一、端粒酶与肿瘤研究（论文文献综述）
唐铃丰[1]（2021）在《人端粒酶逆转录酶hTERT鉴别乳腺良恶性肿瘤的Meta分析》文中指出目的系统评估人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）基因检测鉴别诊断乳腺良恶性肿瘤的临床价值。方法检索CNKI、CBM、维普、Wan Fang Data、Pub Med、The Cochrane Library（2020年10期）、Web of Science、EMbase数据库中与hTERT基因检测鉴别乳腺良恶性肿瘤相关的文章,检索时间均由建库时间至2020年10月9日。提取纳入文献基本资料并通过QUADAS标准评价研究质量。使用Stata 15.0和Meta-Disc 1.4软件对数据进行统计分析。首先通过ROC曲线和Spearman相关系数来检验有无阈值效应,若有阈值效应,则拟合ROC曲线并计算AUC及Q*指数;若无阈值效应,则采用卡方检验分析异质性,并结合I2定量判断异质性的大小。然后使用meta回归分析探寻异质性来源,进行亚组分析。最后通过漏斗图分析发表偏倚。结果本研究一共纳入了17篇文献,共1436例患者（乳腺恶性肿瘤852例,乳腺良性肿瘤584例）。结果显示,hTERT诊断乳腺恶性肿瘤的合并敏感度(Sen合并)为0.81[95%CI（0.79,0.84）],合并特异度(Spe合并)为0.83[95%CI（0.79,0.86）],合并阳性似然比(+LR合并)为4.75[95%CI（3.35,6.74）],合并阴性似然比(-LR合并)为0.21[95%CI（0.15,0.30）]以及合并诊断优势比(DOR合并)为26.93[95%CI（15.02,48.28）]。所有结局指标I2均大于50%,因此采用随机效应模型进行Meta分析。对全部因素进行meta回归分析,结果显示异质性主要来源为作者国家,剔除两篇国外文献后行亚组分析,采用固定效应模型计算合并DOR为35.89,AUC=0.9242,Q*=0.8582。结论hTERT基因检测鉴别诊断乳腺良恶性肿瘤有较好的灵敏度及特异度,诊断试验的判别效果较好,其有助于临床上乳腺良恶性肿瘤的鉴别。
李春宏[2]（2021）在《DNA纳米结构的构建及其在肿瘤标志物成像分析中的应用》文中进行了进一步梳理癌症作为世界上最致命的疾病之一,仍然是一个非常严重的健康问题。尽管人们在开发新的肿瘤治疗方法上投入了大量的人力、物力和财力,但由于肿瘤的复杂性、多样性和异质性,目前的临床治疗方案取得的成果依然有限。因此,恶性肿瘤的早期诊断和临床治疗仍然是一个亟待解决的问题。肿瘤治疗面临的第一个问题就是如何实现肿瘤的精确诊断。一方面,在肿瘤发病的早期阶段,肿瘤患者并无明显的不适和异常现象,错过了最佳的治疗时期;另一方面,当确诊之后,大部分患者已进入肿瘤发展的中晚期,肿瘤已经发生了浸润和转移,而现今的治疗手段难以对中晚期的肿瘤增殖产生行之有效的抑制或杀死效果。为了尽早地发现和诊断恶性肿瘤,研究者致力于开发细胞水平上肿瘤标志物的成像分析方法。肿瘤标志物的概念自1978年提出以来,已经成为肿瘤诊断的一个重要工具。由于肿瘤标志物的含量远超正常人体内的含量,因此通过检测肿瘤标志物可以为肿瘤的早期诊断提供可靠有效的信息。针对肿瘤标志物的检测方法有很多,包括电化学方法、色度法、质谱法、化学发光及表面增强拉曼散射等方法,这些方法在肿瘤标志物的检测方面取得了很大进展,但是这些方法大部分只能对体外的肿瘤标志物进行检测,无法对活细胞内的肿瘤标志物进行实时成像。为解决这一问题,很多纳米材料,比如脂质体、硅纳米颗粒、金纳米颗粒、量子点、氧化石墨烯、二氧化锰纳米片等被开发用于构建活细胞内肿瘤标志物的原位成像分析。这些方法均取得了很好的研究成果,但是这些方法也存在着一些不足,比如脂质体的包封是杂乱无序的,递送进细胞的核酸探针也容易受到酶解的影响;而基于无机纳米材料的荧光探针又往往存在潜在生物毒性及合成修饰复杂的缺点,因此寻找生物相容性好、合成修饰简单、稳定性好的载体用于构建活细胞中肿瘤标志物的原位成像具有重要意义。近年来,DNA纳米结构,比如DNA四面体、DNA三棱柱、DNA纳米球等因其优异的单分散性、良好的生物相容性、修饰的简单可操作性、优异的核酸稳定性等优点而广泛用于活细胞内肿瘤标志物的成像分析。但是这类探针大部分只针对某一特定肿瘤标志物进行成像分析,肿瘤诊断准确性尚显不足。因为一种肿瘤可以同时产生多种不同的肿瘤标志物,而不同的肿瘤或者相同肿瘤的不同类型也可以产生同一种肿瘤标志物,因此单一肿瘤标志物的成像分析方法往往难以得到准确的诊断结果。因此,开发活细胞内多种肿瘤标志物的同时成像分析方法对于提高肿瘤诊断的准确性具有重要意义。最后,化疗作为目前肿瘤治疗应用最广泛的方式之一,虽然在肿瘤治疗和延长患者生命方面取得了显着的成果,但是依然存在不少的问题,其中之一便是化疗所产生的毒副作用。因此,通过对载药体系的功能化设计,建立肿瘤标志物识别及触发的可控药物释放系统,不仅可以对活细胞内的肿瘤标志物进行成像分析,起到肿瘤诊断的目的;又可以对药物的释放及肿瘤治疗过程进行监控,对提高肿瘤靶向治疗效果具有重要意义。针对上述问题,本论文主要围绕DNA纳米结构开发了用于多种肿瘤标志物成像分析的荧光探针,并在此基础上设计了肿瘤标志物指导下的靶向可控药物释放策略用于肿瘤的精准治疗。具体的工作如下:1.基于DNA四面体上的CHA循环实现两种miRNA的精准成像微小核糖核酸（micro RNA,miRNA）的异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关,因此建立miRNA的原位成像分析方法对于肿瘤的早期诊断具有重要意义。在这项工作中,我们设计了一个基于DNA四面体的荧光探针用于细胞内两种miRNA的成像分析。我们分别在DNA四面体的四个顶点连接上能够靶向核仁素的核酸适配体AS1411、催化发卡自组装（CHA）的两条发卡DNA,以及一条捕获链。而捕获链上连接有一条引发链和一条封锁链。该DNA四面体荧光探针可以通过AS1411与核仁素的特异性识别靶向进入肿瘤细胞;而只有当肿瘤细胞中同时存在miR-21和miR-155时,捕获链才能分别与两种miRNA杂交,释放出引发链;释放的引发链可以进一步触发DNA四面体内的CHA循环,使修饰在两个发卡DNA上的供受体荧光分子相互靠近,从而产生明显的荧光共振能量转移（FRET）信号,实现活细胞中两种miRNA的成像分析。通过结合核仁素靶向、四面体内的CHA循环及两种miRNA成像,本设计有望提高miRNA相关肿瘤诊断的准确性。2.基于DNA纳米片的AND逻辑门用于两种miRNA的精准成像基于FRET的比率型荧光探针可以同时观察到供受体的荧光强度变化,能够有效避免假阳性信号,因此广泛应用于肿瘤标志物的成像分析及肿瘤诊断。但是,目前常用的荧光探针都是基于供受体在10 nm以内的研究,限制了其在更长距离的应用。在这项工作中,我们以可编程的DNA纳米片为模板,研究了不同供受体在不同距离及不同构型下的能量转移效率。通过合理的设计,我们构建了基于Alexa fluor 430/Cy3、Cy3/Cy3、Cy3/Cy5三对能量转移供受体之间的级联长程共振能量转移系统。在此基础上,我们用BHQ2分子猝灭两个Cy3分子的荧光,进一步构建了以DNA纳米片为模板,基于级联长程共振能量转移的AND逻辑门系统。只有在设计的miR-21和miR-155两个输入信号同时存在时,该AND逻辑门系统才能产生输出信号,从而实现活细胞中两种miRNA的同时成像。这项工作有望拓宽级联长程荧光共振能量转移在肿瘤标志物的检测及肿瘤诊断中的应用。3.核仁素靶向和端粒酶响应可控药物释放的DNA纳米管用于肿瘤精准治疗肿瘤的精确诊断和精准治疗是提高肿瘤治疗疗效的重要保障。在这项工作中,我们开发了一种核仁素靶向及FRET信号指示端粒酶响应可控药物释放的DNA纳米管,可以同时实现端粒酶的检测及精准的肿瘤治疗。首先,我们通过DNA自组装合成了DNA纳米片,并通过碱基互补配对负载核酸修饰的抗肿瘤药物蓖麻毒素A链（RTA）;随后,再通过Cy3分子标记的拉链DNA与纳米片两侧的端粒酶引发链和Cy5标记的单链结合将DNA纳米片卷曲成DNA纳米管,由于Cy3和Cy5的相互靠近,此时可以观察到明显的FRET信号。最后,再在纳米管的两端修饰上核仁素的核酸适配体,从而制备出核仁素靶向及端粒酶响应释放RTA的DNA纳米管。在核仁素的介导下,纳米管可以特异性地进入肿瘤细胞;进入肿瘤细胞中的纳米管可以进一步对胞质中过表达的端粒酶产生响应,重新转换成纳米片并带来明显的FRET信号改变。而暴露在胞质中的RTA可以进一步从纳米片上释放以发挥肿瘤治疗效果。而即使有部分纳米管进入了正常细胞,但由于正常细胞缺乏足量的端粒酶,纳米管也不会被打开,从而大大降低肿瘤治疗的毒副作用。这项工作通过设计核仁素靶向、端粒酶响应药物释放的DNA纳米管,有望在降低药物毒副作用的同时增加药物的治疗疗效。综上所述,在本研究中,我们构建了可用于多种肿瘤标志物成像分析的DNA纳米结构;并在此基础上建立了肿瘤细胞靶向及肿瘤标志物可控药物释放的DNA纳米管用于肿瘤的精准治疗。首先,我们以DNA四面体为载体,构建了肿瘤细胞靶向及四面体内的CHA循环放大荧光探针用于活细胞中两种miRNA的同时成像,提高了肿瘤诊断的准确性。随后,我们以DNA纳米片为模板,通过在其表面精确定位,研究了不同供受体组成下的级联长程共振能量转移,并在此基础上构建了AND逻辑门系统,用于肿瘤细胞内两种miRNA的同时成像,拓宽了级联长程FRET在肿瘤标志物检测及肿瘤诊断中的应用。最后,我们在DNA纳米片上负载RTA,并用拉链将其卷曲成DNA纳米管,通过连接核酸适配体构建了核仁素靶向、端粒酶成像及其响应下的可控药物释放DNA纳米管用于肿瘤的精准治疗。因此,本研究不仅提高了miRNA相关肿瘤诊断的准确性,还拓宽了级联长程共振能量转移在生化分析中的应用,更建立了集肿瘤标志物成像及肿瘤诊断、肿瘤标志物触发下的可控药物释放用于精准肿瘤治疗为一体的肿瘤诊疗体系,有助于提高肿瘤治疗疗效并降低毒副作用。
刘德豪[3]（2021）在《外周血白细胞端粒长度与端粒酶活性对非小细胞肺癌患者预后的影响》文中研究指明目的:探讨非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）患者外周血白细胞端粒长度以及端粒酶活性对患者预后的影响。方法:本研究病例选取2016年4月至2017年6月期间在保定市第一中心医院心胸外科确诊为NSCLC患者,经纳入标准及排除标准筛选后,选取符合入组标准的患者55例。依据端粒酶活性和端粒DNA长度的特定值进行分组:长链高活性组7例、长链低活性组14例、短链低活性组14例、短链高活性组20例。全部患者均进行一般资料收集、外周血采集以便检测NSCLC患者白细胞端粒长度和端粒酶活性代表物。在患者入院期间以及出院后均对患者生存时间及预后效果进行随访,以明确患者外周血白细胞端粒长度、端粒酶活性与患者治疗后生存时间的相关性。结果:经研究,各组患者之间年龄、性别、肿瘤病理分型、是否吸烟未见明显相关性（P>0.05）,总体对比患者临床TNM分期有统计学意义（P=0.025）。各组患者自身端粒酶活性与端粒长度无相关性（r=-0.112,P=0.228）。不同分组NSCLC患者生存时间:端粒DNA长链端粒酶低活性组患者生存时间为（30.93±1.06）月;端粒DNA长链端粒酶高活性组患者生存时间为（29.48±2.64）月;端粒DNA短链端粒酶高活性组患者生存时间为（14.70±1.65）月;端粒DNA短链端粒酶低活性组患者生存时间为（19.98±1.68）月。整体对比不同组别患者预后生存时间（OS）具有统计学意义（P<0.001）。通过Kaplan-Meier曲线组间两两对比患者预后生存时间发现:整体对比有统计学意义,不同组别之间两两对比:端粒DNA长链高活性组与端粒DNA长链低活性组对比、端粒DNA短链高活性组与短链低活性组对比、端粒DNA长链低活性组与端粒DNA短链低活性组对比均无统计学意义（P>0.05）,端粒DNA长链高活性组与端粒DNA短链高活性组对比、端粒DNA长链低活性组与端粒DNA短链高活性组对比,结果具有统计学意义（P<0.05）。经Cox风险比例回归分析得出:患者年龄、临床TNM分期、端粒长度以及端粒酶活性是影响NSCLC患者预后生存的独立风险因素。结论:评价非小细胞癌患者预后生存的独立风险因子包括患者年龄、肿瘤TNM分期、外周血白细胞端粒长度以及端粒酶活性。其中外周血白细胞端粒长度对于患者治疗效果以及生存时间的影响较其他因素更为明显。
沈晓宝[4]（2021）在《基于PI3K/AKT/mTOR信号通路和端粒酶逆转录酶靶标的小分子药物的设计、合成及构效研究》文中指出调节端粒酶活性和PI3K/AKT/mTOR信号通路,可以调控细胞系的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,端粒酶活性调控是肿瘤治疗研究的热点。第一章在紫草素骨架基础上进行了衍生化,此类衍生物通过自噬调节PI3K/AKT/mTOR信号通路;第二章发展了系列二氢吡唑-嘧啶骨架化合物,并研究了其对端粒酶抑制性能,抑制端粒酶活力可以调控异常细胞的繁殖周期,促进癌细胞的凋亡。利用计算机药物设计软件（Discovery Studio）,对已有的活性化合物化学结构进行分析,分别以PI3K/AKT/mTOR信号通路和端粒酶逆转录酶为靶标,同时结合拼合原理和生物电子等排原理,设计合成了多个相关化合物并进行相关的生物活性测试。紫草素是中药紫草的主要成分,有着很好的抗肿瘤作用,但因为其较差的选择性和较高的细胞毒性,在抑制癌细胞的同时,其毒性同样能够破坏有序生长的细胞,因此在保持其较高的抗癌细胞活性同时降低其对正常细胞的毒性是紫草素类化合物需要解决的主要问题。通过紫草素衍生物的构效关系分析,以期筛选到对癌细胞具有较好抑制活性同时对正常肝细胞的毒性较低的化合物。经对紫草素构效分析,发现侧链羟基不是活性所必需的,可以作为是主要的修饰位点。酰化和醚化均能在低浓度下保持较强的抗肿瘤活性,而双键的引入会明显提高活性。为了合成更高效、毒性更小的衍生物,根据紫草素的分子对接（其中一种化合物的最低对接能为15.7597 k Cal/M,紫草素的最低对接能为6.13917 k Cal/M）和药效团分析,设计合成了23个紫草素衍生物。此外,对其抗癌活性进行了初步探讨,大部分衍生物对肿瘤细胞有一定的抑制作用,特别是化合物12对SGC-7901细胞的IC50为4.1±2.6μM,并通过Annexin V/PI染色、免疫荧光、westernblot等方法探讨了化合物12对SGC-7901细胞的抗癌机制分子对接。这些结果表明,化合物12通过调节PI3K信号通路诱导细胞凋亡和自噬,对肿瘤细胞系的凋亡起到积极作用。端粒酶在肿瘤细胞中起着至关重要的作用,抑制端粒酶活性可以抑制癌细胞的增殖,促进癌细胞的凋亡。端粒酶具有有效性和特异性,已成为抗癌药物的新靶点之一。由于生殖细胞和肿瘤细胞的端粒在端粒酶作用下不断修复,在体外长期治疗后,无法达到预期的与功能性复制衰老相关的临界端粒长度。因此,在小分子端粒酶抑制方面仍存在一些问题,如端粒酶的激活和抑制机制尚不清楚,端粒酶抑制对生殖细胞、干细胞、胚胎干细胞的毒副作用仍存在。很多吡唑衍生物具有重要的药理活性,是药物研究的核心骨架。传统的药物设计方法在药物合成史上起着重要的作用,另一方面计算机辅助药物设计等新技术是新药开发不可忽略的。随着大量靶标蛋白等复合物共晶结构的解析,为基于靶标设计的药物分子提供了基础。本章在骨架跃迁,拼合原理等传统药物的基础上,结合新技术,以端粒酶逆转录酶为靶标,根据其结构特性,首先确定了二氢吡唑和嘧啶的核心骨架,同时依据分子对接结果,对其左右侧疏水区域进行了多官能团修饰,设计合成了67个新型二氢吡唑嘧啶类化合物,以期解决现有端粒酶抑制剂毒性较大的问题,从而开发新型生物活性高,毒性低的端粒酶逆转录酶抑制剂先导化合物。本章采用CCDK-8法对合成化合物进行细胞增殖测试,同时针对端粒酶进行酶活测试,通过细胞周期和凋亡检测了目标化合物91的作用机制。首先结合文献和本课题组前期工作结果,设计了4甲基吡唑和嘧啶结构分子,体外细胞测试和酶活力检测,这些结构都具有较好的端粒酶抑制和肿瘤细胞增殖活性。5-（1-苄基-4-甲基-4,5-二氢-1H-代-吡唑-3-基）-N-（3-甲氧基苄基）嘧啶-2-胺化合物29对端粒酶抑制活性达到7.58±0.69μM,对人乳腺癌细胞MCF7,人卵巢癌细胞SKOV3,人恶性黑色素瘤细胞A-375的IC50分别为6.91±0.43、16.37±0.83和10.06±0.34μM,且细胞毒性很小。同时对比化合物29与已有药物的分子对接结果,也说明该骨架对端粒酶具有较好的相互作用。在化合物29的基础上,探讨了二氢吡唑上甲基对该类化合物活性的影响。发现吡唑甲基在生物活性中不是必须基团。而当嘧啶取代基为不同取代的苄胺时能进一步增加相关的生物活性,但细胞毒性也随之增加如化合物61端粒酶抑制活性(IC50=0.28±0.04μM)优于阳性对照组BIBR1532的水平(IC50=0.39±0.05μM),对三种肿瘤细胞的抗增殖能力也能达到微摩尔水平,但细胞毒性较大。顺着抗增殖和端粒酶抑制活性指导的方向,不断的对各基团进行修饰和改造,得到化合物91（2-（4-乙基哌嗪-1-基）-5-（1-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-3-基）嘧啶）,其端粒酶抑制活性为IC50=0.57±0.13μM细胞增殖活性IC50（MCF-7、A375和SKOV-3细胞系）分别为:2.06±0.88、3.26±0.43和0.97±0.29μM,达到阳性对照组阿霉素的水平,通过细胞周期和凋亡实验进一步验证。酶活测试结果表明该化合物可以抑制端粒酶活性,细胞实验证实了该化合物可以诱导细胞凋亡达到抑制肿瘤细胞的目标。化合物91与端粒酶蛋白分子对接能最高值为22.852 k J/M,最低值为15.7847k J/M,平均值19.06663 k J/M,分子对接计算结果数据表明无论是对接能,还是对接相互作用能的值都与实验结果相吻合。总体结论为:二氢吡唑环上的甲基不是必须基团,而具有Π相互作用的芳香基团有利于与蛋白质分子相互作用。嘧啶环上取代基为不同取代的苄基时,虽然具有较好的生物活性,但其细胞毒性也较大。而当嘧啶环上的取代为哌嗪时,不仅有助于此类结构分子活性的提升还大大降低了细胞毒性,可能是因为哌嗪环能够增加此类分子与DNA的相互作用。最终目标化合物91具有良好生物活性和低毒性,是潜在的端粒酶逆转录酶抑制剂,对新型端粒酶抑制的开发具有重要的意义。
韩森,马旭,方健[5]（2021）在《端粒与端粒酶研究在肺癌中的临床应用前景与挑战》文中指出肺癌是世界范围内发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一。端粒和端粒酶与肺癌的发生发展密切相关。虽然端粒酶可能不是导致细胞癌变的直接原因,但在维持端粒长度和肿瘤生长方面起到关键作用。包括肺癌在内的大部分肿瘤端粒长度缩短。端粒长度的变化与肺癌发生风险相关,并可能成为肺癌的治疗靶标和预测指标。针对端粒和端粒酶信号通路的靶向治疗药物正在探索中,以端粒酶抑制剂为代表的小分子药物有希望应用于肺癌的临床治疗中。但是,人们对于端粒和端粒酶的研究还远远不够,端粒长度维持的旁路作用机制可能是下一步需要深入研究的方向。
孟凡渝[6]（2020）在《基于新型无酶生物传感体系的端粒酶及miRNA检测成像技术的研究》文中提出端粒是位于线状染色体两端的DNA-蛋白质帽子结构,能够保证遗传信息以及染色体正常的生理功能。端粒酶作为一类具有逆转录作用的酶,能够决定端粒的长短和活性大小。端粒与端粒酶在细胞衰亡、肿瘤发生以及干细胞能力维持等生命活动中都至关重要,而表达和调控机制的紊乱很可能导致癌症相关疾病的发生。在大部分恶性肿瘤细胞中端粒酶都会过表达,阻止端粒长度缩短和缺失,使癌细胞永生化。由此端粒酶可作为重要的肿瘤标志物,为癌症早期诊断提供依据和相应的治疗靶点,它的检测分析具有广泛的应用价值。本论文依据端粒酶扩增的基本原理,设计相应的核酸纳米结构和分子识别探针,构建基于功能化纳米材料介导的信号放大体系,以电化学和荧光技术作为关键检测手段,开发超灵敏生物传感器,开展针对端粒酶活性相关的定量检测和细胞内成像研究,具体内容如下:1.我们首先利用纳米材料作为信号分子,设计了无PCR参与的基于电化学传感技术的端粒酶活性分析方法。在这项研究里,使用未修饰的金纳米材料（AuNPs）和电化学伏安法定量分析从HeLa细胞中提取的端粒酶的活性。在金电极上,端粒酶可以利用硫醇修饰的端粒酶底物（TS）引物和脱氧核糖核苷酸（dNTPs）的混合物,特异性地促进含有重复核苷酸序列（TTAGGG）n的单链DNA（ssDNA）的延长。在TS引物与阻断剂DNA杂交后,纳米金粒子被ssDNA延伸部分暴露的含氮碱基捕获,并且通过差分脉冲伏安法（DPV）来具体量化端粒酶活性。在分析电化学信号后,获得20到2000个细胞的线性检测范围。这种简单的分析机制的检测极限是20个细胞。此方法无需PCR参与,快速且简单,非常适合在体外灵敏的评估细胞提取物中的端粒酶活性。2.我们接着开发了一种更稳定精确的双信号比率型电化学传感器,设计核酸的发夹结构用于端粒酶活性的超灵敏分析。发夹结构的DNA探针在其5’末端用亚甲基蓝（MB）分子标记后首先被结合在金电极界面上。然后与二茂铁标记（Fc）的端粒酶底物引物（Fc）进行杂交。随着端粒酶的催化反应,重复产生（TTAGGG）n的序列,能够与发夹DNA其余部分结合,进而触发探针的构象转导,打开发夹结构。因此,MB信号从电极表面释放,检测到的氧化峰值电流（IMB）降低。同时,Fc信号不受构象变化影响,保持相对稳定,峰值电流（IFc）可以用作内部对照,提高信号输出的稳定性和准确性。这种智能结构设计可以实现可靠的目标识别,获得的结果表现出出色的分析性能,非常适合低浓度目标物的检测。实验结果发现IMB/IFc与端粒酶浓度对数线性相关,检测限度极低。这种基于核酸结构变化和比率型信号输出的方法,可以成为一种强有力的分析端粒酶活性的实用工具,也可以作为开发其他核酸分析的多功能工具。3.端粒酶催化端粒延伸反应并添加DNA重复序列,诱发癌症或其他疾病,除了体外检测,其细胞内成像分析也具有重大应用价值。因此,开发可靠和方便的端粒酶原位监测方法对于恶性肿瘤的临床诊断至关重要。然而,大多数用于细胞内端粒酶活性测定的电流探针都面临不可避免的假阳性干扰。在这项研究中,我们设计了一种核酸四面体结构,并利用荧光共振能量转移（FRET）效应,来高灵敏度的监测和分析细胞内基于端粒酶表达的自由扩增程序。其中,由DNA四面体作为结构基底和发光DNA作为有效识别序列,构建DNA纳米探针,以实现端粒酶的体外传感检测和细胞内成像,并且避免假阳性干扰的问题。端粒酶可以使其底物引物延伸产生重复序列,发生链置换反应并改变核酸探针的构型,两端标记荧光团的发光DNA被释放游离出来,信号分子之间的距离增加导致荧光的恢复。此方法基于显着的FRET效应建立了简单比率传感器,检测限度可以达到单细胞水平。这种检测系统可以在端粒酶抑制剂的筛选分析中得到应用,在抗癌药物发现中发挥作用。4.端粒酶和miRNA在肿瘤细胞中含量较高,已被公认为常见的肿瘤检测标志物。我们又设计了基于miRNA触发的DNA酶步行器,与纳米金（AuNPs）探针结构相结合,用于端粒酶活性的逻辑门传感分析。通过链置换反应,目标miRNA打开两个发卡结构,循环扩增形成双足DNA酶步行器。在AND逻辑门实验中（实验A）,端粒酶的存在使引物（Tp）被延长,与锁定链结合。双足DNA酶和Mn2+与底物链结合,发生催化剪切作用,被AuNPs抑制的羧基荧光素信号（FAM）释放到溶液中,荧光恢复。在两种目标物或任何一种目标物不存在时,检测体系的荧光皆无法恢复。在OR逻辑门实验中（实验B）,miRNA触发的双足DNA酶可以单独打开AuNPs探针上的发卡结构,在Mn2+作用下,将荧光分子释放出来。端粒酶产生的延伸产物,可以与AuNPs探针上含有FAM的锁定链结合形成双链,释放到溶液中产生荧光。单一目标物存在下,荧光信号皆可恢复,两种目标物存在下,荧光强度增加。除此之外,含有信号分子的AuNPs探针复合物、载有DNA酶和TP引物的二氧化锰（MnO2）纳米片,可被细胞自主摄取,传递到细胞中,用于细胞内成像分析。该方法使用生物逻辑门和DNA酶步行器,极大地提高了荧光探针检测的适用性和灵敏度,已成功应用于端粒酶和miRNA的体外检测和细胞内成像研究,对于临床诊断来说具有重要意义。5.在更进一步的研究中,我们策略性地制造了多功能纳米结构TDNs-Flare探针,来同时灵敏地检测端粒酶和miR-21这两种肿瘤标志物,以及进行相应的细胞内生物成像研究。TDNs-Flare探针主要是由金纳米颗粒（AuNPs）修饰的四面体DNA纳米结构（TDNs）作为基质,包含Flarel（Cy5）和Flare2（CDg）两种不同的反应性应答信号。在存在靶标的情况下,不完全互补的DNA链Flare会竞争性地从四面体框架中被置换下来,从而导致荧光信号的恢复。CDg荧光对应的miR-21线性检测范围从1 fmol到100 pmol,而Cy5荧光可以完成低至10个HeLa细胞的端粒酶浓度分析,动态分析范围从10到5000个HeLa细胞。此外,抗癌药物（Dox）在插入DNA双链后,会随目标物的识别和结合,而释放到细胞中发挥作用。这项研究表明TDNs-Flare探针是定量测定癌症生物标志物的很好的选择,并且已成功在研究中用于响应性生物成像。该纳米结构不仅克服了在细胞水平上同时检测多种生物标志物的障碍,而且在DNA装载抗癌药物的细胞内传递方面有着广阔的应用前景。
陈彪[7]（2020）在《纳米银抗肿瘤活性及对肺组织的毒理学研究》文中研究指明纳米银由于其独特的理化性能和抗菌活性,在生物医学领域有诸多应用。最近的研究表明,纳米银具有很强的抗肿瘤活性,在一些动物模型中也表现出抗癌活性,但其诱导癌细胞杀伤的分子机制仍待进一步探讨。同时,纳米银在医疗领域的广泛应用,导致其暴露人体的风险增加,其生物安全性也备受关注。本研究以肿瘤细胞为研究对象,探究纳米银的抗肿瘤活性及生物学机制;以人肺正常细胞及小鼠为研究对象,探究低剂量纳米银长期暴露造成肺组织损伤及分子机制。具体研究结果如下:1.纳米银导致肿瘤细胞增殖抑制和细胞死亡:以HeLa细胞为研究对象,纳米银暴露后,检测细胞端粒酶活性、端粒长度、细胞增殖及相关蛋白表达。结果表明,纳米银不仅能在细胞外抑制端粒酶活性,还能诱导癌细胞端粒酶活性下调,小粒径纳米银（25 nm）对端粒酶活性的抑制作用显着高于大粒径纳米银（75 nm）,纳米银抑制端粒酶催化亚基（hTERT）蛋白表达导致端粒酶活性降低;进一步探究发现,纳米银对癌细胞端粒酶活性的持续抑制和对端粒结合蛋白的下调作用导致端粒缩短与功能障碍,干扰癌细胞染色体的稳定,使细胞在分裂后期形成后期桥。通过构建端粒酶过表达细胞、端粒酶敲低细胞、酶活突变细胞及TRF2突变细胞深入研究发现,过表达hTERT可减弱纳米银的抗肿瘤活性,而下调端粒酶活性或干扰端粒可增强纳米银对HeLa细胞的细胞毒性。这些结果表明,纳米银导致的端粒功能紊乱、端粒酶活性抑制参与了纳米银介导的HeLa细胞活性抑制密切相关,为理解纳米银的抗癌机制提供了新的见解。2.纳米银对肺细胞衰老与组织纤维化的的影响:通过检测纳米银暴露后细胞衰老水平变化及相关蛋白表达情况,研究纳米银对正常肺细胞及组织的损害。本研究发现,亚毒性剂量纳米银长期暴露导致肺正常细胞中衰老相关的β半乳糖苷酶活性上调,细胞核中染色质出现异常凝集,衰老相关的分泌因子基因表达上调,这些衰老生物标记物升高表明纳米银暴露可显着诱导肺细胞发生衰老。流式分析结果显示,纳米银暴露后细胞周期阻滞在G2/M期,凋亡细胞数目从3.3%上升到74.3%。进一步通过荧光分析表明纳米银诱导的细胞凋亡与衰老相关。机制研究表明,纳米银通过上调核转录因子NFKB、环氧合酶2（COX2）等蛋白表达,进而合成过多的前列腺素E2（PGE2）,导致肺细胞发生衰老;抑制COX2可将纳米银诱导的细胞衰老降低到正常水平。同时,动物实验也表明,纳米银诱导小鼠肺组织中COX2蛋白表达及声-半乳糖苷酶活性上调,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达增多及胶原沉积。综上所述,纳米银通过激活NFκB信号通路,上调COX2/PGE2表达与合成诱导肺细胞衰老,并通过凋亡方式清除衰老细胞;纳米银暴露加速小鼠肺部细胞衰老,引起肺组织炎症与轻微肺纤维化。
庄原[8]（2019）在《无机纳米颗粒与核酸纳米材料在肿瘤细胞诊断及靶向治疗中的应用研究》文中提出肿瘤是目前人类致死率最高的疾病之一。传统抗肿瘤药物往往存在靶向能力差、生物相容性差、代谢过快和毒副作用较强等缺点,因此在实际应用中受到了严重限制。此外,针对与肿瘤发生密切相关的肿瘤生物标志物进行检测是目前较为流行的肿瘤早期诊断手段,但这种方式对检测的灵敏度、特异性等都提出了极高的要求。基于以上问题,本文研究了多种无机纳米颗粒与核酸纳米材料在肿瘤标志物检测及肿瘤靶向治疗中的应用,设计和构建了用于检测肿瘤生物标志物端粒酶与miR-21的纳米生物传感器件,并通过研究细胞器靶向性和肿瘤靶向受体的精准排布探究了精确调控纳米颗粒肿瘤细胞靶向性的方法。本文的主要工作如下:（1）利用具有特定序列的端粒酶寡核苷酸引物,构建一系列纳米生物传感器,并将之应用于端粒酶提取物和活细胞内端粒酶的高灵敏度检测,实现了肿瘤细胞提取物内低至5个细胞的端粒酶检测,膀胱癌病人清尿与血尿样本的检出率分别达到100%和89.5%。此外,在肿瘤细胞内成功实现了端粒酶的实时荧光检测。（2）基于具有特殊荧光弛豫时间信号的荧光纳米金刚石（FND）与四氧化三铁磁性纳米颗粒（MNP）,制备了生物传感器FND-DNA-MNP,证实了其对肿瘤标志物miR-21的特异性响应。由于荧光弛豫时间信号在生物体内背景极低,此传感器有望应用于活细胞与活体内的单分子miR-21检测。（3）在作为纳米药物载体的DNA折纸纳米结构表面定点修饰具有肿瘤细胞靶向能力的转铁蛋白（Tf）,探究Tf的分布方式对纳米药物载体的细胞摄取效率的影响。研究发现,Tf的修饰数量对细胞摄取效率的提升效果最好,其次是Tf分子的标记间距,其对载体细胞摄取效率提升的顺序关系是:28 nm>14 nm>>42 nm。此外,Tf在所研究纳米载体上的修饰区域对载体的细胞摄取效率未表现出明显影响。（4）用具有线粒体靶向能力的三苯基膦阳离子（TPP）标记抗癌药物硒纳米颗粒（SeNPs）,将进入细胞内的SeNPs准确定位至线粒体,提升SeNPs产生的活性氧物种（ROS）对线粒体的氧化损伤效率,改善了SeNPs的抗肿瘤效果,使SeNPs的给药量降低以及进一步的正常组织细胞毒副作用降低成为可能。本文希望通过以上研究,构建具有高灵敏度的肿瘤标志物生物传感器,为肿瘤的早期检测与诊断提供参考,同时通过细胞器靶向改性及精准调控肿瘤识别靶向受体的排布,进一步提高抗肿瘤药物的肿瘤靶向能力,以弥补传统抗肿瘤药物对正常组织器官产生高毒性的缺点。
胡丽娟[9]（2007）在《连黛片对大肠癌端粒酶活性及hTERT mRNA表达的影响》文中进行了进一步梳理大肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于肺癌和乳腺癌，居第三，病因不明，预后较差，5年存活率不超过40％。在我国，随着人们生活水平的提高，膳食结构的变化，发病率有逐年上升趋势。近几年来，端粒酶在细胞衰老和癌变过程中的作用日益受到人们的重视，现代研究者普遍认为：端粒酶的激活是肿瘤形成过程中的关键步骤。本项目以连黛片（左金丸加青黛）为受试药，研究中药复方在对端粒酶活性、相关基因表达的影响，从分子生物学的角度寻找中药抑癌可能的新途径，这对进一步探讨中药抑癌作用机理有重要意义，为今后从更深层次研究中药抑癌奠定一定的基础，也为开发新药提供了依据。1、临床试验研究目的：观察连黛片对非根治性术后或化疗后复发的大肠癌患者的临床疗效及对端粒酶活性及其相关基因hTERTmRNA表达的影响。研究对象：35例大肠癌患者均来自广州中医药大学一附院2005．08—2006．08年间门诊及住院手术患者，经肠镜检查均为非根治性术后或化疗后复发患者。其中20例伴大肠腺瘤性息肉。研究方法：（1）采用TRAP—ELISA法检测肿瘤组织端粒酶相对活性，荧光定量PCR法检测肿瘤组织端粒酶hTERTmRNA的表达。观察35例大肠癌患者肿瘤组织端粒酶相对活性及端粒酶hTERTmRNA的表达。同时比较其与癌旁组织、正常组织、腺瘤性息肉端粒酶相对活性及端粒酶hTERTmRNA的表达的差异。（2）35例大肠癌患者按照单盲随机数字表法分为治疗组20例和对照组15例。治疗组20例大肠癌患者在不改变对症支持等常规用药基础上加服连黛片中药汤剂每次50ml（含黄连6g、吴茱萸1g、青黛3g），每日两次。对照组15例大肠癌除不服连黛片外，其他与治疗组完全相同。疗程1个月，期间不使用与连黛片相类似的其它药物。分别观察两组患者主要临床症状积分的变化、中医症候疗效比较；两组患者肿瘤组织局部端粒酶活性及其相关基因hTERTmRNA表达量的变化。结果：（1）大肠癌组织中端粒酶活性增强及端粒酶hTERTmRNA的高表达。端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA的表达在正常组织、癌旁组织、腺瘤性息肉、大肠癌组织呈递增趋势。其与年龄、性别、大肠癌病变部位及病理类型无关，随肿瘤组织学分级及临床分期的增加而呈上升趋势。（2）疗程结束后，治疗组患者症状体征较对照组有改善。连黛片组在大便干或烂、腹胀或腹痛、呕吐或恶心、烦热口渴等症状优于对照组，在改善食欲、神疲乏力、口干口苦、纳呆等症状与对照组相当。在中医证候疗效方面，20例治疗组中显效为4例，有效为11例，无效为5例；15例对照组的显效为为1例，有效为4例，无效为10例。疗程结束后，肿瘤组织局部端粒酶活性及其相关基因hTERTmRNA表达量较对照组明显下降。在热毒内结和湿热下注二个证型的患者中，以热毒内结型中医证候疗效改善明显，肿瘤组织局部端粒酶活性及其相关基因hTERTmRNA表达量下降最为明显。结论：连黛片能减轻患者临床症状体征，尤其对辩证为热毒聚于大肠的患者的症状改善尤为明显。可能的机制之一是通过改变与肿瘤密切相关的端粒酶活性及hTERTmRNA表达量。2、动物试验研究目的：观察连黛片对实验性HT29大肠癌裸鼠移植瘤端粒酶活性及其相关基因hTERTmRNA表达的影响。研究方法：采用皮下注射HT29大肠癌细胞株制作结肠癌裸鼠模型，将皮下移植的裸小鼠随机分为3组。每组均在初次接种后7天进行灌胃治疗，连续灌胃一月。中药治疗组用连黛片灌胃治疗（每只灌胃2g／kg），西药治疗组用端粒酶抑制剂3’—叠氮3’—脱氧胸腺核苷（叠氮胸苷，AZT，150mg／kg）灌胃治疗，空白对照组予以生理盐水灌胃。动态观察各组裸鼠肿瘤体积变化，用游标卡尺测量每组裸鼠移植瘤的大小。采用TRAP-ELISA方法检测肿瘤组织端粒酶活性变化，荧光定量PCR检测肿瘤组织端粒酶hTERTmRNA的表达，结果进行统计学分析。结果：（1）初次接种后7天各组裸鼠皮下肿瘤大小比较无显着性差异，并用于下一步的试验。（2）一个月后治疗组裸鼠皮下肿瘤体积比较无明显差异，两组治疗组裸鼠皮下肿瘤块大小与空白组比较有差异；（3）空白对照组端粒酶相对活性较两组治疗组明显增强；空白对照组端粒酶hTERTmRNA的表达增多。中药组与AZT组端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA的表达改变无显着性差异。结论：连黛片能抑制人大肠癌HT29裸小鼠移植瘤的增值，其机制之一可能是减少hTERTmRNA的表达，从而降低肿瘤组织端粒酶的活性。提示中医药防治疗大肠癌具有一定优势，深入开展以端粒酶为靶点的中医药治疗研究必将为防治大肠癌或其癌前病变开辟新的途径。
潘风光[10]（2007）在《MDV致瘤的分子机理》文中认为马立克氏病（Marek’s Disease,MD）是能用实验方法证明的有致瘤性的第一个疱疹病毒,也是第一个能用疫苗来预防的肿瘤病,因此是研究肿瘤发病机理的理想模型。由于MDV-I具有快速致瘤的特性,因此我们完全有理由推测病毒本身具有致瘤基因。目前认为,与致瘤相关的基因有132重复序列（132-bpr）、pp38和meq,在目前已得到鉴定的46个MDV基因组中特异的基因中,仅有meq与132-bpr 2个基因是MDV-I所特有的,但132-bpr与病毒致弱程度或细胞上传代的次数有关,因此人们将马立克氏病毒致瘤的更多的焦点集中到meq上。meq编码一个含339个氨基酸的蛋白质,N-端为碱性区含有亮氨酸拉链结构,C-端为富含脯氨酸重复的区域,具有与肿瘤蛋白fos/jun家族相似的结构。因此,人们把它当作一种细胞核内的致瘤基因,但目前尚未阐明其与MDV致瘤作用的关系。本研究旨在通过潜伏感染期检测到的MDV基因组中的meq、L-meq基因为切入点,比较两者核苷酸的差别序列和氨基酸的差异序列,并探索meq、L-meq基因对肿瘤抑制基因p53、端粒酶催化亚基chTERT和端粒酶的模板chTR表达的影响,并用2-DE技术分析meq、L-meq基因及其差异序列转染CEF前后的差异蛋白质,为鸡马立克氏肿瘤病的研究和肿瘤的发生机制提供理论依据。
二、端粒酶与肿瘤研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、端粒酶与肿瘤研究（论文提纲范文）
（1）人端粒酶逆转录酶hTERT鉴别乳腺良恶性肿瘤的Meta分析（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 文献综述:人端粒酶逆转录酶h TERT在乳腺肿瘤诊断治疗中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的文章 |
（2）DNA纳米结构的构建及其在肿瘤标志物成像分析中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 选题依据 |
| 1.1 研究意义 |
| 1.2 研究现状及不足 |
| 1.2.1 常见的肿瘤标志物及检测方法 |
| 1.2.2 肿瘤标志物的胞内原位成像 |
| 1.2.3 DNA纳米结构及其在肿瘤标志物成像分析中的应用 |
| 1.2.4 DNA纳米结构在药物递送及肿瘤治疗中的应用 |
| 1.2.5 存在的主要问题 |
| 1.3 本研究的目标、内容 |
| 1.3.1 研究目标 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 1.3.3 研究方案及技术路线 |
| 第2章 基于DNA四面体上的CHA循环实现两种miRNA的精准成像 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 仪器 |
| 2.2.2 材料 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 实验原理 |
| 2.3.2 DNA四面体的合成表征 |
| 2.3.3 DTFH合成表征 |
| 2.3.4 CHA循环验证 |
| 2.3.5 可行性验证 |
| 2.3.6 实验条件的优化 |
| 2.3.7 mi R-21/155 检测的线性和选择性 |
| 2.3.8 四面体内CHA 循环与游离CHA 循环对比 |
| 2.3.9 DTFH的生物相容性实验 |
| 2.3.10 DTFH的核酸酶稳定性实验 |
| 2.3.11 DTFH的细胞成像实验 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 基于DNA纳米片的AND逻辑门用于两种miRNA的原位成像 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 仪器 |
| 3.2.2 材料 |
| 3.2.3 实验内容 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 DNA纳米片的合成表征 |
| 3.3.2 基于纳米片的级联长程能量转移的构建 |
| 3.3.3 级联能量转移效率的计算 |
| 3.3.4 染料分子之间距离的调整 |
| 3.3.5 供受体数量对能量转移效率的影响 |
| 3.3.6 级联长程能量转移的应用 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 核仁素靶向及端粒酶响应DNA纳米管实现肿瘤精准诊疗 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 仪器 |
| 4.2.2 材料 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 RTA-DNA偶联物的制备及表征 |
| 4.3.2 AS1411/nanotube/RTA的制备及表征 |
| 4.3.3 端粒酶响应的纳米管的打开 |
| 4.3.4 核仁素的核酸适配体介导的精准靶向 |
| 4.3.5 DNA纳米管的核酸酶稳定性 |
| 4.3.6 活细胞内端粒酶响应的FRET成像 |
| 4.3.7 活细胞内RTA的可控释放 |
| 4.3.8 细胞毒性实验 |
| 4.3.9 荷瘤小鼠的抗肿瘤验证 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 全文总结及展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 论文创新点 |
| 5.3 展望 |
| 5.3.1 构建多种肿瘤标志物的联合成像分析方法 |
| 5.3.2 开发多模式的协同肿瘤治疗方法 |
| 参考文献 |
| 缩写符号对照表 |
| 攻读博士学位期间科研成果 |
| 致谢 |
（3）外周血白细胞端粒长度与端粒酶活性对非小细胞肺癌患者预后的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 端粒长度、端粒酶与非小细胞肺癌患者预后相关性研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）基于PI3K/AKT/mTOR信号通路和端粒酶逆转录酶靶标的小分子药物的设计、合成及构效研究（论文提纲范文）
| 专用词缩写表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 基于PI3K/AKT/mTOR信号通路紫草素衍生物的设计合成及抗肿瘤活性测试 |
| 1 前言 |
| 2 目标化合物的设计 |
| 3 材料与方法 |
| 3.1 试剂和仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 细胞培养 |
| 3.4 细胞增殖实验 |
| 3.5 细胞周期检测试验 |
| 3.6 细胞凋亡实验 |
| 3.7 集落克隆实验 |
| 3.8 酸性囊泡检测试验 |
| 3.9 GFP-LC3 转染实验 |
| 3.10 免疫荧光检测LC3 |
| 3.11 Western Blot分析 |
| 3.12 统计分析 |
| 4 实验结果 |
| 5 结论 |
| 第二章 新型端粒酶逆转录酶嘧啶类抑制剂的设计、合成及活性构效关系研究 |
| 1 前言 |
| 2 目标化合物的设计 |
| 3 材料与方法 |
| 3.1 试剂和仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 细胞培养 |
| 3.4 CCK-8 细胞增殖实验 |
| 3.5 端粒酶活性检测实验 |
| 3.6 细胞周期检测试验 |
| 3.7 细胞凋亡实验 |
| 3.8 分子对接方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 单晶数据解析 |
| 4.2 抗增殖活性分析 |
| 4.3 细胞周期结果分析 |
| 4.4 细胞凋亡实验分析 |
| 4.5 分子对接结果分析 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 附图:部分中间体和产品谱图 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 综述 小分子端粒酶抑制剂研究进展 |
| 参考文献 |
（6）基于新型无酶生物传感体系的端粒酶及miRNA检测成像技术的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 端粒和端粒酶概述 |
| 1.1.1 端粒和端粒酶的发现 |
| 1.1.2 端粒和端粒酶的组成结构 |
| 1.1.3 端粒和端粒酶的功能 |
| 1.1.4 端粒和端粒酶的研究应用 |
| 1.1.5 端粒酶的测定 |
| 1.2 基于生物传感器的检测方法 |
| 1.2.1 生物传感器的检测原理 |
| 1.2.2 电化学生物传感器检测 |
| 1.2.3 荧光生物传感器检测 |
| 1.2.4 其他生物传感器检测 |
| 1.3 核酸纳米结构在检测中的应用 |
| 1.3.1 核酸纳米结构的可控组装 |
| 1.3.2 核酸纳米结构在体外生物传感中的应用 |
| 1.3.3 核酸纳米结构在细胞内成像中的应用 |
| 1.4 本课题的研究意义 |
| 第2章 基于金纳米粒子的端粒酶直接电化学生物传感 |
| 2.1 背景介绍 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 材料和化学品 |
| 2.2.2 细胞培养和端粒酶提取 |
| 2.2.3 凝胶电泳 |
| 2.2.4 AuNPs的制备和表征 |
| 2.2.5 工作电极预处理和实验条件优化 |
| 2.2.6 端粒酶延伸和AuNPs捕获 |
| 2.2.7 电化学测量 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 端粒酶活性测定的原理 |
| 2.3.2 AuNPs图像和实验优化 |
| 2.3.3 使用凝胶电泳检测端粒酶活性 |
| 2.3.4 生物传感器构建的表征 |
| 2.3.5 端粒酶活性的量化 |
| 2.3.6 传感器的评估 |
| 2.4 结论 |
| 第3章 基于比率型电化学传感策略的端粒酶活性超灵敏检测 |
| 3.1 背景介绍 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验材料和试剂 |
| 3.2.2 二硫键的还原反应 |
| 3.2.3 细胞培养和端粒酶提取 |
| 3.2.4 端粒酶活性检测过程 |
| 3.2.5 电化学测量 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 端粒酶检测的原理 |
| 3.3.2 电极修饰过程的表征 |
| 3.3.3 比率传感器的表征 |
| 3.3.4 端粒酶活性的检测 |
| 3.3.5 端粒酶抑制剂的分析 |
| 3.3.6 不同细胞系端粒酶活性分析 |
| 3.4 结论 |
| 第4章 基于荧光共振能量转移和DNA纳米探针的比率型传感器用于端粒酶活性分析 |
| 4.1 背景介绍 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 材料和化学品 |
| 4.2.2 DNA四面体的制备 |
| 4.2.3 细胞培养及端粒酶的提取 |
| 4.2.4 凝胶电泳实验 |
| 4.2.5 DNA探针的毒性检测 |
| 4.2.6 端粒酶活性的体外定量 |
| 4.2.7 原位成像 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 传感原理 |
| 4.3.2 检测体系的适用性 |
| 4.3.3 检测体系的荧光定性分析 |
| 4.3.4 DNA纳米探针的毒性分析 |
| 4.3.5 荧光信号的浓度优化 |
| 4.3.6 端粒酶活性的体外分析 |
| 4.3.7 特异性调查 |
| 4.3.8 细胞内成像 |
| 4.4 结论 |
| 第5章 基于miRNA触发的DNA酶步行器用于端粒酶活性的逻辑门传感检测 |
| 5.1 背景介绍 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 实验试剂和材料 |
| 5.2.2 AuNPs和MnO_2的合成 |
| 5.2.3 AuNPs探针和DNA酶的预处理 |
| 5.2.4 细胞培养和端粒酶提取 |
| 5.2.5 端粒酶和miRNA的体外检测和分析 |
| 5.2.6 检测体系的特异性和毒性测定 |
| 5.2.7 共聚焦荧光显微镜的细胞内成像 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 实验原理 |
| 5.3.2 检测体系的荧光表征 |
| 5.3.3 反应条件的优化 |
| 5.3.4 端粒酶和miRNA体外传感检测 |
| 5.3.5 检测体系的评估 |
| 5.3.6 细胞毒性实验 |
| 5.3.7 目标物的共聚焦成像 |
| 5.4 总结 |
| 第6章 基于核酸四面体和荧光探针介导的端粒酶与MiR-21的检测和细胞内成像 |
| 6.1 背景介绍 |
| 6.2 实验部分 |
| 6.2.1 化学试剂和仪器 |
| 6.2.2 TDNs-Flare探针的制造 |
| 6.2.3 细胞培养和端粒酶提取 |
| 6.2.4 端粒酶和miR-21的体外评估 |
| 6.2.5 TDNs-Flare探针的细胞特异性和毒性测定 |
| 6.2.6 共聚焦荧光显微镜的细胞内成像 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 TDNs-Flare探针检测端粒酶和miR-21的原理 |
| 6.3.2 TDNs-Flare探针的结构和光学表征 |
| 6.3.3 端粒酶和miR-21的体外检测 |
| 6.3.4 检测方法的稳定性和细胞毒性 |
| 6.3.5 TDNs-Flare探针用于原位成像 |
| 6.4 结论 |
| 第7章 论文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与其他研究成果 |
（7）纳米银抗肿瘤活性及对肺组织的毒理学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 纳米银概述 |
| 1.2.1 纳米银合成方法 |
| 1.2.2 纳米银医学应用 |
| 1.3 纳米银抗肿瘤应用前景 |
| 1.3.1 纳米银抗肿瘤研究进展 |
| 1.3.2 纳米银抗肿瘤机制 |
| 1.3.3 靶向端粒/端粒酶抗肿瘤前景 |
| 1.4 纳米银暴露与健康风险 |
| 1.4.1 纳米银肺组织暴露途径 |
| 1.4.2 纳米银长期低剂量暴露的健康风险 |
| 1.4.3 细胞衰老对肺组织慢性疾病的影响 |
| 1.5 论文研究目的和主要内容 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 纳米银 |
| 2.2 主要试剂、抗体、耗材和仪器 |
| 2.2.1 试剂 |
| 2.2.2 抗体及质粒 |
| 2.2.3 耗材 |
| 2.2.4 仪器 |
| 2.3 常用工作液的制备 |
| 2.4 细胞培养 |
| 2.4.1 细胞传代 |
| 2.4.2 细胞冻存 |
| 2.5 纳米银溶液配制及细胞暴露 |
| 2.6 细胞活力实验 |
| 2.7 克隆形成实验 |
| 2.8 稳转细胞株构建 |
| 2.9 荧光法标记衰老细胞 |
| 2.10 一步法TUNEL细胞凋亡检测 |
| 2.11 RNA提取 |
| 2.12 ELISA法测定PGE2浓度 |
| 2.13 蛋白质样品提取与制备 |
| 2.14 组蛋白提取 |
| 2.15 蛋白免疫印迹 |
| 2.16 端粒酶活性检测 |
| 2.16.1 端粒酶提取 |
| 2.16.2 端粒酶活性检测 |
| 2.17 基因组DNA提取 |
| 2.18 端粒长度测定 |
| 2.19 核/质蛋白分离提取 |
| 2.20 PI单染法检测细胞周期 |
| 2.21 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡 |
| 2.22 动物分组及处理 |
| 2.23 动物样本采集与处理 |
| 2.24 H&E染色 |
| 2.25 石蜡切片免疫组化 |
| 2.26 石蜡切片Masson染色 |
| 2.27 统计分析 |
| 第3章 纳米银调控端粒端粒酶发挥抗肿瘤活性 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 纳米银表征 |
| 3.2.2 纳米银对胞外/胞内端粒酶活性的影响 |
| 3.2.3 纳米银对肿瘤细胞端粒长度及染色体不稳定性的影响 |
| 3.2.4 端粒酶活性变化影响纳米银的肿瘤细胞杀伤能力 |
| 3.2.5 端粒酶活性变化对肿瘤细胞辐射敏感性的影响 |
| 3.2.6 纳米银长期暴露对肿瘤细胞抗性的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 低剂量纳米银长期暴露对肺细胞衰老的影响及机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 低剂量纳米银长期暴露对人胚肺成纤维细胞(MRC5)活力的影响 |
| 4.2.2 低剂量纳米银长期暴露诱导的细胞衰老水平变化 |
| 4.2.3 细胞周期阻滞在低剂量纳米银长期暴露诱导的细胞衰老中的作用 |
| 4.2.4 NFκB信号通路在低剂量纳米银长期暴露诱导细胞衰老中的作用 |
| 4.2.5 细胞凋亡在低剂量纳米银长期暴露诱导的衰老细胞清除中的作用 |
| 4.2.6 低剂量纳米银长期暴露对小鼠肺组织衰老的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 总结与展望 |
| 5.1 研究总结 |
| 5.1.1 总结 |
| 5.1.2 创新性 |
| 5.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 附录A 图清单 |
| 附录B 缩略词表 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（8）无机纳米颗粒与核酸纳米材料在肿瘤细胞诊断及靶向治疗中的应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 无机纳米材料与肿瘤诊断 |
| 1.2.1 生物传感器概述 |
| 1.2.2 金纳米材料与肿瘤诊断 |
| 1.2.3 量子点与肿瘤诊断 |
| 1.2.4 纳米金刚石与肿瘤诊断 |
| 1.2.5 磁性纳米材料与肿瘤诊断 |
| 1.3 核酸纳米材料与肿瘤诊断 |
| 1.3.1 核酸纳米材料概述 |
| 1.3.2 核酸适配体与肿瘤诊断 |
| 1.3.3 核酸引物与肿瘤诊断 |
| 1.4 无机纳米材料与肿瘤治疗 |
| 1.4.1 金纳米材料与肿瘤治疗 |
| 1.4.2 硒纳米材料与肿瘤治疗 |
| 1.4.3 硅纳米材料与肿瘤治疗 |
| 1.5 核酸纳米材料与肿瘤治疗 |
| 1.5.1 DNA折纸结构与肿瘤治疗 |
| 1.5.2 核酸枝状大分子(Dendrimer)与肿瘤治疗 |
| 1.5.3 基于滚环扩增(RCA)的DNA纳米结构与肿瘤治疗 |
| 1.6 选题思路 |
| 第二章 检测端粒酶活性的DNA纳米传感器研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.1.1 端粒酶与肿瘤诊断 |
| 2.1.2 聚集诱导发光(AIE)分子 |
| 2.1.3 本章研究目标 |
| 2.2 实验仪器与材料 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法与步骤 |
| 2.3.1 端粒酶提取 |
| 2.3.2 引物延伸反应 |
| 2.3.3 体系荧光测试 |
| 2.3.4 酶联免疫吸附(Elisa)测试 |
| 2.3.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测试 |
| 2.3.6 端粒酶延伸反应特异性测试 |
| 2.3.7端粒酶活性抑制实验 |
| 2.3.8 S1 核酸酶降解实验 |
| 2.3.9 细胞内端粒酶水平检测 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 实验原理 |
| 2.4.2 AIE效应验证 |
| 2.4.3 端粒酶延伸反应条件优化 |
| 2.4.4 检测体系背景荧光优化 |
| 2.4.5 检测特异性对比 |
| 2.4.6 端粒酶提取物荧光响应测试 |
| 2.4.7 细胞内端粒酶活性检测 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 基于荧光纳米金刚石的生物传感器设计及其应用 |
| 3.1 引言 |
| 3.1.1 MicroRNA与肿瘤诊断 |
| 3.1.2 荧光纳米金刚石概述 |
| 3.1.3 本章研究目标 |
| 3.2 实验仪器与材料 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法与步骤 |
| 3.3.1 双链制备 |
| 3.3.2 吸收、荧光光谱测定 |
| 3.3.3 FND-C1 的制备 |
| 3.3.4 MNP-C2 的制备 |
| 3.3.5 生物传感器FND-DNA-MNP的自组装 |
| 3.3.6 传感器对靶标miR-21 的响应 |
| 3.3.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测试 |
| 3.3.8 动态光散射(DLS)表征颗粒粒径变化 |
| 3.3.9 纳米颗粒的透射电子显微镜(TEM)表征 |
| 3.3.10 荧光弛豫时间测试 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 实验原理 |
| 3.4.2 链置换反应的荧光与凝胶电泳表征 |
| 3.4.3 自组装反应优化 |
| 3.4.4 FND与 MNP的投料比优化 |
| 3.4.5 传感器FND-DNA-MNP的表征 |
| 3.4.6 荧光弛豫时间表征 |
| 3.4.7 传感器对靶标miR-21 的原位响应表征 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 基于DNA折纸技术探究肿瘤细胞靶向因子的最佳分布 |
| 4.1 引言 |
| 4.1.1 药物载体 |
| 4.1.2 转铁蛋白受体 |
| 4.1.3 DNA折纸纳米技术 |
| 4.1.4 本章研究目标 |
| 4.2 实验仪器与材料 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法与步骤 |
| 4.3.1 DNA折纸结构制备 |
| 4.3.2 DNA折纸结构纯化 |
| 4.3.3 生物素的NHS化修饰 |
| 4.3.4 转铁蛋白(Tf)的生物素化修饰 |
| 4.3.5 DNA折纸结构的转铁蛋白定点修饰 |
| 4.3.6 DNA折纸结构的Cy5 荧光基团杂交 |
| 4.3.7 琼脂糖凝胶电泳测试 |
| 4.3.8 DNA折纸结构的透射电子显微镜(TEM)表征 |
| 4.3.9 DNA折纸结构的原子力显微镜(AFM)表征 |
| 4.3.10细胞摄取实验 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 实验原理 |
| 4.4.2 DNA折纸结构ONR的设计与表征 |
| 4.4.3 ONR-Tf结构的表征 |
| 4.4.4 ONR结构的Cy5 标记表征 |
| 4.4.5 不同ONR结构的细胞摄取效率对比 |
| 4.4.6 Tf-TfR识别过程抑制实验 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 线粒体靶向无机硒纳米颗粒的抗肿瘤研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.1.1 硒纳米颗粒 |
| 5.1.2 ROS与细胞凋亡 |
| 5.1.3 本章研究目标 |
| 5.2 实验仪器与材料 |
| 5.2.1 实验试剂 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.3 实验方法与步骤 |
| 5.3.1 HSA蛋白的TPP功能化修饰 |
| 5.3.2 HSA与 HSA-TPP的荧光标记 |
| 5.3.3 cHSA的制备与标记 |
| 5.3.4 硒纳米颗粒(SeNPs)的制备 |
| 5.3.5 蛋白质的Maldi-Tof-MS表征 |
| 5.3.6 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测试 |
| 5.3.7 SeNPs的透射电子显微镜(TEM)成像表征 |
| 5.3.8 功能化修饰蛋白与SeNPs的细胞毒性测试 |
| 5.3.9活细胞内线粒体共定位实验 |
| 5.3.10 活细胞内ROS水平测试 |
| 5.3.11 活细胞内线粒体膜电位变化测试 |
| 5.3.12活细胞内ROS抑制实验 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 实验原理 |
| 5.4.2 蛋白质HSA的正电荷化修饰与表征 |
| 5.4.3 cHSA@SeNPs的表征与胞内测试 |
| 5.4.4 蛋白质HSA的功能化修饰与表征 |
| 5.4.5 HSA-TPP靶向修饰蛋白的生物相容性探究 |
| 5.4.6 SeNPs的制备与表征 |
| 5.4.7 靶向基团修饰对SeNPs抗肿瘤效果提升的机理研究 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 工作展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读博士学位期间已发表与待发表论文目录 |
（9）连黛片对大肠癌端粒酶活性及hTERT mRNA表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 第一节 端粒、端粒酶与大肠癌研究进展 |
| 1 端粒 |
| 1.1 端粒的由来 |
| 1.2 端粒的功能 |
| 1.3 端粒DNA |
| 1.4 人的端粒结合蛋白 |
| 2 端粒酶 |
| 2.1 端粒酶结构、功能 |
| 2.1.1 人端粒酶RNA |
| 2.1.2 端粒酶相关蛋白 |
| 2.1.3 人端粒酶催化亚单位 |
| 3 端粒长度、端粒酶活性调节机制 |
| 3.1 端粒的长度调节机制 |
| 3.2 端粒酶活性调节机制 |
| 4 端粒长度 端粒酶与肿瘤发生 |
| 4.1 端粒长度与肿瘤发生 |
| 4.2 端粒酶与肿瘤发生 |
| 5 端粒酶活性抑制与肿瘤抑制 |
| 6 端粒长度、端粒酶在大肠肿瘤发生发展、诊断中的作用 |
| 6.1 端粒长度与大肠癌 |
| 6.2 端粒酶活性与大肠癌发生发展的关系 |
| 6.3 端粒酶在大肠癌早期诊断及预后判断中的作用 |
| 7 中医药与端粒酶 |
| 8 展望 |
| 第二节 中医药抗大肠癌的研究思路 |
| 1 中医辨证分型配合手术、放化疗治疗 |
| 2 中医固定处方治疗大肠癌术后病人 |
| 3 目前国内比较公认的抗大肠癌中成药 |
| 4 中药单方制剂 |
| 5 作用机理 |
| 6 中医学对大肠癌肿瘤转移的认识及对策 |
| 7结语 |
| 第二部分 临床试验研究 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 标本来源 |
| 1.2 标本的采集与处理 |
| 1.3 大肠癌西医诊断标准 |
| 1.4 大肠癌分期方案 |
| 1.5 卡劳夫斯基(Karnofsky)体力状况评分标准 |
| 1.6 大肠癌中医辨证分型 |
| 1.7 病例纳入标准 |
| 1.8 病例排除标准 |
| 1.9 给药方法 |
| 1.10 临床症状的观察与判定方法 |
| 1.11 中医证候疗效评定标准 |
| 1.12 安全性观测: |
| 2 试验材料和方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 端粒酶活性检测操作方法 |
| 2.4 组织hTERTmRNA的提取 |
| 2.5 荧光定量PCR反应 |
| 2.6 资料统计 |
| 3 结果 |
| 4.讨论 |
| 4.1 荧光定量PCR的原理 |
| 4.2 荧光定量PCR的特点 |
| 4.3 端粒酶活性与大肠癌的关系 |
| 4.4 端粒酶hTERTmRNA表达与大肠癌的关系 |
| 4.5 方药解析 |
| 4.6 连黛片现代研究 |
| 4.7 连黛片的临床意义 |
| 第三部分 动物试验研究 |
| 1、试验资料 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 检测指标 |
| 1.3.1 抑瘤率 |
| 1.3.2 肿瘤病理形态学检查 |
| 1.3.3 观察移植瘤端粒酶相对活性及hTERTmRNA的表达量 |
| 1.4 检测端粒酶相对活性及hTERTmRNA表达的方法 |
| 1.5 资料统计 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 第四部分 结语 |
| 第五部分 设想与展望 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 附图 |
| 在读期间发表及待发表的论文目录 |
| 致谢 |
（10）MDV致瘤的分子机理（论文提纲范文）
| 提要 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 鸡马立克氏病与马立克氏病毒的研究进展 |
| 1 MD 的研究进展 |
| 2 MDV 的分子生物学研究现况 |
| 第二章 端粒和端粒酶的研究进展 |
| 1 端粒和端粒酶的研究进展 |
| 2 端粒酶活性的调控 |
| 3 端粒酶活性检测的研究进展 |
| 4 端粒、端粒酶与肿瘤 |
| 第三章 P53 与细胞周期调控研究进展 |
| 1 细胞周期 |
| 2 细胞周期限制点的调控 |
| 3 鸡细胞周期因子的研究进展 |
| 4 端粒酶与细胞周期和细胞周期调控因子的关系 |
| 第四章 蛋白质组学研究内容及技术概况 |
| 1 蛋白质组学概念及研究内容 |
| 2 蛋白质组学研究技术 |
| 3 比较蛋白质组学及其主要进展 |
| 4 蛋白质组研究策略 |
| 5 双向凝胶电泳技术研究及其在蛋白质组学中的应用 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 MD 京-1 株感染鸡后不同时期meq 基因的动态监测 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 meq 基因在CEF 中的表达及对p53、chTERT、chTR 表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 L-meq 基因在CEF 中的表达及对p53、chTERT、chTR 表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 meq 和L-meq 及L-meq-180 序列在CEF 中的表达及对p53、 chTERT、chTR 表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 双向凝胶电泳(2-DE)比较转染 CEF 前后蛋白质组差异的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的主要论文 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 个人简介 |
四、端粒酶与肿瘤研究（论文参考文献）
- [1]人端粒酶逆转录酶hTERT鉴别乳腺良恶性肿瘤的Meta分析[D]. 唐铃丰. 重庆医科大学, 2021(01)
- [2]DNA纳米结构的构建及其在肿瘤标志物成像分析中的应用[D]. 李春宏. 西南大学, 2021
- [3]外周血白细胞端粒长度与端粒酶活性对非小细胞肺癌患者预后的影响[D]. 刘德豪. 承德医学院, 2021(01)
- [4]基于PI3K/AKT/mTOR信号通路和端粒酶逆转录酶靶标的小分子药物的设计、合成及构效研究[D]. 沈晓宝. 安徽医科大学, 2021(01)
- [5]端粒与端粒酶研究在肺癌中的临床应用前景与挑战[J]. 韩森,马旭,方健. 中国肺癌杂志, 2021(01)
- [6]基于新型无酶生物传感体系的端粒酶及miRNA检测成像技术的研究[D]. 孟凡渝. 中国科学技术大学, 2020(01)
- [7]纳米银抗肿瘤活性及对肺组织的毒理学研究[D]. 陈彪. 中国科学技术大学, 2020(01)
- [8]无机纳米颗粒与核酸纳米材料在肿瘤细胞诊断及靶向治疗中的应用研究[D]. 庄原. 华中科技大学, 2019(03)
- [9]连黛片对大肠癌端粒酶活性及hTERT mRNA表达的影响[D]. 胡丽娟. 广州中医药大学, 2007(06)
- [10]MDV致瘤的分子机理[D]. 潘风光. 吉林大学, 2007(03)