一、人同种异体抗原诱导的T细胞克隆在体外的建立及鉴定（论文文献综述）
杨惠舒[1]（2021）在《紫草素对T细胞的抑制作用及其机制研究》文中提出目的:器官移植是终末期器官衰竭患者的最终治疗手段。然而,几乎所有移植患者都需要使用免疫抑制剂进行持续治疗。虽然免疫抑制剂在维持同种异体移植物存活中起到重要作用,但持续使用免疫抑制剂也可能导致严重的副作用。因此,有必要寻找新的高效且副作用较小的免疫抑制药物。紫草素是一种具有生物活性的萘醌色素,提取自传统中药紫草,已被证明可以调节免疫和炎症反应,重要的是,紫草素还被证明可以通过抑制JNK信号和IKKβ活性来抑制人T淋巴细胞的激活。但紫草素是否可以抑制同种异体心脏移植排斥反应目前仍不清楚。本研究从细胞学层面上探究了紫草素对T细胞的抑制作用及其潜在机制,并进行了小鼠同种异体心脏移植物生存期的尝试,为日后其在同种异体移植排斥反应中的应用奠定基础。方法:首先,我们通过淋巴细胞转化实验及CFSE染色实验探究了紫草素在体外是否可以抑制淋巴细胞的增殖;然后,我们通过克隆无能实验、FITC-Annexin V/PI染色实验、细胞周期检测实验、调节性T细胞诱导实验等在细胞水平上探讨了紫草素抑制淋巴细胞增殖的潜在机制。最后,我们通过建立小鼠同种异体心脏移植模型,探究了紫草素对小鼠心脏移植物生存期的影响。结果:通过淋巴细胞转化实验及CFSE增殖检测实验,我们发现紫草素在体外可以有效地抑制淋巴细胞的增殖,并且这种抑制作用具有剂量依赖性。接着体外细胞学实验揭示了紫草素是通过诱导淋巴细胞凋亡、诱导调节性T细胞生成以及阻滞细胞周期发挥其作用的。体内实验表明,紫草素用药组可延长小鼠同种异体心脏移植物的生存期。结论:我们的结果表明,紫草素在体外可以通过多种机制抑制淋巴细胞的增殖,并且可以延长小鼠同种异体心脏移植物的生存期。综上,紫草素具有成为一种高效的免疫抑制剂的潜力。
董曦文[2]（2021）在《牙髓干细胞对椎间盘退变与类风湿关节炎的免疫调控作用及治疗机制研究》文中提出椎间盘退变（IVDD）及类风湿关节炎（RA）是常见的慢性骨关节疾病。二者发病率高,治疗难度大,复发率高,给患者身体健康及生活质量带来较大威胁,为国家社会造成重大经济负担。在两者发病过程中,炎症免疫反应均发挥作用:免疫豁免丧失后,抗原物质暴露并被机体免疫系统识别,激活免疫级联反应,引起免疫病理损伤。间充质干细胞是干细胞疗法中最常见的细胞类型,具有治疗潜力大、免疫原性低、应用范围广的特点。作为间充质干细胞的重要组成类型,牙髓干细胞（DPSCs）具有较强的自我更新能力、突出的免疫调控作用和出色的成软骨/成骨特性。科室前期研究证明,DPSCs能够抑制炎症,促进组织修复,在慢性牙周病软硬组织缺损中发挥较好的治疗作用。由于自身免疫反应在牙周炎的发病过程中同样占据举足轻重的地位。由此,我们推测DPSCs对自身免疫反应相关炎症所致疾病具有潜在免疫调节作用。基于以上因素,我们考虑使用DPSCs对IVDD及RA动物模型进行治疗,分析DPSCs对二者的治疗作用;并通过分离患者原代细胞,研究DPSCs在二者中发挥作用的相关机制。本研究主要分以下四部分进行。第一部分:目的评估DPSCs对大鼠IVDD模型椎间盘结构及细胞外基质的影响。方法使用针刺髓核法构建大鼠IVDD模型,原位注射DPSCs进行治疗。使用Micro-CT对大鼠IVDD病变情况进行影像学评估。使用H&E染色、Masson染色、番红固绿染色和免疫组织化学染色以及Masuda评分和形态结构参数定量分析对大鼠椎间盘病变及细胞外基质进行组织病理学评估。结果Micro-CT结果证明:DPSCs治疗后,椎间盘高度恢复,影像学表现良好。组织病理学结果证实:DPSCs治疗后,椎间盘组织结构趋于恢复,纤维环与髓核界限清楚,髓核细胞数量恢复;软骨终板肥厚及髓核萎缩均有所缓解;髓核中II型胶原（Col II）分泌增加,细胞外基质增多。结论DPSCs促进IVDD动物模型椎间盘结构恢复及细胞外基质产生。第二部分:目的分析DPSCs培养上清对椎间盘突出患者原代髓核细胞基因表达及信号通路的影响,明确DPSCs治疗后髓核细胞变化的分子机制。方法使用DPSCs上清处理患者原代髓核细胞后进行转录组测序。通过对测序结果进行生物信息学分析,找出差异表达基因（DEGs）及富集的信号通路。使用Western blotting及免疫荧光染色验证测序结果并分析髓核细胞表型变化。结果转录组测序结果证明:DPSCs上清处理后,炎症相关基因如IL6、CCL7、IL1RL1、TNFAIP6等明显下调,髓核细胞功能相关基因如PIK3R1、ITGA10、IGFBP2和LEP等明显上调;GO分析提示,炎性因子分泌及结合过程减弱,细胞外基质分泌增强;Pathway富集分析提示,上调基因主要富集到与细胞外基质分泌相关的信号通路（如弹性纤维和胶原蛋白产生相关信号通路）,下调基因主要富集与炎症相关的信号通路（如Jak-STAT信号通路、TNF信号通路和NF-κB信号通路等）。Western blotting结果证实:DPSCs上清处理后,髓核细胞IL-6分泌减少,Col II分泌增加,细胞凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3表达降低;NF-κB及STAT3信号通路活化降低,Akt信号通路活化增加。免疫荧光染色证明:DPSCs培养上清处理后,髓核细胞F-actin组成的丝状骨架结构相对完整,降解较少,细胞凋亡水平降低,功能保持完好。结论DPSCs上清处理抑制髓核细胞炎症相关信号通路活化,减少炎性因子释放,保护髓核细胞存活及功能。第三部分:目的评估HGF修饰的DPSCs（DPSCs-HGF）及对照基因修饰的DPSCs（DPSCs-Null）治疗对小鼠胶原诱导关节炎（CIA）模型临床表现、病理学和影像学的影响。方法使用腺病毒载体在DPSCs中过表达具有免疫调控及免疫耐受重建作用的HGF分子,构建DPSCs-HGF细胞。静脉注射DPSCs-HGF细胞、对照细胞DPSCs-Null细胞或PBS治疗CIA模型。对CIA小鼠临床表现进行评分。使用H&E染色及Kreen评分标准对CIA小鼠关节滑膜炎进行组织病理学评估。使用Micro-CT对关节骨质破坏情况进行影像学评估。结果临床评分结果证明:DPSCs-Null治疗组小鼠关节肿胀相对较轻,关节表面红疹较少;DPSCs-HGF治疗组早期,小鼠临床评分较低,在治疗中后期小鼠关节炎评分迅猛升高。组织病理学结果证实:DPSCs-Null治疗组能够有效降低滑膜炎的严重程度;DPSCs-HGF治疗组实验终点关节腔内浸润炎症细胞增多,关节滑膜衬里层增厚,滑膜局部细胞密度增加。Micro-CT结果证明:DPSCs-Null及DPSCs-HGF治疗后,骨质破坏均有所缓解,二者无统计学差异。结论DPSCs-Null治疗能够减轻CIA小鼠临床表现,改善关节滑膜炎;DPSCs-HGF治疗早期对CIA小鼠临床症状有益,后期发生病情反弹,总体并无较好收益。第四部分:目的明确DPSCs-HGF治疗CIA小鼠关节炎后期发生病情反弹的机制。方法使用流式细胞术分析治疗后不同时间点CIA小鼠外周血免疫细胞亚型。使用多因子检测技术分析治疗后不同时间点CIA小鼠外周血炎症因子表达水平变化。使用免疫组织化学染色分析治疗后CIA小鼠关节局部IL-6分子表达。分离患者原代滑膜细胞后,使用HGF和/或抑制剂进行处理。通过细胞克隆形成实验、Western blotting及细胞周期染色实验分析髓核细胞增殖活性、凋亡情况、细胞周期等生物学特性变化。结果CIA小鼠外周血及关节免疫分析结果证明:DPSCs-HGF治疗后,小鼠外周血Treg细胞比例较早出现升高,但维持时间较短;且外周血Th1/Th2细胞比例升高;血清及关节局部IL-6分子在治疗后期迅猛增加;DPSCs-Null治疗后,小鼠Treg细胞比例升高现象出现相对晚,但升高幅度大,维持时间长;外周血Th1/Th2细胞比例较低;血清及关节IL-6保持较低水平。滑膜细胞离体实验证明:HGF分子以时间和剂量依赖性的方式促进滑膜细胞IL-6的分泌;DPSCs-HGF培养上清或外源补充HGF分子通过活化c-Met受体及下游Akt信号通路,诱导Survivin分子表达,增强滑膜细胞克隆形成能力和凋亡抵抗能力;使用抑制剂抑制c-Met、Akt分子活化或减少Survivin分子表达后,滑膜细胞出现G2/M期阻滞,CDK1及Cyclin B1分子表达降低,HGF引起的滑膜细胞克隆形成能力提高和凋亡抵抗能力增强被有效抑制。结论DPSCs-HGF治疗CIA模型,在疾病早期诱导Treg细胞上调,减少IL-6细胞因子分泌,控制关节炎临床表现;在疾病中后期,HGF分子通过激活c-Met受体,活化下游Akt信号通路,诱导Survivin蛋白表达,促进滑膜增殖及凋亡抵抗,加速关节炎的恶化。基于上述内容,本研究系统阐明:（1）DPSCs通过抑制髓核细胞炎症相关信号通路活化,减少炎性因子释放,保护髓核细胞存活及功能以及促进椎间盘结构恢复,发挥治疗IVDD的潜在作用。（2）DPSCs通过增加免疫抑制性Treg细胞,降低炎性Th1细胞比例及IL-6分泌水平以及控制滑膜炎症,发挥治疗RA的潜在作用。（3）HGF在治疗早期通过抑制免疫系统,发挥控制关节炎的作用;在治疗中后期,HGF通过激活滑膜细胞c-Met受体,活化下游Akt信号通路,促进滑膜细胞增殖及凋亡抵抗,发挥促进关节炎进展的作用。
石磊[3]（2020）在《基于基因编辑构建表达β2m-HLA-G融合蛋白的低免疫原性人胚胎干细胞》文中研究说明人多能干细胞（human pluripotent stem cells,hPSCs）具有在体外维持环境下自我更新及在特定分化条件下分化为三胚层细胞谱系的能力。因此,hPSCs可以作为理想的种子细胞为再生医学提供细胞移植所需的各类功能谱系。然而,hPSCs及其分化产生的功能谱系具有免疫原性,即移植由hPSCs分化获得的细胞/组织会诱发受体患者体内的同种异体免疫排斥反应,造成移植物的死亡。因此,构建低免疫原性hPSCs已经成为推动细胞替代治疗的核心环节。作为哺乳动物中普遍存在的最有效的同种异体免疫抑制案例,绒毛外滋养层细胞与母体子宫蜕膜直接接触,但是母胎屏障的存在有效地保护了作为同种异体抗原的胎儿免受来自母体免疫系统的攻击。母胎屏障的分子机制与人类白细胞抗原（human leukocyteantigen,HLA）直接相关。而绒毛外滋养外胚层细胞具有不表达HLA-A,-B,低表达HLA-C,高表达HLA-G蛋白质的特点。已有研究证明,该蛋白质分子能够抑制NK细胞、T细胞、DC细胞等多种免疫细胞的激活与杀伤作用。为了构建HLAⅠ表达缺失的hPSCs,我们设计了 B2M基因敲除的编辑方案。B2M是HLAⅠ型分子细胞膜定位的关键分子,敲除B2M的hPSCs的细胞膜表面将不表达任何HLAⅠ型分子。我们首先构建了一个高效、可精确控制且无需供体质粒的双gRNAs基因敲除系统,即通过将一对gRNAs与CRISPR/Cas9共同导入hPSCs,人为造成基因组相邻两个位点产生DSB,这两个DSB的平末端通过无缝连接后,可以产生一个提前终止密码子,从而阻止了非内源性蛋白质的翻译。利用这套双gRNAs敲除系统,我们成功的在人类多能干细胞中敲除了包括SMAD3和β-Catenin在内的十几个基因。另外,针对多个基因的敲除结果显示双gRNAs敲除系统可以同步对多个基因进行高效敲除。对于敲除非编码RNA,我们通过引入双gRNAs切除整段转录MIR1193的DNA序列实现了对该miRNA的敲除以及特异性切除MALAT1启动子核心区域的方案实现了对该lncRNA的敲除。我们设计的双gRNA敲除策略高效,适合敲除编码与非编码基因,可以实现多基因同步敲除,并且敲除后的基因产物可以进行精确预测。基于这一原理,我们成功的使用双gRNA基因敲除系统构建了内源性B2M基因敲除的低免疫原性hPSCs。为了构建细胞膜表面经典型HLAⅠ分子缺失,但是表达非经典型HLA-G的hPSCs,我们通过同源重组方案在人类胚胎干细胞内源性B2M基因的终止密码子位置插入了一段编码连接肽（G4S）4与HLA-G1的DNA序列,并在此细胞系的基础上,利用慢病毒载体,将一段编码B2M-（G4S）3-HLA-G5融合蛋白质的DNA序列引入该细胞系。我们的研究结果证明,B2M敲除hPSCs的细胞膜表面缺失β2m以及HLAⅠ分子。而过表达HLA-G的细胞系则成功表达β2m-HLA-G1与β2m-HLA-G5,其中流式细胞分析检测证明β2m-HLA-G1可以到达细胞膜表面且该融合蛋白的表达受内源性B2M基因启动子的调控,可以响应IFN-y的刺激。Western blot分析证明β2m-HLA-G5可以被分泌到细胞外培养环境中。同时,由于游离内源性β2m蛋白质的缺失,经典型HLAI蛋白质复合物无法完成组装,导致基因修饰后的人类胚胎干细胞系细胞膜表面缺失HLA-A、-B、-C蛋白质。体外与体内的同种异体免疫学实验证明上述表达HLA-G细胞系相较于野生型人类胚胎干细胞具有明显的低免疫原性。相比于B2M基因缺失的细胞系而言,表达HLA-G的细胞系能够更加有效的抑制NK细胞的激活。另外,β2m-HLA-G5分泌蛋白可以显着抑制野生型人类胚胎干细胞对NK细胞的激活,并且可以有效调控免疫细胞分泌的炎症因子。综上所述,我们成功构建了双gRNAs基因编辑系统,实现了在人类多能干细胞中高效,可预测的基因敲除。同时,我们成功实现了在人类多能干细胞中表达膜定位与分泌型的HLA-G蛋白,并且同时阻断了经典型HLAI分子在细胞膜表面的分布。该细胞系可以有效抑制T细胞、NK细胞诱导的免疫排斥,同时可以调节移植物周围的免疫环境,从而为广泛适用型细胞移植物提供了重要的细胞来源。
丁禹[4]（2020）在《《糖尿病和部分自身免疫性疾病的免疫治疗》（节选）英汉翻译实践报告》文中指出随着中国经济快速发展,居民生活水平大幅度提高,中国糖尿病患病率急剧上升,因此对1型糖尿病等自身免疫性疾病应引起重视。欧美国家在1型糖尿病的研究水平上超于我国,可以为我国开展相关研究提供借鉴和启发。本次翻译实践项目选择医学文本《糖尿病和部分自身免疫性疾病的免疫治疗》（Immunotherapy of Diabetes and Selected Autoimmune Diseases）为翻译材料,编者为乔治·艾森巴斯（George S.Eisenbarth）,其研究主要涉及1型糖尿病。本书主要以1型糖尿病以及部分自身免疫性疾病的发病机制和免疫治疗进行相关研究。译者选取了书中“1型糖尿病的免疫发病机制”和“寻求更多选择性疗法来阻断自身免疫”这两章的汉译作为分析案例,具体分析卡特福德转换理论是如何指导此医学文本的翻译。本报告由六个章节组成,包括翻译项目简介、原文本分析、翻译过程、译后质量评估、案例分析和翻译实践总结。第五章的案例分析是本报告的核心部分。在卡特福德转换理论的指导下,根据英语和汉语在语法、词汇和表达方式等方面的差异,本报告结合文本中的真实译例,分析了卡特福德转换理论在医学文本翻译过程中的具体应用。层次转换主要聚焦在时态表达和语义复数表达上,通过将英语语法转换为汉语词汇得以实现。而范畴转换主要体现在词类转换、单位转换和结构转换上。词类转换主要探讨了通过转换词性使句子更加通顺;单位转换聚焦于将短语（从句）转换成单句使句子逻辑更加清晰;结构转换集中在将被动语态转换成主动语态以及将主语突出结构转换成主题突出结构来符合汉语的表达习惯。译者希望对此医学文本的分析和翻译能为翻译爱好者和医学研究者提供一些帮助和启发。
杨熙之[5]（2020）在《人脐带间充质干细胞对共培养体系中角质形成细胞增殖的影响》文中研究说明研究背景及目的急慢性创面、尤其是严重烧（创）伤后皮肤缺损形成的大面积创面,易导致休克、感染、脏器功能损害等并发症,甚至危及患者生命,如何尽早修复创面一直是烧（创）伤临床救治中最棘手和急迫的问题。利用自体少量皮源快速修复创面是患者抢救成功的关键。组织工程皮肤和细胞治疗学为此带来新的希望,而种子细胞是组织工程皮肤至关重要的组成部分。具有排斥反应的异体和异种细胞移植后只能临时存活,自体和无排斥反应的异体细胞成为理想种子细胞和治疗用细胞的最佳选择。人脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs）取材于脐带华通胶（Wharton’s Jelly,WJ）组织,与骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs）等相比,具有更强自我增殖、多向分化和促进效应细胞增殖等功能,并能在体外维持更长时间;而且来源广泛、非侵入性取材、不受伦理限制、病毒感染概率低;具有免疫调节作用的同时还能避免细胞毒性T细胞和NK细胞的免疫杀伤,在不使用免疫抑制剂的情况下,异体hUC-MSCs移植后几乎不会引起免疫排斥反应;移植后不具有致瘤性。因此,hUC-MSCs正成为充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）的主要来源、作为治疗细胞应用于创面修复和作为种子细胞应用于组织工程皮肤的构建等研究中。但目前技术条件下诱导hUC-MSCs向角质形成细胞（Keratinocytes,KCs）等分化率仍较低,单独应用于创面促进其上皮化时间较长。如将hUC-MSCs与KCs联合应用,则可能在保存hUC-MSCs特性基础上,快速提供创面上皮化所需的KCs。KCs是皮肤屏障表皮主要构成细胞,其数量约占表皮细胞的80%以上,能够连续不断地分化与更新,使新生细胞与脱落的角质层细胞保持平衡,在分化过程中产生角蛋白。有研究证实患者自体KCs悬液可加速烧伤创面和部分慢性创面的愈合;KCs也是组织工程皮肤中不可或缺的种子细胞,异体来源KCs只能暂时存活,目前多主张采用自体KCs。而成人表皮中的KCs已有一定程度的分化,其分裂扩增能力低且寿命短,且常规体外培养条件下生长缓慢、生命周期短、易分化和衰老等不利于其临床应用。而有研究证实hUC-MSCs可抑制KCs凋亡、促进其增殖和迁移等,联合应用可能改善成人原代KCs上述不足。为探讨hUC-MSCs和KCs联合应用是否更优于单独应用作为种子细胞参与组织工程皮肤的构建和作为效应细胞参与促创面愈合的细胞治疗,开展本研究。通过分离培养人hUC-MSCs和人KCs,将两者间接或直接共培养,了解hUC-MSCs对共培养体系中KCs增殖的影响及相关机制,从而为hUC-MSCs与患者自体KCs联合应用作为种子细胞参与构建组织工程皮肤和作为效应细胞参与促创面愈合的细胞治疗提供理论依据。方法1、采用酶消化法从健康足月产新生儿脐带中分离培养hUC-MSCs。显微镜下观察hUC-MSCs形态特点;采用MTT法检测不同代hUC-MSCs增殖能力并绘制生长曲线;流式细胞术鉴定其细胞表面标志物;成软骨实验检测hUC-MSCs的多向分化潜能。2、采用两步消化法,从成人皮肤分离培养原代KCs。显微镜下进行形态学观察;免疫荧光染色检测KCs细胞标志物CK19,β1-整合素表达。3、将P3代hUC-MSCs与P3代KCs按照细胞数比例为1:1、1:2、2:1分组建立直接共培养体系,设立单纯hUC-MSCs和单纯KCs培养组作为对照组。用MTT法检测两种共培养后24h、48h、72h各组细胞OD值,免疫荧光染色检测KCs细胞标志物CK19、β1-整合素表达,ELISA法检测共培养上清液中表皮细胞生长因子（Epidermal growth factor,EGF）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）的含量。4、取P3代hUC-MSCs 1×105个接种在Transwell上室,将P3代KCs 2×105个接种于Transwell下室,建立间接共培养体系;对照组为Transwell下层接种KCs,Transwell上室为培养液。采用MTT法检测细胞共培养后24h、48h、72h各组细胞OD值,ELISA法检测共培养上清液中EGF、VEGF的含量。结果1、采用酶消化法从健康足月产新生儿脐带分离培养的细胞在显微镜下观察呈现长梭形或多角形,细胞整体呈“旋涡状”生长;流式细胞术检测发现分离培养的细胞高表达 CD105（98.3±0.9）%和 CD90（97.1±1.5）%,低表达 CD34（1.1±0.2）%和HLA-DR（0.7±0.5）%;MTT法检测hUC-MSCs增殖并绘制生长曲线发现各代细胞接种后1d内为潜伏期,然后进入对数增殖期,第7d达到峰值;通过成软骨诱导,诱导后21d免疫荧光染色检测到细胞有Ⅱ型胶原的表达。2、采用两步酶消化法从成人皮肤中分离培养的KCs多数呈圆形,形态较规则,细胞培养后6d后开始汇合连接成片,呈铺路石样紧密排列;免疫荧光染色显示培养的细胞CK19、β1-整合素表达为阳性。3、将hUC-MSCs与KCs按不同比例直接共培养,显微镜下观察两种细胞可以共培养增殖。MTT法检测结果显示hUC-MSCs与KCs细胞数比1:2组其OD值最高,且共培养3组OD值均明显高于单纯hUC-MSCs和单纯KCs培养组（P<0.05）;免疫荧光染色显示共培养组细胞数较单纯KCs培养组明显增多;共培养组的CK19、β1-整合素的免疫荧光表达也较KCs单纯培养组增强;共培养3组中培养上清液中EGF、VEGF含量均显着高于单纯hUCMSCs组及单纯KCs组（P<0.05）,其中,以细胞数比1:2组培养上清液中EGF、VEGF的含量最高。4、MTT法检测结果显示hUC-MSCs与KCs间接共培养组于共培养后24h、48h、72h时OD值均高于单纯KCs培养组,间接共培养后72h共培养组OD值与单纯KCs培养组有明显差异（P<0.05）;ELISA检测结果显示hUC-MSCs与KCs间接共培养组培养上清液中的EGF、VEGF含量明显高于单纯KCs培养组（P<0.05）结论1、本研究在体外成功分离培养出hUC-MSC和人KCs,并予鉴定,为hUC-MSCs与人KCs研究应用提供技术支持。2、hUC-MSCs能促进hUC-MSCs与KCs直接或间接共培养体系中KCs细胞增殖。提示hUC-MSCs和KCs可联合应用作为种子细胞参与组织工程皮肤的构建和促进创面愈合的细胞治疗。3、hUC-MSCs促进直接或间接共培养体系中KCs细胞增殖,可能与其分泌EGF、VEGF等旁分泌功能有关。
方迎[6]（2020）在《B细胞向浆细胞分化发育的分子机制研究》文中指出背景:B淋巴细胞异常活化、增殖和浆细胞（PC）异常增多在系统性红斑狼疮等自身免疫疾病中起到非常关键的作用,深入探究浆细胞的异常增多的机制对于自身免疫疾病的诊治有着重要意义。为了探究浆细胞异常增多机制中的分子机制,我们使用LPS诱导的浆母细胞作为正常的浆母细胞,使用增殖性高的（瘤性）浆母细胞样SP 2/0细胞作为异常增殖的浆母细胞,通过RNA测序,我们筛选出了在增殖性高的SP 2/0细胞中低表达的Loc108168067,Gm40600和Itch三个基因。Loc108168067和Gm40600是两个功能未知的新基因,Itch是近期发现的一种E3泛素连接酶,研究显示其可能在浆细胞产生中具有重要功能。我们应用体外细胞过表达,小鼠体内过表达,小鼠体内敲除等方法对这三个分子进行研究,探索这三个基因是否涉及在B细胞向浆细胞的异常分化中发挥生物学功能,为自身免疫疾病的诊断及治疗提供更多可能思路。目的:对于基因测序筛选出的与浆细胞产生相关的基因Loc108168067,Gm40600,Itch,探究三个分子的生物学功能,深入了解B细胞向浆细胞分化发育的机制。方法:1、使用RNA测序确定LPS诱导的浆细胞和SP 2/0细胞之间的基因表达谱,明确了Loc108168067,Gm40600是差异表达基因,但目前功能尚未明确。通过CCK-8检测法和FACS测定新基因对SP 2/0细胞增殖,细胞周期和细胞凋亡的影响。应用SP 2/0异种移植瘤小鼠模型评估新基因对肿瘤进展的影响。Western印迹和RNA测序分析用于评估Gm40600对mRNA和蛋白质表达的影响。2、选择Itch B细胞特异性基因敲除小鼠和Itch全细胞基因敲除小鼠共同研究Itch敲除在抗原驱动的B细胞反应中的作用,通过向体内注射绵羊红细胞和在体外给予LPS刺激脾脏B细胞,分析胸腺依赖抗原（TD）和非胸腺依赖抗原（TI）这两种不同抗原亚组对B细胞活化和抗体产生的影响。结果:1、我们发现LPS诱导的浆细胞表达较高水平的Loc108168067,而浆细胞样SP 2/0细胞表达较低水平的Loc108168067。Loc108168067过表达不影响SP 2/0细胞增殖,但通过G1/S阻断诱导细胞凋亡。在机理上,我们发现Loc108168067通过促进Trim21启动子激活诱导Trim21-CDKN1c表达以阻断G1/S周期。另一方面,我们还发现Loc108168067通过促进Myc启动子激活诱导Myc-IRF4-Blimp1表达上调细胞增殖/存活。因此,两个方面的综合效果导致Loc108168067对SP 2/0细胞增殖和异种移植瘤进展没有影响。这些结果表明Loc108168067具有许多不同的生物学功能。2、与LPS诱导的PC相比,SP 2/0细胞表达的Gm40600 mRNA水平非常低。Gm40600过表达通过诱导细胞凋亡,抑制SP 2/0细胞的增殖,进一步体内验证发现Gm40600过表达抑制SP 2/0异种移植小鼠模型中的肿瘤进展。Gm40600过表达降低了PC相关转录因子Blimp1和Xbp1的表达,从而抑制了Bcl2基因的转录,介导细胞凋亡。3、与野生对照组小鼠相比全细胞敲除Itch小鼠表现出全身多处皮肤损伤,淋巴结及脾脏肿大,抗体相关基因水平升高。而B细胞特异性敲除小鼠的淋巴结和脾脏只是比野生对照小鼠略大,B细胞活化和抗体产生情况无明显变化。敲除Itch可以促进包括LPS和绵羊红细胞（SRBC）诱导的B细胞活化和抗体产生,并且发现敲除Itch可以上调具有翻译起始因子活性的蛋白来促进抗原诱导的细胞因子产生。结论:1、Loc108168067分别通过促进Myc启动子和Trim21启动子激活诱导Myc-IRF4-Blimp1表达和Trim21-CDKN1c表达,彼此相互抵消,使得Loc108168067对SP 2/0细胞体外增殖和体内异种移植肿瘤进展没有影响。2、Gm40600通过减少Blimp1和Xbp1下调Bcl2转录,来诱导细胞凋亡,从而抑制SP 2/0的增殖和同种异体移植肿瘤的生长和进展。3、敲除Itch可以上调具有翻译起始因子活性的蛋白,来促进抗原驱动的B细胞应答,提示Itch可以成为自身免疫疾病患者新的治疗靶点。
文艺[7]（2019）在《组织特异性细胞外基质中COL4A2对牙周膜干细胞成骨分化的影响》文中研究指明研究背景:牙周炎（periodontitis,PD）是一种以牙周组织不可逆和进行性降解为特征的慢性疾病,主要引起牙齿缺失和牙槽骨缺损。牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）作为牙周修复治疗的种子细胞,在牙周炎不同微环境中修复牙周组织缺损的能力不同。但是,现有的临床治疗,如牙周皮瓣手术,引导组织再生,并加入生长因子,只能清除坏死组织和控制炎症,对牙周组织的修复作用是有限的。幸运的是,近年来,随着组织工程在受损组织再生修复中的广泛应用和研究,干细胞和生物材料在牙周复合组织的生物和功能再生中的研究越来越受到重视。同时,细胞外基质（extracellular matrix,ECM）中存在多种胶原结构,它们可以调节细胞的生理活动,从而影响组织的修复能力。研究目的:本研究旨在探讨特异性ECM中COL4A2对PDLSCs成骨分化以及牙槽骨缺损修复过程影响的机制研究。研究内容:1.经贴壁法获得牙周膜细胞（PDLCs）与骨髓细胞（BMCs）,制备牙周膜来源ECM（P-ECM）和颌骨骨髓来源ECM（B-ECM）以及相应的脱细胞ECM（decellularized ECM,dECM）。2.对于牙周膜来源脱细胞ECM（P-dECM）以及颌骨骨髓来源脱细胞ECM（B-dECM）进行电镜和蛋白质质谱（mass spectrometry,MS）分析检测,观察两者差异。3.对特异性ECM进行COL4A2的调控,并研究特异性ECM对于PDLSCs增殖分化的影响。4.Wnt/β-catenin经典通路在特异性ECM对PDLSCs成骨分化作用的机制研究。5.特异性ECM结合PDLSCs和Bio-Oss骨粉分别植入免疫缺陷小鼠皮下以及SD大鼠上颌牙槽骨缺损处,8周后对标本进行Micro-CT扫描以及化学染色,观察移植物的生长情况。研究方法:检测分离的PDLSCs表面标志物及其多向分化能力。本实验制备了牙周膜细胞来源的P-ECM和骨髓细胞来源的B-ECM以及相应的脱细胞ECM。采用透射电子显微镜（transmission electron microscopy,TEM）、扫描电镜（scanning electron microscopy,SEM）、原子力显微镜（atomic force electron microscopy,AFM）和MS等方法对细胞外基质进行鉴别。通过siRNA转染骨髓细胞,慢病毒转染牙周膜细胞,实现COL4A2在ECM中的调控。在COL4A2调控下,PDLSCs和不同的dECM及Bio-Oss骨粉混合,植入免疫缺陷小鼠皮下或SD大鼠牙槽骨缺损处,并通过组织学或免疫组织化学染色和Micro-CT对修复效果进行检测。研究结果:利用TEM、SEM、AFM等方法,观察P-dECM比B-dECM所含纤维更纤细。蛋白质谱法观察到在B-dECM中,COL4A2含量显着高于P-dECM。同时,PDLSCs在B-dECM中培养时比P-dECM有更强的增殖、维持干性和成骨分化能力。对ECM中的COL4A2进行调控,结果发现上调COL4A2后,P-dECM内生长的PDLSCs增殖能力以及成骨分化能力增强;相反,下调COL4A2后,B-dECM内生长的PDLSCs增殖能力以及成骨分化能力减弱。同时,将特异性ECM结合骨粉以及PDLSCs植入免疫缺陷小鼠以及SD大鼠牙槽骨缺损处,上调COL4A2后,PDLSCs的成骨分化能力增强,修复骨缺损效果提高,而下调COL4A2后,结果则相反。上调COL4A2后,Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达降低,通路被抑制,而成骨相关蛋白表达升高;下调COL4A2后,Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达升高,通路被激活,而成骨相关蛋白表达降低,证实Wnt/β-catenin经典通路在PDLSCs的成骨过程中起着负性调节作用。结论:骨髓来源脱细胞ECM与牙周膜来源脱细胞ECM中差异蛋白COL4A2影响PDLSCs的成骨分化水平。同时,COL4A2通过Wnt/β-catenin经典通路的负性调节作用促进PDLSCs的成骨分化,是一种有前景的修复骨缺损的治疗方法。
李增耀[8]（2017）在《供鼠脾脏细胞CHI3L1缺失加重急性移植物抗宿主病的机制研究》文中提出目的 利用全身辐照法构建稳定的小鼠异基因造血细胞移植（allo-HSCT）急性移植物抗宿主病（aGVHD）模型,研究CHI3L1在小鼠aGVHD中的作用机制,探讨CHI3L1对Treg细胞分化及功能的影响。方法（1）C57BL/6（H-2b,♂）小鼠为供鼠,BALB/C（H-2d,早）小鼠为受鼠。30 只 SPF 级 BALB/C 小鼠分为 6 组,分别接受 6.5Gy、7.0Gy、7.5Gy、8.0Gy、8.5Gy及9.0Gy的X射线全身照射。20只BALB/C小鼠经过全身照射预处理后随机分为4组,分别尾静脉注射1 X106,3 ×106,5X 106,,10×106个骨髓细胞重建造血。在重建造血的基础上建立小鼠aGVHD模型,输入10×106个骨髓细胞的基础上再尾静脉输入1X106,3×106,5X106,10X106个脾脏细胞。观察小鼠的生存状态及生存率。HE染色观察靶器官组织病理切片,流式细胞仪检测小鼠嵌合率。（2）建立C57BL/6→BALB/C小鼠清髓性异基因骨髓移植aGVHD模型。30只BALB/C小鼠经过预处理后随机分为三组:单纯骨髓移植组（BM组）为单纯尾静脉注射5X 106个骨髓细胞;野生型aGVHD组（WT组）为尾静脉注射5× 106个骨髓细胞+3×106个WT脾脏细胞;CHI3L1基因敲除aGVHD组（CHI3L1-KO组）为尾静脉注射5×106个骨髓细胞+3×106个CHI3L1-KO脾脏细胞。移植后观察各组临床表现;Log-rank检验各组生存率;移植后20d天各组体重变化;移植后20d天检验各组嵌合率;移植后20天应用组织病理学技术检测各组靶器官肺脏、肝脏、小肠及皮肤的损伤程度。（3）应用流式微珠阵列（CBA）法于移植后20d对各组受鼠血清中多种细胞因子水平进行检测;应用ELISA法对各组受鼠血清中IL-21水平进行检测,应用趋化因子芯片对各组受鼠血清中趋化因子进行检测;应用流式细胞仪于移植后20d对各组脾脏细胞绝对数进行计数;应用流式细胞仪于移植后20d对各组脾脏细胞中CD3、CD4、CD8阳性细胞比例进行检测;应用流式细胞仪于移植后20d对各组脾脏细胞进行胞内染色;检测分泌IFN-γ、TNF-α、IL-6及IL-10的T细胞比例;应用流式细胞仪于移植后20d对各组脾脏细胞中Tfh细胞比例进行检测。（4）建立同种异基因混合淋巴细胞培养（MLR）体系,以BALB/C小鼠来源的非CD3+T细胞作为刺激细胞,以WT供鼠和CHI3L1-KO供鼠CD3+T细胞作为反应细胞并进行羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记,共同培养5d,检测WT供鼠和CHI3L1-KO供鼠CD3+T细胞的增殖能力。（5）应用Real-time PCR技术对各组肺脏、肝脏、小肠及皮肤中IFN-y、TNF-α、IL-6、IL-10、IL-21、CXCL9、CXCL11 及 CXCL13 mRNA 表达水平进行检测。（6）应用 Western blot技术对各组靶器官如肺脏、肝脏、小肠及皮肤ICOS、AKT/P-AKT、ERK/P-ERK蛋白表达水平进行检测。（7）从WT和CHI3L1-KO C57BL/6小鼠脾脏中分别分离CD4+T细胞,2ug/ml抗CD3单克隆抗体包被,在含有1ug/ml抗CD28单克隆抗体和IL-2 100U/ml的RPMI-1640完全培养基中培养3周,流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+T 淋巴细胞的比例。（8）从 WT 和 CHI3L1-KO C57BL/6 小鼠脾脏中分别分离CD3+CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞,随后从WT组分离出CD4+CD25-T细胞并应用CFSE标记,共培养三天后应用流式细胞仪检测CD4+CD25-T细胞增殖情况。（9）再次建立C57BL/6→BALB/C小鼠清髓性异基因骨髓移植aGVHD模型。30只BALB/C小鼠经过预处理后随机分为三组:单纯骨髓移植组（BM组）为单纯尾静脉注射5 ×1 06个骨髓细胞;野生型aGVHD组（WT组）为尾静脉注射5×106个骨髓细胞+3×106个WT脾脏细胞;CHI3L1基因敲除aGVHD组（CHI3L1-KO组）为尾静脉注射5×106个骨髓细胞+3×106个CHI3L1-KO脾脏细胞。模型建造成功20d后对各组受鼠脾脏细胞中CD3+CD4+CD25+Foxp3+ Treg 比例进行检测。（10）应用 Real-time PCR 技术对各组受鼠脾脏、肺脏、肝脏、小肠及皮肤中Sirt-1 mRNA表达水平进行检测。结果（1）接受X射线全身照射的小鼠中,照射剂量6.5Gy的小鼠全部存活,照射剂量7.0Gy的小鼠中位生存期为32天,40天65%死亡。照射剂量7.5Gy的小鼠中位生存期为25天,40天85%死亡。照射剂量为8.0Gy的小鼠中位生存期为18天,40天100%死亡。照射剂量为8.5Gy的小鼠中位生存期为10天,40天100%死亡。照射剂量为9.0Gy的小鼠中位生存期为5天,40天100%死亡。采用Log-rank检验分析生存时间,χ 2=67.4,P<0.0001。尾静脉输入5× 106个骨髓细胞可成功重建造血,100天的生存率达到100%。并且,单纯输入骨髓细胞不会诱导小鼠aGVHD的发生。1× 106个脾脏细胞输入尾静脉诱导的小鼠aGVHD程度较轻,30%出现aGVHD相关性死亡。3×106个脾脏细胞输入尾静脉诱导的小鼠aGVHD程度中等,中位生存期为38.5天,100%出现aGVHD相关性死亡。5×106个脾脏细胞输入尾静脉诱导的小鼠aGVHD程度属于重度,100%出现aGVHD相关性死亡。10 × 106个脾脏细胞输入尾静脉诱导的小鼠aGVHD程度属于极重度,100%出现aGVHD相关性死亡。其中,3×106个脾脏细胞输入尾静脉诱导的小鼠靶器官（肺、肝、小肠、皮肤）出现典型的aGVHD病理表现,14天后为完全供体嵌合状态。（2）于WT组相比,CHI3L1-KO组诱导出的aGVHD临床表现更加严重,CHI3L1-KO组出现更加严重的肺脏、肝脏、小肠及皮肤的病理改变。两实验组受鼠生存率以及体重变化具有明显统计学差异（P<0.0001）。两实验组受鼠嵌合率均达到完全嵌合程度。（3）CHI3L1-KO组小鼠外周血细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-6及IL-21水平升高,外周血IL-10水平降低,与WT组相比差异具有统计学意义（P<0.0001）;、CHI3L1-KO组小鼠外周血趋化因子CXCL9、CXCL10及CXCL13 水平升高,与WT组相比差异具有统计学意义（P<0.0001）;CHI3L1-KO组小鼠脾脏细胞绝对数明显减少,与WT组相比差异具有统计学意义（P<0.0001）;CHI3L1-KO组小鼠脾脏细胞中CD3、CD4及CD8 阳性细胞比例明显增加,与WT组相比差异具有统计学意义（P<0.0001）;CHI3L1-KO组小鼠脾脏细胞胞内染色中CD3+CD4+IFN-γ+ T细胞、CD3+CD4+TNF-α+T细胞、CD3+CD4+IL-6+T细胞、CD3+CD8+IFN-γ+T细胞、CD3+CD8+TNF-α+T细胞及 CD3+CD8+IL-6+T细胞比例明显增加,CD3+CD4+IL10+T细胞和CD3+CD8+IL-10+T细胞比例明显降低,与WT组相比差异具有统计学意义（P<0.0001）;CHI3L1-KO组小鼠脾脏细胞中Tfh细胞比例明显增加,与WT组相比差异具有统计学意义（P<0.0001）。（4）在MLR实验中,与CFSE标记的WT供鼠CD3+T细胞相比,CFSE标记的CHI3L1-KO供鼠CD3+T细胞增殖能力明显增强,差距具有统计学意义（P<0.0001）。（5）与WT组相比,CHI3L1-KO组肺脏、肝脏、小肠及皮肤中 IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-21、CXCL9、CXCL10 及 CXCL13 mRNA表达水平明显增高,而肺脏、肝脏、小肠及皮肤中IL-10水平明显降低,差距具有统计学意义。（6）与WT组相比,CHI3L1-KO组肺脏、肝脏、小肠及皮肤中ICOS、P-AKT、P-ERK蛋白表达水平明显增强。（7）与WT型小鼠CD4+T细胞相比,CH13L1-KO小鼠CD4+T细胞分化为CD3+CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的能力明显减弱,差距具有统计学意义（P<0.0001）。（8）、与WT型小鼠CD3+CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞相比,CHI3L1-KO 小鼠 CD3+CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞抑制CD4+CD25-T细胞增殖能力减弱,但差距无统计学意义。（9）、与WT组相比,CHI3L1-KO组受鼠脾脏细胞中CD3+CD4+CD25+Foxp3+Treg比例明显减少,差距具有统计学意义（P<0.0001）。（10）、与WT组相比,CHI3L1-KO组受鼠脾脏、肺脏、肝脏、小肠及皮肤中Sirt-1mRNA表达水平明显增高,差距具有统计学意义（P<0.0001）。结论 8.0GyX射线全身照射剂量对于BALB/C小鼠为清髓照射剂量,预处理后尾静脉输入5× 106个骨髓细胞可成功重建造血。尾静脉输入3×106个脾脏细胞即可诱导典型的小鼠aGVHD。供鼠脾脏细胞CHI3L1缺失可明显加重aGVHD,并对脾脏中Treg细胞的分化产生抑制作用。
陈海德[9]（2017）在《GGTA1敲除猪以及低免疫原性人多能干细胞的研究》文中研究说明(1)GGTA1敲除猪的研究面临器官移植供体短缺的现状,异种移植是一种可行的替代方案。大量研究证明猪是合适的异种移植供体。使用猪进行异种移植仍然需要克服许多免疫排斥障碍,包括超急性免疫排斥反应（HAR）,急性体液异种排斥反应（AHXR）,急性细胞排斥反应（ACR）,凝血功能异常,慢性排斥反应（CR）和炎症反应等。基于相关致病机理的研究,研究人员认为制备基因修饰猪是克服异种移植免疫排斥障碍的有效措施。目前功能正常的猪多能干细胞系仍然没有建立,而基于同源重组进行的基因修饰在猪体细胞中效率较低,严重制约了相关研究的进展。最近几年出现了多种高效的基因定点修饰工具,包括锌指核酶（ZFN）,转录激活因子样效应物核酸酶（TALEN）以及CRISPR/Cas9。这些技术被成功地应用于各种模式生物中,我们也建立了基于ZFN和TALEN的猪基因修饰系统。我们首先使用ZFN制备GGTA1KO（GTKO）猪,然后在GTKO猪细胞中使用TALEN对猪白细胞抗原（SLAs）相关基因进行修饰。GGTA1参与形成的Ga1是引起HAR的主要异种抗原。在进化过程中,GGTA1在人类和旧世界猴中失去功能,导致他们的细胞表面没有Ga1抗原,所以他们血液中存在大量靶向Ga1抗原的天然抗体。为了克服HAR障碍,研究人员在猪体细胞上通过同源重组修饰GGTA1并结合体细胞核移植技术制备GTKO猪,通过异种移植实验表明GTKO猪可以显着抑制HAR的发生。但是这种技术不仅效率很低,而且会引入外源的抗药基因,无法满足后续大量基因修饰的需求。我们将靶向GGTA1编码区序列的ZFN质粒和抗药质粒通过瞬转手段导入胎猪成纤维细胞中,经过药物筛选获得了18个单拷贝敲除和4个双拷贝敲除的细胞克隆,效率分别为23.4%和5.2%。随后我们将获得的双拷贝敲除的细胞作为核供体进行体细胞核移植,产生克隆猪。经鉴定,一共获得3头GTKO猪。同时我们利用克隆胎儿建立了一个GTKO胎猪成纤维细胞系。通过细胞表面标记鉴定证明GTKO猪的细胞膜上Ga1抗原被完全清除。通过杀伤实验证明GTKO猪的细胞可以在与人血清共培养时不受抗体补体介导的免疫攻击。在GTKO猪的基础上,我们通过TALEN技术修饰猪的SLAs,将其中的部分基因替换为人类白细胞抗原（HLAs）中的部分基因。我们设计并验证了靶向SLA-1和-2的TALEN。同时我们设计并构建了相关的KI载体进行基因替换实验。通过PCR验证HLA-A基因成功替代SLA-1,并能在猪细胞中表达。这一策略在异种移植中的效果仍需要使用实验猪进行进一步的异种移植验证。（2）低免疫原性人多能干细胞的研究人多能干细胞（hPSCs）具有自我更新能力,并可以在一定条件下分化为机体内所有的细胞类型。所以研究人员尝试将hPSCs分化为各种组织细胞,用于移植替换病人身上受损的组织细胞。在人类同种异体组织器官移植的过程中,供受体细胞表面的HLAs不兼容会导致免疫排斥反应。HLAs分为HLA Ⅰ和HLA Ⅱ:CD8+T细胞识别HLA Ⅰ,参与直接靶细胞杀伤作用;CD4+T细胞识别HLA Ⅱ,分泌大量细胞因子参与调控免疫反应。我们实验室的工作重点在于使用定点基因修饰的方法降低hPSCs的免疫原性,以满足其临床使用的要求。我们实验室之前通过对B2M的KO已经建立了 HLA Ⅰ缺陷的hPSCs,证明了其免疫原性的降低,同时hPSCs的多能性和自我更新能力都没有显着的变化。在本研究中我们使用TALEN对HLA Ⅱ的关键调控基因CIITA进行KO,从而降低hPSCs及其分化获得的细胞中的HLA Ⅱ相关基因的表达。CIITA-/-hPSCs在自我更新和分化能力方面与WT hPSCs无明显差异。将CIITA-/-hPSCs分化为树突状细胞（DCs）后,CD83和CD86等表面蛋白标记物正常表达,但其结构型HLA Ⅱ表达显着下降。将CIITA-/-hPSCs分化为成纤维细胞后,在IFN-γ的刺激下诱导型HLA Ⅱ表达显着下降。将分化获得的CIITA--成纤维细胞与CD4+T细胞共培养,CD4+T的活化减弱。这些结果说明CIITA-/-hPSCs分化获得的组织细胞可能降低CD4+T细胞介导的免疫排斥反应。我们的研究将有利于推动hPSCs的临床应用,尤其是将hPSCs分化为结构型高表达HLAII的组织细胞进行移植替换,比如DCs和T细胞等。
李成林[10]（2015）在《人诱导多能干细胞来源的间充质干细胞调控小鼠免疫反应的机制研究》文中提出背景:间充质干细胞是具有自我更新能力和分化能力的组织细胞前体细胞,能够分化为一系列的间质细胞,包括成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞和内皮细胞等。细胞治疗是再生医学发展的一个重要分支。越来越多的研究发现,间充质干细胞能够修复组织损伤,达到一定治疗效果。因此,间充质干细胞被视为天然组织工程材料的重要种子细胞,具有广阔的应用前景。此外,间充质干细胞具有负性免疫调节能力。在体外共培养条件下,间充质干细胞能够抑制免疫细胞功能,包括抑制T细胞反应,抑制树突状细胞的成熟和抗原提成,抑制B细胞激活和增殖,降低自然杀伤（natural killer,NK）细胞的增殖和毒性,促进调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）生成等。但是由于间充质干细胞在体内比例很小,获取难度较大,体内间充质干细胞的数量不能满足临床治疗的需求。多能诱导干细胞是体细胞经过重编程技术得来的细胞,在功能上类似于胚胎干细胞。多能诱导干细胞分化成的间充质干细胞可能弥补间充质干细胞供应不足这一缺陷。研究报道,诱导多能干细胞分化成的间充质干细胞（induced pluripotent stem cell derived mesenchymal stem cell,iPS-MSC）在体外也能够抑制 NK 细胞的毒性,并且iPS-MSC和胚胎干细胞来源的间充质干细胞（enbryonic stem cell derived mesenchymal stem cell,ES-MSC）比骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs）在拮抗NK细胞的激活上具有更好的效果。CD4+T细胞能够分化为一系列的细胞亚群保护机体免受病原体伤害,包括辅助性T细胞1（T helper1）和辅助性T细胞2（T helper 2）。研究发现,在体外共培养体系中,间充质干细胞能够抑制Th1细胞的伽马干扰素（IFN-γ）分泌,促进Th2细胞的白细胞介素4（interleokin4,IL-4）释放。但是,由于缺乏一个有效的实验动物模型,目前对间充质干细胞在体内的免疫调节能力和机制还知之甚少。capspase在T细胞内稳态和T细胞介导的免疫反应方面发挥了关键的作用。抑制caspase8的活性伴随着T细胞存活的减少。因此caspase可能在间充质干细胞抑制T细胞免疫应答这一过程中发挥了一定的作用。研究内容和方法:1)实验动物模型构建。本课题借鉴了胰岛移植模型,构建了小鼠肾被膜下细胞移植模型,共分四组:a)空白对照组,移植等体积的PBS,对小鼠造成相同的手术创伤;b)内皮细胞（HUVEC）移植组,内皮细胞是细胞免疫排斥的首要靶点,在本课题中作为阳性对照;c)iPS-MSC移植组,处理方法与b组一致;d)内皮细胞和间充质干细胞联合移植组（Co-grafts）（HUVEC:iPS-MSC=1:1）,移植的总细胞数和b、c组一致,但是内皮细胞和间充质干细胞各自减半后混合。2)组织病理检测。移植一周后利用HE染色技术和激光共聚焦技术分别检测受体移植部位免疫细胞浸润情况和移植细胞的存活情况。3)T细胞亚群检测。通过流式细胞术检测受体小鼠脾脏内T细胞整体比例变化,以及Th1、Th2和Treg细胞整体比例变化;将T细胞分离纯化与体外内皮细胞和间充质干细胞共培养,检测T细胞群体比例改变。4)PCR技术和ELISA技术检测脾脏组织炎性因子改变。5)淋巴细胞增殖检测。分离受体小鼠脾脏细胞进行体外培养,利用BrdU和MTT技术检测脾细胞的增殖能力;将分离纯化的T细胞在体外与内皮细胞、干细胞共培养,BrdU检测T细胞的增殖能力;将T细胞培养在内皮细胞和间充质干细胞的培养上清中,检测T细胞的增殖能力;6)抗体芯片检测。利用抗体芯片技术检测内皮细胞和间充质干细胞的代谢组学,并进行Go oncology分析。7)受体小鼠脾脏信号通路检测。利用western blot技术检测受体小鼠脾脏组织半胱天冬酶（caspase）信号通路的改变,并利用信号通路抑制剂验·证该信号通路参与免疫应答的可能性。结果:与HUVEC移植组相比较,1)间充质干细胞组移植组显着地抑制了炎症细胞浸润,并且在肾被膜下可以更好地存活;2)间充质干细胞移植减少了脾脏内T细胞亚群比例,减少了 Th1、Th2细胞亚群比例,增加调节性T细胞的数量;3)体外共培养结果显示,间充质干细胞抑制T细胞群体内Th1、Th2的比例;4)间充质干细胞抑制了体内脾细胞的增殖;间充质干细胞及其培养上清抑制了体外T细胞的增殖5)间充质干细胞移植降低了脾细胞内和血清中细胞因子IL-2、IL-4的表达,促进抑制性细胞因子IL-10、TGF-β的表达。6)抗体芯片检测显示间充质干细胞高表达和分泌276种可溶性因子,包括IL-10、TGF-β、TSG-6等已报道的免疫调节因子。Go oncology分析显示其中137种富集在免疫系统进程（immune system process）,51种富集在细胞因子产生（cytokineproduction）,参与了淋巴细胞调控。7)信号通路检测显示,间充质干细胞移植减低了脾脏内caspase3,caspase8,PARP的活性。体外抑制caspase3和总的caspase活性能够抑制ConA诱导的T细胞增殖;体外TGF-β刺激抑制ConA诱导的脾细胞和T细胞增殖,抑制Th1和Th2亚群比例,失活caspase 3,激活caspase 8和PARP。结论:1)间充质干细胞移植能够抑制免疫细胞浸润;2)间充质干细胞移植抑制促炎性细胞因子表达和释放,促进抑炎性因子表达和释放;3)间充质干细胞移植能够通过旁分泌形式抑制辅助性T细胞群体比例,负性调控T细胞介导的免疫应答;4)间充质干细胞能够表达和分泌大量的可溶性因子调控免疫应答;5)间充质干细胞移植通过或部分通过失活caspase 3,caspase 8和PARP方式抑制小鼠脾脏免疫应答;6)体外TGF-β刺激能够抑制ConA诱导的脾细胞和T细胞增殖,抑制.Th1和Th2群体比例,失活caspase 3,但激活caspase 8和PARP。由此表明,间充质干细胞移植不完全通过分泌TGF-β调控小鼠脾脏免疫应答。
二、人同种异体抗原诱导的T细胞克隆在体外的建立及鉴定（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人同种异体抗原诱导的T细胞克隆在体外的建立及鉴定（论文提纲范文）
（1）紫草素对T细胞的抑制作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略语表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 器官移植概述 |
| 1.1.1 器官移植发展历程 |
| 1.1.2 器官移植领域的两大问题 |
| 1.2 T细胞与移植免疫排斥反应 |
| 1.2.1 T细胞亚群 |
| 1.2.2 免疫排斥反应类型 |
| 1.3 T细胞介导的免疫排斥反应机制 |
| 1.3.1 T细胞的激活 |
| 1.3.2 T细胞的效应功能 |
| 1.3.3 T细胞建立免疫耐受的机制 |
| 1.4 免疫抑制剂发展与应用 |
| 1.4.1 激素类免疫抑制剂 |
| 1.4.2 钙调神经磷酸酶抑制剂 |
| 1.4.3 嘌呤合成类抑制剂 |
| 1.4.4 mTOR类抑制剂 |
| 1.4.5 中药来源免疫抑制剂 |
| 1.5 本研究目的、内容和意义 |
| (1)研究目的 |
| (2)研究内容 |
| (3)研究意义 |
| 第二章 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要耗材 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 细胞学实验 |
| 2.2.2 统计学分析 |
| 第三章 结果和分析 |
| 3.1 紫草素对淋巴细胞增殖的影响及其细胞水平的机制研究 |
| 3.1.1 紫草素抑制淋巴细胞的增殖 |
| 3.1.2 紫草素抑制淋巴细胞增殖的作用机制 |
| 3.1.3 小结 |
| 3.2 紫草素对小鼠同种异体心脏移植物生存期及小鼠健康状况的影响 |
| 3.2.1 紫草素对小鼠同种异体移植物生存期的影响 |
| 3.2.2 紫草素对小鼠体重及健康状态的影响 |
| 3.2.3 小结 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）牙髓干细胞对椎间盘退变与类风湿关节炎的免疫调控作用及治疗机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献回顾1 干细胞在IVDD中的研究进展 |
| 1 正常椎间盘结构 |
| 2 椎间盘退变发生机制 |
| 3 干细胞原位移植在椎间盘退变中的治疗作用 |
| 4 原位移植的干细胞选择 |
| 文献回顾2 间充质干细胞治疗类风湿关节炎的研究进展 |
| 1 RA发病机制 |
| 2 MSCs对固有免疫细胞的作用 |
| 3 MSCs对适应性免疫细胞的作用 |
| 4 MSCs治疗RA的临床研究 |
| 第一章 DPSCs促进椎间盘退变动物模型局部结构恢复及II型胶原产生 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 健康牙髓组织来源 |
| 1.2 实验动物来源 |
| 1.3 主要器材 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 DPSCs细胞鉴定 |
| 2.2 IVDD大鼠模型构建 |
| 2.3 IVDD大鼠模型细胞治疗 |
| 2.4 IVDD大鼠模型Micro-CT拍摄 |
| 2.5 大鼠椎间盘H&E染色 |
| 2.6 大鼠椎间盘退变组织学分级 |
| 2.7 大鼠椎间盘形态结构参数定量分析 |
| 2.8 大鼠椎间盘Masson染色 |
| 2.9 大鼠椎间盘番红固绿染色 |
| 2.10 大鼠椎间盘IHC染色 |
| 2.11 数据统计 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 DPSCs细胞形态学观察 |
| 3.2 DPSCs细胞表面标志物鉴定 |
| 3.3 DPSCs成骨分化能力检测 |
| 3.4 DPSCs成脂分化能力检测 |
| 3.5 DPSCs治疗后大鼠椎间盘退变影像学改变 |
| 3.6 DPSCs治疗后大鼠椎间盘退变病理学改变 |
| 4 讨论与小结 |
| 4.1 IVDD动物模型的选择 |
| 4.2 DPSCs体内治疗效果评价 |
| 第二章 DPSCs抑制髓核细胞炎症保护其存活及功能 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 健康牙髓组织来源 |
| 1.2 椎间盘突出患者标本来源 |
| 1.3 主要器材 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 原代髓核细胞的分离与培养 |
| 2.2 髓核细胞RNA提取与质量控制 |
| 2.3 文库构建及测序 |
| 2.4 转录组测序数据分析: |
| 2.5 Western Blotting实验 |
| 2.6 细胞骨架染色 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 DPSCs处理前后DEGs分析 |
| 3.2 基于DEGs的 GO分析 |
| 3.3 基于DEGs的信号通路分析 |
| 3.4 信号通路相关分子蛋白表达分析 |
| 3.5 DPSCs上清促进髓核细胞功能恢复 |
| 4 讨论与小结 |
| 4.1 转录组测序揭示髓核细胞改变 |
| 4.2 炎症因子变化影响髓核细胞功能 |
| 4.3 TNF-α对髓核细胞影响 |
| 4.4 IL-1β对髓核细胞影响 |
| 第三章 DPSCs与 DPSCs-HGF治疗类风湿关节炎动物模型的疗效对比 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 健康牙髓组织来源 |
| 1.2 实验动物来源 |
| 1.3 主要器材 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 溶液配制 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 CIA小鼠模型构建及评分 |
| 2.2 CIA小鼠模型细胞治疗 |
| 2.3 小鼠关节H&E染色 |
| 2.4 小鼠关节滑膜炎组织学分级 |
| 2.5 小鼠关节Micro-CT拍摄及分析 |
| 2.6 数据统计 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 DPSCs-Null治疗降低CIA小鼠关节炎临床评分 |
| 3.2 DPSCs-HGF治疗无较好长期收益 |
| 3.3 DPSCs-Null及 DPSCs-HGF对 CIA骨质破坏的治疗作用 |
| 4.讨论与小结 |
| 4.1 DPSCs生物学特性 |
| 4.2 DPSCs多向分化及免疫调节作用 |
| 第四章 HGF基因修饰DPSCs发挥抑制免疫与促滑膜炎的双重作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 健康牙髓组织来源 |
| 1.2 滑膜组织标本来源 |
| 1.3 主要器材 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 原代滑膜细胞的分离与培养 |
| 2.2 Western Blotting实验 |
| 2.3 免疫细胞亚型分析 |
| 2.4 小鼠细胞因子检测 |
| 2.5 培养上清IL-6浓度检测(ELISA法) |
| 2.6 小鼠关节IHC染色 |
| 2.7 H score评分 |
| 2.8 克隆形成实验 |
| 2.9 细胞周期分析 |
| 2.10 数据统计 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 DPSCs-Null与 DPSCs-HGF治疗后免疫细胞亚型变化 |
| 3.2 DPSCs-Null与 DPSCs-HGF治疗后炎症因子变化 |
| 3.3 HGF对滑膜细胞生物学表型及信号通路影响 |
| 3.4 HGF活化c-Met/Akt信号通路促进滑膜细胞增殖及凋亡抵抗 |
| 4 讨论与小结 |
| 4.1 HGF及 c-Met受体结构及生物学功能 |
| 4.2 HGF 及 c-Met 受体免疫调控作用 |
| 4.3 HGF 在自身免疫性疾病中的治疗作用 |
| 4.4 HGF在RA中的作用研究 |
| 第五章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 A |
| 作者在学期间取得的学术成果 |
| 主要简历 |
| 致谢 |
（3）基于基因编辑构建表达β2m-HLA-G融合蛋白的低免疫原性人胚胎干细胞（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 多能干细胞的免疫原性分子 |
| 1.1.1 主要组织相容性抗原(Major Histocompatibility Antigens,MHC) |
| 1.1.2 次要组织相容性抗原(Minor Histocompatibility Antigens, mH) |
| 1.1.3 ABO抗原 |
| 1.1.4 杀伤细胞免疫球蛋白样受体(Killer Immunoglobulin-like Receptors,KIR) |
| 1.2 HLA-G |
| 1.3 CRISPR/Cas9基因编辑技术 |
| 1.4 已发表的构建低免疫原性胚胎干细胞技术 |
| 2 双gRNA基因编辑系统的构建 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 主要仪器设备及耗材 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.2.3 培养基及常用试剂配方 |
| 2.2.4 细胞系及质粒 |
| 2.2.5 抗体 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 感受态细菌制备 |
| 2.3.2 感受态细菌转化 |
| 2.3.3 质粒小量抽提 |
| 2.3.4 质粒中量抽提 |
| 2.3.5 细胞内RNA抽提 |
| 2.3.6 RNA反转录 |
| 2.3.7 qPCR检测 |
| 2.3.8 免疫荧光染色 |
| 2.3.9 蛋白质免疫印迹实验(Western Blot) |
| 2.3.10 细胞基因组DNA抽提 |
| 2.3.11 小鼠MEF细胞制备 |
| 2.3.12 hESCs的复苏 |
| 2.3.13 hESCs传代 |
| 2.3.14 靶向gRNA设计 |
| 2.3.15 gRNA质粒构建 |
| 2.3.16 gRNA效率检验 |
| 2.3.17 hESC电转 |
| 2.3.18 hESCs神经定向分化 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 双gRNA基因编辑系统可以在hPSCs中实现高效、可预测的基因敲除 |
| 2.4.2 双gRNA基因编辑系统可以在hPSCs中一次性针对多个基因实现高效、可预测的基因敲除 |
| 2.4.3 双gRNA基因编辑系统可以在hPSCs中高效、可预测地敲除非编码RNA |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 结论 |
| 3 低免疫原性人类胚胎干细胞构建 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 主要仪器设备及耗材 |
| 3.2.2 主要试剂 |
| 3.2.3 培养基及常用试剂配方 |
| 3.2.4 细胞系及质粒 |
| 3.2.5 抗体 |
| 3.2.6 实验使用gRNA统计 |
| 3.2.7 实验使用引物统计 |
| 3.2.8 HLA配型统计 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 B2M-(G4S)_4-HLA-G1及Lenti-B2M-(G_4S)_3-HLA-G5质粒构建 |
| 3.3.2 Southern Blot |
| 3.3.3 小鼠畸胎瘤注射,切片及HE染色 |
| 3.3.4 流式细胞分析 |
| 3.3.5 人类胚胎干细胞向心肌细胞定向分化 |
| 3.3.6 外周血分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC) |
| 3.3.7 混合淋巴反应(Mixed lymphocytes reaction,MLR) |
| 3.3.8 NK-92细胞培养及传代 |
| 3.3.9 JEG-3细胞培养及传代 |
| 3.3.10 PBMC细胞体外激活检测 |
| 3.3.11 NK-92细胞体外激活检测 |
| 3.3.12 慢病毒包装及感染 |
| 3.3.13 同种异体人类PBMC的预激活 |
| 3.3.14 同种异体PBMCs介导的体内免疫反应 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 通过基因编辑手段在hPSCs中实现经典型HLAI蛋白表达缺失与非经典型膜结合/分泌型HLA-G蛋白表达 |
| 3.4.2 B2M~(mHLAG)、B2M~(m/sHLAG) hESCs成功表达HLA-G,B2M~(null)、B2M~(mHLAG)、B2M~(m/sHLAG) hESCs均缺失膜结合经典型HLAⅠ类分子 |
| 3.4.3 体外实验中B2M~(null),B2M~(mHLAG)和B2M~(m/sHLAG) hPSCs及其分化所得心肌细胞表现出低免疫原性 |
| 3.4.4 体内实验中B2M~(null),B2M~(mHLAG)和B2M~(m/sHLAG)细胞表现出低免疫原性 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简历及博士期间研究成果 |
（4）《糖尿病和部分自身免疫性疾病的免疫治疗》（节选）英汉翻译实践报告（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 翻译项目简介 |
| 1.1 项目背景 |
| 1.2 项目意义 |
| 第二章 原文本分析 |
| 2.1 作者及作品介绍 |
| 2.2 文本性质和语言特征 |
| 第三章 翻译过程 |
| 3.1 平行文本确定 |
| 3.2 术语表与翻译工具确定 |
| 3.3 翻译理论选择与分析 |
| 3.4 翻译计划制定 |
| 3.5 应急预案 |
| 第四章 译后质量评估 |
| 4.1 自我审校 |
| 4.2 他人校对 |
| 第五章 翻译转换理论指导下的案例分析 |
| 5.1 层次转换 |
| 5.1.1 时态表达 |
| 5.1.2 语义复数表达 |
| 5.2 范畴转换 |
| 5.2.1 词类转换 |
| 5.2.1.1 名词转换为动词 |
| 5.2.1.2 介词转换为动词 |
| 5.2.2 单位转换 |
| 5.2.2.1 从句转换为单句 |
| 5.2.2.2 短语转换为单句 |
| 5.2.3 结构转换 |
| 5.2.3.1 主被动语态转换 |
| 5.2.3.2 主语突出向主题突出转换 |
| 第六章 翻译实践总结 |
| 6.1 翻译实践中的问题和不足 |
| 6.2 翻译实践的启示 |
| 参考文献 |
| 附录1 翻译任务的原文文本与译文文本 |
| 附录2 生物医学类术语表 |
| 附录3 翻译辅助工具列表 |
| 致谢 |
（5）人脐带间充质干细胞对共培养体系中角质形成细胞增殖的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一章 hUC-MSCs的分离、培养及鉴定 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 原代人KCs分离、培养及鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 hUC-MSCs与KCs共培养实验研究 |
| 第一部分 hUC-MSCs与KCs直接共培养 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 结论 |
| 第二部分 hUC-MSCs与KCs间接共培养 |
| 3.4 材料与方法 |
| 3.5 结果 |
| 3.6 结论 |
| 第三部分 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 英文缩略词表 |
| 附录 |
| 致谢 |
（6）B细胞向浆细胞分化发育的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 综述自身免疫病中B细胞信号通路的作用机制 |
| 2.1 B细胞在发育分化经历的选择作用 |
| 2.2 B细胞活化增殖分化为分泌抗体的浆细胞 |
| 2.2.1 滤泡外B细胞途径 |
| 2.2.2 GC相关B细胞反应 |
| 2.2.2.1 BCR |
| 2.2.2.2 BAFF受体 |
| 2.2.3 TLR |
| 2.2.3.1 TLR异常对B细胞分化发育选择的影响 |
| 2.2.3.2 对B细胞激活的影响 |
| 2.2.4 CD40-CD40L |
| 2.2.5 其他细胞因子 |
| 第3章 Loc108168067基因的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.1.1 细胞系 |
| 3.1.1.2 实验用动物 |
| 3.1.1.3 主要试剂 |
| 3.1.1.4 主要仪器 |
| 3.1.1.5 常用试剂的配制 |
| 3.1.1.6 引物设计 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.2.1 实验小鼠的处理及样品留取 |
| 3.1.2.2 细胞的培养 |
| 3.1.2.3 细胞转染 |
| 3.1.2.4 细胞的增殖、凋亡和周期实验 |
| 3.1.2.5 激光共聚焦 |
| 3.1.2.6 从细胞中提取总RNA |
| 3.1.2.7 将RNA反转录为cDNA |
| 3.1.2.8 Real-time Q-PCR |
| 3.1.2.9 蛋白质免疫印迹实验（Western blotting） |
| 3.1.2.10 双荧光素酶报告基因分析实验 |
| 3.1.2.11 异种移植瘤的小鼠模型的建立 |
| 3.1.2.12 统计 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 与LPS诱导的浆母细胞相比，SP 2/0细胞表达低水平的Loc108168067、Gm40600、和Itch分子 |
| 3.2.2 Loc108168067在LPS诱导的浆细胞中高表达，在SP 2/0细胞中低表达 |
| 3.2.3 Loc108168067过表达对SP 2/0细胞增殖没有影响，但通过G1 / S阻断诱导细胞凋亡 |
| 3.2.4 在SP 2/0异种移植瘤小鼠模型中，Loc108168067过表达不影响肿瘤进展 |
| 3.2.5 激光共聚焦测定Loc108168067在293T细胞过表达定位 |
| 3.2.6 核内Loc108168067促进Trim21和Myc启动子的活化 |
| 3.2.7 Loc108168067过表达可上调Myc及其相关的IRF4和Blimp1的表达 |
| 3.2.8 Loc108168067过表达可上调Trim21及其相关的CDKN1c表达 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 Gm40600基因的相关研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.1.1 细胞系 |
| 4.1.1.2 实验用动物 |
| 4.1.1.3 主要试剂 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 SP 2/0细胞表达低水平的Gm40600 mRNA |
| 4.2.2 Gm40600过表达可诱导SP 2/0细胞凋亡而抑制细胞增殖 |
| 4.2.3 激光共聚焦测定Gm40600在293T细胞过表达定位 |
| 4.2.4 Gm40600过表达降低SP 2/0细胞中Blimp1和Xbp1蛋白的表达 |
| 4.2.5 Gm40600过表达抑制SP 2/0异种移植小鼠模型中的肿瘤进展 |
| 4.2.6 Gm40600过表达抑制经LPS刺激的原代B细胞产生抗体 |
| 4.3 讨论 |
| 第5章 Itch基因敲除小鼠的研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.1.1 试验用动物 |
| 5.1.1.2 主要试剂 |
| 5.1.1.3 主要仪器 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.1.2.1 小鼠基因型鉴定 |
| 5.1.2.2 实验小鼠的样品留取 |
| 5.1.2.3 流式细胞术实验 |
| 5.1.2.4 酶联免疫吸附实验 |
| 5.1.2.4 免疫共沉淀及银染 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 Itch敲除小鼠的鉴定 |
| 5.2.2 相对于全细胞Itch敲除小鼠，B细胞特异性敲除Itch小鼠的症状较轻 |
| 5.2.3 小鼠B细胞特异性敲除Itch后对B细胞活化和抗体水平无明显影响 |
| 5.2.4 Itch在生发中心（GC）B细胞和浆细胞（PC）中的表达下降 |
| 5.2.5 敲除Itch可以促进抗原诱导的B细胞活化和抗体产生 |
| 5.2.6 敲除Itch通过上调具有翻译起始因子活性的蛋白质促进抗原诱导的细胞因子和抗体升高 |
| 5.3 讨论 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（7）组织特异性细胞外基质中COL4A2对牙周膜干细胞成骨分化的影响（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 人牙周膜细胞和骨髓细胞的分离培养与鉴定及特异性ECM的制备 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 牙周膜来源的细胞外基质与骨髓来源的细胞外基质的差异研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 COL4A2 通过WNT/Β-CATENIN通路介导的成骨作用的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 组织特异性ECM植入裸鼠体内及大鼠牙槽骨缺损的体内研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（8）供鼠脾脏细胞CHI3L1缺失加重急性移植物抗宿主病的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 建立小鼠异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型 |
| 实验材料 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 CHI3L1在小鼠aGVHD中的作用机制 |
| 实验材料 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 CHI3L1对Treg细胞分化及功能影响的机制研究 |
| 实验材料 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 结论 |
| 综述 CD4~+T淋巴细胞在aGVHD中的作用机制 |
| 参考文献 |
| 发表论文及其它 |
| 致谢 |
（9）GGTA1敲除猪以及低免疫原性人多能干细胞的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 第1部分 文献综述 |
| 第1章 基因修饰猪用于异种移植的研究进展 |
| 1.1 猪异种移植免疫障碍 |
| 1.2 促进异种移植发展的相关技术 |
| 1.3 组织器官异种移植的研究进展 |
| 1.4 展望 |
| 第2章 人多能干细胞移植的免疫障碍 |
| 2.1 人多能干细胞移植的意义 |
| 2.2 人多能干细胞的免疫原性 |
| 2.3 克服人多能干细胞移植免疫障碍的相关策略 |
| 2.4 展望 |
| 第2部分 实验研究 |
| 第3章 GGTA1敲除猪的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 实验结果和讨论 |
| 3.4 结论 |
| 第4章 低免疫原性人多能干细胞的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法(与3.2相同者,省略) |
| 4.3 实验结果和讨论 |
| 4.4 结论 |
| 第5章 过表达转录因子提高人多能干细胞造血分化能力 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料和方法(与3.2,4.2相同者,省略) |
| 5.3 实验结果和讨论 |
| 5.4 结论 |
| 第6章 全文总结和展望 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 在学期间所取得的科研成果 |
（10）人诱导多能干细胞来源的间充质干细胞调控小鼠免疫反应的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 干细胞 |
| 1.1.1 干细胞的种类 |
| 1.1.2 干细胞的应用 |
| 1.2 免疫应答 |
| 1.2.1 B细胞介导的免疫应答 |
| 1.2.2 T淋巴细胞介导的免疫应答 |
| 1.3 干细胞与免疫调控 |
| 1.3.1 MSCs的免疫原性 |
| 1.3.2 MSCs免疫调节作用 |
| 1.3.3 MSCs发挥免疫调节作用的机制 |
| 1.4 研究目的、内容和研究意义 |
| 1.4.1 研究目的 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 研究意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 细胞移植模型构建 |
| 2.2.3 淋巴细胞分离 |
| 2.2.4 细胞免疫学检测 |
| 2.2.5 细胞增殖检测 |
| 2.2.6 分子生物学检测 |
| 2.2.7 抗体芯片检测 |
| 2.3 统计学分析 |
| 第三章 结果与讨论 |
| 3.1 人IPS-MSCS抑制小鼠免疫排斥 |
| 3.1.1 人iPS-MSCs细胞的免疫表型鉴定 |
| 3.1.2 干细胞移植模型的建立 |
| 3.1.3 干细胞移植后免疫排斥水平的检测 |
| 3.1.4 干细胞移植后细胞存活检测 |
| 3.1.5 小结 |
| 3.2 干细胞移植抑制受体小鼠脾细胞免疫反应 |
| 3.2.1 干细胞移植抑制小鼠脾细胞增殖 |
| 3.2.2 干细胞移植抑制小鼠脾脏细胞中T细胞亚群 |
| 3.2.3 干细胞移植下调CD3~+T细胞数量,上调Foxp3调节性T细胞数量 |
| 3.2.4 干细胞移植调控小鼠脾脏中细胞因子mRNA水平表达和血清中细胞因子的表达 |
| 3.2.5 小结 |
| 3.3 干细胞通过旁分泌途径抑制小鼠T细胞激活 |
| 3.3.1 干细胞抑制小鼠T细胞增殖 |
| 3.3.2 干细胞抑制小鼠T细胞增殖不依赖于细胞间接触 |
| 3.3.3 干细胞下调小鼠T细胞亚群内Th1、Th2数量 |
| 3.3.4 小结 |
| 3.4 干细胞表达分泌大量免疫调控因子 |
| 3.4.1 干细胞表达分泌大量的可溶性因子 |
| 3.4.2 干细胞分泌蛋白部分结果验证 |
| 3.4.3 干细胞分泌蛋白的Go oncology分析 |
| 3.4.4 小结 |
| 3.5 干细胞移植调控小鼠脾脏内信号通路转导 |
| 3.5.1 干细胞表达分泌可溶性蛋白调控细胞周期和细胞死亡 |
| 3.5.2 干细胞移植调控小鼠脾脏细胞周期蛋白表达 |
| 3.5.3 干细胞移植调控小鼠脾脏细胞凋亡信号通路 |
| 3.5.4 凋亡信号通路与T细胞激活以及Th1、Th2之间的关系 |
| 3.5.5 小结 |
| 3.6 干细胞移植调控小鼠免疫反应不完全通过TGF-B细胞通路 |
| 3.6.1 TGF-β抑制conA诱导的T细胞增殖 |
| 3.6.2 TGF-β抑制conA诱导的Th1、Th2数量增加 |
| 3.6.3 TGF-β调控的周期蛋白和凋亡信号通路变化 |
| 3.6.4 小结 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一: 图表索引 |
| 附录二: 抗体芯片检测的276个差异表达蛋白 |
| 附录二: 缩略语及中英文对照 |
| 致谢 |
四、人同种异体抗原诱导的T细胞克隆在体外的建立及鉴定（论文参考文献）
- [1]紫草素对T细胞的抑制作用及其机制研究[D]. 杨惠舒. 广西大学, 2021(02)
- [2]牙髓干细胞对椎间盘退变与类风湿关节炎的免疫调控作用及治疗机制研究[D]. 董曦文. 军事科学院, 2021(02)
- [3]基于基因编辑构建表达β2m-HLA-G融合蛋白的低免疫原性人胚胎干细胞[D]. 石磊. 浙江大学, 2020(01)
- [4]《糖尿病和部分自身免疫性疾病的免疫治疗》（节选）英汉翻译实践报告[D]. 丁禹. 湘潭大学, 2020(02)
- [5]人脐带间充质干细胞对共培养体系中角质形成细胞增殖的影响[D]. 杨熙之. 南方医科大学, 2020(01)
- [6]B细胞向浆细胞分化发育的分子机制研究[D]. 方迎. 吉林大学, 2020(08)
- [7]组织特异性细胞外基质中COL4A2对牙周膜干细胞成骨分化的影响[D]. 文艺. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [8]供鼠脾脏细胞CHI3L1缺失加重急性移植物抗宿主病的机制研究[D]. 李增耀. 南京医科大学, 2017(05)
- [9]GGTA1敲除猪以及低免疫原性人多能干细胞的研究[D]. 陈海德. 浙江大学, 2017(11)
- [10]人诱导多能干细胞来源的间充质干细胞调控小鼠免疫反应的机制研究[D]. 李成林. 厦门大学, 2015(01)