一、多器官衰竭时肠黏膜肥大细胞活性的变化研究（论文文献综述）
任以行,冷玉芳,张健民,石亚静,陈凤,刘馨[1]（2021）在《免疫细胞参与介导肠缺血再灌注损伤的机制》文中提出免疫细胞作为免疫系统的主要功能单元,在生理条件下是机体免疫活动的关键参与者、机体健康的保护者,然而在某些病理条件下（如器官缺血再灌注）可介导、加重组织损伤。肠缺血再灌注因累及范围广、治疗难度大、预后较差等成为棘手的临床疾病。肠缺血再灌注后多种免疫细胞被大量招募、激活,通过分泌促炎因子、产生活性氧类和抗体及与其他免疫系统成分相互作用等方式介导肠及多种远隔器官的损伤。故深入探究免疫细胞参与介导肠缺血再灌注损伤的具体机制并在此基础上加以干预可为临床防治肠缺血再灌注所致肠及远隔器官损伤提供有力的帮助。
王媛[2]（2020）在《骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠屏障功能影响及相关机制探讨》文中研究指明目的脓毒症时机体对感染产生了失控的炎症反应,大量炎症因子被释放,多条炎症相关信号通路被激活,最终出现多器官功能障碍,死亡率高,而且在治疗上措施少,效果差,花费高。目前急需找到新的治疗切入点。肠道是人体最大的细菌池,脓毒症时过度的炎症反应累及肠道,肠粘膜屏障受损,大量细菌及内毒素入血,加重炎症反应,推动了后续器官损伤的进程。因此肠道既是脓毒症的损伤器官,也是脓毒症向多器官功能障碍发展的重要中间环节,所以对脓毒症时肠屏障功能的保护至关重要。本实验研究骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠屏障功能影响并探讨其相关机制,目的是为脓毒症时肠屏障功能的保护提供方法及理论基础。方法第一部分骨髓间充质干细胞及外泌体的提取:实验提取大鼠股骨及胫骨的骨髓间充质干细胞,采用骨髓贴壁法分离及培养原代细胞,消化培养传代细胞,于光镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞表面抗原进行鉴定;采用离心法提取骨髓间充质干细胞外泌体,在电镜下观察外泌体形态,采用流式细胞术检测表面标志物进行鉴定,保存外泌体为后续实验做好准备。第二部分脓毒症大鼠模型建立及生存率观察:取18只大鼠随机分为3组,（1）正常对照组（n=6）（2）假手术组（n=6）,麻醉后开腹,翻动盲肠后逐层关腹,术后为防止休克皮下注射生理盐水20m L/kg。（3）盲肠结扎穿孔术致脓毒症（CLP）组（n=6）,采用CLP制备脓毒症大鼠模型,术后为防止休克皮下注射生理盐水20m L/kg。观察大鼠术后一般情况、腹腔情况及生存率。第三部分骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠屏障功能影响及相关机制探讨:取48只大鼠随机分为4组,具体分组为（1）假手术+生理盐水组（n=12）:开腹后翻动盲肠关腹并缝合腹壁,于术后2小时经尾静脉注射100μL生理盐水;（2）盲肠结扎穿孔术致脓毒症+生理盐水（CLP+生理盐水）组（n=12）大鼠行CLP,并于术后2小时经尾静脉注射100μL生理盐水;（3）盲肠结扎穿孔术致脓毒症+外泌体（CLP+外泌体）组（n=12）:大鼠行CLP,并于术后2小时经尾静脉注射含30μL间充质干细胞外泌体的稀释液100μL;（4）盲肠结扎穿孔术致脓毒症+去外泌体上清液（CLP+去外泌体上清液）组（n=12）:大鼠行CLP,并于术后2小时经尾静脉注射不含外泌体的上清液100μL。在6小时和24小时两个时间点,每时间点取6只大鼠,取血浆及小肠组织,在光镜下观察肠组织病理变化,应用ELISA检测血浆中D-乳酸、二胺氧化酶（DAO）、内毒素水平,检测肠组织中肿瘤坏死因子-a（TNF-a）、白介素-6（IL-6）及髓过氧化物酶（MPO）水平,反应脓毒症时肠粘膜通透性变化、炎症变化以及骨髓间充质干细胞外泌体对其影响;采用westernblot检测不同组别脓毒症大鼠MAPK信号通路及NF-kB信号通路磷酸化水平,以探索骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症时肠屏障功能影响的机制。结果第一部分骨髓间充质干细胞及外泌体的提取:骨髓间充质干细胞接种后24小时可见部分细胞贴壁,3-4天后细胞由多形转变为梭形为主,1周后出现旋涡式集落,9-10天细胞逐渐融合成片。消化传代24小时,细胞完全贴壁,生长旺盛,形态均一呈现梭形。流式细胞术显示培养的骨髓间充质干细胞均一表达CD44 CD105（>95%）,而CD34 CD45（<2%）。离心法分离骨髓间充质干细胞外泌体,并于电镜下观察可见囊泡状结构,大小约为30-60nm,流式细胞术显示其表面标志物CD9、CD63、CD81有表达。第二部分脓毒症大鼠模型建立及生存率观察:采用CLP制造脓毒症大鼠模型,术后约6小时左右大鼠病态逐渐明显,出现精神萎靡、呼吸急促、进食及饮水减少、竖毛蜷缩等表现,观察腹腔情况发现CLP组大鼠在CLP术后6小时腹腔内肠管排列紊乱,盲肠有肿胀扩张,腹腔可见少量积液,随时间延长肠管肿胀扩张明显出现粘连坏死,腹腔积液逐渐增多可见血性积液,术后72小时内,假手术组大鼠未发现死亡,CLP组生存率为50%,且大鼠死亡时间主要集中在术后24-48小时。第三部分骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠屏障功能影响及相关机制探讨:在6小时与24小时两个时间点,光镜下假手术+生理盐水组小肠绒毛排列整齐,小肠粘膜结构基本完整,CLP+生理盐水组及CLP+去外泌体上清液组小肠绒毛稀疏排列紊乱倒伏,部分绒毛顶端及固有膜脱落,毛细血管扩张,炎性细胞浸润,CLP+外泌体组小肠粘膜充血水肿,无绒毛及固有层脱落,进行Chius评分后发现,与假手术+生理盐水组相比,CLP+生理盐水组和CLP+去外泌体上清液组大鼠肠组织Chius评分显着升高（P<0.05）,而CLP+外泌体组与CLP+生理盐水组和CLP+去外泌体上清液组相比Chius评分显着降低（P<0.05）;在6小时与24小时两个时间点,与假手术+生理盐水组相比,CLP+生理盐水组和CLP+去外泌体上清液组大鼠血浆中D-乳酸、DAO及内毒素水平显着升高（P<0.05）,而CLP+外泌体组与CLP+生理盐水组和CLP+去外泌体上清液组相比血浆中D-乳酸、DAO及内毒素水平显着降低（P<0.05）;与假手术+生理盐水组相比,CLP+生理盐水组和CLP+去外泌体上清液组大鼠肠组织中TNF-α、IL-6及MPO水平显着升高（P<0.05）,而CLP+外泌体组与CLP+生理盐水组和CLP+去外泌体上清液组相比肠组织中TNF-α、IL-6及MPO水平显着降低（P<0.05）;与假手术+生理盐水组相比,CLP+生理盐水组和CLP+去外泌体上清液组大鼠肠组织中ERK、P38、JNK及NF-kB磷酸化水平显着升高（P<0.05）,而CLP+外泌体组与CLP+生理盐水组和CLP+去外泌体上清液组相比肠组织中ERK、P38、JNK及NF-kB磷酸化水平显着降低（P<0.05）。结论1.采用骨髓贴壁法可以成功分离及培养骨髓间充质干细胞,离心法可成功提取外泌体。2.盲肠结扎穿孔术可以成功制备脓毒症大鼠模型。3.骨髓间充质干细胞外泌体可以抑制脓毒症大鼠肠组织炎症反应,降低肠粘膜通透性保护肠屏障功能。4.骨髓间充质干细胞外泌体可以通过抑制脓毒症大鼠肠组织中MAPK信号通路及NF-kB信号通路的激活起到保护肠屏障功能的作用。
罗锦花[3]（2019）在《基于mTOR通路探讨加味四君子汤对严重烫伤后肠道屏障功能的调理作用及相关机制》文中认为目的1.了解严重烫伤后肠道屏障功能的变化,观察不同浓度加味四君子汤对严重烫伤肠道屏障功能的保护作用。2.了解烫伤后肠道16SrDNA菌群多样性的变化,阐述高通量检测的对菌群分析的优势;并观察加味四君子汤对烫伤肠道菌群多样性效果。3.利用蛋白组学技术筛选烫伤后mTOR通路上差异蛋白,观察加味四君子汤对这些差异蛋白的影响。方法1.选取90只日本大耳兔,随机分为5组,每组18只,具体分组情况如下所示:正常对照组:自由饮食、饮水;烫伤+常规喂养组+生理盐水灌胃组（烫伤模型组）:建立烫伤模型后,给予生理盐水灌胃,10 ml/次,3次/天;烫伤+常规喂养+四君子汤灌胃组（0.2g/ml）:烫伤后给予加味四君子汤灌胃0.2 g/ml,10 ml/次,3次/天;烫伤+常规喂养+四君子汤灌胃组（1.0 g/ml）:烫伤后给予四君子汤灌胃1.0 g/ml,10 ml/次,3次/天;烫伤+常规喂养+四君子汤灌胃组（5.0g/ml）:烫伤后给予四君子汤灌胃5.0 g/ml,10 ml/次,3次/天;分别于灌胃后1天、3天、7天处死动物,取部分回肠组织行HE染色检测各组肠粘膜病理结构变化,行ELSIA检测各组TNF-α、IL-10和IL-1β水平。2.根据上述结果,选取治疗效果最佳的浓度和时间组,即烫伤+常规喂养+加味四君子汤灌胃组（1.0 g/ml）组（加味四君子汤干预组）:烫伤后给予加味四君子汤灌胃1.0 g/ml,10 ml/次,3次/天,连续灌胃7天。加味四君子汤干预组与正常对照组、烫伤模型组兔于灌胃后7天取肠道内容物利用高通量技术检测各组肠道内容物中的16S rDNA,并通过Illumina MiSeq测序技术分析肠道内容物中菌群多样性;各组于伤后7天,取回肠粘膜组织,利用对蛋白组学技术比较和筛选各组mTOR通路中的差异表达蛋白,并挑选其中6个基因利用荧光定量PCR和Western blot行进一步验证。结果烫伤前兔皮肤正常,烫伤后即刻未见大小水泡,表皮苍白,与周边分界清晰,烫伤1天后皮肤有损伤松弛,烫伤3天和7天后可见皮肤基底苍白,无水泡,黑色焦痂状,稍凹陷质硬呈皮革样。烫伤后皮肤病理HE染色可见:大量炎性细胞出现,全层皮肤损伤破坏严重,毛囊结构紊乱。正常对照组的回肠粘膜没有异常现象,烫伤模型组随着时间的延长回肠粘膜炎症越来越严重,伴大量炎性细胞浸润。加味四君子汤给药组随着给药时间延长治疗效果越明显,以1.0g/ml浓度给药7天治疗效果最佳。与正常对照组相比,烫伤模型组中肠粘膜内TNF-α和IL-1β各时间点明显升高,IL-10明显下降。在烫伤+加味四君子汤灌胃组（5.0g/ml）和烫伤+加味四君子汤灌胃组（1.0g/ml）中,我们观察到随着时间的延长,TNF-α和IL-1β浓度逐渐降低,且在7天最低;随着时间延长IL-10浓度逐渐升高且在7天最高,浓度1.0g/ml组效果更明显。在随后的高通量检测中,通过剔除疑问序列后测序三组样品共获得299309条序列,正常对照组共获得96023条优质序列,烫伤+常规喂养组+生理盐水灌胃组获得107365条优质序列,烫伤+常规喂养+加味四君子汤灌胃组获得95921条。随着分类水平的细化,三组肠道内容物的菌群组成差异逐渐明显。三组样品的菌群组成比较均匀,但不同物种中细菌的百分比不同,提示肠道菌群出现紊乱。进而对三组肠道菌群的Alpha多样性分析,发现各组对象的Simpson、Chao1、Shannon指数则没有显着性差异（p>0.005）,PCo A分析显示,基于三组样本分布距离相对集中,三组的菌群组成Beta多样性无差异,说明三组肠道菌群的丰富度和多样性无明显差别。为进一步明确加味四君子汤对烫伤后肠道屏障功能的作用,我们进行了小肠的蛋白质组学实验。本次实验共鉴定蛋白质数共894个;各组中mTOR通路中差异表达蛋白为12个。与正常对照组相比,烫伤模型组上调的基因为4个,下调的基因为8个。与烫伤模型组相比,加味四君子汤干预组上调的基因为8个,下调的基因为4个。各组之间的差异表达蛋白能明显的将正常对照组、烫伤模型组和加味四君子汤干预组区分开,说明我们筛选的mTOR通路差异表达蛋白能够代表三组样本之间的差异。与正常对照相比,烫伤模型组中小肠组织PEBP1和EIF4G1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高,而CSNK2A1、EIF3I、PPP2CA和MAP2K1的mRNA和蛋白表达水平明显下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;与烫伤模型组相比,加味四君子汤干预组的EIF4G1和PEBP1 mRNA和蛋白表达水平显着下降,而CSNK2A1、EIF3I、PPP2CA和MAP2K1的mRNA和蛋白表达水平显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;这结果与蛋白组学结果一致。结论1.严重烫伤兔回肠粘膜组织损伤明显、炎症反应重,并随着时间越长损伤明显,加味四君子汤能促进严重烧伤兔回肠粘膜组织修复,减轻炎症反应。其治疗效果最佳浓度为1.0g/ml,作用时间为第7天。2.相较于传统的菌群分析法,高通量测序法更能够精准地反映肠道菌群的结构组成,本研究发现各组样本中菌群组成无明显差异,但在纲、目、科和属的百分比上存在差异,说明加味四君子汤对严重烧伤后肠道菌群具有一定的调节作用。3.利用TMT标记联合LC-MS/MS技术筛选到mTOR通路上相关的蛋白共鉴定蛋白质数共894个,各组差异蛋白12个,从而寻求到加味四君子汤的作用靶点。
刘晓芬[4]（2019）在《婴幼儿食物过敏和食物不耐受相关胃病的临床、内镜和病理特点分析》文中研究表明目的:分析婴幼儿食物过敏和食物不耐受相关胃病的临床、内镜和病理特点,探讨胃粘膜嗜酸性粒细胞数和肥大细胞数在婴幼儿食物过敏和食物不耐受相关胃病中的变化。方法:分析2016年9月到2018年12月因腹痛、呕吐、呕血、便血为临床表现在江西省儿童医院消化内科住院的101例婴幼儿,以食物过敏组（食物特异性Ig G抗体、食物过敏原特异性Ig E抗体均阳性）和食物不耐受组（食物特异性Ig G抗体阳性、食物过敏原特异性Ig E抗体阴性）为研究组,以食物特异性Ig G抗体、食物过敏原特异性Ig E抗体均阴性为对照组,分析三组的临床表现、内镜和病理特点,采用统计分析胃粘膜嗜酸性粒细胞（eosinophils,EOS）数、肥大细胞（mast cells,MCs）数在食物过敏和食物不耐受相关胃病中的变化,及合并幽门螺旋杆菌感染后的变化。结果:1.三组胃镜下均表现为胃炎、十二指肠黏膜充血、水肿,有的伴点、片状糜烂,溃疡,其中食物过敏组中胃炎有22例,十二指肠溃疡2例,十二指肠炎1例,食道炎1例;食物不耐受组中胃炎有59例,十二指肠溃疡4例,十二指肠球炎7例,食道炎3例;对照组中胃炎有20例,十二指肠球炎3例,食道炎1例。病理结果均示浅表性胃炎,其中食物过敏组和食物不耐受组中EOS计数大于20个/HPF分别有2例、12例;MCs计数大于15个/HPF分别为5例、11例。病理结果还显示食物过敏组中EOS数显着增多者大多不伴有MCs数增多,MCs数显着增多者大多不伴有嗜酸性粒细胞增多。2.食物过敏组、食物不耐受组与对照组中胃黏膜EOS计数相比,具有统计学意义（P<0.05）;两两比较,食物不耐受组胃粘膜EOS计数较对照组具有统计学意义（P<0.05）。3.食物过敏组、食物不耐受组与对照组胃黏膜MCs计数相比,无统计学意义（P>0.05）。4.食物不耐受组合并Hp感染与对照组合并Hp感染后胃粘膜EOS计数相比,具有统计学意义（P<0.05）,食物不耐受组合并Hp感染与食物不耐受组未合并Hp感染胃粘膜EOS计数相比,亦具有统计学意义（P<0.05）;食物过敏组合并Hp感染与对照组合并Hp感染后胃粘膜EOS计数相比,无统计学意义（P>0.05）,食物过敏组合并Hp感染与食物过敏组未合并Hp感染后胃粘膜EOS计数相比,无统计学意义（P>0.05）。5.食物过敏组同时合并Hp感染和食物不耐受组同时合并Hp感染与对照组合并Hp感染后胃粘膜MCs计数相比,均具有统计学意义（P<0.05）。食物过敏组合并Hp感染与食物过敏组未合并Hp感染后胃粘膜MCs数相比,具有统计学意义（P<0.05）。食物不耐受组合并Hp感染与食物不耐受未合并Hp感染后胃粘膜MCs数相比,具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.食物过敏组和食物不耐受组中胃粘膜EOS数、MCs数显着增多的患儿较对照组多。2.食物不耐受相关胃病中胃粘膜EOS数增多。3.Hp感染后可能导致食物过敏相关胃病的胃粘膜MCs数和食物不耐受相关胃病的胃粘膜EOS数、MCs数的增多。4.食物过敏和食物不耐受相关胃病中符合嗜酸性粒细胞性胃肠炎诊断的有14例,即食物过敏和食物不耐受可能与嗜酸性粒细胞胃肠炎的发病有关。
张涛[5]（2019）在《从肠粘膜免疫稳态重建探讨“温阳解毒化瘀方”治疗ACLF的干预机制》文中进行了进一步梳理目的:从肝脏、小肠粘膜组织病理学,肠道菌群、肠粘膜免疫屏障功能变化探讨“温阳解毒化瘀方”对ACLF大鼠肠粘膜免疫稳态重建的影响。方法:D-氨基半乳糖+脂多糖联合肝纤维化大鼠诱导建立ACLF大鼠模型;将其分为:模型对照（M）组、中药低剂量（Z低）组、中药高剂量（Z高）组、肠道菌群活性菌治疗（C）组,每组各10只,另设非模型空白对照（N）组;对比以不同剂量”温阳解毒化瘀方”进行为期4周的干预治疗;收集新鲜粪便进行16S rRNA高通量焦磷测序检测;采集外周血行TBil、ALT、AST检测,血清鲎试剂检测内毒素;ELISA法测定血清中TNF-α、IL-6、IL-1含量;HE染色判定肝脏组织及小肠粘膜组织病理学,透射电镜观察小肠粘膜超微病理学,荧光定量PCR及Western-Blot技术观察肝组织中TLR4的表达及小肠粘膜组织中occludin和ZO-1的表达。结果:1.肝组织HE染色示Z高组肝细胞坏死面积较其他实验组减小,病变程度明显减轻,2.小肠粘膜组织HE染色示Z高组在改善绒毛上皮细胞脱落、黏膜层和黏膜下层水肿以及炎性细胞增生明显优于其他实验组。3.采用16S rRNA高通量焦磷酸测序技术,结果显示:M组肠道菌群的Shannon指数、Observed OTU指数、Faith’s指数及chao1指数显着低于Z高组与C组（P<0.05）;经Alpha、Beta分析,Z高组与M组、Z低组间存在显着的差异（P<0.01）,C组与M组、Z低组大鼠间存在显着差异（P<0.05）,C组与Z高组间无统计学差异（P>0.05）。4.各实验组大鼠外周血ALT、AST、TBil值比较:Z高组降低ALT、AST效果最佳;Z高、Z低降低TBil疗效相当（P>0.05）;5.血清TNF-α、IL-6、IL-1值比较:各实验组均较M组显着下降（P<0.05）,Z高组降低IL-6、IL-1疗效更显着（P<0.05）;Z高组与C组降低TNF-α方面疗效相当（P>0.05）;血浆LPS水平比较Z高组降低LPS更显着（P<0.05）;肝组织TLR4mRNA、小肠组织ZO-1mRNA、occuldin mRNA表达比较:Z高、C组降低TLR4、ZO-1mRNA、提高occuldin mRNA表达更显着（P<0.05）,Z高与C组比较无差异性（P>0.05）。结论:“温阳解毒化瘀方”通过提高肠道菌群的丰度与多样性,上调肠粘膜紧密连接蛋白的表达,调节肠粘膜通透性,降低肠源性内毒素血症及炎性反应,实现对ACLF大鼠的肠粘膜免疫稳态重建,从而抑制肝脏细胞炎性坏死,降低ACLF病死率。
王思珍[6]（2014）在《重症急性胰腺炎肠源性细菌易位的研究》文中认为在世界范围内,急性胰腺炎是常见的急腹症,其年发病率约为13-45/100000。而重症急性胰腺炎有较高的死亡率和并发症的发生率,一直是临床上治疗的难点。根据SAP病人的死亡高峰可将病程分为两个阶段:急性期（通常为发病的一周之内）及发病一周之后的感染期。发病早期由于胰酶的活化、炎症介质细胞因子和氧自由基的产生以及机体高凝状态引发的机体超强炎症反应,即系统性炎症反应综合征（SIRS）进一步导致的全身器官功能衰竭,随着脏器支持水平和微创技术的提高这一阶段病人病死率较前明显下降;在疾病发展的后期,胰腺坏死组织及胰周积液的感染引起感染相关并发症是目前导致SAP病人死亡的主要原因,而肠道内菌群失调,肠黏膜屏障功能障碍和肠源性细菌易位被认为是导致胰腺坏死组织及胰周积液感染的主要原因。脊椎动物体内寄居者庞大的微生物群,包括细菌、病毒和真菌,尤其是空腔脏器,如口腔和小肠。肠道是体内最复杂和数量最多的微生态。包括300-500菌种和1014个细菌,其中的大多数是不能常规培养出来的。在健康的个体中,革兰氏阴性变形菌和拟杆菌,和革兰氏阳性厚壁菌门,如梭菌属和乳酸杆菌,是肠道细菌中主要门类,而产甲烷菌是主要的肠道古细菌早期关于肠道菌群的研究对集中与炎症性疾病。近些年的研究发现肠道菌群在维护正常的肠道微生态,调节宿主的免疫和影响包括器官发育及代谢在内的宿主发育及生理都起及其重要的作用。肠道菌群对正常健康人体的生长发育和免疫调节中起重要作用,而在疾病时肠道菌群紊乱常会易位入血,加重病情。调节紊乱的肠道菌群,预防肠源性细菌易位一直是临床上治疗重症病人的重点和难点。如何早期快速诊断肠源性细菌易位对预防和治疗重症急性胰腺炎后期胰腺坏死感染具有重要意义。细菌的DNA相对稳定,本课题主要采用基于细菌DNA的PCR-DGGE技术研究重症急性胰腺炎是肠道菌群和肠黏膜上皮随发病时间的变化规律,同时研究DGGE在重症急性胰腺炎时肠源性细菌易位的早期诊断的价值。本文共分四部分:第一部分 重症急性胰腺炎动物模型的建立与验证目的:为研究肠道菌群和肠源性细菌易位的关系建立经十二指肠的逆行性胰胆管注射牛磺胆酸钠的重症急性胰腺炎大鼠模型。方法:24只SD大鼠被随机分为对照组（n=6只）和胰腺炎组（n=18组）。造模成功后的2小时,6小时及12小时取材,胰腺组织行病理检查,同时评价造模后的肝肾功能及该胰腺炎模型的死亡率情况。结果:对照组的12h的生存率100%（6/6）,而胰腺炎组,造模成功后生存率29%（7/24）。胰腺炎组的大鼠的血淀粉酶、脂肪酶的水平明显高于对照组。包括谷丙转氨酶和谷草转氨酶的肝功能随造模时间的明显升高,而肌酐、尿素氮和胱抑素C等肾功能未见显着变化。结论:逆行性胰胆管注射牛磺胆酸钠造胰腺炎模型稳定,死亡率较高,能致严重的胰腺损伤,可以作为研究重症急性胰腺炎的动物模型。第二部分 重症急性胰腺炎小肠菌群及肠黏膜屏障变化目的:重症急性胰腺炎时胰腺坏死组织感染是决定病情预后的重要因素之一。本部分主要研究重症急性胰腺炎模型大鼠随造模时间不同小肠肠道菌群及肠黏膜上皮变化特征。方法:24只大鼠随机分为4组（每组6只）。一组为正常对照组,其他三组为行逆行性胰胆管注射牛磺胆酸钠,模型建立后2h,6h及12h后处死大鼠。采用变形梯度凝胶电泳研究造模不同时间小肠菌群的变化特征。采用透射电镜及普通病理检测肠黏膜形态学及紧密连接结构变化,应用免疫组化法研究紧密连接蛋白Z0-1的变化情况。结果:对各组结肠粪便菌群DGGE分析显示,重症急性胰腺炎模型建立后不同时间点回肠菌群组成不同。2h即出现变化,6小时达到最大,随着再造模时间继续延长,菌群结构与正常组的差异逐渐减少。具体的菌群变化特征为以大肠杆菌等有害菌的明显增多,乳酸杆菌等有益菌的明显减少。造模后肠粘膜屏障功能较正常对照明显受损。小肠绒毛的完整性受到破坏,紧密连接的缝隙较正常对照组明显增宽。结论:大鼠重症急性胰腺炎模型建立以后,小肠肠道菌群内随造模时间明显发生紊乱,肠粘膜屏障功能受损。第三部分重症急性胰腺炎时结肠肠道菌群及肠黏膜变化目的:重症急性胰腺炎时肠源性细菌易位被认为是导致胰腺坏死组织及胰周积液感染的主要原因,其具体机制尚未清楚。而肠道菌群失调及肠屏障功能受损是导致肠源性细菌易位的主要因素,本研究主要探讨重症急性胰腺炎大鼠结肠肠道菌群及结肠上皮屏障功能变化。方法:逆行性胰胆管注射牛磺胆酸钠建立重症急性胰腺炎大鼠模型。采用变形梯度凝胶电泳（DGGE）方法检测对照组及重症急性胰腺炎造模后2,6和12小时结肠大便的菌群变化情况。同时取大鼠盲肠肠壁行病理,透射电镜及免疫组化检测观察造模后不同时间的肠上皮屏障功能变化。结果:重症急性胰腺炎模型建立后粪便DGGE结果显示建模早期即出现结肠肠道菌群不同时间点结肠菌群组成不同,其中6h和正常组差异最大,随着造模时间继续延长,菌群结构与正常组的差异逐渐减少,造模后12小时向正常菌群结构变化。表现为有益菌的减少,致病菌的增多。结肠上皮免疫组化显示紧密连接蛋白ZO-1随造模时间的延长表达明显减少,电镜显示结肠上皮的紧密连接间隙随造模时间的延长明显增宽。结论:重症急性胰腺炎会导致结肠肠道菌群的紊乱。同时重症急性胰腺炎时结肠粘膜上皮的紧密连接受损间隙增大。二者共同导致重症急性胰腺炎时肠源性细菌易位的发生。第四部分重症急性胰腺炎时肠源性细菌易位的检测目的:早期精确诊断细菌易位对预防和治疗重症急性胰腺炎后期的细菌感染有重要意义。本研究主要采用变形梯度凝胶电泳方法来早期诊断重症急性胰腺炎大鼠模型的肠源性细菌易位。方法:24只大鼠随机分为4组,每组6只。一组为正常组。其余3组为重症急性胰腺炎组。收集正常对照组和胰腺炎组于造模后2h,6h和12h的腹水及血行PCR-DGGE检测其中细菌量和传统培养相对比。结果:胰腺炎大鼠模型造模成功后2小时腹水中细菌的阳性率为66%。重症急性胰腺炎时肠源性细菌易位的主要细菌为梭杆菌属,大肠杆菌,乳酸杆菌和肺炎克雷伯菌等肠道细菌。造模2h后的传统培养的细菌阳性率远远低于PCR-DGGE的阳性率（29%vs 66%,p<0.05）。在造模后第6h和第12h传统细菌培养的阳性率仍显着低于DGGE检测结果。胰腺炎大鼠模型血中在造模后2小时即出现DGGE阳性,在造模后2h,6h和12h的DGGE阳性率均显着高于传统培养组.结论:与传统培养结果不同,PCR-DGGE能够早期检测重症急性胰腺炎的肠源性细菌易位。基于DNA的分子技术能够检测出常规培养不能检测出的失活细菌。全文结论:逆行性胰胆管注射牛磺胆酸钠造胰腺炎模型稳定,死亡率较高,能致严重的胰腺损伤,可以作为研究重症急性胰腺炎的动物模型。大鼠重症急性胰腺炎模型建立以后,小肠肠道菌群内随造模时间明显发生紊乱,肠粘膜屏障功能受损。重症急性胰腺炎会导致结肠肠道菌群的紊乱。同时重症急性胰腺炎时结肠粘膜上皮的紧密连接受损间隙增大。二者共同导致重症急性胰腺炎时肠源性细菌易位的发生。重症急性胰腺炎时肠道菌群紊乱及肠黏膜上皮的受损共同导致肠源性细菌易位的发生。变形梯度凝胶电泳是能够早期诊断重症急性胰腺炎肠源性细菌易位的发生。
韦志军,吴先平,甘小亮,黑子清[7]（2011）在《大黄素对小鼠缺血再灌注肠黏膜肥大细胞活性的影响》文中认为目的:研究大黄素对小鼠肠缺血再灌注肠黏膜肥大细胞活性的影响。方法:28只昆明种小鼠随机均分为4组,假手术组（A组）、模型组（B组）、模型+大黄素60 mg.kg-1组（D1组）及模型+大黄素120 mg.kg-1组（D2组）。采用肠系膜上动脉夹闭法建立小肠缺血再灌注模型,观察肠黏膜病理结构变化、肠黏膜肥大细胞超微结构变化及类胰蛋白酶表达、比较计算肥大细胞数量,测定小肠组织组胺、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）浓度。结果:与假手术组比较,模型组Chiu’s评分、肥大细胞数量、组胺及TNF-α浓度显着增加（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较,大黄素60,120 mg.kg-1组的肥大细胞数量明显减少（P<0.05）,大黄素120 mg.kg-1组的小肠组织TNF-α浓度明显降低（P<0.05）。假手术组肥大细胞超微结构正常,模型组肥大细胞颗粒包膜相互融合形成细胞内空泡等脱颗粒现象,大黄素60,120 mg.kg-1组肥大细胞形成空泡较少。结论:大黄素能减少小鼠小肠黏膜结构破坏,抑制小肠肥大细胞活化及脱颗粒,从而起到防治肠缺血再灌注损伤的作用。
孙伟,于洪川[8]（2010）在《P物质在奶牛临床型乳腺炎心肌中的表达》文中进行了进一步梳理应用组织化学和免疫组织化学方法对正常与临床型乳腺炎奶牛心肌组织中的P物质表达水平、炎性细胞以及肥大细胞的活力、组化性质的变化进行了研究.结果表明:在奶牛临床型乳腺炎心肌纤维间P物质异常丰富,呈单根或网状走行,表达增强,与肥大细胞串联及相邻排列,而肥大细胞和炎性细胞也急剧增多,均极显着高于正常奶牛（P<0.01）,并与P物质的表达水平相吻合,表明P物质参与乳腺炎病理过程中所致心肌组织损伤与心功能衰竭的病理进程.
潘志远[9]（2010）在《宾赛克嗪对胆碱受体功能的拮抗作用及其对胆碱酯酶抑制剂抗毒效应的药理学特征》文中研究指明胆碱酯酶抑制剂（ChEI）主要包括神经性毒剂和有机磷农药。ChEI中毒的主要机制是抑制胆碱酯酶活性,导致体内乙酰胆碱（ACh）过度蓄积,持续激活胆碱受体,引发胆碱能危象。在中枢神经系统表现为焦虑、失眠、混乱、震颤、惊厥、心血管呼吸中枢麻痹、昏迷等症状。在外周,一方面ACh激动外周自主神经系统M受体引起瞳孔缩小、腺体分泌亢进、血压下降、心动过缓、恶心、呕吐、支气管痉挛、腹痛、腹泻、大小便失禁等M样毒性症状;另一方面ACh激活外周神经节N受体后引起受体失敏,产生肌颤、无力、呼吸困难、麻痹等N样毒性症状。ChEI中毒救治是急救医学面临的重大课题。目前WHO推荐的标准救治方案是以M受体拮抗剂阿托品和胆碱酯酶复活剂为核心的综合治疗。但是采用标准方案救治急性有机磷农药中毒（AOPP）的患者,抢救失败率仍然在20%以上,死亡率居高不下。这一方案的局限性至少表现为以下三方面:（1）胆碱酯酶复活剂的使用效果仍然备受争议;（2）虽然阿托品可降低M样毒性反应,但是阿托品的组织选择性差,对M受体的亚型选择性不强,毒副作用多,易导致阿托品中毒而加重死亡率;（3）救治策略中缺少针对N受体这一重要靶点的药物。进一步研究发现N受体拮抗剂不仅能在中毒早期对抗N受体激动所介导的N样毒性反应,而且能在中毒晚期对抗失敏态N受体对M受体的易化作用,显着增强M受体拮抗剂的抗毒疗效。因此,开发具有抗M和N作用的高效抗毒剂,是提高中毒救治成功率的一条可行的现实途径。目前已公认肠黏膜屏障功能的破坏可迅速引发内毒素血症和脓毒血症,引起全身炎症反应综合征（SIRS）,是诱发多器官功能障碍综合征的始动因素和核心环节。肠黏膜屏障功能的好坏对危重疾病的发生、发展和转归起着极为重要的作用。ChEI中毒发生快、起病急、程度重,是病理生理机制十分复杂的一种急危重症。临床观察到重度AOPP患者病死率高的另一个重要原因是患者发生了多器官功能障碍综合征（MODS）甚至多系统器官功能衰竭（MSOF）。因此,研究中毒状态下肠黏膜屏障功能的变化,对于阐明胆碱酯酶抑制剂中毒引起MODS的机制,开发既可有效抗毒,又可保护肠屏障功能的抗胆碱能药物具有重要价值。宾赛克嗪是具有抗M和抗N作用的新型抗毒剂。前期研究证明宾赛克嗪具有独特的治疗学优势:吸收快,易于透过血脑屏障,主要分布在肺、腺体、脑、心脏;对神经元不同亚型N受体均具有不同的可逆性的抑制作用;对五种不同亚型M受体（M1M5）和不同的离体组织具有不同的亲和力;在沙林、梭曼、塔崩、VX中毒小鼠中抗毒效价和效能均显着强于阿托品;对神经毒战剂和有机磷农药中毒诱发的循环衰竭具有高效、速效、特效的救治作用;对毒剂诱发的呼吸衰竭具有良好的救治作用。更有意义的是,宾赛克嗪能抑制VX中毒小鼠血浆内毒素水平的增高。由于宾赛克嗪本身对肠道平滑肌和肠黏膜M受体的亲和力很低,而且用量比阿托品少,因此推断其不易引起肠麻痹等副作用,不会加重肠黏膜损伤。本论文第一部分以槟榔碱诱发中枢性震颤和外周流涎、毛果芸香碱诱发外周流涎、乙酰胆碱和氧化震颤素诱发豚鼠离体回肠收缩为评价中枢和外周M受体功能的指标,以烟碱诱发惊厥、诱发豚鼠离体回肠收缩为评价中枢和外周N受体功能的指标,以毛果芸香碱与烟碱合用同时激动M和N受体诱发混合性震颤为指标,系统地研究了宾赛克嗪拮抗胆碱能受体功能的药理学特点,并与经典抗毒剂阿托品作比较。论文第二部分研究了宾赛克嗪对胆碱酯酶活性的影响。论文第三部分研究了宾赛克嗪抗胆碱酯酶抑制剂中毒的药理学特征。在胆碱酯酶抑制剂敌敌畏染毒的小鼠模型上验证了宾赛克嗪的强效抗毒作用,并且着重研究了胆碱酯酶抑制剂中毒时肠黏膜屏障功能的改变和形态结构的变化以及宾赛克嗪的救治效果。48只雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组、VX染毒模型组、宾赛克嗪1、3、9mg/kg救治组和阿托品9mg/kg救治组;皮下注射VX（13μg/kg）染毒,药物救治组在染毒后5min腹腔注射给予相应剂量的药物,对照组给予生理盐水。于染毒后3h各组动物取血,检测血浆二胺氧化酶（DAO）活性及D-乳酸浓度,同时取小肠组织,观察肠黏膜形态和超微结构变化。结果如下:1.宾赛克嗪对胆碱受体功能拮抗作用的药理学特征1.1宾赛克嗪对中枢M受体功能的拮抗作用宾赛克嗪和阿托品抗槟榔碱（8mg/kg, sc）致小鼠中枢性震颤的ED50±LD95分别是0.31±0.06mg/kg和1.33±0.17mg/kg,宾赛克嗪对抗中枢M受体功能的作用比阿托品强3.3倍。1.2宾赛克嗪对外周M受体功能的拮抗作用宾赛克嗪和阿托品对抗槟榔碱（8mg/kg, sc）诱发小鼠外周流涎ED50值分别为0.38±0.09mg/kg和0.17±0.03mg/kg,其对抗强度比阿托品弱1.2倍。宾赛克嗪和阿托品对抗毛果芸香碱诱发小鼠外周流涎的ED50值分别为5.57±1.30mg/kg和0.46±0.18mg/kg;其对抗强度比阿托品弱11倍。宾赛克嗪和阿托品均可剂量依赖性地对抗乙酰胆碱、氧化震颤素诱发的离体回肠收缩,宾赛克嗪的作用稍弱,但两药IC50均没有显着性差异。可见,宾赛克嗪对抗外周M受体功能的作用比阿托品弱。1.3宾赛克嗪对中枢N受体功能的拮抗作用宾赛克嗪可剂量依赖性地对抗烟碱诱发的惊厥,ED50值为2.87±0.76 mg/kg。而阿托品给药20mg/kg时不能对抗烟碱诱发的惊厥,其剂量高达60mg/kg时抗惊厥率仍然<20%。1.4宾赛克嗪对外周N受体功能的拮抗作用宾赛克嗪拮抗烟碱诱发的离体回肠收缩的IC50为1.1±0.18μM,阿托品的IC50为13.84±1.68μM,两药的IC50有显着性差异（P<0.05）。宾赛克嗪比阿托品的作用强约13倍。阿托品在大于75μM时可以完全抑制烟碱诱发回肠收缩,可能与其高浓度时使肠平滑肌麻痹有关。结果提示宾赛克嗪具有明确的拮抗外周神经节N受体作用。1.5宾赛克嗪对烟碱和毛果芸香碱诱发小鼠混合性震颤的拮抗作用宾赛克嗪和阿托品对抗毛果芸香碱和烟碱诱发小鼠混合性震颤的的ED50值分别为2.64±0.35mg/kg和4.95±0.65mg/kg,比阿托品强约1倍。2.宾赛克嗪对胆碱酯酶活性的影响宾赛克嗪各浓度组对大鼠血浆和脑匀浆胆碱酯酶活性均没有影响。3.宾赛克嗪对胆碱酯酶抑制剂抗毒效应的药理学特征3.1宾赛克嗪对敌敌畏致死作用的影响宾赛克嗪和阿托品（10mg/kg）预防给药分别可以使敌敌畏的LD50±L95提高到199.40±16.02mg/kg和20.22±3.07mg/kg,宾赛克嗪抗毒的PR值提高了16.84倍,而阿托品仅提高了0.81倍。宾赛克嗪对抗敌敌畏1.2LD中毒致死作用,其ED50为2.87±0.40mg/kg。而阿托品的ED50为6.78±3.92mg/kg,宾赛克嗪的抗毒作用显着强于阿托品。3.2宾赛克嗪对维埃克斯所致肠黏膜屏障损伤的保护作用3.2.1染毒大鼠血浆D-乳酸含量的变化以及宾赛克嗪的救治作用与正常对照组（29.07±6.55μg/mL）比较,模型组血浆D-乳酸浓度明显升高（87.75±22.91μg/mL,P<0.01）,较正常对照组升高了2倍。宾赛克嗪1、3、9mg/kg治疗组（64.23±24.88,56.94±10.37,45.29±11.14μg/mL）能剂量依赖性降低VX染毒大鼠血中D-乳酸含量,与模型组比较,宾赛克嗪3和9mg/kg治疗组血浆D-乳酸浓度明显降低（P均<0.01）。阿托品9mg/kg治疗组（44.42±14.38μg/mL）也可显着降低D-乳酸浓度,与宾赛克嗪等剂量组相比无差异。3.2.2染毒大鼠血浆二胺氧化酶活性的变化以及宾赛克嗪的救治作用与正常对照组（2.99±0.43 U/L）比较,模型组在染毒后3h血浆二胺氧化酶活性显着升高（P<0.01）,较正常对照组升高了2.2倍。与模型组（6.72±0.93 U/L）比较,宾赛克嗪1、3、9mg/kg救治组（5.26±0.81,4.11±1.11,3.17±0.68 U/L）可剂量依赖性逆转VX染毒大鼠血浆二胺氧化酶的活性升高（P<0.05和P<0.01）,宾赛克嗪9mg/kg治疗组效果最好。阿托品9mg/kg治疗组（3.24±0.50 U/L）也可显着降低二胺氧化酶活性,与宾赛克嗪等剂量组相比无差异。3.2.3染毒大鼠肠黏膜形态结构的变化以及宾赛克嗪的救治作用光镜下显示模型组大鼠小肠发生肠壁变薄,皱壁变短,结构紊乱,固有层毛细血管扩张充血,黏膜间质水肿等病理变化;电镜下显示模型组染毒大鼠小肠上皮细胞发生坏死,细胞器损伤,紧密连接破坏等变化。宾赛克嗪1、3、9 mg/kg组呈现剂量依赖性改善小肠的病理变化,阿托品9 mg/kg组也能改善此病理变化。综上所述,本研究结论如下:（1）宾赛克嗪对中枢和外周的胆碱受体均具有拮抗作用。宾赛克嗪对外周M受体功能的拮抗作用比阿托品弱,是其副作用少的基础;对中枢M受体功能的拮抗作用比阿托品强,与其易进入中枢相关;宾赛克嗪同时具有中枢和外周神经节N受体拮抗作用;因此,宾赛克嗪能够全面对抗M/N毒性效应。（2）宾赛克嗪抗ChEI中毒的抗毒效价比阿托品高一个数量级,其高效抗毒作用与其兼具有抗M和抗N作用密切相关,而与胆碱酯酶活性无关。（3）ChEI中毒时肠黏膜上皮细胞损伤,肠黏膜屏障功能破坏,通透性增加;宾赛克嗪能改善肠黏膜屏障形态结构和功能的损伤。宾赛克嗪既能高效对抗ChEI中毒的毒性症状,又能改善肠黏膜屏障损伤,这对于防止ChEI中毒诱发的MODS具有重要意义。
王伟平,李宝亮,张静,牛春雨,赵自刚[10]（2009）在《急性肾衰竭发展为多器官功能障碍综合征发病机制的研究进展》文中指出
二、多器官衰竭时肠黏膜肥大细胞活性的变化研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、多器官衰竭时肠黏膜肥大细胞活性的变化研究（论文提纲范文）
（1）免疫细胞参与介导肠缺血再灌注损伤的机制（论文提纲范文）
| 1 免疫细胞的分类与功能 |
| 2 Np参与介导肠缺血再灌注损伤的机制 |
| 2.1 Np介导肠缺血再灌注中肠损伤的机制 |
| 2.2 Np迁移、介导肠缺血再灌注中远隔器官损伤的机制 |
| 2.3 Np防治肠缺血再灌注损伤的作用 |
| 3 肥大细胞参与介导肠缺血再灌注损伤的机制 |
| 3.1 肥大细胞介导肠缺血再灌注中肠损伤的机制 |
| 3.2 肥大细胞介导肠缺血再灌注中远隔器官损伤的机制 |
| 4 巨噬细胞参与介导肠缺血再灌注损伤的机制 |
| 4.1 巨噬细胞介导肠缺血再灌注中肠损伤的机制 |
| 4.2 巨噬细胞介导肠缺血再灌注中远隔器官损伤的机制 |
| 4.3 巨噬细胞防治肠缺血再灌注损伤的作用 |
| 5 T淋巴细胞参与介导肠缺血再灌注损伤的机制 |
| 5.1 T淋巴细胞介导肠缺血再灌注中肠损伤的机制 |
| 5.2 T淋巴细胞介导肠缺血再灌注中肠损伤的可能机制 |
| 5.3 T淋巴细胞防治肠缺血再灌注损伤的作用 |
| 6 B淋巴细胞参与介导肠缺血再灌注损伤的机制 |
| 7 血小板参与介导肠缺血再灌注损伤的机制 |
| 7.1 血小板介导肠缺血再灌注中肠损伤的机制 |
| 7.2 血小板介导肠缺血再灌注中远隔器官损伤的机制 |
| 7.3 血小板介导肠缺血再灌注中肠损伤的可能机制 |
| 7.4 血小板防治肠缺血再灌注损伤的可能作用 |
| 8 DC参与介导肠缺血再灌注损伤的机制 |
| 9 小结与展望 |
（2）骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠屏障功能影响及相关机制探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Absract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、骨髓间充质干细胞及外泌体分离和鉴定 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.1.4 研究方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 大鼠骨髓间充质干细胞形态学观察 |
| 1.2.2 骨髓间充质干细胞表面抗原鉴定 |
| 1.2.3 骨髓间充质干细胞外泌体形态学观察 |
| 1.2.4 骨髓间充质干细胞外泌体表面标志物鉴定 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、脓毒症大鼠模型制备及生存率观察 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 研究方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 大鼠术后一般情况 |
| 2.2.2 大鼠术后腹部情况 |
| 2.2.3 大鼠术后72小时生存率 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠屏障功能影响及相关机制探讨 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 研究对象 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 研究方法 |
| 3.1.5 统计方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠病理变化及评分的影响 |
| 3.2.2 骨髓间充质外泌体对脓毒症大鼠肠通透性的影响 |
| 3.2.3 骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠炎症变化的影响 |
| 3.2.4 骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠相关信号通路的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠屏障功能影响 |
| 3.3.2 骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠屏障功能影响的机制探讨 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 外泌体研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（3）基于mTOR通路探讨加味四君子汤对严重烫伤后肠道屏障功能的调理作用及相关机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1.概述 |
| 2.16 SrDNA高通量测序技术在肠道微生物中的应用 |
| 3.中医药加味四君子汤研究的意义 |
| 4.蛋白组学技术应用的意义 |
| 5.mTOR信号对肠道屏障功能的影响 |
| 6.本研究的简要方案 |
| 7.加味四君子对严重烫伤后肠道功能的预期研究结果及意义 |
| 第一章 加味四君子汤对严重烫伤兔回肠粘膜及炎症因子的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂和药品 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要实验试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 兔烫伤模型的制备 |
| 2.2 加味四君子汤制备 |
| 2.3 实验分组 |
| 2.4 烫伤皮肤组织标本HE染色 |
| 2.5 回肠粘膜组织标本HE染色 |
| 2.6 测定回肠粘膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平 |
| 2.6.1 回肠粘膜样本制备 |
| 2.6.2 酶联免疫(ELISA)检测回肠粘膜组织中TNF-α的水平 |
| 2.7 测定回肠粘膜组织中白细胞介素10(IL-10)的水平 |
| 2.8 测定回肠粘膜组织中白介素1β (IL-1β)的水平 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 兔烫伤模型建立 |
| 3.2 各组兔回肠粘膜组织病理情况变化 |
| 3.3 加味四君子汤对回肠粘膜组织TNF-α水平的影响 |
| 3.4 加味四君子汤对回肠粘膜组织IL-1β水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二章 加味四君子汤对严重烫伤兔肠道16Sr DNA菌群多样性的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂和药品 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 兔烫伤模型的制备 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 肠道内容物中微生物组总DNA提取 |
| 2.4 PCR扩增 |
| 2.5 文库构建 |
| 2.6 高通量测序 |
| 2.7 疑问序列的剔除及序列数统计 |
| 2.8 聚类分析和物种注释 |
| 2.9 Alpha多样性分析 |
| 2.10 Beta多样性分析 |
| 2.11 统计学分析方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 测序信息 |
| 3.2 菌群结构比较 |
| 3.3 Alpha多样性分析 |
| 3.4 Beta多样性分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三章 加味四君子汤对严重烫伤兔小肠黏膜蛋白组学的分析及其对mTOR通路的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药品和试剂 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 主要实验试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 兔烫伤模型的制备 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 各组小肠黏膜组织蛋白组学分析 |
| 2.4 EIF3I、CSNK2A1、PEBP1、EIF4G1、MAP2K1和PPP2CAm RNA表达检测 |
| 2.5 EIF3I、CSNK2A1、PEBP1、EIF4G1、MAP2K1和PPP2CA蛋白表达检测 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 蛋白质鉴定及定量结果 |
| 3.2 小肠黏膜组织中烫伤模型m TOR通路差异表达蛋白筛选 |
| 3.3 小肠黏膜组织中加味四君子汤干预m TOR通路差异表达蛋白筛选 |
| 3.4 各组小肠黏膜组织m TOR通路差异表达蛋白聚类分析 |
| 3.5 各组小肠黏膜组织m TOR通路差异基因通路 |
| 3.6 各组小肠黏膜组织m TOR通路差异基因荧光定量PCR验证结果 |
| 3.7 各组小肠黏膜组织m TOR通路差异基因蛋白验证结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 论文综述 |
| 参考文献 |
（4）婴幼儿食物过敏和食物不耐受相关胃病的临床、内镜和病理特点分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 相关诊断标准 |
| 2.3 纳入标准 |
| 2.4 排除标准 |
| 2.5 分组 |
| 2.6 研究方法 |
| 2.6.1 实验主要试剂 |
| 2.6.2 实验主要器材 |
| 2.6.3 标本采集和处理 |
| 2.6.4 MCs、EOS染色 |
| 2.6.5 Hp的检测 |
| 2.6.6 采用欧蒙印迹法和酶联免疫法(ELISA)检测患儿血清中食物过敏原特异性IgE抗体,食物特异性IgG抗体 |
| 2.7 数据整理及统计分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 一般资料 |
| 3.2 胃镜、病理结果 |
| 3.3 食物过敏组、食物不耐受组和对照组EOS计数 |
| 3.4 食物过敏组、食物不耐受组和对照组胃粘膜MCs计数 |
| 3.5 食物过敏组、食物不耐受组和对照组同时合并感染Hp后胃粘膜EOS计数 |
| 3.6 食物过敏组、食物不耐受组和对照组同时合并Hp感染后胃粘膜MCs计数 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 一般资料,内镜和病理特点分析 |
| 4.2 食物过敏组胃粘膜EOS数和MCs数的改变 |
| 4.3 胃粘膜EOS数和MCs数在FA相关性胃病中的作用 |
| 4.4 食物不耐受组胃粘膜EOS数和MCs数的改变 |
| 4.5 胃粘膜EOS数和MCs数在FI相关胃病中的作用 |
| 4.6 Hp感染与胃粘膜EOS数和MCs数 |
| 4.7 Hp感染与胃粘膜EOS数和MCs数的改变 |
| 4.8 局限与展望 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（5）从肠粘膜免疫稳态重建探讨“温阳解毒化瘀方”治疗ACLF的干预机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 课题资助 |
| 引言 |
| 本实验研究技术路线图 |
| 第一部分 ACLF大鼠模型的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂、实验仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验动物造模 |
| 1.2.2 组织采样 |
| 1.2.3 HE染色病理检测 |
| 1.2.4 透射电镜观察肠粘膜超微结构 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 免疫致敏阶段 |
| 2.2 免疫攻击阶段 |
| 2.3 ACLF大鼠模型评价 |
| 2.3.1 大鼠死亡情况 |
| 2.3.2 肝脏组织病理学评估 |
| 2.3.3 肠粘膜组织学评估 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 从病理组织学探讨“温阳解毒化瘀方”对ACLF大鼠肝脏与小肠粘膜组织的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂、实验仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 动物分组 |
| 1.2.2 药物制备、给药剂量及给药方法 |
| 1.2.3 标本采样 |
| 1.2.4 HE染色病理检测 |
| 1.2.5 透射电镜观察肠粘膜超微结构分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.0 大鼠一般情况分析 |
| 2.1 各实验组大鼠肝脏组织病理学比较 |
| 2.2 各实验组大鼠小肠粘膜组织病理学比较 |
| 2.3 各实验组大鼠小肠粘膜组织超微结构比较 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 基于高通量测序技术研究“温阳解毒化瘀方”对ACLF大鼠肠道菌群特征的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器和设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 动物分组 |
| 1.2.2 给药剂量及给药方法 |
| 1.2.3 粪便标本采样 |
| 1.2.4 大鼠粪便样本肠道菌群的DNA提取 |
| 1.2.5 PCR扩增 |
| 1.2.6 Illumina Miseq测序 |
| 1.2.7 数据处理 |
| 1.2.8 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 大鼠肠道菌群16S rRNA高通量焦磷酸测序结果序列分析 |
| 2.1.1 测序数据的处理 |
| 2.1.2 物种组成分析 |
| 2.1.3 组间OTU差异显着性分析 |
| 2.1.4 样本共有物种分析 |
| 2.1.5 alpha多样性指数分析 |
| 2.1.6 肠道菌群整体结构分析 |
| 2.1.7 Beta多样性指数分析 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 第四部分 从免疫炎症因子功能变化探讨“温阳解毒化瘀方”对ACLF大鼠肠粘膜免疫功能的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂、实验仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 动物分组 |
| 1.2.2 给药剂量及给药方法 |
| 1.2.3 标本采样 |
| 1.2.4 指标检测 |
| 1.2.5 统计方法 |
| 2.结果与分析 |
| 3.讨论 |
| 第五部分 全文讨论 |
| 结论 |
| 本研究的创新、不足与展望 |
| 参考文献 |
| 综述“肠-肝”轴:ACLF患者中的细菌易位,炎症和肠粘膜免疫 |
| 1.背景 |
| 2.ACLF中的“肠-肝”轴功能异常机制 |
| 2.1 .肠道黏膜免疫 |
| 2.2 .肠道细菌易位激活先天性免疫系统 |
| 2.3 .肠道菌群相关的炎症反应 |
| 3.以“肠-肝”轴为理论依据,ACLF的治疗策略 |
| 3.1 .激活肠DC对肠黏膜屏障功能的保护作用 |
| 3.2 .肠道微生态重建 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表论文、参与课题及获奖情况 |
（6）重症急性胰腺炎肠源性细菌易位的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠重症急性胰腺炎大鼠模型的建立 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 参考文献 |
| 第二部分 重症急性胰腺炎时回肠菌群改变特征及肠黏膜屏障功能变化 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 重症急性胰腺炎时大鼠结肠菌群及肠粘膜屏障功能变化 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 结论 |
| 3.5 参考文献 |
| 第四部分 重症急性胰腺炎时肠源性细菌昜位的检测 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 4.6 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表文章 |
| 致谢 |
（7）大黄素对小鼠缺血再灌注肠黏膜肥大细胞活性的影响（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 1.1 仪器及试剂 |
| 1.2 动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物模型建立 |
| 2.2 标本处理及指标检测 |
| 2.2.1 小肠组织病理观察 |
| 2.2.2 小肠黏膜透射电镜观察 |
| 2.2.3 肥大细胞计数[8] |
| 2.2.4 小肠组织匀浆组胺及TNF-α浓度测定 |
| 2.3 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 肠黏膜病理变化 |
| 3.2 肥大细胞超微结构变化 |
| 3.3 肥大细胞数量,组胺、TNF-α浓度变化 |
| 3 讨论 |
（9）宾赛克嗪对胆碱受体功能的拮抗作用及其对胆碱酯酶抑制剂抗毒效应的药理学特征（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 宾赛克嗪对胆碱受体功能拮抗作用的药理学特征研究方法 |
| 2.1.1 抗槟榔碱诱发小鼠中枢性震颤和外周流涎实验 |
| 2.1.2 抗毛果芸香碱诱发小鼠外周流涎实验 |
| 2.1.3 抗烟碱诱发小鼠惊厥实验 |
| 2.1.4 抗烟碱和毛果芸香碱合用诱发小鼠混合性震颤实验 |
| 2.1.5 抗胆碱能受体激动剂诱发离体豚鼠回肠收缩实验 |
| 2.2 微量 DTNB 法测定胆碱酯酶活性 |
| (1) 血浆和脑匀浆制备 |
| (2) 酶活性测定操作方法 |
| 2.3 宾赛克嗪对胆碱酯酶抑制剂抗毒效应的药理学特征研究方法 |
| 2.3.1 抗敌敌畏中毒致死实验 |
| (1) 宾赛克嗪和阿托品对抗敌敌畏致死效应 PR 值的研究 |
| (2) 宾赛克嗪和阿托品对抗敌敌畏致死作用的研究 |
| 2.3.2 宾赛克嗪对胆碱酯酶抑制剂所致肠黏膜屏障损伤的保护作用研究方法 |
| (1) 动物分组及给药方法 |
| (2) 血浆二胺氧化酶活性测定 |
| (3) 血浆 D-乳酸含量测定 |
| (4) 肠组织形态结构观察 |
| (5) 肠黏膜上皮细胞超微结构观察 |
| 三、数据分析与统计处理 |
| 实验结果 |
| 第一部分 宾赛克嗪对胆碱受体功能拮抗作用的药理学特征 |
| 1.1 宾赛克嗪对中枢 M 受体功能的拮抗作用 |
| 1.1.1 抗槟榔碱诱发小鼠中枢性震颤作用 |
| 1.2 宾赛克嗪对外周 M 受体功能的拮抗作用 |
| 1.2.1 抗槟榔碱诱发小鼠外周流涎作用 |
| 1.2.2 抗毛果芸香碱诱发小鼠外周流涎作用 |
| 1.2.3 抗乙酰胆碱诱发离体回肠收缩作用 |
| 1.2.4 抗氧化震颤素诱发离体回肠收缩作用 |
| 1.3 宾赛克嗪对中枢 N 受体功能的拮抗作用 |
| 1.3.1 抗烟碱诱发小鼠惊厥的作用 |
| 1.4 宾赛克嗪对外周 N 受体功能的拮抗作用 |
| 抗烟碱诱发离体回肠收缩作用 |
| 1.5 宾赛克嗪对烟碱和毛果芸香碱合用诱发混合性震颤的拮抗作用 |
| 结语 |
| 第二部分 宾赛克嗪对胆碱酯酶活性的影响 |
| 2.1 宾赛克嗪在体外对大鼠血浆胆碱酯酶活性的影响 |
| 2.2 宾赛克嗪在体外对大鼠脑匀浆乙酰胆碱酯酶活性的影响 |
| 结语 |
| 第三部分 宾赛克嗪对胆碱酯酶抑制剂抗毒效应的药理学特征 |
| 3.1 抗敌敌畏中毒小鼠致死作用的比较 |
| 3.2 宾赛克嗪对维埃克斯所致肠黏膜损伤的保护作用研究 |
| 3.2.1 VX 染毒后大鼠肠屏障功能和通透性的变化及宾赛克嗪的救治作用 |
| (1) 中毒 3h 后大鼠血浆 D-乳酸含量的变化以及宾赛克嗪的救治作用 |
| (2) 中毒 3h 后大鼠血浆二胺氧化酶活性的变化以及宾赛克嗪的救治作用 |
| 3.2.2 VX 染毒后大鼠肠黏膜形态结构的变化及宾赛克嗪的救治作用 |
| (1) 中毒大鼠空肠黏膜形态结构的变化以及宾赛克嗪的救治作用 |
| (2) 中毒大鼠回肠黏膜形态结构的变化以及宾赛克嗪的救治作用 |
| (3) 中毒大鼠回肠黏膜上皮细胞超微结构的变化以及宾赛克嗪的救治作用 |
| (4) 中毒大鼠回肠黏膜上皮细胞间紧密连接的变化以及宾赛克嗪的改善作用 |
| 结语 |
| 讨论 |
| 一、宾赛克嗪对胆碱受体功能拮抗作用的药理学特征分析 |
| 1. 宾赛克嗪对中枢神经系统胆碱受体功能的拮抗作用特点 |
| 2. 宾赛克嗪对外周胆碱受体功能拮抗作用的特点 |
| 3.宾赛克嗪对 M/N 受体激动剂合用引起的胆碱能功能亢进的拮抗作用特点 |
| 二、宾赛克嗪和阿托品抗胆碱酯酶抑制剂中毒致死作用的比较 |
| 三、宾赛克嗪对胆碱酯酶抑制剂中毒时肠黏膜屏障功能损伤的保护作用 |
| 1. 肠黏膜屏障功能在 ChEI 中毒诱发多器官功能障碍综合征中的重要性 |
| 2. 胆碱酯酶抑制剂中毒时肠黏膜屏障的变化特点 |
| 3. 宾赛克嗪改善胆碱酯酶抑制剂中毒所致肠黏膜屏障功能损伤的机制分析 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（10）急性肾衰竭发展为多器官功能障碍综合征发病机制的研究进展（论文提纲范文）
| 1 炎症反应 |
| 2 氧化应激 |
| 3 肠道细菌-内毒素移位 |
| 4 血液流变性异常与微循环障碍 |
四、多器官衰竭时肠黏膜肥大细胞活性的变化研究（论文参考文献）
- [1]免疫细胞参与介导肠缺血再灌注损伤的机制[J]. 任以行,冷玉芳,张健民,石亚静,陈凤,刘馨. 医学综述, 2021(11)
- [2]骨髓间充质干细胞外泌体对脓毒症大鼠肠屏障功能影响及相关机制探讨[D]. 王媛. 天津医科大学, 2020(06)
- [3]基于mTOR通路探讨加味四君子汤对严重烫伤后肠道屏障功能的调理作用及相关机制[D]. 罗锦花. 南昌大学, 2019(08)
- [4]婴幼儿食物过敏和食物不耐受相关胃病的临床、内镜和病理特点分析[D]. 刘晓芬. 南昌大学, 2019(01)
- [5]从肠粘膜免疫稳态重建探讨“温阳解毒化瘀方”治疗ACLF的干预机制[D]. 张涛. 湖南中医药大学, 2019
- [6]重症急性胰腺炎肠源性细菌易位的研究[D]. 王思珍. 南京大学, 2014(05)
- [7]大黄素对小鼠缺血再灌注肠黏膜肥大细胞活性的影响[J]. 韦志军,吴先平,甘小亮,黑子清. 中国实验方剂学杂志, 2011(16)
- [8]P物质在奶牛临床型乳腺炎心肌中的表达[J]. 孙伟,于洪川. 农业科学研究, 2010(02)
- [9]宾赛克嗪对胆碱受体功能的拮抗作用及其对胆碱酯酶抑制剂抗毒效应的药理学特征[D]. 潘志远. 中国人民解放军军事医学科学院, 2010(04)
- [10]急性肾衰竭发展为多器官功能障碍综合征发病机制的研究进展[J]. 王伟平,李宝亮,张静,牛春雨,赵自刚. 中国微循环, 2009(06)