人居住在高原地区。随着高原地区社会经济和国防事业的日益发展,现在每年都有超过1000万人从平原进入高原从事旅游、商贸、建设和军事戍守。高原自然环境恶劣,低压低氧可导致急性高山病（又称急性高原反应）（acute mountain sickness,AMS）和高原红细胞增多症（high altitude polycythemia,HAPC）等疾病高发,严重损害身体健康。AMS是指从平原急进至高原（海拔高度2500 m以上）人群,出现由缺氧引起的以剧烈头痛、头晕、恶心等神经症状为典型表现的一种急性高原病。该病的发病率高,据国内外多项研究显示,AMS发病率高达30%-90%。同时,其危害性很大,轻者显着降低急进高原人的作业能力,影响日常工作,重者可以发展成为高致死率的高原脑水肿（high altitude cerebral edema,HACE）,危及生命安全。因此,AMS已经成为威胁急进高原军民身体健康的主要疾病。HAPC是一种以红细胞过度增生为主要特征的常见慢性高原病,在久居3000-4500 m高原人群中,其发病率为1.21%-24.0%。HAPC对人体具有很大危害性,过度增生的红细胞会引起微循环障碍,造成各器官缺氧损伤;损伤严重者,甚至会发生各脏器血栓栓塞,导致猝死。因此,HAPC高发已经成为严重威胁久居高原军民的重大公共卫生问题。目前对于AMS与HAPC治疗,尚无特异性高、副作用低的治疗药物可用,因此疾病的早期预防具有重要意义。然而,目前对于AMS与HAPC发病风险预测也缺乏特异性强、灵敏性高的生物标志物。究其原因,以往对AMS与HAPC的研究主要集中于生理反应差异、生化代谢改变及病理形态异常等方面,而对其分子生物学机制缺乏系统性探究。因此,从新角度深入研究AMS与HAPC的发病相关分子生物学机制,寻找可能防治靶点及高效的预测标志物,对于维护我国高原军民健康、促进高原地区社会经济和国防事业的发展具有重大的现实意义。近年来,有关microRNA对基因表达调控及其在疾病发病机制中的作用受到广泛关注。microRNA是一类广泛存在于真核细胞中,长度为18-24个核苷酸的内源性小分子非编码RNA。该分子在基因表达调控网络中处于节点位置,通过转录或转录后抑制的方式,调控机体超过30%的编码蛋白质基因。低氧可以引起多种microRNA的表达变化,且许多microRNA参与了缺氧代偿性生理调节与缺氧病理生理学过程。现已发现,microRNA表达异常与冠心病、脑卒中、肝肾缺血损伤、急性呼窘迫症等多种缺氧相关疾病的发生密切相关。这些研究为阐明疾病发病机制和寻找有效的防治靶点提供了全新的思路。然而,microRNA在AMS发病机制中起到什么作用?其是否能作为预测AMS发病风险的高效生物标志物?目前尚缺乏研究。同时,microRNA还参与红系细胞的增殖、分化和成熟,并在真性红细胞增多症、继发性红细胞增多症及骨髓增殖性肿瘤等多种血液疾病的发病中起到重要的作用。然而,microRNA是否参与HAPC这种高原特殊环境中的血液系统疾病的发生发展?目前,也缺乏系统的研究。因此,本文围绕“microRNA在AMS和HAPC中的表达特征及其在疾病发病机制中的作用”这一主题,从下述五部分进行研究。第一部分,采用microRNA表达谱芯片对急性高原低氧暴露后AMS患者和不发病者的血浆标本进行检测,以揭示AMS患者的microRNA表达谱特征。并进一步对AMS发病相关microRNA的靶基因进行GO和KEGG富集分析,以探究这些microRNA所调控的分子生物学过程及信号通路,为AMS发病机制研究提供新的思路。第二部分,以AMS患者体内显着上调的miR-181b-5p为研究分子,分别在小鼠高原脑水肿（high altitude cerebral edema,HACE）模型上对miR-181b-5p的变化进行检测（注:HACE是重症AMS发展而来,目前研究认为二者主要在病情的严重程度不同,而发病机制基本相同,再者由于AMS动物疾病模型的缺乏,故本研究选用HACE模型进行研究）;并进一步在细胞模型上对miR-181b-5p进行分子生物学实验,明确其在AMS炎症相关发病机制中所起的作用,为AMS治疗寻找新的靶点。第三部分,在AMS患者和不发病者平原时（急性低氧暴露前）血浆和唾液标本中进行 microRNA 实时定量聚合酶链式反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测,为AMS发病风险预测寻找高效生物标志物。第四部分,对HAPC患者和同海拔健康对照的血浆标本进行外泌体RNA-seq检测,以揭示HAPC患者的血浆外泌体microRNA表达谱特征。并进一步对HAPC发病相关microRNA的靶基因进行GO和KEGG富集分析,以探究这些microRNA所调控的分子生物学过程及信号通路,为HAPC发病机制的研究提供新思路。第五部分,在HAPC患者及动物模型的红细胞内对miR-144-3p的变化进行检测;并进一步在红系细胞内针对miR-144-3p设计分子生物学实验,以明确miR-144-3p在HAPC红系细胞功能紊乱相关发病机制中的作用,为HAPC治疗寻找新的作用靶点。研究对象和实验方法一、AMS患者的microRNA表达谱检测（1）研究对象为急性暴露于高原环境中的AMS患者（AMS）和不发病者（Non-AMS）。AMS 诊断根据路易斯湖标准（Lake Louis score system,LLS）进行。（2）采集研究对象的人口学资料、生理学指标及血浆标本。（3）使用microRNA表达谱芯片对血浆标本进行检测,并对结果进行生物信息学分析。（4）运用qRT-PCR验证microRNA表达谱芯片筛选出的AMS发病相关microRNA。二、AMS发病相关分子miR-181b-5p的生物学功能研究（1）通过生物信息学分析,预测在AMS患者中上调的microRNA——miR-181b-5p的靶基因,了解其所涉及的信号通路。（2）选用8周龄的雄性C57BL/6小鼠,分成2组:（Ⅰ）正常对照组,在常氧环境中饲养24 h;（Ⅱ）高原脑水肿组,通过低压氧舱（模拟海拔:6000 m）暴露24 h复合尾静脉注射脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）（剂量:0.5 mg/kg）复制疾病模型。（3）检测对照组和高原脑水肿组小鼠外周血白细胞中miR-181b-5p、IL-1β、IL-6以及TNF-α表达水平。（4）选用小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞作为细胞实验对象。将RAW264.7细胞分成2组:（Ⅰ）正常对照组,在21%O2条件下正常培养24 h;（Ⅱ）低氧和LPS复合刺激组,在1%O2和LPS（100 ng/mL）复合刺激条件下培养24小时,以构建细胞炎症模型。（5）使用 miR-181b-5p 模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）、阴性对照（negative control）转染RAW264.7细胞,检测细胞及上清中IL-1β、IL-6以及TNF-α的mRNA表达及蛋白含量变化。（6）采用双荧光素酶报告基因法鉴定“蛋白激酶C-δ（protein kinase C delta,PRKCD）”是否为miR-181b-5p的靶基因。三、平原血浆和唾液microRNA对AMS发病风险预测的研究（1）研究对象为AMS患者（AMS）和不发病者（Non-AMS）。AMS诊断根据LLS诊断标准进行。（2）采集研究对象的人口学资料、生理学指标。（3）采集AMS组和Non-AMS组的血浆及唾液标本。（4）使用qRT-PCR检测AMS组和Non-AMS组平原血浆和唾液中microRNA表达水平。（5）通过生物信息学分析microRNA生物学功能。（6）采用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测AMS组和Non-AMS组急性高原暴露后血浆标本中IL-1β、IL-6以及TNF-α含量。四、HAPC患者microRNA表达谱检测（1）研究对象为HAPC患者和同海拔健康对照。HAPC诊断根据第六届国际高原医学和高原生理学学术会议推荐指南执行。（2）采集研究对象的人口学资料、生理学指标、血常规指标及血浆标本。（3）使用RNA-seq技术对血浆外泌体microRNA进行检测,并对结果进行生物信息学分析。（4）使用qRT-PCR验证筛选出的差异表达microRNA。五、HAPC发病相关分子miR-144-3p的生物学功能研究（1）通过生物信息学分析,预测HAPC患者中上调microRNA——miR-144-3p的靶基因,了解其所涉及的信号通路。（2）检测HAPC患者与健康对照红细胞中miR-144-3p表达水平及氧化物（ROS和MDA）和抗氧化物（SOD和GSH）含量。（3）动物实验研究:选6周龄的雄性SD大鼠,分成2组:（Ⅰ）对照组,在常氧条件下饲养28天;（Ⅱ）HAPC组,在低压氧舱（模拟海拔:5800 m）中持续暴露28天,复制HAPC大鼠模型。（4）检测对照组和HAPC组大鼠红细胞中miR-144-3p表达水平及ROS、MDA、SOD、GSH 含量。（5）选用人红系细胞系K562细胞为细胞实验对象。将K562细胞分成2组:（Ⅰ）正常对照组,在21%O2的培养箱中正常培养6h;（Ⅱ）氧化损伤组,使用含10 μM/mL过氧化氢的培养基,在21%O2的培养箱中培养6小时,构建细胞氧化损伤模型。（6）使用 miR-144-3p 模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）、阴性对照（negative control）转染K562细胞,检测细胞中ROS水平、MDA含量,及抗氧化物SOD1、GCLC、GCLM、CAT、GPX1 及 NQO1 mRNA 表达水平。（7）采用双荧光素酶报告基因法鉴定“核因子E2相关因子2（nuclear factor E2-related factor 2,NRF2）”是否为 miR-144-3p 的靶基因。主要结果一、AMS患者的microRNA表达谱特征（1）AMS患者和不发病者的microRNA表达谱存在显着差异microRNA芯片检测,共筛选到93个microRNA在AMS患者与不发病者之间显着差异表达,其中56个血浆microRNA在AMS患者中表达显着上调,37个显着下调（全部 p<0.05）。（2）AMS发病相关microRNA主要涉及低氧适应、能量代谢、血管生成及炎症反应相关信号通路调节AMS发病相关microRNA的功能,主要涉及低氧适应（HIF-1通路）、能量代谢（cAMP通路）、血管生成（VEGF通路）及炎症反应（MAPK、NF-κB、Toll样受体、NOD样受体及TNF等通路）等信号调节。（3）microRNA芯片检测结果可重复性强qRT-PCR 检测结果显示,与 Non-AMS 相较,miR-676-3p、miR-181b-5p、miR-193b-5p和miR-3591-3p在AMS患者血浆中的表达水平显着上调,与microRNA芯片结果趋势一致（全部p<0.01）。（4）miR-676-3p、miR-181b-5p 及 miR-3591-3p 可作 AMS 辅助诊断指标ROC 曲线分析显示,miR-676-3p、miR-181b-5p 及 miR-3591-3p 对 AMS 发病的诊断效能分别为 0.713（95%CI=0.588-0.838,p<0.01）、0.735（95%CI=0.614-0.855,p<0.001）和 0.805（95%CI=0.700-0.911,p<0.001）。二、miR-181b-5p是炎症反应的负调节分子（1）miR-181b-5p涉及炎症反应通路的调节miR-181b-5p的靶基因涉及的信号通路主要为炎症反应相关的信号通路,如:MAPK、NF-κB、NOD样受体、Toll样受体等通路。其中,NF-κB通路中重要基因“蛋白激酶C-δ（protein kinase C delta,PRKCD）”被预测为 miR-181b-5p 的靶基因。（2）miR-181b-5p在小鼠高原脑水肿模型中显着上调表达与对照组相较,小鼠高原脑水肿模型的白细胞中miR-181b-5p、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显着上调（全部p<0.05）。该结果提示miR-181b-5p与炎症反应之间的潜在关系。（3）miR-181b-5p可通过抑制PRKCD减轻巨噬细胞炎症反应外源性在RAW264.7细胞中过表达miR-181b-5p,可以显着下调细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表达水平,并降低细胞上清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量（全部p<0.01）。而外源性在RAW264.7细胞中抑制miR-181b-5p表达后,结果与过表达相反（全部p<0.01）。经双荧光素酶报告基因实验鉴定,PRKCD是miR-181b-5p的靶基因（全部p<0.01）。三、平原血浆和唾液microRNA可作为AMS发病风险预测生物学标志物（1）平原血浆microRNA分子可作为AMS发病风险预测生物学标志物三个平原血浆microRNA 分子（miR-1183、miR-15b-5p及miR-23b-5p）构成的生物标志物组合对AMS发病风险的预测效能可以达到0.872（95%CI=0.836-0.903,p<0.001）。（2）调控抗炎症能力储备可能是血浆microRNA组合生物作用基础GO分析结果显示:miR-1183,miR-15b-5p和miR-23b-5p参与调控免疫系统过程、固有免疫反应、MAPK信号通路、MyD88-Toll样受体信号等经典炎症反应通路调节。相关性分析显示,miR-1183、miR-15b-5p和miR-23b-5p与血浆炎症因子（IL-1β,IL-6和TNF-α）含量显着相关（全部p<0.01）。（3）平原唾液miR-134-3p和miR-15b-5p可预测AMS发病风险平原时唾液miR-134-3p和miR-15b-5p组合对AMS发病风险的预测效能可达到0.811（95%CI=0.731-0.876,p<0.001）。（4）miR-134-3p和miR-15b-5p涉及调控炎症反应GO分析结果显示:miR-134-3p和miR-15b-5p可以共同调控MAPK及Toll样受体信号通路等经典炎症反应通路。四、HAPC患者microRNA表达谱特征（1）HAPC患者和健康对照间的microRNA表达谱存在显着差异RNA-seq检测筛选到44个血浆外泌体microRNA在HAPC患者和同海拔健康对照组间存在显着差异,其中3 3个microRNA在HAPC患者中表达显着上调,11个microRNA表达显着下调（全部p<0.05）。（2）HAPC发病相关microRNA主要的分子生物学功能上述HAPC发病相关microRNA分子涉及鞘脂类、细胞内吞、线粒体自噬、Ras、TNF、MAPK及Hedgehog等多个信号通路的调节。（3）RNA-seq检测结果可重复性强qRT-PCR检测结果显示,与同海拔健康对照相比较,miR-144-3p、miR-210-3p,miR-19b-3p及miR-21-3p在HAPC患者血浆外泌体中的表达水平显着上调（全部p<0.01）。该结果与RNA-seq检测结果趋势一致。五、miR-144-3p是抗氧化损伤通路的负向调节分子（1）miR-144-3p可能涉及抗氧化损伤通路的调节miR-144-3p的靶基因显着富集于HGF受体、NRF2-抗氧化损伤、Sonic Hedgehog及MAPK等信号通路。进一步分析发现“核因子E2相关因子2（nuclear factor E2-related factor 2,NRF2）”是 miR-144-3p 的预测靶基因。（2）红细胞miR-144-3p表达上调与其抗氧化能力下降及氧化损伤加重密切相关与对照组相较,在HAPC患者及大鼠模型的红细胞中,miR-144-3p表达水平显着上调（全部p<0.05）。进一步相关性分析发现,红细胞中miR-144-3p与氧化指标ROS和MDA显着正相关（全部p<0.05）,与抗氧化指标SOD和GSH显着负相关（全部p<0.05）。（3）miR-144-3p可能通过抑制NRF2削弱红系细胞抗氧化能力外源性在K562细胞中过表达miR-144-3p,可以显着抑制抗氧化物SOD1、CAT、GCLC、GCLM、GPX1和NQO1mRNA表达水平,加重细胞氧化损伤（全部p<0.01）。而在K562细胞中外源性抑制miR-144-3p表达后,结果与过表达相反（全部p<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实,NRF2是miR-144-3p的靶基因（全部p<0.001）。结论（1）AMS患者和不发病者间的microRNA表达存在显着差异;差异microRNA主要涉及低氧适应、血管新生、能量代谢及炎症免疫等信号通路调节;急性低氧后miR-181b-5p表达不足,导致对NF-κB信号通路重要基因PRKCD抑制减弱,继而加剧外周炎症反应及神经炎症损伤,可能参与AMS发病。（2）平原血浆microRNA 分子（miR-1183、miR-15b-5p和miR-23b-5p）构成的生物标志物组合在可作为汉族青年男性人群AMS发病风险预测的新型生物学标志物;平原唾液miR-134-3p和miR-15b-5p组合可作为汉族青年男性人群AMS发病风险预测的无创生物标志物。（3）HAPC患者和同海拔健康人的microRNA表达存在显着差异;差异microRNA涉及鞘脂类、线粒体自噬、Ras、TNF、MAPK及Hedgehog等多条信号通路的调节;miR-144-3p通过抑制抗氧化损伤信号通路重要调节因子NRF2,继而削弱红系细胞抗氧化物能力,导致红系细胞的氧化损伤加重和功能紊乱,可能参与HAPC的发生发展。
马金秋[10]（2020）在《预防大鼠低压低氧脑损伤的葛根素鼻用温敏凝胶的研究》文中研究说明目的:制备葛根素温敏凝胶,通过鼻腔给药提高葛根素生物利用度和脑靶向性,用于预防低压低氧脑损伤。方法:首先通过大鼠在体鼻腔灌流筛选葛根素及其衍生物中透鼻黏膜能力最强的药物,以丙二醇为溶剂、以泊洛沙姆407和泊洛沙姆188为基质制备载药凝胶。以胶凝温度和胶凝时间作为评价指标,采用正交实验设计优化处方。通过体外透析法考察药物的释放行为并通过释药方程模拟探究释放机制,通过Franz扩散池考察载药凝胶透黏膜吸收能力。采用流变仪考察温敏凝胶的胶凝温度及流变学性质,通过离体蟾蜍上颚黏膜纤毛毒性评价制剂安全性。考察葛根素温敏凝胶鼻腔给药后小鼠在急性减压缺氧条件下的携氧能力改变及死亡率。建立大鼠低压低氧脑损伤模型,通过行为学、脑组织病理及免疫组化染色评价葛根素温敏凝胶预防脑损伤的作用。利用液质联用技术,比较口服和鼻腔给药后大鼠血浆和组织分布,评价其脑靶向性。结果:鼻腔灌流实验显示葛根素透鼻黏膜吸收能力最好。葛根素鼻用温敏凝胶最优处方为23%泊洛沙姆407,4%泊洛沙姆188和10%丙二醇,胶凝温度为34.3℃,胶凝时间为2.9 min,适于鼻腔内给药。6 h内,葛根素累积释放率及单位面积累积渗透量分别为55.5±6.0%和151.9±21.0μg/cm2,具有一定缓释作用,符合一级动力学方程。流变学试验表明,葛根素鼻用温敏凝胶模量与温度成正比,当高于30℃时,储能模量大于损耗模量,此时可形成黏附性较好的凝胶。在鼻腔温度（34℃）下,储能模量始终高于损耗模量,说明凝胶态能较好滞留于鼻腔。葛根素鼻用温敏凝胶可显着提高小鼠血液中红细胞数量和血红蛋白含量,增加携氧能力,并降低急性低压低氧条件下小鼠死亡率。通过低压氧舱成功建立稳定的大鼠低压低氧脑损伤模型。水迷宫实验表明,中、高剂量葛根素鼻用温敏凝胶可显着缩短低压低氧脑损伤大鼠逃避潜伏期,增加大鼠穿越平台次数,提高脑损伤大鼠学习记忆和空间探索能力。旷场实验表明,葛根素中、高剂量组脑损伤大鼠运动平均速度和直立次数显着增加,与模型组相比提高了大鼠自主探索能力。葛根素高剂量组可降低丙二醛含量减轻氧化应激,通过提高谷胱甘肽含量增加抗氧化能力。葛根素中、高剂量减轻了低压低氧条件下大鼠神经细胞损伤,下调缺氧诱导因子-1α表达。血浆药代动力学表明,与口服给药葛根素组相比,鼻腔给药葛根素温敏凝胶达峰时间缩短(口服给药Tmax=36±13.4 min,鼻腔给药Tmax=10.0±5.7 min),相对生物利用度是口服给药的300%。相同剂量下,口服给药组在脑中未检出葛根素,鼻腔给药组AUC为954.5±335.1 h*ng/m L,说明鼻腔用葛根素温敏凝胶具有较好的脑靶向作用。结论:本研究成功制备葛根素鼻用温敏凝胶,能提高葛根素的生物利用度和脑靶向作用,有效预防大鼠低压低氧脑损伤,将为急进高原等特殊环境下低压低氧脑损伤的预防提供新思路。
二、高原急性低氧对大鼠脑中枢内AVP含量的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、高原急性低氧对大鼠脑中枢内AVP含量的影响（论文提纲范文）
（1）医学地理视角下高海拔环境对机体肺损伤机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要符号表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 选题背景及意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 医学地理学研究现状 |
| 1.2.2 地理环境对健康的影响研究现状 |
| 1.2.2.1 气候对人体健康的影响 |
| 1.2.2.2 湿度对人体健康的影响 |
| 1.2.2.3 太阳辐射对人体健康的影响 |
| 1.2.2.4 气压对人体健康的影响 |
| 1.2.2.5 年降水量对人体健康的影响 |
| 1.2.3 高原低氧环境对健康的影响研究现状 |
| 1.2.3.1 HAPE临床症状的研究现状 |
| 1.2.3.2 HAPE的发病机制研究现状 |
| 1.2.3.3 HAPE的防治措施研究现状 |
| 1.3 国内外研究中存在问题 |
| 1.4 研究内容 |
| 1.5 技术路线图 |
| 1.6 研究目标及特色创新点 |
| 1.6.1 研究目标 |
| 1.6.2 研究特色创新点 |
| 第二章 研究区自然地理概况及各地理环境因子的相关性 |
| 2.1 青海省地理概况 |
| 2.1.1 气温 |
| 2.1.2 NDVI |
| 2.1.3 降水量 |
| 2.2 研究区环境因素的相关性 |
| 2.2.1 地理因素数据收集 |
| 2.2.2 数据统计与分析 |
| 2.2.3 结果 |
| 2.2.4 讨论 |
| 2.3 小结 |
| 第三章 不同海拔低氧对机体肺功能影响的差异 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.1.1 实验动物 |
| 3.1.1.2 实验试剂 |
| 3.1.1.3 实验仪器 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.2.1 动物分组 |
| 3.1.2.2 肺动脉压检测 |
| 3.1.2.3 腹主动脉血氧分压及血氧饱和度检测 |
| 3.1.2.4 肺组织含水量检测 |
| 3.1.2.5 HE染色 |
| 3.1.2.6 透射电镜 |
| 3.1.2.7 肺组织中氧化应激指标检测 |
| 3.1.2.8 数据统计与分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 不同海拔低氧胁迫大鼠生理指标的差异 |
| 3.2.2 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织含水量的差异 |
| 3.2.3 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织病理形态学差异 |
| 3.2.4 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织超微结构差异 |
| 3.2.5 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织中氧化应激因子的差异 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 大鼠肺损伤与地理环境因子相关性分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 动物分组 |
| 4.1.2 地理环境因子数据收集 |
| 4.1.3 数据统计与分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 腹主动脉氧分压与地理环境因子相关性分析 |
| 4.2.2 氧饱和度与地理环境因子相关性分析 |
| 4.2.3 肺动脉压与地理环境因子相关性分析 |
| 4.2.4 肺组织含水量与地理环境因子相关性分析 |
| 4.2.5 低氧胁迫SD大鼠各项生理指标相关性分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 不同海拔低氧胁迫导致肺损伤的分子机制 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.1.1 实验动物 |
| 5.1.1.2 实验试剂 |
| 5.1.1.3 实验仪器 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.1.2.1 动物分组和建模 |
| 5.1.2.2 组织总RNA提取 |
| 5.1.2.3 转录组测序 |
| 5.1.2.4 差异基因功能注释和分析 |
| 5.1.2.5 RT-PCR实验对差异基因准确性进行验证 |
| 5.1.2.6 蛋白免疫印迹法(Western Blot)对差异蛋白准确性进行验证 |
| 5.1.2.7 原位末端标记法(TUNEL)染色方法 |
| 5.1.2.8 数据统计与分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 肺损伤大鼠模型肺组织转录组测序数据 |
| 5.2.1.1 测序数据质量 |
| 5.2.1.2 差异基因筛选 |
| 5.2.1.3 差异基因GO功能注释 |
| 5.2.1.4 差异基因KEGG信号通路富集分析 |
| 5.2.2 关键通路关键节点基因的筛选及验证 |
| 5.2.3 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织p38 MAPK/NF-κB表达差异 |
| 5.2.4 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织炎症因子表达量的差异 |
| 5.2.5 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织内质网应激的差异 |
| 5.2.6 不同海拔低氧胁迫大鼠肺组织细胞凋亡的差异 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 维生素D_3对缺氧性肺损伤的预防效果 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 实验材料 |
| 6.1.1.1 实验动物 |
| 6.1.1.2 实验主要试剂 |
| 6.1.1.3 实验仪器 |
| 6.1.2 方法 |
| 6.1.2.1 构建Fdft 1沉默腺病毒载体 |
| 6.1.2.2 实验分组 |
| 6.1.2.3 肺动脉压检测 |
| 6.1.2.4 腹主动脉血氧分压及血氧饱和度检测 |
| 6.1.2.5 HE染色 |
| 6.1.2.6 透射电镜 |
| 6.1.2.7 免疫组化染色 |
| 6.1.2.8 RT-PCR方法 |
| 6.1.2.9 Western Blot方法 |
| 6.1.2.10 数据统计与分析 |
| 6.2 结果与分析 |
| 6.2.1 腺病毒sh-Fdft 1在H9C2细胞中的转染效率 |
| 6.2.2 Fdft 1在大鼠体内表达水平检测 |
| 6.2.3 Fdft 1和VD_3对低氧胁迫大鼠肺动脉压、血氧饱和度、血氧分压的影响 |
| 6.2.4 Fdft 1和VD_3对低氧胁迫大鼠肺组织含水量的影响 |
| 6.2.5 Fdft 1和VD_3对低氧胁迫大鼠肺组织病理形态的影响 |
| 6.2.6 Fdft 1和VD_3对低氧胁迫大鼠肺组织超微结构变化的影响 |
| 6.2.7 Fdft 1和VD_3对低氧胁迫后大鼠肺组织PCNA蛋白表达的影响 |
| 6.2.8 Fdft 1和VD_3对高原低氧胁迫大鼠肺组织中凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 结论与展望 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.2 对进入高原人群的防护建议 |
| 7.3 展望与不足 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间科研成果 |
（2）高压氧预处理和后处理对低压低氧环境造成的大鼠认知功能障碍的保护作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分:高压氧预处理和后处理对低压低氧环境造成的大鼠认知功能障碍的保护作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 预处理实验结果 |
| 2.2 后处理实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分:高压氧预处理和后处理对低压低氧环境造成的大鼠认知功能障碍的改善作用机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 方法 |
| 1.5 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 预处理实验结果 |
| 2.2 后处理实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 高压氧治疗神经外科疾病及认知功能障碍的研究现状 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（3）通心络胶囊对大鼠低压低氧暴露后炎症反应和脑组织水肿及认知功能的影响（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 实验分组 |
| 1.3.2 低压低氧环境建立 |
| 1.3.3 旷场实验 |
| 1.3.4 水迷宫实验 |
| 1.3.5 脑水含量测定 |
| 1.3.6 蛋白印迹 |
| 1.3.7 脑组织病理染色 |
| 1.3.8 酶联免疫吸附实验 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 通心络干预及低压低氧暴露对大鼠体重的影响 |
| 2.2 通心络干预及低压低氧暴露对大鼠一般行为的影响 |
| 2.3 对大鼠空间记忆的影响 |
| 2.4 对大鼠脑组织水肿的影响 |
| 2.5 对大鼠海马TLR-4/My D88/NF-κB p65通路的影响 |
| 2.6 对大鼠外周血及海马炎症因子水平的影响 |
| 3 讨论 |
（4）急性低压低氧对大鼠血脑屏障相关连接蛋白和通透性的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 研究内容和技术路线 |
| 1.2.1 研究内容 |
| 1.2.2 技术路线 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配制 |
| 2.1.4 qPCR引物 |
| 2.1.5 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠分组及处理 |
| 2.2.2 记录大鼠体重 |
| 2.2.3 测定大鼠脑组织含水量 |
| 2.2.4 测定大鼠血脑屏障通透性 |
| 2.2.5 q-RT PCR检测相关基因mRNA的表达量 |
| 2.2.6 检测AQP4、Occludin、Z0-1蛋白表达水平 |
| 2.2.7 H.E.染色观察脑组织的形态学变化 |
| 2.3 统计学方法 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 大鼠体重变化差异和精神状态 |
| 3.2 大鼠脑含水量测定结果 |
| 3.3 大鼠血脑屏障通透性测定结果 |
| 3.4 大鼠脑组织相关基因mRNA的表达量检测结果 |
| 3.5 大鼠脑组织AQP4、Occludin、Z0-1蛋白的表达水平检测结果 |
| 3.5.1 脑组织AQP4的表达水平 |
| 3.5.2 脑组织Occludin的表达水平 |
| 3.5.3 脑组织Z0-1的表达水平 |
| 3.6 大鼠脑组织的形态学变化结果 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 第6章 本研究存在的不足及展望 |
| 参考文献 |
| 综述 紧密连接及其在血脑屏障中的作用研究 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）“井穴”放血预处理对西宁地区急性低氧大鼠肺损伤AQP-1、AQP-5的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 立题依据 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 第二章 |
| 2.1 研究目标与研究内容 |
| 2.1.1 研究目标 |
| 2.1.2 研究内容 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 研究方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 肺组织形态学观察 |
| 3.2 各组大鼠动脉血气分析对比 |
| 3.3 各组大鼠肺组织湿干重比对比 |
| 3.4 肺组织TNF-α含量 |
| 3.5 肺组织AQP-1、AQP-5mRNA表达 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 创新点 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 作者在读期间科研成果简介 |
| 致谢 |
| 附录 |
（6）“井穴”放血预处理对大鼠急性高原肺损伤AngⅡ、ACE、ET-1的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 立题依据 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 RAS与 HAPE |
| 1.2.2 ET与HAPE |
| 1.2.3 ET-1、AngⅡ、ACE之间相互调节机制 |
| 1.2.4 刺络放血相关论述 |
| 1.2.5 手十二井穴的临床应用 |
| 1.2.6 肺与脑的关系 |
| 第二章 正文 |
| 2.1 研究目标与研究内容 |
| 2.1.1 研究目标 |
| 2.1.2 研究内容 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 研究方法 |
| 2.2.3 技术路线 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 大鼠W/D、AngⅡ、ET-1 的比对 |
| 3.1.1 空白与模型各组肺组织W/D对比 |
| 3.1.2 空白与模型各组AngⅡ含量的比较 |
| 3.1.3 空白与模型各组ET-1 含量的比较 |
| 3.2 肺组织显微结构变化 |
| 3.3 井穴放血对AngⅡ含量变化的影响 |
| 3.3.1 井穴放血对肺组织AngⅡ含量的变化 |
| 3.3.2 井穴放血对血浆AngⅡ含量的变化 |
| 3.4 井穴放血对组织ET-1 含量变化的影响 |
| 3.5 井穴放血对ACE m RNA表达的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第六章 创新点 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 作者在读期间科研成果 |
| 致谢 |
（7）运用DCE-MRI技术结合醋甲唑胺负荷实验探讨慢性高原环境下SD大鼠脑血流储备能力及血脑屏障改变（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要缩写词中英文对照表 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 对象与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.1.1 实验动物来源 |
| 2.1.2 分组及饲养 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 设备 |
| 2.2.2 扫描序列及参数 |
| 2.2.3 动态对比度增强扫描的基本原理 |
| 2.2.4 取材 |
| 2.2.5 醋甲唑胺负荷实验 |
| 2.2.6 血常规检查 |
| 2.2.7 病理检查 |
| 2.2.8 统计方法 |
| 2.3 实验过程 |
| 2.3.1 扫描前准备 |
| 2.3.2 DCE-MR扫描及醋甲唑胺负荷试验 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 高原组及平原组DCE半定量参数比较 |
| 3.2 高原组及平原组DCE定量参数比较 |
| 3.3 高原组及平原组血常规及病理结果比较 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 研究慢性高原环境下脑血流储备力及血脑屏障改变的意义 |
| 4.2 磁共振动态对比度增强技术各参数的临床意义 |
| 4.3 磁共振动态对比度增强结果分析 |
| 4.3.1 脑血流量(CBF) |
| 4.3.2 脑血流储备能力(CVR) |
| 4.3.3 容积转运常数(Ktrans) |
| 第五章 结论 |
| 第六章 创新与不足 |
| 6.1 本次研究的创新之处 |
| 6.2 本次研究的不足之处及有待完善的实验计划 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 科研成果简介 |
| 附录A 附图 |
| 附录B 综述大鼠脑血流影像学研究方法及进展 |
| 参考文献 |
（8）大株红景天胶囊对高原缺氧致疲劳、情绪及认知损伤的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 立题依据 |
| 1.1.1 高原缺氧对体能的影响 |
| 1.1.2 高原缺氧对情绪的影响 |
| 1.1.3 高原缺氧对认知功能的影响 |
| 1.1.4 氧感知信号通路研究进展 |
| 1.1.5 红景天的研究背景 |
| 1.2 课题研究思路和论文结构 |
| 1.2.1 课题研究思路 |
| 1.2.2 论文结构 |
| 第二章 大株红景天胶囊提高常压缺氧耐力和抗疲劳作用 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验动物分组与给药 |
| 2.3.2 低氧混合气体缺氧致死实验 |
| 2.3.3 密闭缺氧致死实验 |
| 2.3.4 负重游泳实验 |
| 2.3.5 转棒疲劳实验 |
| 2.3.6 试剂盒检测肝和肌糖原含量及血清中疲劳相关指标和氧化应激相关指标 |
| 2.3.7 统计学分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 大株红景天胶囊对小鼠体重的影响 |
| 2.4.2 大株红景天胶囊对小鼠低氧混合气体缺氧和密闭缺氧存活时间的影响 |
| 2.4.3 大株红景天胶囊对小鼠负重游泳时间的影响 |
| 2.4.4 大株红景天胶囊对小鼠协调能力和疲劳耐力的影响 |
| 2.4.5 指标检测结果 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 模拟高原缺氧不同暴露时间对小鼠体能、情绪及认知功能的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 实验分析软件 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 实验动物分组 |
| 3.3.2 低压缺氧处理 |
| 3.3.3 自主活动实验 |
| 3.3.4 旷场实验 |
| 3.3.5 高架十字迷宫实验 |
| 3.3.6 新物体识别实验 |
| 3.3.7 转棒实验 |
| 3.3.8 强迫游泳实验 |
| 3.3.9 悬尾实验 |
| 3.3.10 统计学分析 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 模拟高原缺氧对小鼠体重和体能的影响 |
| 3.4.2 模拟高原缺氧对小鼠物体识别记忆的影响 |
| 3.4.3 模拟高原缺氧对焦虑样行为的影响 |
| 3.4.4 模拟高原缺氧对抑郁样行为的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 大株红景天胶囊对模拟高原缺氧致疲劳、情绪及认知损伤的影响及作用机制 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 实验试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 实验动物分组与给药 |
| 4.3.2 低压缺氧处理 |
| 4.3.3 大株红景天胶囊对模拟高原缺氧致小鼠疲劳、焦虑抑郁及认知损伤的影响 |
| 4.3.4 大株红景天胶囊改善模拟高原缺氧致小鼠焦虑抑郁及认知损伤的作用机制 |
| 4.3.5 统计学分析 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 大株红景天胶囊对模拟高原缺氧致小鼠疲劳、焦虑抑郁及认知损伤的影响 |
| 4.4.2 大株红景天胶囊改善模拟高原缺氧致小鼠焦虑抑郁及认知损伤的作用机制 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文与成就 |
（9）急性高山病和高原红细胞增多症的microRNA表达特征及其病理生理学意义研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 急性高山病患者microRNA表达谱特征及miR-181b-5p在其发病中的作用研究 |
| 2.1 研究对象与材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 研究不足与未来展望 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 平原血浆和唾液microRNA对急性高山病发病风险的预测作用研究 |
| 3.1 研究对象与实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 研究不足和未来展望 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 高原红细胞增多症患者的microRNA表达谱特征及miR-144-3p在其发病中的作用研究 |
| 4.1 研究对象与材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 研究不足和未来展望 |
| 4.6 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 microRNA对缺氧神经损害的保护作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（10）预防大鼠低压低氧脑损伤的葛根素鼻用温敏凝胶的研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 急进高原与认知功能损伤 |
| 2 葛根素药理作用 |
| 2.1 保护脑血管及神经系统 |
| 2.2 治疗糖尿病并发症 |
| 2.3 抗肿瘤 |
| 3 脑靶向递药系统 |
| 3.1 血脑屏障结构功能 |
| 3.2 脑靶向方式 |
| 3.3 鼻腔-大脑递药系统 |
| 4 原位凝胶研究进展 |
| 5 本课题研究思路 |
| 第二章 葛根素及其衍生物透鼻黏膜特性 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药物与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 HPLC含量测定方法的建立 |
| 2.2 葛根素及其衍生物透鼻黏膜能力考察 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 色谱图及线性范围 |
| 3.2 葛根素及衍生物透鼻粘膜能力 |
| 4 本章小结 |
| 第三章 葛根素温敏凝胶处方筛选及性质评价 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药物与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 葛根素鼻用温敏凝胶处方筛选 |
| 2.2 葛根素鼻用温敏凝胶体外释放考察 |
| 2.3 葛根素鼻用温敏凝胶流变学测定 |
| 2.4 葛根素鼻用温敏凝胶纤毛毒性考察 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 葛根素鼻用温敏凝胶优化处方 |
| 3.2 葛根素鼻用温敏凝胶体外释放特性 |
| 3.3 葛根素鼻用温敏凝胶流变学特性 |
| 3.4 葛根素鼻用温敏凝胶纤毛毒性 |
| 4 本章小结 |
| 第四章 葛根素温敏凝胶预防低压低氧性脑损伤药效学研究 |
| 第一节 葛根素温敏凝胶抗缺氧能力评价 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 药物与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组及给药 |
| 2.2 小鼠血象指标 |
| 2.3 小鼠急性减压缺氧实验 |
| 2.4 数据处理 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 葛根素鼻用温敏凝胶对小鼠血象的影响 |
| 3.2 葛根素鼻用温敏凝胶对小鼠死亡率的影响 |
| 4 小结 |
| 第二节 大鼠低压低氧脑损伤模型建立 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药物与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 水迷宫训练 |
| 2.2 低压低氧脑损伤模型建立 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 大鼠低压氧舱中状态 |
| 3.2 急性低压低氧对大鼠认知功能的影响 |
| 3.3 急性低压低氧对大鼠脑含水量的影响 |
| 3.4 急性低压低氧对大鼠海马区神经元的影响 |
| 4 小结 |
| 第三节 葛根素鼻用温敏凝胶预防大鼠低压低氧脑损伤药效学研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药物与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组与给药 |
| 2.2 大鼠低压低氧模型建立 |
| 2.3 水迷宫测试 |
| 2.4 旷场测试 |
| 2.5 动物取材 |
| 2.6 相关指标检测 |
| 2.7 数据处理 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 葛根素对低压低氧脑损伤大鼠学习记忆能力的影响 |
| 3.2 葛根素对低压低氧脑损伤大鼠自主探索行为的影响 |
| 3.3 葛根素对低压低氧脑损伤大鼠MDA和 GSH含量的影响 |
| 3.4 葛根素对低压低氧脑损伤大鼠脑组织H.E.病理改变的影响 |
| 3.5 葛根素对低压低氧脑损伤大鼠HIF-1α表达的影响 |
| 4 小结 |
| 第五章 葛根素温敏凝胶药代动力学研究 |
| 第一节 葛根素温敏凝胶血浆药代动力学研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药物与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 色谱质谱条件 |
| 2.2 动物分组及给药 |
| 2.3 血浆样品处理 |
| 2.4 标准曲线制备 |
| 2.5 精密度和准确度考察 |
| 2.6 数据分析 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 色谱图及标准曲线 |
| 3.2 准确度与精密度 |
| 3.3 葛根素在血浆中药时曲线及药动学参数 |
| 4 小结 |
| 第二节 葛根素经鼻腔、口服给药后在脑和肝脏中的分布 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药物与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 色谱质谱条件 |
| 2.2 动物分组及给药 |
| 2.3 脑和肝脏组织样品处理 |
| 2.4 标准曲线制备 |
| 2.5 精密度和准确度考察 |
| 2.6 数据分析 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 色谱图及标准曲线 |
| 3.2 准确度与精密度 |
| 3.3 葛根素在脑和肝脏中药时曲线及药动学参数 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 主要成果 |
四、高原急性低氧对大鼠脑中枢内AVP含量的影响（论文参考文献）
- [1]医学地理视角下高海拔环境对机体肺损伤机制的研究[D]. 蒲小燕. 青海师范大学, 2021
- [2]高压氧预处理和后处理对低压低氧环境造成的大鼠认知功能障碍的保护作用研究[D]. 常宇飞. 山西医科大学, 2021(01)
- [3]通心络胶囊对大鼠低压低氧暴露后炎症反应和脑组织水肿及认知功能的影响[J]. 刘鹏飞,胡艳婷,姜静雯,赵晟,邓会,薛新颖,潘磊,崔磊,王勇,乔辉,李天佐,赵斌江. 中国比较医学杂志, 2021(06)
- [4]急性低压低氧对大鼠血脑屏障相关连接蛋白和通透性的影响[D]. 马倩倩. 青海大学, 2021(01)
- [5]“井穴”放血预处理对西宁地区急性低氧大鼠肺损伤AQP-1、AQP-5的影响[D]. 沈慧萍. 青海大学, 2021(01)
- [6]“井穴”放血预处理对大鼠急性高原肺损伤AngⅡ、ACE、ET-1的影响[D]. 麻海英. 青海大学, 2021(01)
- [7]运用DCE-MRI技术结合醋甲唑胺负荷实验探讨慢性高原环境下SD大鼠脑血流储备能力及血脑屏障改变[D]. 黄尚勇. 青海大学, 2021(01)
- [8]大株红景天胶囊对高原缺氧致疲劳、情绪及认知损伤的作用研究[D]. 王艺博. 广东药科大学, 2021(02)
- [9]急性高山病和高原红细胞增多症的microRNA表达特征及其病理生理学意义研究[D]. 黄河. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020
- [10]预防大鼠低压低氧脑损伤的葛根素鼻用温敏凝胶的研究[D]. 马金秋. 山东中医药大学, 2020(01)