一、肺癌癌胚抗原升高对机体免疫系统抑制的研究（论文文献综述）
王剑锋[1]（2021）在《冷消融联合中药治疗老年晚期非小细胞肺癌的临床研究和实验研究》文中研究说明[研究背景]老年晚期非小细胞肺癌（NSCLC,nonsmall-cell lung cancer）具有极高的发病率和死亡率,对于驱动基因阴性的患者,化疗是指南推荐的基础治疗方案,然而很多老年晚期NSCLC患者身体储备较差不能化疗或不能耐受化疗副作用不得不停止化疗,还有部分患者化疗效果一般,化疗后很快出现进展,因此治疗手段相对局限。“冷消融联合中药”治疗模式在中医理论指导下,以中医辨证治疗为主线,以冷消融微创治疗为关键节点,具有低损伤、可持续的特点。前期诸多研究结论显示冷消融联合中药模式临床效果较好,然而针对老年患者这一特定人群的研究较少,冷消融联合中药这一治疗模式的疗效能否达到常规化疗水平,是否能够为老年晚期NSCLC患者,特别是不能化疗或者化疗效果不好的患者提供新的治疗选择,还需要进一步评价;同时通过总结该模式的“优势人群”特征,研究冷消融联合中药队列患者术后的治法和组方用药,以及作用机制有望进一步优化该治疗模式,增加患者获益。[研究目的]临床部分:1.评价冷消融联合中药模式治疗老年晚期NSCLC患者的疗效能否达到常规化疗水平,以期为这类患者特别是不能化疗或化疗效果不好的患者提供可持续、低损伤的治疗选择;2.总结冷消融联合中药治疗模式的“优势人群”特征,为临床决策提供参考;3.研究冷消融联合中药队列患者手术前后中医证候要素变化和治法组方规律,探索冷消融术后中医证候变化特点及适用方药,以期优化该模式提高治疗效果。实验部分:1.评价冷消融联合中药对比化疗、单纯冷消融和单纯中药干预老龄肺癌小鼠的疗效;2.基于免疫调控和血管生成研究冷消融联合中药干预老龄肺癌小鼠的作用机制。[研究内容]临床部分1.倾向得分匹配基线信息:基于多中心肺癌真实世界治疗数据,纳入316例样本,分为冷消融联合中药队列、化疗队列,使用倾向得分匹配方法减少混杂因素匹配87对;2.生存分析:比较两队列中位OS,中位PFS和生存率,COX回归筛选预后独立影响因素;3.筛选“优势人群”:通过Logistic回归分析“冷消融联合中药模式”的优势人群特征;4.评价疗效与安全性:评价两队列实体瘤疗效,客观缓解率、疾病控制率,KPS评分,不良反应;5.中医证素变化和组方治法研究:研究冷消融联合中药队列的中医证素变化和术后的治法组方规律。实验部分实验分为实验一和实验二两部分,两组造模、分组及干预相同。1.造模:建立老龄Lewis肺癌小鼠模型。2.分组:分别随机分组40只和45只老龄Lewis肺癌模型小鼠为①模型组,②冷消融联合中药组,③冷消融组,④化疗组,⑤中药组。3.干预:①模型组:仅造模,②联合组:冷冻消融手术和中药灌胃1次/天,共14天;③冷消融组:冷冻消融手术;④化疗组:腹腔注射顺铂3mg/kg,1次/周,共2周;⑤中药组:中药灌胃1次/天,共14天;隔天记录体质量并测量瘤径,非中药干预组予生理盐水灌胃,非化疗干预组予腹腔注射生理盐水,非冷消融干预组予切开缝合。4.指标:实验一观察生存期;实验二计算小鼠的脾脏和胸腺的脏器指数,肿瘤生长/转移抑制率,流式检测小鼠脾脏组织CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值;ELISA检测小鼠血清中IFNγ、IL-2、IL-10的表达;WB检测小鼠肺和肿瘤组织HIF-1α、VEGF、MMP-2和MMP-9的表达。[研究结果]临床部分1.冷消融联合中药队列（下文简称“联合队列”）和化疗队列分别入组96和220例,倾向得分匹配87对,两组中位OS分别为12个月和10.3个月（P>0.05）,两组6个月、1年、2年、3年生存率无显着差异（P>0.05）。2.匹配后联合队列和化疗队列中位PFS分别为4.7个月和4个月（P<0.05）,6个月无进展生存率分别为34.2%和18.4%（P<0.05）,联合队列患者PFS>6个月的机会是化疗队列的3倍。3.生存期影响因素分析:①联合队列,LY%是独立保护因素,CCI和临床分期是独立危险因素。②化疗队列,LY%和KPS是独立保护因素,NEUT%,KPS,CCI、NLR和临床分期是独立危险因素。4.优势人群特征:本研究中冷消融联合中药队列优势人群特征:年龄≤80岁且优势与年龄呈负相关;CCI评分≤9;Ⅲb、Ⅲc、Ⅳa期;LY%>20%。5.KPS评分:治疗后冷消融联合中药队列KPS>化疗队列患者KPS（P<0.05）。6.实体瘤疗效评价:联合队列的疾病控制率26.83%>化疗队列13.79%（P<0.05）。7.本次研究冷消融联合中药队列患者病位证素以肺、脾、肾为主;病性证素虚症以气虚、阳虚、阴虚为主,实证以血瘀、痰湿为主,冷消融术后血瘀、阳虚证素显着增加（P<0.05）;气虚用黄芪、五味子等;阴虚用麦冬、熟地等,健脾益肾用茯苓、白术等;阳虚用细辛、干姜等;血瘀用乳香、没药、三七等;痰湿用半夏、陈皮等;痰热用川贝母、浙贝母等。8.通过聚类分析得出与冷冻消融术后契合的新方组合:①乳香,没药,干姜,山楂;②赤芍,红花,细辛,干姜,五味子;③桃仁,赤芍,红花,细辛,干姜,体现温通活血化瘀治法。实验部分实验一1.冷消融联合中药组（简称“联合组”）小鼠平均生存期28d明显高于模型组19d、化疗组22 d（P<0.05）;冷消融组24 d、中药组23 d和化疗组间无统计学差异（P>0.05）实验二1.体质量:化疗组小鼠的体质量明显低于模型组（P<0.05）;联合组、冷消融组和中药组这三组小鼠体质量均明显高于化疗组（P<0.05）。2.瘤体质量:联合组、冷消融组和化疗组的小鼠瘤体质量均小于中药组和模型组（P<0.05）。3.转移肺结节数量:联合组、冷消融组和化疗组小鼠肺转移结节数量少于模型组（P<0.05）,冷消融组、化疗组和中药组肺转移结节数量多于联合组（P<0.05）。冷消融联合中药组、冷消融组、化疗组和中药组的肿瘤生长抑制率分别为32.95%、25.85%、22.16%和1.98%,肺转移抑制率分别为50%、28.91%、23.67%和34.12%。4.脏器指数:各组小鼠脾脏指数和胸腺指数均大于模型组（P<0.05）;冷消融组、化疗组、中药组脾脏指数和胸腺指数均小于联合组（P<0.05）。5.流式细胞术检测:联合组和冷消融组小鼠脾脏组织中CD4+的表达均高于模型组（P<0.05）;各组CD4+的表达均低于联合组（P<0.05）;各组CD8+的表达低于模型组（P<0.05）;各组CD4+/CD8+均低于联合组（P<0.05）;联合组和冷消融组CD4+/CD8+>1。6.ELISA 检测6.1 IL-2:联合组、冷消融组、化疗组>模型组（P<0.05）;联合组>冷消融组、化疗组和中药组（P<0.05）。6.2IL-10:各组IL-10的表达<模型组（P<0.05）;联合组<冷消融组、化疗组和中药组（P<0.05）。6.3IFN-γ:各组IFN-γ的表达>模型组（P<0.05）;化疗组和中药组<联合组（P<0.05）;冷消融组>化疗组、中药组（P<0.05）;7.Western Blot 检测7.1 VEGF和HIF-1α①肺组织:各组VEGF和HIF-1α表达<模型组（P<0.05）;各组小鼠VEGF的表达>联合组（P<0.05）;冷消融组和中药组肺组HIF-1α表达>联合组（P<0.05）,中药组HIF-1α表达>冷消融组（P<0.05）。②肿瘤组织:各组VEGF和HIF-1α表达<模型组（P<0.05）;各组VEGF的表达均>联合组（P<0.05）。各组HIF-1α的表达>联合组（P<0.05）。7.2 MMP-2和MMP-9①肺组织:MMP-2:各组小鼠MMP-2表达<模型组（P<0.05）;联合组<其他各组（P<0.05）。MMP-9:联合组、冷消融组和化疗组<模型组（P<0.05）;中药组>联合组（P<0.05）。②肿瘤组织:MMP-2:联合组、冷消融组和化疗组<模型组（P<0.05）。MMP-9:联合组、冷消融组和化疗组<模型组（P<0.05）;中药组>联合组（P<0.05）。[研究结论]1.对于老年晚期NSCLC患者,冷消融联合中药治疗模式在延缓病情进展、增强近期疗效、提高患者生存质量方面优于常规化疗,在总体生存获益方面相当,因此可以作为老年晚期NSCLC患者,特别是不能化疗或者化疗效果不好的患者的治疗选择。2.年龄<80岁,CCI评分≤ 9,肿瘤临床分期为Ⅲb、Ⅲc、Ⅳa期,LY%>20%的老年晚期NSCLC患者更适合接受冷消融联合中药模式治疗。3.冷消融联合中药模式治疗老年晚期NSCLC治法以益气、养阴、温阳、补肺、健脾、益肾等扶正治疗为主线,不同阶段兼顾活血化瘀、燥湿化痰等祛邪治法,同时老年晚期NSCLC患者,特别是冷消融术后的患者阳虚血瘀证候普遍存在,应重视温通活血化瘀治法。4.冷消融联合温通活血化瘀中药组方在延长生存期,抑制转移方面效果较好,其机制与促进抗肿瘤免疫,抑制肿瘤血管生成有关。
张知云[2]（2021）在《电针足三里激活迷走神经调控乳腺癌小鼠炎性水平和抗肿瘤免疫功能的研究》文中研究表明研究背景炎性水平和免疫功能与肿瘤的发生发展密切相关,而作为促进肿瘤进展的重要危险因素,炎性因子能通过多种机制抑制荷瘤机体的抗肿瘤免疫应答,其中一种方式是诱导髓系免疫抑制细胞（myeloid-derived suppressive cells,MDSC）的大量扩张和激活,不同程度地破坏CD8+T细胞和自然杀伤（naturalkiller,NK）细胞的增殖、迁移和活化。减轻荷瘤机体的炎性水平以解除免疫抑制状态进而增强抗肿瘤免疫功能已成为肿瘤治疗的重要策略。针灸对多种免疫效应分子和细胞具有良好的调控作用,能有效增强机体的免疫功能。此外,针灸干预能减轻过度的炎性反应,在多项炎性疾病的临床研究中均显示出良好疗效。有关针灸抗炎效应机制的研究表明,激活迷走传出神经抑制过度产生的炎性因子是电针足三里发挥抗炎作用的重要途径。研究目的及意义探索电针足三里能否通过迷走传出神经抑制荷瘤小鼠的炎性水平,减轻免疫抑制状态,增强抗肿瘤免疫功能,减缓肿瘤的进展,为扩大针灸在肿瘤的临床应用提供一定的科学依据。研究方法第一部分:将雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组和电针组,在模型和电针组小鼠右侧第二乳垫下注射4T1-luc2小鼠乳腺癌细胞制备原位乳腺癌模型,对电针组小鼠的双侧足三里行电针干预（0.1 mA,2/15 Hz,30 min）,隔日一次。使用游标卡尺测量并计算肿瘤体积;采用活体成像技术在体检测瘤体的位置、面积和荧光强度;电针干预结束后取出瘤体和脾脏称重比较,以整体观察小鼠的肿瘤生长情况。第二部分:采用MSD多因子和Western Blot技术检测实验小鼠血清和肿瘤局部组织内炎性细胞因子肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor,TNF）-α、白细胞介素（interleukin,IL）-1β和IL-10的含量,同时采用HE染色观察荷瘤小鼠肿瘤局部组织内的炎性浸润情况,以观察电针对乳腺癌模型小鼠的抗炎作用。第三部分:采用流式细胞术分析实验小鼠外周血、脾脏和肿瘤局部组织内的抗肿瘤免疫细胞CD8+T细胞和NK细胞的比例,同时采用Western Blot技术分析肿瘤局部组织内穿孔素和颗粒酶B的蛋白表达水平,以评价荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫功能。第四部分:采用流式细胞术分析实验小鼠外周血、脾脏和肿瘤局部组织内免疫抑制细胞MDSC的比例,采用Western Blot技术分析肿瘤局部组织内环氧合酶-2（Cyclooxygenase 2,COX-2）和精氨酸酶-1（Arginase-1,Arg-1）的蛋白表达水平;此外,分离正常小鼠的脾T细胞与模型组和电针组荷瘤小鼠的脾MDSC进行体外共培养,采用CellTrace Far Red检测T细胞的增殖水平,流式细胞术分析CD25分子的表达量以显示T细胞的活化水平,以分析荷瘤小鼠体内的免疫抑制状态。第五部分:共包括三个部分。实验一验证了电针足三里对荷瘤小鼠迷走传出神经的作用:首先采用荧光免疫组织化学技术对荷瘤小鼠脑干迷走神经背核（dorsal motor nucleus of vagus,DMV）内胆碱乙酰转移酶（Choline acetyltransferase,ChAT）阳性神经元的c-Fos进行标记,观察迷走传出神经元的激活水平;其次,采用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测小鼠血浆和肿瘤局部组织内乙酰胆碱（acetylcholine,ACh）的水平,以反映迷走传出神经被激活后的效应。实验二观察了激活α7nAchR对乳腺癌模型小鼠免疫功能与炎性反应的作用:将正常和乳腺癌模型小鼠随机分为正常对照组,二甲基亚砜（dimethylsulfoxide,DMSO）组和 PNU-282987 组,对 DMSO 组小鼠腹腔注射DMSO,PNU-282987组小鼠腹腔注射选择性α7亚型烟碱受体（α7 subunit ofthe nicotinic acetylcholine receptors,α7nAchR）激动剂 PNU-282987（0.1 mg/kg）,隔日注射一次,游标卡尺测量并计算肿瘤体积,并进行活体成像检测,干预结束后取出脾脏和瘤体称重;MSD多因子技术检测外周血和肿瘤局部组织内炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-10的含量;流式细胞术分析外周血和脾脏内的CD8+T细胞、NK细胞和MDSC的比例。实验三采用了膈下迷走神经切断术进行了反向验证:对小鼠行膈下迷走神经切断术或假手术后接种4T1-luc2细胞制备原位乳腺癌模型,再随机分为手术-模型组（VNX）、手术-电针组（VNX-EA）、假手术-模型组（sVNX）和假手术-电针组（sVNX-EA）,对VNX-EA和sVNX-EA组小鼠双侧足三里行电针干预,干预结束后对小鼠进行活体成像检测并取出瘤体和脾脏称重,采用流式细胞术分析各组小鼠外周血和脾脏内的CD8+T细胞、NK细胞和MDSC的比例。研究结果第一部分:电针足三里可有效减缓乳腺癌模型小鼠肿瘤的进展。接种4T1-luc2细胞的第18天,电针组小鼠的肿瘤体积开始低于模型组（P<0.05）,且持续到接种后第22天（P<0.05）;活体成像结果显示,与模型组小鼠相比,电针组小鼠瘤体的成像面积减小,荧光强度降低（P<0.05）,重量明显减轻（P<0.01）。此外,荷瘤小鼠出现明显脾肿大,而电针组小鼠脾肿大程度较模型组减轻（P<0.01）。第二部分:电针足三里减轻了乳腺癌模型小鼠系统性和肿瘤局部炎性水平。荷瘤小鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-10的含量均显着上升（P<0.001）,电针干预后,小鼠血清（P<0.01）和肿瘤局部组织（P<0.05）中促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的水平降低,抗炎性细胞因子IL-10无明显变化（P>0.05）。HE染色结果显示,电针组小鼠肿瘤局部的炎性浸润情况较模型组减轻。第三部分:电针足三里对乳腺癌模型小鼠的抗肿瘤免疫细胞具有明显的促进作用。荷瘤小鼠外周血和脾脏内CD8+T细胞和NK细胞的比例均显着降低（P<0.001）,电针干预后,外周血、脾脏和肿瘤局部组织内CD8+T细胞（外周血,P<0.01;脾脏,P<0.05;肿瘤局部组织,P>0.05）和NK细胞（P<0.05）的比例均升高。此外,电针组小鼠肿瘤局部组织内穿孔素（P<0.05）和颗粒酶B（P<0.01）的蛋白表达水平较模型组明显增高。第四部分:电针足三里能有效抑制乳腺癌模型小鼠的MDSC。荷瘤小鼠外周血、脾脏和肿瘤局部组织内出现大量MDSC（P<0.001）,电针干预后,小鼠外周血（P<0.05）、脾脏（P<0.001）和肿瘤局部组织内（P<0.05）MDSC的比例均明显降低,MDSC的扩张程度减轻。此外,电针组小鼠肿瘤局部组织中COX-2（P<0.05）和Arg-1（P<0.05）的蛋白表达水平明显低于模型组。体外共培养结果显示,相比较与模型组小鼠MDSC共培养的T细胞,与电针组小鼠MDSC共培养的T细胞增殖和活化的程度升高（P<0.05）。第五部分:迷走传出神经参与了电针足三里对乳腺癌模型小鼠炎性水平与免疫功能的调控作用。实验一中,荷瘤小鼠脑干DMV区ChAT+神经元的c-Fos表达量在电针干预后显着增多,血浆和肿瘤局部组织内ACh的水平也明显升高。实验二中,从肿瘤生长情况来看,相比于DMSO组,PNU-282987组小鼠肿瘤生长速度减慢（P<0.05）,瘤体的成像面积和荧光强度降低（P<0.05）;多因子检测结果显示,相比于DMSO组,PNU-282987组小鼠血清TNF-α和IL-1β的含量明显降低（P<0.05）,IL-10无明显变化（P>0.05）;在肿瘤局部组织内,PNU-282987 组小鼠 TNF-α 和 IL-1β 的含量无明显变化（P>0.05）,IL-10 的含量明显升高（P<0.05）;流式细胞术结果显示,相比于DMSO组,PNU-282987组小鼠脾脏内的CD8+T细胞比例回升（P<0.05）,NK细胞比例无明显变化（P>0.05）,同时,外周血和脾脏内MDSC的比例降低（P<0.05）。实验三中,对实验小鼠行膈下迷走神经切断术或假手术后,相比于sVNX组,sVNX-EA组小鼠的瘤体成像面积缩小,荧光强度降低（P<0.05）,瘤体（P<0.05）和脾脏（P<0.01）的尺寸减小,重量减轻;外周血和脾脏内CD8+T细胞和NK细胞的比例升高,MDSC的比例下降。而相比于VNX组,VNX-EA组小鼠瘤体的成像面积、荧光强度、瘤体和脾脏的尺寸及重量、外周血和脾脏内的CD8+T细胞、NK细胞以及MDSC的比例均无明显改变。研究结论电针足三里可能通过激活迷走传出神经,减轻荷瘤小鼠系统性和肿瘤局部的炎性水平,促进CD8+T细胞和NK细胞的比例和细胞杀伤功能,同时降低MDSC的比例和免疫抑制水平,增强荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫功能,减缓肿瘤的生长。
郭琼[3]（2021）在《CEACAM6启动子介导PE38KDEL毒素基因治疗人舌鳞状细胞癌的研究》文中研究说明人舌鳞状细胞癌（hOTSCC）是口腔癌中发病率和死亡率最高的一种,具有复发风险高、预后差的特点。临床上治疗hOTSCC的手段仍主要以手术、放疗和化疗为主。然而这些治疗手段往往缺乏靶向性,具有较高的毒副作用,对患者的生存质量造成了严重的影响。因此,开发hOTSCC的基因靶向药物成为当下的研究热点。肿瘤的毒素基因治疗通过肿瘤特异性启动子来调控毒素的表达,使毒素基因只在肿瘤细胞中表达,而在正常组织和细胞中不表达,因而使治疗具有更高的安全性和治疗效率。近年来,肿瘤毒素基因治疗受到了越来越多的研究者的青睐。然而,截止目前,关于hOTSCC毒素基因治疗的报道仍然很少。CEACAM6是细胞表面的一种粘附因子,在多种肿瘤中都过表达,糖基化的CEACAM6可以作为早期口腔鳞状细胞癌患者复发的肿瘤标志物。因此,本文拟用CEACAM6启动子来调控假单胞菌外毒素A的表达,构建hOTSCC毒素基因治疗质粒并探索其对hOTSCC的治疗效果。首先,我们通过qRT-PCR检测了CEACAM6在不同细胞中的表达情况。结果表明,CEACAM6在hOTSCC细胞中显着过表达,而在正常细胞中的表达量则很低,表现出了较强的OTSCC表达特异性。然后,利用基因重组技术构建了p CEACAM6-PE38KDEL毒素表达质粒和p CEACAM6-Basic萤火虫荧光素酶表达质粒,并利用萤火虫荧光素酶活性检测的办法测定CEACAM6启动子的表达活性及表达特异性。结果表明,CEACAM6启动子在体外条件下可以特异性地调控萤火虫荧光素酶的表达,同样表现出了较强的OTSCC表达特异性。因为PE38KDEL毒素可以导致真核细胞翻译延长因子（e EF2）失活,我们利用共转染的方法检测毒素质粒对hOTSCC细胞蛋白合成的特异性抑制作用,并分别利用细胞增殖抑制实验、流式细胞术、TUNEL、Western Blotting、Transwell和伤口愈合试验在体外检测毒素质粒对OTSCC细胞的靶向抑制和杀伤作用。和预期的一样,p CEACAM6-PE38KDEL毒素表达质粒可以特异性抑制OTSCC细胞TCA8113的蛋白合成,对其增殖、侵袭和迁移也具有明显的抑制作用,同时还能诱导其发生凋亡和细胞周期阻滞。相反,对正常细胞以及CEACAM6表达阴性的细胞则影响很小。在裸鼠移植瘤模型中,p CEACAM6-PE38KDEL同样表现出了良好的体内治疗效果,对肿瘤的形成以及生长均具有显着的抑制作用。与此同时,通过H&E、免疫组化检测我们发现,该毒素表达质粒不会对机体的正常组织及器官造成明显的损伤,具有较高的生物安全性。本文的研究结果表明,CEACAM6启动子介导的PE38KDEL毒素基因治疗药物能够有效地抑制和杀伤hOTSCC细胞,具有很高的靶向性和安全性,有望成为未来在临床上进行hOTSCC基因靶向治疗的候选药物。
徐鲁[4]（2021）在《肿瘤相关自身抗体检测在肺癌诊断中的临床价值研究》文中研究指明目的:探讨肺癌相关自身抗体（tumor associated antibody,TAAbs）在初诊肺癌患者中的临床诊断价值。方法:选取2020年1月到2020年12月就诊于华中科技大学同济医院的383名就诊患者作为研究对象。根据病理诊断和影像学诊断将上述患者分为肺癌组和良性肺部疾病组,将同期就诊于我院体检中心的健康体检者247例设为健康人群组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上述研究对象的7种肺癌自身抗体（P53、SOX2、GAGE7、PGP9.5、MAGE A1、GBU4-5、CAGE）的浓度,采用化学发光法检测上述研究对象的5种血清肿瘤标志物（CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC、pro GRP）的浓度。进一步研究7种肺癌自身抗体在肺癌患者血清中的浓度与TNM分期、病理类型、淋巴结转移、远端转移、肿瘤大小等的关系。分析7种肺癌自身抗体单独和联合检测肺癌的灵敏度和特异度,分析7种肺癌自身抗体与血清肿瘤标志物联合检测在肺癌诊断中的价值。结果:1、肺癌自身抗体各单项在三组间表达水平均有差异,差异具有统计学意义。2、肺癌自身抗体单项和7项自身抗体联合判读（7-TAAbs）在各组中的阳性率比较发现:自身抗体PGP9.5和MAGE A1在各组间阳性率差异无统计学意义（χ2=3.956,p=0.138、χ2=2.864,p=0.239,均p>0.05）,其他各项自身抗体均在各组间阳性率差异有统计学意义（p<0.05）。7-TAAbs联合判读在三组间差异有统计学意义,两两比较后发现肺癌组vs良性疾病组阳性率差异有统计学意义（χ2=62.265,p=0.000）,肺癌组vs健康人群组阳性率差异有统计学意义（χ2=138.195,p=0.000）,良性疾病组vs健康人群组阳性率差异无统计学意义（χ2=1.647,p=0.199）,7-TAAbs联合判读阳性率肺癌组高于健康人群组和良性肺部疾病组。3、自身抗体P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1和CAGE在早期肺癌组和健康人群组间表达水平差异均具有统计学意义（Z值分别为5.732、7.235、3.057、3.856、7.870、13.427和16.470;均p<0.05）;PGP9.5和MAGE A1在早期肺癌组和健康人群组中阳性率差异无统计学意义（p值分别为0.745和0.358）;P53、SOX2、GAGE7、GBU4-5、CAGE和7-TAABs在早期肺癌组中阳性率高于健康人群组,差异均具有统计学意义（χ2分别为8.025、13.797、29.130、18.908、25.601和107.844;均p<0.05）。4、7-TAAbs阳性率在不同的临床分期、病理类型、是否淋巴结转移、是否远端转移、肿瘤大小中的差异均有统计学意义,晚期肺癌阳性率>早期肺癌阳性率、鳞状细胞癌阳性率>腺癌阳性率、有淋巴结转移阳性率>无淋巴结转移阳性率、有远端转移阳性率>无远端转移阳性率、“肿瘤大小>3cm组”阳性率>“肿瘤大小≤3cm组”阳性率。5、自身抗体各单项和传统肿瘤标志物在以健康人群和良性肺部疾病人群为对照组诊断肺癌均表现出低敏感度高特异性的特点;7-TAAbs可提高诊断试验的敏感度（58.55%）但降低了特异性（89.30%）;7-TAAbs与传统肿瘤标志物联合检测相比具有较高的敏感性（58.55%vs 54.18%）和较低的AUC（敏感性:58.55%vs 54.18%,AUC:0.747 vs 0.761;均p>0.05）;7-TAAbs+传统肿瘤标志物联合检测敏感度为66.91%,特异性为90.42,AUC为0.812（95%CI:0.779-0.841）,7-TAAbs+传统肿瘤标志物联合检测敏感度和AUC高于7-TAAbs或传统肿瘤标志物联合检测（敏感度:66.91%vs 58.55%、54.18%,AUC:0.812 vs 0.747、0.716;均p<0.05）。结论:1、单项TAAbs在早期肺癌患者血清表达水平升高,表明其在早期肺癌筛查中具有一定的应用价值。2、7-TAAbs联合检测的诊断效能高于单项TAAbs检测,联合传统肿瘤标志物检测可进一步提高对肺癌的诊断效能。3、7-TAAbs联合检测的阳性率在肺癌的不同临床分期和不同病理分型中均有统计学差异,表明其在区分肺癌临床分期和病理分型中存在一定的应用价值。
陈兴财[5]（2021）在《Tim-3与PD-1在多发性骨髓瘤患者NK细胞及单核细胞上的表达及意义》文中研究说明目的:明确Tim-3和PD-1在多发性骨髓瘤（MM）患者外周血NK细胞及单核细胞上的表达情况,探讨Tim-3和PD-1对NK细胞、单核细胞抗肿瘤免疫功能的影响及其与多发性骨髓瘤发生发展的关系。方法:1、选择2019年8月至2020年9月期间经病理诊断为多发性骨髓瘤的初诊病例31例,选择同期15例年龄性别无明显差异且排除明显疾患的体检者作为正常对照。2、收集31例MM患者的临床资料,包括性别、年龄、实验室常规检查结果,MM的免疫球蛋白分型及采用Durie-Salmon分期标准进行肿瘤分期的结果,骨髓涂片镜检计数骨髓瘤细胞百分比。3、采集15例正常对照者外周血标本和31例治疗前以及其中10例经3个疗程化疗后完全缓解或部分缓解的MM患者外周血标本经流式细胞术检测其CD3-CD56+NK细胞百分比、CD14+CD64+单核细胞百分比以及Tim-3和PD-1在CD3-CD56+NK细胞、CD14+CD64+单核细胞上的表达情况;采用ELISA方法检测15例正常对照者、21例MM患者治疗前以及10例经3个疗程化疗后完全缓解或部分缓解的MM患者治疗后外周血血清中细胞因子（IFN-γ、TNF-α）水平,电化学发光法检测IL-6水平。统计并分析其与多发性骨髓瘤发生发展的关系。结果:1、31例MM患者临床免疫球蛋白分型情况:Ig G型15例,Ig A型9例,其他类型7例（Ig D型2例、轻链型3例、Ig M型2例）。DS分期情况:I期2例,Ⅱ期8例,Ⅲ期21例。2、Tim-3在MM患者外周血NK细胞和单核细胞上的表达。2.1不同免疫球蛋白分型MM患者之间Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比,Tim-3+CD14+CD64+单核细胞百分比均无明显差异（P>0.05）,差异无统计学意义。2.2 MM患者较正常对照外周血CD3-CD56+NK细胞百分比（P=0.121）、CD14+CD64+单核细胞百分比（P=0.071）均无显着变化,差异无统计学意义。但Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比较正常对照显着升高（P=0.025）;Tim-3+CD14+CD64+单核细胞较正常对照也显着升高（P=0.007）,差异均有统计学意义。2.3 Ⅲ期相较Ⅰ–Ⅱ期的MM患者Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比无明显变化（P=0.867）,差异无统计学意义;但Tim-3+CD14+CD64+单核细胞百分比显着升高（P<0.0001）。其中10例经3个疗程治疗后完全缓解或部分缓解的MM患者较治疗前Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比显着降低（P=0.046）,Tim-3+CD14+CD64+单核细胞百分比也显着降低（P=0.011）,差异均有统计学意义。2.4 MM患者相较正常对照外周血血清中细胞因子水平TNF-α（P=0.014）,IFN-γ（P=0.004）均显着降低,IL-6则显着升高（P<0.0001）,且Ⅲ期相较Ⅰ–Ⅱ期的MM患者IL-6水平显着升高（P=0.0426）,差异均有统计学意义。10例经3个疗程治疗后完全缓解或部分缓解的MM患者较治疗前外周血血清中细胞因子TNF-α（P=0.0009）,IFN-γ（P=0.0004）均显着升高,IL-6则显着降低（P=0.003）。2.5作相关性分析发现,MM患者治疗前Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比与IFN-γ呈负相关（r=-0.514,P=0.017）,Tim-3+CD14+CD64+单核细胞百分比与TNF-α也呈负相关（r=-0.728,P=0.002）,均有统计学意义。另外,MM患者初诊时骨髓瘤细胞百分比与Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比呈负相关（r=-0.109,P=0.561）,但无统计学意义,与Tim-3+CD14+CD64+单核细胞百分比呈正相关（r=0.516,P=0.003）,有统计学意义。3、PD-1在MM患者外周血NK细胞和单核细胞上的表达。3.1不同免疫球蛋白分型MM患者之间PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分比,PD-1+CD14+CD64+单核细胞百分比均无明显差异（P>0.05）,差异无统计学意义。3.2 MM患者较正常对照外周血PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分比显着升高（P=0.025）,PD-1+CD14+CD64+单核细胞（P=0.007）也显着升高,差异均有统计学意义。3.3 Ⅲ期相较Ⅰ–Ⅱ期的MM患者PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分比明显降低（P=0.034）;但PD-1+CD14+CD64+单核细胞百分比显着升高（P<0.001）,差异均有统计学意义。其中10例经3个疗程治疗后完全缓解或部分缓解的MM患者较治疗前PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分比显着降低（P=0.0417）,PD-1+CD14+CD64+单核细胞百分比也显着降低（P=0.021）,差异均有统计学意义。3.4作相关性分析发现,MM患者治疗前PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分比与IFN-γ呈负相关（r=-0.896,P<0.0001）,PD-1+CD14+CD64+单核细胞百分比与TNF-α呈负相关（r=-0.568,P=0.007）,均有统计学意义。初诊时骨髓瘤细胞百分比与PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分呈负相关（r=-0.136,P>0.05）,但无统计学意义,与PD-1+CD14+CD64+单核细胞百分比呈正相关（r=0.544,P<0.05）,有统计学意义。3.5 MM患者Tim-3和PD-1分别在NK细胞、单核细胞上的表达均呈正相关（NK细胞r=0.564,P<0.05;单核细胞r=0.851,P<0.05）,差异均有统计学意义。结论:1、Tim-3和PD-1在MM患者外周血中NK细胞及单核细胞上的表达水平与MM的免疫球蛋白分型无关,但与MM的肿瘤分期密切相关。2、Tim-3和PD-1在MM患者NK细胞和单核细胞上表达水平增高,可能导致其自身功能障碍,致使其分泌细胞因子异常,介导MM的发生发展及其进程。3、与正常对照组比较,Tim-3和PD-1在MM患者NK细胞和单核细胞上表达水平显着增高,而治疗缓解后较治疗前又显着降低,因此,Tim-3和PD-1可以成为外周血肿瘤筛查检测新的潜在标志物。4、Tim-3和PD-1在MM患者NK细胞及单核细胞上的表达呈正相关,可能存在协同作用,两者共同高表达强化了抑制MM患者NK细胞及单核细胞的抗肿瘤功能,促进了MM的进展。因此针对此两个免疫靶点的联合治疗方案有望成为多发性骨髓瘤免疫治疗的有效策略。
徐坤保[6]（2021）在《西宁地区NLR、PLR与非小细胞肺癌的关系》文中研究表明目的:肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率居首位,对人们的生活造成极大的负面影响。目前,对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的最佳诊疗方式是做到早发现、早手术。因此,有必要对非小细胞肺癌进行更多的研究。本文旨在研究中性粒细胞与淋巴细胞比值（Neutrophil to lymphocyte ratio,NLR）、血小板与淋巴细胞比值（Platelet to lymphocyte ratio,PLR）与非小细胞肺癌的关系,探讨其对非小细胞肺癌早期诊断的价值。方法:本研究收集了2017年1月至2019年12月首次在青海大学附属医院胸外科确诊的非小细胞肺癌患者110例。匹配同期在青海大学附属医院体检中心体检健康者作为对照组,共108例。分析和比较这两组之间性别、年龄、体质量指数（Body mass index,BMI）、NLR、PLR的差异有无统计学意义。然后,运用二元Logistic回归方程评估NLR和PLR指标与NSCLC之间是否存在线性关系。最后,绘制受试者工作曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）图评估年龄、BMI、NLR、PLR对非小细胞肺癌的诊断效能。结果:110例患病组中男性71例,女性39例,平均年龄为59.87±9.32岁;108例健康组中男性52例,女性56例,平均年龄为52.23±9.08岁。两组一般资料比较差异有统计学意义（均P<0.05）。BMI（23.10±2.82 kg/m2 vs24.27±3.27 kg/m2）、NLR（2.78±1.22 vs 1.88±0.65）、PLR（147.64±58.22vs 115.80±48.50）在患病组与健康组间存在差异,且差异有统计学意义（t/X2=5.959,6.129,-2.812,6.801,4.384,P均<0.05）。在单因素分析中,我们发现年龄、BMI、NLR与非小细胞肺癌之间存在线性关系（均P<0.05）;即:年龄每增加1岁,患非小细胞肺癌的风险较前增加10.6%,比值比（odds ratio,OR）为1.106,95%置信区间（confidence interval,CI）（1.061-1.154）,差异具有统计学意义（P=0.000）;BMI每增加1kg/m2,患非小细胞肺癌的风险较前减少10.9%（OR=0.891,95%CI:0.801-0.991,P=0.033）;NLR每增加1,患非小细胞肺癌的风险较前增加214.8%（OR=3.148,95%CI:1.803-5.496,P=0.000）;未发现性别、PLR与非小细胞肺癌之间存在线性关系（分别OR=0.888,95%CI:0.456-1.732,P=0.728;OR=1.005,95%CI:0.997-1.014,P=0.231）。ROC曲线结果提示:年龄诊断NSCLC的曲线下面积（Area under curve,AUC）为0.714,95%CI为0.649-0.773,敏感度为45.45%,特异度为86.11%;BMI诊断NSCLC的AUC为0.603,95%CI为0.534-0.668,敏感度为57.27%,特异度为64.81%;NLR诊断NSCLC的AUC为0.775,95%CI为0.714-0.829,敏感度为74.55%,特异度为70.37%;PLR诊断NSCLC的AUC为0.716,95%CI为0.651-0.775,敏感度为91.82%,特异度为49.07%。NLR、PLR两项指标联合诊断NSCLC的AUC为0.775,95%CI为0.714-0.829,敏感度为74.55%,特异度为70.37%;年龄、BMI、NLR三项指标联合诊断NSCLC的AUC为0.835,95%CI为0.779-0.882,敏感度为73.64%,特异度为85.19%。结论:单因素分析结果显示,年龄、BMI、NLR与非小细胞肺癌之间存在线性关系,即:年龄越大、BMI指标越低、NLR值越高,患非小细胞肺癌的风险越大。ROC分析结果显示,年龄、BMI、NLR、PLR对非小细胞肺癌均具有一定的诊断价值,三项联合指标（年龄+BMI+NLR）诊断效能高于各单项指标的诊断效能。
孙一丹[7]（2021）在《“扶正解毒祛瘀法”参与治疗小细胞肺癌的回顾性研究》文中认为研究目的:小细胞肺癌（SCLC）的发病率、死亡率据统计呈逐年升高态势。SCLC预后极差,多数患者确诊时已属于广泛期,前期通过观察扶正解毒祛瘀法对小细胞肺癌的临床研究,发现扶正解毒祛瘀法能够在一定程度上,通过改善患者的临床症状,提高生活质量,以及配合西医治疗,实现减毒增效等方面,体现出较好的疗效。基于此,本研究通过回顾性研究305例SCLC病例,分析并归纳影响SCLC患者生存预后的独立因素,探讨贾英杰教授“扶正解毒祛瘀法”综合治疗SCLC的临床用药规律、治疗模式,以及参与治疗的优势阶段,为扶正解毒祛瘀法的临床应用提供依据。方法:本研究采用回顾性调查方法,根据纳入、排除标准,选择2015-1-1至2021-1-31间就诊于天津中医药大学第一附属医院肿瘤科,接受“扶正解毒祛瘀法”综合治疗的305例SCLC癌患者。电话随访并收集患者生存状态、总生存时间（OS）、无疾病进展时间（PFS）等信息,进行生存分析,绘制Kaplan-Meier生存曲线。通过比较组间生存差异,确定影响预后的临床特征。分析结果中,P<0.1的临床因素纳入多因素Cox回归分析,以进一步分析影响患者总生存的独立预后因素。对于综合性实验室指标,利用ROC曲线确定连续变量的截点值,比较各指标的高、低组间差异。通过对不同病理阶段、不同治疗阶段中患者使用中药的频次、功效等进行统计分析,总结贾英杰教授“扶正解毒祛瘀法”在小细胞肺癌中的用药规律。结果:1.基本特征:本研究纳入305例患者的平均年龄为68.3±2.354岁。随访截至2021年3月31日,共获得287例患者生存信息,其中尚有102例患者存活。患者中位总生存期为13.0个月,中位无进展生存时间为5.0个月。患者1年生存率为51.0%（147/287）,2年总生存率为12.2%（35/287）,3年总生存率为4.2%（12/287）。失访人数共18例（5.9%）。2.单因素Kaplan-Meier生存分析中具有统计学意义的因素包括身体质量指数（BMI）（P<0.001）、临床分期（P<0.001）、中医辨证分型（P<0.001）,呼吸系统疾病史（P<0.001）与吸烟史（P=0.004）,继发转移情况[肝转移（P<0.001）、脑转移（P=0.015）、骨转移（P<0.001）],伴发的多种合并症[肺部感染（P=0.028）、胸腔积液（P<0.001）、癌性发热（P=0.012）、癌性疼痛（P=0.026）],西医治疗方式[手术（P<0.001）与放疗（P=0.005）],“扶正解毒祛瘀法”参与治疗模式（P<0.001）（根据患者接受中、西医治疗情况分为单纯“扶正解毒祛瘀法”治疗组,“扶正解毒祛瘀法”联合序贯治疗组和“扶正解毒祛瘀法”维持治疗组）,以及“扶正解毒祛瘀法”参与治疗后复发/进展情况（P<0.001）,能够反应肿瘤生长状况及炎症、免疫状态的多种实验室指标[NLR（P=0.003）、PLR（P=0.001）、ALI（P=0.001）、SII（P=0.003）、CEA（P<0.001）、CYFRA21-1（P<0.001）及各淋巴细胞亚群占比（P<0.05）],与SCLC患者的生存密切相关。多因素Cox回归分析结果显示,肝转移（P=0.034）、骨转移（P=0.002）、肿瘤分期（P<0.001）、呼吸系统疾病史（P=0.016）、胸腔积液（P=0.006）、吸烟史（P<0.001）、手术（P=0.002）、“扶正解毒祛瘀法”参与治疗模式（P<0.001）,以及PLR（P=0.007）、SII（P=0.006）、CEA（P<0.001）、CD3+占比（P=0.015）、CD3-/CD19+占比（P<0.001）是影响SCLC患者总生存的独立预后因素。3.贾英杰教授“扶正解毒祛瘀法”治疗SCLC的用药规律显示,初次用药共计147味,高频用药依次是生黄芪、川芎、瓜蒌、枳壳、白花蛇舌草、桑白皮、鸡内金、党参、神曲、冬瓜子、净砂仁、浙贝母、山慈菇、陈皮、厚朴。辨证分型分层分析结果显示黄芪、瓜蒌、郁金、姜黄为所有证型的高频用药,总体用规律药能够体现“扶正解毒祛瘀法”辨证施治的基本原则。局限期患者高频药物以清热化痰,解毒祛瘀药味居多,而广泛期患者则多用健脾和胃,疏调气血之品,其中不乏淡渗利湿药。在不同西医治疗阶段中,化疗前及化疗期间,生黄芪使用频次最高,化疗后使用最多的是瓜蒌。化疗期间及化疗后用药规律相似,相比于化疗前补气健脾和胃为主的用药规律,更注重行气消导。相较于首诊的总体用药情况,化疗前、后患者清热解毒药使用明显较少。粒子植入术前、后用药频次最高者为瓜蒌,粒子植入术后较术前的高频用药中清热解毒药更多。免疫治疗前、后使用频次最高的药物仍为黄芪及瓜蒌。免疫治疗前以清热宽胸涤痰、理气药味者为多,不乏养血、祛瘀之品;免疫治疗后同样重视清肺化痰,理气和胃药应用相对较多。相比于放、化疗而言,免疫治疗前、后在益气扶正的基础上,更加注重疏调气机及养血和营之品的应用,同时兼顾解毒、祛瘀。综合治疗后的维持巩固治疗阶段中,黄芪使用频次最高,郁金、姜黄次之。补气药如党参、白术同样属于高频用药。瓜蒌、桑白皮为清热化痰药的高频用药,还包括当归、白芍等养血之品,以及丹皮、鸡血藤等用于养血祛瘀。白花蛇舌草、连翘、猫爪草等清热解毒药物仍有所应用。并且杜仲作为补益肝肾之品,也列席其中。结论:1.截至随访结束之日,305例SCLC患者中,1年、2年及3年生存率为51.0%、12.2%、4.2%,中位OS为13.0（9.0-20.0）个月。“扶正解毒祛瘀法”联合序贯治疗模式为本研究中SCLC患者的主要治疗模式,该组患者较其他组具有明显的生存优势,疗效好。2.单因素、多因素分析结果显示,存在呼吸系统疾病史及吸烟史,临床分期为广泛期,伴有肝部及骨部转移,合并胸腔积液是SCLC患者预后不良因素。炎症相关的综合性实验室指标PLR、SII,肿瘤标志物CEA,总T细胞、NK细胞的占比可以作为SCLC患者的独立预后因素。另外,接受手术治疗为保护性因素。“扶正解毒祛瘀法”参与的治疗模式中,接受“扶正解毒祛瘀法”联合序贯治疗和接受“扶正解毒祛瘀法”维持治疗的患者,较接受单纯“扶正解毒祛瘀法”治疗的患者而言死亡风险降低,能够作为SCLC总生存预后的保护性因素。相对而言,“扶正解毒祛瘀法”联合序贯治疗模式的显着性及保护性均较其他两种“扶正解毒祛瘀法”参与的综合治疗模式在临床中疗效更佳。3.通过总结贾英杰教授“扶正解毒祛瘀法”治疗SCLC用药规律的分层分析结果,发现在“扶正解毒祛瘀法”指导下,临证辨证施治的用药规律各有侧重。局限期治疗重点在于宣肃上焦,扶正以助攻邪;广泛期治疗多以补气养血,调节阴阳,健运中洲为主,兼顾解毒、祛瘀,以减少癌毒对正气的损伤。对于接受不同西医治疗的SCLC患者,在不同治疗阶段及不同病理阶段,贾英杰教授强调审因、辨证、辨症相结合。贾英杰教授认为化疗的“药毒”和放疗的“热毒”会加重正气的虚损,并形成“毒剧损正,因虚致瘀,瘀而毒甚”的恶性循环。贾英杰教授临证根据放、化疗的不同阶段调整用药,以扶正培本,旺气磨积为重,顾护中州,疏调三焦,同时以解毒、祛瘀相结合为总体治疗原则。抗血管生成靶向药物及免疫治疗阶段以补气和血,调和气血阴阳恢复内环境稳态为主。维持治疗阶段正气内虚,余邪藏匿,“虚”、“毒”、“瘀”并存。贾英杰教授认为此时治当权衡正气与邪毒之势,强调攻补之间的尺度是辨证施治的关键。临证通过调和阴阳之偏盛偏衰,以求最终达到“健脾益肾”的治疗平台期。
吴建磊[8]（2021）在《TIM-3在上皮性卵巢癌发生及其临床预后中的意义》文中指出上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,其死亡率高居妇科恶性肿瘤之首,严重影响女性健康。由于缺乏特异性的肿瘤标志物及早期症状,超过70%的EOC患者在诊断时已经处于晚期。目前,EOC的主要治疗方法是手术+铂类为基础的化疗。近年来,虽然PARP抑制剂等辅助治疗策略也被应用于EOC,但晚期EOC患者的5年生存率仍然徘徊在30-40%之间,近40年来改善甚微。因此,迫切需要寻找能够揭示EOC发生、发展的深层次分子机制,为EOC的诊断及新的治疗方法的开发提供理论基础。随着肿瘤免疫学的发展,免疫治疗已成为与手术、化疗、放疗并列的第四种治疗方式。免疫疗法的应用已经彻底改变了一些肿瘤的治疗模式,其中针对免疫检查点分子的治疗,如CTLA-4和PD-1等,在黑色素瘤、肾癌、霍奇金病和肺癌中取得了令人兴奋的结果。但是,针对现有免疫检查点的免疫治疗的整体有效率较低。更为严重的是,包括卵巢癌、结直肠癌在内的多种肿瘤,在很大程度上对CTLA-4或PD-1阻断剂无效。因此,需要对其它的免疫检查点分子进行详细研究,以开发新的免疫检查点药物及筛选对免疫治疗有效的人群,提高免疫治疗的效果。TIM-3蛋白是T细胞免疫球蛋白-粘蛋白家族（T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein,TIM）的成员,最初发现在Th1细胞上特异表达,其编码基因位于人类chr5q33,全长23kb,由7个外显子组成。后续研究发现:TIM-3可在多种免疫细胞中表达,如单核细胞、DCs、NK细胞等天然免疫细胞,并参与免疫细胞功能的调控。大量的肿瘤免疫学的研究表明:TIM-3不仅可以通过调控T细胞耗竭和抑制骨髓细胞增殖在肿瘤免疫中发挥负性调节作用,而且可以通过促进肿瘤相关巨噬细胞表型的转化来调节抗肿瘤免疫反应。正如Romero博士在综述《Immunotherapy:PD-1 says goodbye,TIM-3says hello》所说的:TIM-3在肿瘤免疫中发挥重要的免疫检查点作用。因此,TIM-3作为一种潜在的肿瘤免疫治疗候选药物靶点,已经占据了突出的地位。近年来,多项研究也表明TIM-3在肿瘤细胞中过表达,如黑色素瘤、胃癌、B细胞淋巴瘤、宫颈癌、肾透明细胞癌、骨肉瘤等,并通过参与IL-6/STAT3通路、TGF-β/Smad通路和上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）等过程促进肿瘤侵袭转移,而且TIM-3的异常表达与患者不良预后相关。先前有学者研究发现,在卵巢癌患者外周血CD4+和CD8+T细胞中TIM-3的表达水平较正常人相比显着升高,而TIM-3高表达的患者的临床分期和肿瘤分级显着高于低表达的患者。进一步研究显示,TIM-3在卵巢癌患者的肿瘤浸润性Tregs中高表达与患者预后不良有关。因此,TIM-3可能在EOC发生发展中起重要作用,可能成为EOC的潜在治疗靶点。但是,目前关于TIM-3在EOC肿瘤细胞中表达情况及在EOC肿瘤发生发展中的作用和机制及其与EOC预后的关系仍不明确。阐明TIM-3表达与EOC肿瘤发生发展的关系及可能的作用机制,有助于加深对EOC发病机制的了解及新的治疗靶点开发,同时可以为EOC高危人群的筛查和免疫治疗疗效的预测提供新的分子标志物。本研究中,我们首先探讨TIM-3蛋白及mRNA在EOC肿瘤组织中的表达情况,并分析其与EOC临床病理特征及预后的关系。其次通过体外实验在细胞水平研究TIM-3对EOC细胞生物学行为的影响及其可能的机制。另外,我们还通过病例-对照研究,探讨TIM-3基因上rs10053538、rs10515746及rs1036199三个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）位点与EOC发病风险及预后的关系,意义在于探讨TIM-3基因上的可能的功能性遗传变异是否通过改变其表达而改变人群EOC的发病风险和患者的临床预后,这也可能为EOC高危人群筛查和免疫治疗疗效的预测提供新的分子标志物。第一部分TIM-3在上皮性卵巢癌组织中的表达及其预后关系的研究目的:探讨TIM-3在EOC组织中的表达与EOC患者临床病理特征及其预后的关系。方法:1.采用免疫组化检测46例EOC组织及21例正常卵巢组织中TIM-3蛋白的表达差异。2.RT-qPCR法检测126例EOC组织及21例正常卵巢组织中TIM-3 mRNA的表达情况,分析TIM-3 mRNA表达与EOC临床病理特征及预后的关系;并通过在线网站GEPIA2（http://gepia2.cancer-pku.cn）查阅TCGA数据库中TIM-3 mRNA在卵巢癌与正常卵巢组织中的表达情况。3.采用多色免疫荧光技术检测135例EOC组织中TIM-3蛋白的表达情况,并分析TIM-3蛋白表达情况及在肿瘤区域TIM-3蛋白表达与EOC患者临床病理特征及预后的关系。结果:1.TIM-3蛋白在EOC组阳性率76.1%（35/46）明显高于正常卵巢组23.8%（5/21）,差异具有统计学意义（P<0.001）。2.EOC组织中TIM-3 mRNA的相对表达量明显高于正常卵巢组织,差异具有统计学意义（P<0.001）。TCGA数据库中卵巢癌组织中TIM-3 mRNA的表达也显着高于正常卵巢组织（P<0.05）;EOC组织中TIM-3 mRNA高表达患者肿瘤复发风险（HR=2.43,95%CI=1.47-4.04,P=0.001）和死亡风险（HR=1.84,95%CI=1.10-3.08,P=0.021）与低表达患者相比均明显增加。3.EOC组织中TIM-3蛋白的表达与EOC临床分期、分化及手术残留情况密切相关（P<0.05）;肿瘤区域（即CK+区域）TIM-3蛋白的表达与EOC临床分期、分化密切相关（P<0.05）。4.Cox多因素分析显示EOC组织中TIM-3蛋白高表达患者肿瘤复发风险（HR=1.99,95%CI=1.29-3.08,P=0.002）和死亡风险（HR=2.13,95%CI=1.37-3.30,P=0.001）与低表达患者相比均明显增加;CK+区域TIM-3蛋白高表达患者肿瘤复发风险（HR=1.64,95%CI=1.09-2.46,P=0.018）和死亡风险（HR=1.81,95%CI=1.19-2.75,P=0.006）与低表达患者相比均明显增加。结论:1.TIM-3蛋白及mRNA在EOC组织高表达。2.TIM-3表达与EOC临床分期、分化等临床病理因素相关。3.EOC组织中TIM-3 mRNA和蛋白高表达是患者肿瘤复发及死亡的独立危险因素。第二部分TIM-3对卵巢癌细胞生物学行为的影响及机制研究目的:探讨TIM-3对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其可能的机制,明确TIM-3在EOC恶性化进程中的作用及机制,为EOC的靶向治疗奠定理论基础。方法:1.筛选TIM-3高表达细胞株:RT-qPCR及western-blot技术检测人卵巢癌细胞SKOV3、A2780、OVCAR3及人正常卵巢上皮细胞IOSE80中TIM-3的表达。2.采用脂质体转染法构建TIM-3低表达卵巢癌细胞系,CCK-8法及平板克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化,流式细胞技术检测细胞凋亡情况的变化,划痕实验及transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化。3.Western-blot技术检测转染后EMT及TGF-β/Smad信号通路的变化。结果:1.SKOV3、A2780、OVCAR3细胞中TIM-3 mRNA及蛋白均高于IOSE80细胞（P<0.001）,其中SKOV3细胞中TIM-3 mRNA及蛋白高于A2780、OVCAR3细胞（P<0.05）。2.LVRU6GP-TIM-3-sh RNA治疗转染SKOV3细胞后,TIM-3的mRNA及蛋白表达水平显着低于转染空质粒组（P<0.05）,CCK-8及平板克隆形成实验结果显示,敲低TIM-3表达后SKOV3细胞的增殖率显着降低（P<0.05）,流式细胞实验结果显示,敲低TIM-3表达后SKOV3细胞凋亡率显着增加（P<0.05）,划痕实验及transwell小室实验结果显示,敲低TIM-3表达后SKOV3细胞迁移及侵袭能力显着降低（P<0.05）。3.在SKOV3-sh组细胞中E-cadherin的表达明显高于SKOV3-NC组细胞（P=0.006）;而SKOV3-sh组细胞中N-cadherin和Vimentin的表达明显低于SKOV3-NC组细胞（P=0.014、P=0.002）。SKOV3-sh组细胞Smad7及磷酸化Smad2（p-Smad2）的表达明显高于SKOV3-NC组细胞（P<0.001、P=0.002）,而两组细胞中Smad2的表达无明显差异（P>0.05）。结论:1.敲低TIM-3的表达可抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迀移,并促进其凋亡。2.敲低TIM-3表达抑制卵巢癌细胞EMT过程,可能与TGF-β/Smad信号通路有关。第三部分TIM-3基因多态性与上皮性卵巢癌遗传易感性及临床预后的关联研究目的:探讨TIM-3基因多态性与EOC遗传易感性及其患者临床预后的关系。方法:1.采用我们课题组标本库的710例EOC患者和700例健康女性的外周血DNA标本,通过聚合酶链反应/连接酶检测反应（polymerase chain reaction/ligase detection reaction,PCR-LDR）方法对TIM-3基因上的3个SNPs位点（rs10053538、rs10515746和rs1036199）进行基因分型,分析不同基因型与EOC患者发病风险及预后的关系。2.采用RT-qPCR检测分别携带TIM-3两个位于启动子区的SNPs位点（rs10053538和rs10515746）不同基因型EOC肿瘤组织中TIM-3mRNA的表达水平,分析其对TIM-3 mRNA表达的影响。3.应用Kaplan-Meier plotter数据库分析TIM-3 mRNA对EOC患者的预后价值。结果:1.TIM-3基因rs10053538、rs10515746和rs1036199的的基因型和等位基因型频率分布在病例组和对照组无统计学差异（P>0.05）。2.预后分析显示携带rs10053538 CA+AA基因型患者的PFS和OS较CC基因型患者明显减少（HR=1.49,95%CI=1.05-2.09,P=0.024;HR=1.57;95%CI=1.09-2.26,P=0.017）;而携带rs10515746CC和rs1036199AA不同基因型的患者的PFS和OS均无统计学差异（P>0.05）。3.RT-qPCR结果显示携带rs10053538 CA+AA基因型的EOC患者癌组织中TIM-3 mRNA的表达量显着高CC基因型的患者（P=0.006）,而携带rs10515746不同基因型的EOC患者癌组织中TIM-3 mRNA的表达量则无明显差异（P>0.05）。4.应用Kaplan-Meier plotter数据库分析显示TIM-3 mRNA高表达与EOC患者差的PFS和OS相关（HR=1.57,95%CI=1.29-1.91,P<0.001;HR=1.31,95%CI=1.06-1.63,P=0.013）。结论:1.TIM-3基因rs10053538、rs10515746、rs1036199 SNPs与EOC发病风险无关。2.rs10053538 SNP与EOC患者的临床预后相关,携带rs10053538CA+AA基因型是EOC患者肿瘤复发及死亡的独立危险因素。3.rs10053538可能是一个功能性的多态性位点。4.TIM-3 mRNA高表达与EOC患者的不良临床预后相关。
张琦[9]（2021）在《一、肺癌宿主外周免疫特征及其预后价值的研究 二、人衰老与癌变过程外周免疫系统特征研究》文中研究说明第一部分肺癌宿主外周免疫特征及其预后价值的研究肺癌是一种预后差且死亡率高的疾病,严重威胁着人类的生命健康。人们已经认识到免疫系统在肿瘤发生发展中的重要作用,然而目前对宿主免疫系统与肺癌之间复杂相互作用仍然缺乏足够的了解,限制了患者的获益。在本研究中,我们希望探究肺癌宿主的系统性免疫应答特征,研究其在肺癌发生发展进程中的潜在作用并进一步挖掘其潜在的预后价值。我们分析了来自健康志愿者和肺癌患者的共142例外周血白细胞样品的高通量转录组测序数据,以表征肺癌宿主的系统性免疫应答。我们首先在肺癌患者中观察到了广泛的血液转录组水平的扰动。这种扰动存在异质性,使得肺癌患者被分为两种亚型且两者在病理学类型方面没有差异。从功能上看,这两种亚型之间的异质性体现在多种生物学过程如细胞周期、凝血和炎症相关信号通路的失调,以及血细胞（尤其是淋巴细胞和中性粒细胞）的丰度和活性异常,最终表现为抗肿瘤免疫作用方面的差异。我们基于抗肿瘤免疫功能较差的肺癌亚型中的差异表达基因开发了一个预后模型并验证了其预测效能。利用该模型和其他临床指标我们进一步构建了效能良好的临床预后预测的列线图模型。总之,我们的研究为肺癌宿主的外周免疫应答的异质性提供了新颖而全面的见解。基于外周免疫细胞转录谱异质性的预测模型可能有助于指导肺癌患者的预后管理。第二部分人衰老与癌变过程外周免疫系统特征研究衰老是引起机体免疫功能衰退的重要诱因,并导致衰老人群癌症高发。反过来,肿瘤也被认为是一种系统性疾病,在一定程度上影响着宿主整体的免疫水平甚至引起细胞衰老。认识衰老与癌变过程中机体免疫系统的特征改变,有助于深入理解癌变与衰老的联系,为抗衰老与肿瘤的防治提供更多有价值的信息。目前人们对衰老和癌变发生发展过程中机体系统性免疫特征变化尚且缺乏全面而深刻的认识。基于此,我们利用一个包含不同年龄受试者的衰老研究队列和包含结直肠癌患者及健康对照组的癌变研究队列,探究了人衰老和癌变过程中外周免疫细胞转录水平的特征性改变。我们发现随着年龄的增长,免疫细胞尤其是T淋巴细胞丰度出现异常波动,免疫细胞衰老和功能耗竭的失能状态凸显。外周免疫系统整体上呈现一种免疫炎性状态和RNA剪接加工功能障碍等特征。这些结果都暗示机体维持正常免疫应答水平的能力下降并在一定程度上可以解释肿瘤在衰老人群中高发的现象。反观癌变队列数据,我们发现肿瘤患者尤其是年龄较小的患者其外周免疫特征包括免疫细胞丰度、功能耗竭和炎性状态都在一定程度上呈现出类似衰老过程的改变。但是,肿瘤没有明显加速外周免疫细胞衰老状态,且抗肿瘤免疫应答引起的免疫细胞功能激活状态更为明显,cfDNA基因组变异水平与健康人相比显着增高。总之,我们表征了衰老和癌变过程外周免疫系统的特征改变,发现了年龄相关的免疫衰老可能为肿瘤的发生发展提供了土壤,而肿瘤宿主的外周免疫系统发生了类似衰老过程的特征性改变并可能引起了机体的抗肿瘤免疫应答反应。
万玲玲[10]（2021）在《循环肿瘤细胞与代谢组学的多元分析在早期非小细胞肺癌诊断中的应用价值》文中研究表明据世界卫生组织国际癌症研究中心（International Agency for Research on Cancer,IARC）资料统计显示,2018年全球约有209万肺癌新发病例,约176万死亡病例,发病率以及死亡率均位居第一位,5年生存率仅为18%。其主要原因是早期肺癌缺少典型的临床症状,确诊时已经是中晚期,或者已出现转移,因此肺癌的早期诊断是减少死亡以及改善预后的关键因素。目前肺癌诊断的常用方法有影像学检查、痰脱落细胞学和支气管镜检,这些方法容易造成漏诊与误诊,且仪器价格昂贵。因此迫切需要寻找到新的早期肺癌诊断的生物标志物。传统的肺癌肿瘤标记物是由肿瘤细胞产生的正常细胞缺乏或含量极微的抗原性物质,可以用于肿瘤筛查、预后监测及治疗效果监测等,常见的肺癌标志物癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）、细胞角蛋白19片段（cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1）、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific-enolase,NSE）、胃泌素释放前体（progastrin releasing peptide,Pro-GRP）、鳞状上皮细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen,SCC）等已经广泛用于肺癌的诊断方面,但是还不能用于早期筛查方面。细胞因子（cytokine,CK）是免疫系统的重要组成部分,参与机体正常的免疫稳态,异常情况下也会成为一些疾病发生发展的重要介质,参与炎症与肿瘤的发生。炎症细胞因子是慢性炎症与肺癌之间的桥梁,通过检测细胞因子在血清中的表达水平,可以对肺癌早期诊断有一定的参考价值。循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）是指来源于肿瘤组织并进入外周血循环的肿瘤细胞,即使在肿瘤形成的早期阶段,大量肿瘤细胞也可能流入循环系统,因此CTCs可以作为肿瘤无创和实时监测的工具,同时也是肿瘤患者液体活检重要标志物之一。法国一项研究表明,在慢阻肺患者中CTCs可较LDCT提前4-5年发现早期肺癌患者。早期CTCs检测主要以单纯计数为主,近年来用二代测序（next generation sequencing,NGS）技术对CTCs进行单细胞测序,为CTCs的研究提供了新的利器。我们前期研究显示,LDCT联合CTCs检测可以提高早期肺癌筛查的准确率,对捕获到的CTCs细胞进行NGS分析发现KIT、SMARCB1、TP53、ERBB2、PDGFRA、CFS1R and FGFR1等基因突变。代谢组学是研究某一时刻下正在发生的生命活动。代谢组学作为基因组学与蛋白质组学的补充,可以对肿瘤发生发展过程中的所有代谢物进行定性和定量分析。研究代谢物的表达量,代谢物与生理病理变化的关系,有助于筛选肿瘤患者早期诊断的生物标志物。研究表明,基于LC-MS的代谢组学方法在非吸烟女性非小细胞肺癌患者的血清代谢组学发现了56种差异代谢物,代谢谱特征为能量代谢紊乱、氨基酸代谢紊乱和脂类代谢紊乱等。Musharraf等采用GC-MS技术对肺癌患者、慢性阻塞性肺疾病患者、健康吸烟者和健康不吸烟者的血浆进行分析发现,肺癌患者血浆中脂肪酸、葡萄糖水平较其他组均升高。而Ding等人的研究提示糖代谢紊乱可能与肺癌密切相关。上述研究通过代谢组学方法发现了肺癌糖代谢增强和脂肪代谢的减弱,发现了一些潜在肺癌的肿瘤标志物。因此通过代谢组学寻找肺癌早期诊断的生物标志物具有重要意义。在本研究中,我们利用联合检测早期非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞、传统肿瘤标志物、细胞因子以提高早期非小细胞肺癌的诊断率,利用单细胞测序的方法检测早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs的突变基因,LC-MS非靶向代谢组学方法对早期非小细胞肺癌患者和健康对照者血清中代谢物质进行定性分析,通过分析探究早期非小细胞肺癌患者基因突变和代谢紊乱状态,将健康人与早期非小细胞肺癌患者很好的区分开,并从中探索早期非小细胞肺癌的生物学标志物。第一部分 循环肿瘤细胞与传统肿瘤标志物、细胞因子联合检测对早期非小细胞肺癌诊断的意义目的:探讨循环肿瘤细胞（CTCs）与传统肿瘤标志物、细胞因子联合检测在非小细胞肺癌早期诊断中的价值。方法:将2018-2019年首次在河北医科大学第四医院胸外科住院手术后确诊的48例早期非小细胞肺癌患者作为病例组,50例健康体检者作为对照组,分别检测两组人群外周血循环肿瘤细胞计数、肿瘤标志物及细胞因子。1.本实验通过采用新型CTCs捕获装置Cell Collector对早期非小细胞肺癌患者和健康人外周血CTCs进行捕获富集,应用免疫荧光技术进行检测鉴定。2.利用罗氏cobas e 801全自动化学发光免疫分析仪检测早期非小细胞肺癌患者与健康人外周血清肿瘤标志物癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）、细胞角蛋白19片段（cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1）、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific-enolase,NSE）、胃泌素释放前体（progastrin releasing peptide,Pro-GRP）、鳞状上皮细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen,SCC）水平。3.利用贝克曼NAVIOS流式细胞仪微球阵列术检测早期非小细胞肺癌患者和健康人外周血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-a、INF-g和IL-17A水平。4.利用受试者工作曲线（ROC）分析各指标单独检测与联合检测对早期非小细胞肺癌诊断价值,应用logistic回归分析比较联合肿瘤标记物检测和单独肿瘤标记物检测的灵敏度和特异度。所有数据采用SPSS 22.0软件进行统计分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.早期非小细胞肺癌患者外周血中的CTCs计数水平明显高于健康人,其计数水平、PD-L1表达水平与年龄、性别、吸烟史、临床病理分期和肿瘤大小对CTCs和/或PD-L1表达均无统计学差异（P>0.05）。2.利用ROC曲线分析CTCs表达水平对于早期非小细胞肺癌患者的诊断效果,CTCs对早期肺癌诊断ROC曲线下面积（AUC）为0.813,诊断灵敏度为62.5%,CTCs表达率对早期非小细胞肺的诊断有统计学意。（P<0.01）3.早期非小细胞肺癌患者外周血肿瘤标志物单独检测,标志物CEA（P<0.001）、CYFAR21-1（P<0.1）、NSE（P<0.001）水平均高于健康人,差异均有统计学意义。其中NSE敏感度最高,CEA与CYFAR21-1具有较高特异度。4.通过Logistic回归模型拟合CEA、CYFAR21-1、NSE联合检测结果,建立回归诊断模型Logit（P）,联合三种CEA、CYFAR21-1、NSE肿瘤标志物检测诊断早期非小细胞肺癌的灵敏度可达77.08%,特异度为74.00%。5.CTCs计数与肿瘤标志物单独与联合检测的诊断效果比较,结果显示（CTCs+CEA）对早期非小细胞肺癌的诊断效果最好,灵敏度达87.5%,特异度达到82.0%。其次为多个肿瘤标志（CEA+CYFAR21-1+NSE）联合检测,其灵敏度为89.58%,特异度为74.00%。6.早期非小细胞肺癌患者与健康人外周血细胞因子水平比较显示,早期非小细胞肺癌患者与健康人IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-a和IL-17A水平差异有统计学意义。（P<0.05）进一步分析,IL-17A对早期非小细胞肺癌的诊断效果最好。7.CTCs联合IL-17A检测,诊断早期非小细胞肺癌的灵敏度91.67%,特异度为73.33%。8.CTCs联合CEA与IL-17A检测,诊断早期非小细胞肺癌的灵敏度95.83%,特异度为58.00%。小结:1.本研究采用新型CTCs捕获装置Cell Collector对循环肿瘤细胞进行体内富集,并应用免疫荧光法检测循环肿瘤细胞,证实该方法具有较高的灵敏性及特异性,可以应用于早期非小细胞肺癌的检测。2.肿瘤标志物检测在早期非小细胞肺癌的诊断中有一定的价值,CTCs联合传统肿瘤标志物可以提高早期非小细胞肺癌的检出率,CTCs联合CEA诊断效果最好。3.CTCs联合细胞因子IL-7A检测,其灵敏度与特异度均高于单独检测。4.CTCs联合血清肿瘤标志物和/或细胞因子检测可以明显提高早期非小细胞肺癌患者的诊断敏感度,对早期非小细胞肺癌的诊断具有潜在的临床价值。第二部分 早期非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞基因突变的二代测序研究目的:利用二代测序技术检测质检合格的19例早期非小细胞肺癌患者外周血的CTCs,分析CTCs细胞的基因突变情况,探讨CTCs基因突变与早期非小细胞肺癌发生发展的关系,为早期非小细胞肺癌的筛查与诊断提供相应的分子标志物。方法:1.在早期非小细胞肺癌外周血CTCs收集完成后,根据染色试剂盒的说明对捕获的CTCs的细胞收集器进行染色和鉴定,并提供阴性对照（NK92细胞）和阳性对照（SK-BR-3细胞）,进行CD45（Exbio,克隆Mem-28-Alexa647）抗体,细胞角蛋白7/19/pan-CK抗体（Exbio Praha,克隆A53-B/A2-Alexa488）和PD-L1（克隆PD-L1,Abcam）抗体染色分析,随后用Hoechst33342（Sigma）进行核染色,鉴定肿瘤细胞。2.免疫荧光染色鉴定CTCs后,定位并剪切显微镜下CTCs区域。将取样针中的一小部分CTCs收集到PCR管中,采用MALBAC方法进行全基因组扩增。采用Qubit3.0和Nanodrop2000（Thermo Fisher）进行定量分析。结果:1.对19例早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs进行二代测序,检测127个基因突变,早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs基因突变比例大于50%的有94.7%。其中有4例患者外周血CTCs基因突变比例>70%,12例患者外周血CTCs基因突变比例在60%-70%之间,2例患者外周血CTCs基因突变比例在50%-60%之间,有1例患者外周血CTCs基因突变在50%以下。2.对19例早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs基因突变频率进行分析,19例早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs高频突变基因分别为NOTCH1、IGF2、EGFR、PTCH1、ARID1A。3.对19例早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs进行二代测序,共检测到62个肺癌相关基因突变,检测到229个突变位点。统计分析高频突变基因发现,多位点突变频率最高的是TP53和ARID1A。4.二代测序结果显示,在早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs基因突变中以TP53、NOTCH1、ARID1A、SMARCA4多位点基因突变频率较高,占所有突变位点的37.99%。5.二代测序结果显示,在早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs基因突变中,TP53基因突变分别与ARID1A共突变11例,与NOTCH1共突变11例,与SMARCA4基因共突变9例,与ALK共突变8例,TP53基因突变与EGFR、ALK、CDKN2A等60个基因存在多基因共突变现象。结论:二代测序结果发现19例早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs基因突变比例较高,高频突变基因分别为NOTCH1、IGF2、EGFR、PTCH1、ARID1A。这些基因突变是否可用于早期非小细胞肺癌筛查的分子标志物有待于进一步证实。小结:第二代测序结果显示19例早期肺癌患者外周血CTCs基因突变中有62个肺癌相关突变,其中TP53、NOTCH1、ARID1A和SMARCA4是与早期肺癌外周血CTCs基因相关的高频突变。而这些基因突变是否可以作为肺癌早期筛查的分子标志物,还有待进一步证实。第三部分 代谢组学多元分析在早期非小细胞肺癌诊断中的应用目的:研究早期非小细胞肺癌患者与健康人的代谢产物的差别,探讨LC-MS非靶向代谢组学技术寻找代谢差异物应用于早期肺小细胞肺癌诊断的价值。方法:1.临床样本收集,收集早期非小细胞肺癌患者及健康人血清,其中早期非小细胞肺癌CTCs阳性患者30例（均为I、II期腺癌）与健康对照30例,进行空腹采血。5毫升全血收集到一个无菌凝固BD真空血液收集管,立即颠倒混合5-8倍,在30-120分钟,4 C和离心机在4摄氏度10分钟,1300克和0.2-1毫升血清转移到1.5毫升EP管,保存在-80 C。与此同时,30名健康对照为空腹血液取样,采血与血清制备同肺癌组。2.用LC-MS非靶向代谢组学方法检测早期非小细胞肺癌和健康对照血清进行分析,采集血清样品100μL,采用400μL甲醇:乙腈（1:1,v/v）溶液提取代谢产物。将混合物旋涡30秒,在冰上超声10分钟,此步骤重复3次。样品在-20℃下放置30分钟。在4℃下13000 g离心15分钟后,将上清小心转移到样品瓶中进行LC-MS/MS分析。3.使用Uplc-Triple-Tof-Ms平台（AB SCIEX,USA）分析代谢产物。采用Exion LCTMAD系统（AB Sciex,USA）,ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（100 mm 2.1 mm内径,1.7μm;水域,米尔福德,美国）。流动相A为水（含0.1%甲酸）,流动相B为乙腈/异丙醇（1/1）（含0.1%甲酸）;流速为0.40m L/min,进样量为20μL,柱温为40。作为系统调整和质量控制过程的一部分,通过混合所有等体积的样品来制备复合质量控制样品（QC）。QC样品定期进样（每9个样品）,以监测分析的稳定性。QC样品的处理和测试方法与分析样品相同。最好是代表整个样本集,并监测分析的稳定性。4.UPLC-TOF/MS分析后,将原始数据导入Progenesis QI 2.3（Waters Corporation,Milford,USA）进行峰检测和比较。预处理结果生成了一个由保留时间（RT）、质量电荷比（m/z）值和峰值强度组成的数据矩阵。所有样本中至少有50%的代谢特征被保留。过滤后,估计某一特定代谢物最低代谢物值的一半。在这些特定样本中,代谢物水平低于定量下限,每个代谢物特征用总和归一化。采用QC样品进行数据质量控制（重复性）,删除质量控制样品的相对标准偏差（RSD）变量>30%,以得到最终的数据矩阵,供后续分析。5.非靶标代谢组学统计分析,通过与数据库（http://www.hmdb.ca/,https://metlin.scripps.edu/）匹配,最终得到代谢物列表和数据矩阵。采用主成分分析（PCA）和偏最小二乘判别分析（PLS-DA）,正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）分析差异代谢物。通过模型参数R2和Q2来评估模型的有效性,这两个参数分别为模型的可解释性和可预测性提供了信息,并避免了过度拟合的风险。采用OPLS-DA模型计算预测变量重要性（VIP）,进行差异代谢物分析,筛选标准是变量投影重要性（VIP）大于1.0且t检验结果P值<0.05。用于代谢物相关通路分析的数据库是京都基因和基因组百科全书（KEGG;http://www.genome.jp/kegg/）。6.采用SPSS 22.0软件对数据进行分析。计量数据采用均值标准差服从正态分布,不服从正态分布的采用中位数（四分位数）,计数数据采用频率或率。正态分布计量资料比较采用t检验,非正态分布计量资料比较采用秩和检验。计数资料比较采用卡方检验。采用ROC曲线分析不同指标对肺癌的诊断效果。假定值P-values<0.05为显着性。结果:1.采用非靶标LC-MS检测将早期非小细胞肺癌患者（LC）和健康人（NC）血清样本进行正负离子模式全扫描,得到原始数据和图谱,血清LC-MS非靶向代谢组学检测方法根据美吉自主数据库分析鉴定血清样本的TIC,覆盖的所有主代谢通路的1212个代谢产物进行了检测分析,涵盖了31条主要代谢通路。2.对数据进行PCA分析,观察早期非小细胞肺癌与健康人的总体代谢差异和组内样本之间的差异度大小,PCA得分图结果显示早期非小细胞肺癌患者与健康人代谢物有明显差异。应用ropls Version1.6.2软件PCA对检测30例早期非小细胞肺癌患者和健康人样本的差异代谢物数据进行趋势分析,观察到早期非小细胞肺癌患者与健康人之间的变异度大小。PCA、PLS-DA、OPLS-DA得分图结果显示早期肺非小细胞癌患者与健康人样本可以很明显分开。因此考虑早期非小细胞肺癌与健康人个体内差异代谢物有明显不同。3.统计学分析发现组间含量有差异的代谢物共100个,应用ropls Version1.6.2软件中的PLS-DA、t检验（Student’s t-test）以及差异倍数分析法（FC）筛选能区别早期非小细胞肺癌患者和健康人的差异代谢特征。结合VIP>1,P<0.05及FC>1或FC<1,结果发现,两组样本之间存在100个差异有明显统计学意义的代谢特征。早期非小细胞肺癌患者差异代谢物最显着的涉及脂质物质,特别是鞘脂（如三己基神经酰胺）和甘油磷脂（如心磷脂）,它们是细胞膜的组成成分。4.筛选出的100个差异代谢物通过人类代谢组数据库（Human Metabolome Database,HMDB）分类为化合物,使用KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）数据库进行pathway注释和富集分析。我们筛选出了6种不同类型的代谢物,KEGG通路分析分为六类。通过KEGG富集的三个最重要的途径是癌症中的胆碱代谢、甘油磷脂代谢和逆行的内源性大麻素信号通路。5.肿瘤的发生发展与糖脂代谢密切相关,本研究中,通过KEGG通路分析,糖脂代谢通路和肿瘤代谢通路中富集的差异代谢物较多。21个差异代谢物涉及脂质代谢途径,5个差异代谢物涉及多糖合成和代谢途径,15个差异代谢物涉及肿瘤代谢途径,此为研究重点关注的通路。6.筛选早期NSCLC的潜在生物标志物,研究进一步比较了早期非小细胞肺癌患者与健康人之间脂质代谢途径、多糖合成和代谢途径以及肿瘤相关途径中的差异代谢物,并使用工作者受试曲线（ROC）和曲线下面积（AUC）,得出10个差异代谢物,3个上调,7个下调。小结:1.本次研究探索非靶标代谢组学研究早期非小细胞肺癌的辅助诊断标志物的方法。该种方法对标志物进行半定量分析,使筛选出的标志物具有可重复性,有效提高了其临床应用价值。2.早期非小细胞肺癌患者呈现出不同于健康人的代谢谱图特征,早期非小细胞肺癌患者多种代谢物的含量显着不同于健康人,这为进一步实验与临床研究提供了一定的参考依据,并为实现早期非小细胞肺癌的诊断提供一定的指导。3.通过我们的研究,得出10种差异种代谢物作为潜在早期NSCLC生物标志物,可用于辅助诊断,结果需要进一步靶向代谢组学技术进行验证。4.代谢组学多元分析得出差异代谢物主要集中在糖脂代谢通路特别是磷脂代谢通路,脂类代谢在早期非小细胞肺癌的发生发展中起到重要作用。我们提出该通路中的关键酶的可能作为新的治疗靶点用于今后的研究。
二、肺癌癌胚抗原升高对机体免疫系统抑制的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肺癌癌胚抗原升高对机体免疫系统抑制的研究（论文提纲范文）
（1）冷消融联合中药治疗老年晚期非小细胞肺癌的临床研究和实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| (一) 老年晚期非小细胞肺癌的现代医学治疗进展 |
| 1. 肺癌的流行病学 |
| 2. 老年患者的特殊性 |
| 3. 老年晚期非小细胞肺癌的主要治疗措施 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| (二) 老年晚期非小细胞肺癌的中医治疗进展 |
| 1. 中医对老年晚期非小细胞肺癌的认识 |
| 2. 老年晚期非小细胞肺癌患者的中医特征 |
| 3. 老年晚期非小细胞肺癌的中医治疗原则 |
| 4. 老年晚期非小细胞肺癌的中医治疗作用 |
| 5. 冷消融联合中药模式是中西医结合模式的创新探索 |
| 6. 中医药治疗老年晚期非小细胞肺癌的优势与不足 |
| 7. 中医药治疗晚期肺癌的展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 冷消融联合中药治疗老年晚期非小细胞肺癌的队列研究和中医证素治法分析 |
| 前言 |
| 研究一 冷消融联合中药治疗老年晚期非小细胞肺癌的队列研究和优势人群特征分析 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 研究内容 |
| 3. 研究结果 |
| 研究二 冷消融联合中药队列患者术后证素变化和治法组方分析 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 研究内容 |
| 3. 研究结果 |
| 讨论 |
| 1. 基于真实世界数据的多中心队列研究方法 |
| 2. 冷消融联合中药模式是中西医结合模式的创新探索 |
| 3. 冷消融联合中药模式是局部与全身治疗的有机统一 |
| 4. 多中心回顾性队列研究结果分析 |
| 5. 不同治疗方法优势人群特征分析 |
| 6. 冷消融术后患者的证素变化分析 |
| 7. 冷消融术后的治法组方规律分析 |
| 8. 临床部分的研究小结 |
| 第三章 冷消融联合中药干预老龄Lewis肺癌小鼠的疗效和机制研究 |
| 前言 |
| 实验一 冷消融联合中药对老龄Lewis肺癌荷瘤小鼠生存期的影响 |
| 1. 实验材料、方法和技术路线图 |
| 2. 实验结果 |
| 实验二 冷消融联合中药对老龄Lewis肺癌荷瘤小鼠转移作用及机制研究 |
| 1. 实验材料、方法和技术路线图 |
| 2. 实验结果 |
| 讨论 |
| 1. 转移是老年晚期非小细胞肺癌患者治疗失败和死亡的最主要原因 |
| 2. 血管生成和免疫抑制是转移的重要机制 |
| 3. “温通活血化瘀”治法抑制转移的理论探讨 |
| 4. 醒消丸是“温通活血化瘀”治法的代表方剂 |
| 5. 基于“阳化气,阴成形”理论探讨冷消融联合中药抑制转移过程 |
| 6. 实验研究的结果分析 |
| 7. 实验部分的研究小结 |
| 结语 |
| 1. 研究结论 |
| 2. 创新与不足 |
| 3. 思考与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录1 病例报告表 |
| 附录2 ECOG和KPS评分标准 |
| 附录3 |
| 个人简历 |
（2）电针足三里激活迷走神经调控乳腺癌小鼠炎性水平和抗肿瘤免疫功能的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 电针足三里对乳腺癌模型小鼠肿瘤生长的作用 |
| 一、材料与方法 |
| 1. 实验动物与细胞 |
| 2. 主要实验试剂与仪器 |
| 3. 实验方法 |
| 二、实验结果 |
| 1. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠肿瘤生长的作用 |
| 2. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠脾脏的作用 |
| 三、小结 |
| 第二部分 电针足三里对乳腺癌模型小鼠的抗炎作用 |
| 一、材料与方法 |
| 1. 实验动物与细胞 |
| 2. 主要实验试剂与仪器 |
| 3. 实验方法 |
| 二、实验结果 |
| 1. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠系统性抗炎作用 |
| 2. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠肿瘤局部抗炎作用 |
| 三、小结 |
| 第三部分 电针足三里对乳腺癌模型小鼠抗肿瘤免疫细胞的作用 |
| 一、材料与方法 |
| 1. 实验动物与细胞 |
| 2. 主要实验试剂与仪器 |
| 3. 实验方法 |
| 二、实验结果 |
| 1. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠外周血内抗肿瘤免疫细胞的作用 |
| 2. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠脾脏内抗肿瘤免疫细胞的作用 |
| 3. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠肿瘤局部组织内抗肿瘤免疫细胞的作用 |
| 4. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠抗肿瘤免疫细胞杀伤功能相关蛋白的作用 |
| 三、小结 |
| 第四部分 电针足三里对乳腺癌模型小鼠免疫抑制细胞的作用 |
| 一、材料与方法 |
| 1. 实验动物与细胞 |
| 2. 主要实验试剂与仪器 |
| 3. 实验方法 |
| 二、实验结果 |
| 1. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠外周血内MDSC的作用 |
| 2. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠脾脏MDSC的作用 |
| 3. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠肿瘤局部组织内MDSC的作用 |
| 4. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠MDSC免疫抑制功能相关蛋白的作用 |
| 5. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠MDSC免疫抑制功能的作用 |
| 三、小结 |
| 第五部分 迷走神经介导电针足三里调节抗炎-免疫减缓乳腺癌进展 |
| 实验一 电针足三里对乳腺癌模型小鼠迷走传出神经的作用 |
| 一、材料与方法 |
| 1. 实验动物与细胞 |
| 2. 主要实验试剂与仪器 |
| 3. 实验方法 |
| 二、实验结果 |
| 1. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠脑干DMV区ChAT阳性神经元的作用 |
| 2. 电针足三里对乳腺癌模型小鼠血浆和肿瘤局部组织内ACh的作用 |
| 实验二 激活α7nAChR对乳腺癌模型小鼠的抗炎-免疫调控作用 |
| 一、材料与方法 |
| 1. 实验动物与细胞 |
| 2. 主要实验试剂与仪器 |
| 3. 实验方法 |
| 二、实验结果 |
| 1. 激活α7nAchR对乳腺癌模型小鼠肿瘤生长的作用 |
| 2. 激活α7nAchR对乳腺癌模型小鼠的抗炎作用 |
| 3. 激活α7nAchR对乳腺癌模型小鼠免疫功能的作用 |
| 实验三膈下迷走神经切断验证电针足三里对乳腺癌模型小鼠的调控作用 |
| 一、材料与方法 |
| 1. 实验动物与细胞 |
| 2. 主要实验试剂与仪器 |
| 3. 实验方法 |
| 二、实验结果 |
| 1. 膈下迷走神经对电针减缓乳腺癌模型小鼠肿瘤生长作用的影响 |
| 2. 膈下迷走神经对电针减轻乳腺癌模型小鼠脾肿大作用的影响 |
| 3. 膈下迷走神经对电针增强乳腺癌模型小鼠抗肿瘤免疫功能作用的影响 |
| 小结 |
| 分析与讨论 |
| 一、对乳腺癌模型小鼠足三里行电针干预的依据及方式 |
| 1. 理论依据 |
| 2. 电针干预方式 |
| 3. 电针干预时程 |
| 二、电针足三里对乳腺癌模型小鼠的抗炎作用 |
| 三、电针足三里对乳腺癌模型小鼠免疫功能的调节 |
| 1. 对抗肿瘤免疫细胞CD8+T细胞和NK细胞的调节 |
| 2. 对免疫抑制细胞MDSC的调节 |
| 3. 体外实验验证电针足三里对乳腺癌模型小鼠MDSC的抑制作用 |
| 四、电针足三里调控乳腺癌模型小鼠炎性水平与免疫功能的相关性 |
| 五、电针足三里对乳腺癌模型小鼠抗炎-免疫调控作用的机制 |
| 1. 迷走传出神经介导电针足三里对乳腺癌模型小鼠的抗炎-免疫调控 |
| 2. 迷走神经与胂瘤进展的相关性 |
| 全文总结及展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 文献综述 针灸通过迷走神经调控免疫炎性反应的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
（3）CEACAM6启动子介导PE38KDEL毒素基因治疗人舌鳞状细胞癌的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 人舌鳞状细胞癌概述 |
| 1.2 人舌鳞状细胞癌的治疗现状 |
| 1.2.1 手术治疗 |
| 1.2.2 放射治疗 |
| 1.2.3 化疗 |
| 1.2.4 分子靶向治疗 |
| 1.3 肿瘤基因治疗概述 |
| 1.3.1 抑癌基因的癌症治疗 |
| 1.3.2 RNA干扰和沉默 |
| 1.3.3 抗肿瘤血管生成以及抗表皮生长因子受体的基因治疗 |
| 1.3.4 免疫基因疗法 |
| 1.3.5 溶瘤疗法 |
| 1.3.6 基因编辑法 |
| 1.3.7 自杀基因疗法 |
| 1.4 假单胞菌外毒素概述 |
| 1.4.1 假单胞菌外毒素的结构及其致毒机理 |
| 1.4.2 假单胞菌外毒素在肿瘤毒素治疗中的应用 |
| 1.5 癌胚抗原相关细胞粘附因子6 概述 |
| 1.5.1 CEACAM6 的结构 |
| 1.5.2 CEACAM6 与肿瘤的转移的关系 |
| 1.5.3 CEACAM6 与肿瘤的凋亡及分化的关系 |
| 1.5.4 CEACAM6 与肿瘤抗药性的关系 |
| 1.5.5 CEACAM6 与肿瘤免疫的关系 |
| 1.6 本论文立题依据和研究内容 |
| 第二章 CEACAM6 启动子调控的PE38KDEL毒素表达质粒的构建 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 主要试剂及材料 |
| 2.2.2 所用质粒的结构及特征图谱 |
| 2.2.3 主要仪器 |
| 2.2.4 主要溶液的配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 RNA提取 |
| 2.3.3 反转录 |
| 2.3.4 实时荧光定量PCR |
| 2.3.5 TCA8113 细胞基因组的提取 |
| 2.3.6 CEACAM6 启动子及PE38KDEL片段的扩增 |
| 2.3.7 DNA的回收 |
| 2.3.8 DNA双酶切 |
| 2.3.9 目的基因与质粒载体的连接 |
| 2.3.10 大肠杆菌感受态细胞的制备 |
| 2.3.11 大肠杆菌感受态细胞的转化 |
| 2.3.12 质粒提取 |
| 2.3.13 质粒的鉴定 |
| 2.3.14 细胞转染 |
| 2.3.15 荧光素酶测定 |
| 2.3.16 BCA定量 |
| 2.3.17 数据统计分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 不同细胞中CEACAM6 基因的表达 |
| 2.4.2 质粒的构建 |
| 2.4.3 质粒的双酶切鉴定 |
| 2.4.4 质粒的测序鉴定 |
| 2.4.5 CEACAM6 启动子在不同细胞中的表达活性 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 CEACAM6 启动子调控的PE38KDEL毒素表达质粒的体外抗肿瘤活性 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 材料及试剂 |
| 3.2.2 主要仪器 |
| 3.2.3 主要试剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 荧光素酶合成抑制试验 |
| 3.3.2 细胞增殖抑制试验 |
| 3.3.3 流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡试验 |
| 3.3.4 TUNEL细胞凋亡检测试验 |
| 3.3.5 细胞蛋白的提取 |
| 3.3.6 蛋白免疫印迹实验(Western Blot,WB) |
| 3.3.7 线粒体膜电位检测 |
| 3.3.8 流式细胞术检测细胞周期分布试验 |
| 3.3.9 Transwell实验 |
| 3.3.10 伤口愈合实验 |
| 3.3.11 数据统计分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 pCEACAM6-PE38KDEL对荧光素酶合成的抑制作用 |
| 3.4.2 pCEACAM6-PE38KDEL对细胞增殖的抑制作用 |
| 3.4.3 pCEACAM6-PE38KDEL对细胞凋亡的诱导作用 |
| 3.4.4 pCEACAM6-PE38KDEL通过线粒体途径诱导细胞凋亡 |
| 3.4.5 pCEACAM6-PE38KDEL对细胞线粒体膜电位的影响 |
| 3.4.6 pCEACAM6-PE38KDEL对细胞周期的阻滞作用 |
| 3.4.7 pCEACAM6-PE38KDEL对细胞迁移能力的影响 |
| 3.4.8 pCEACAM6-PE38KDEL对细胞侵袭能力的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 CEACAM6启动子调控的PE38KDEL毒素表达质粒的体内抗肿瘤活性 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 仪器及试剂 |
| 4.2.1 材料及试剂 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.2.3 主要试剂的配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 人舌鳞状细胞癌细胞皮下移植瘤动物模型的建立 |
| 4.3.2 人舌鳞状细胞癌细胞皮下移植瘤动物模型的治疗方案 |
| 4.3.3 尾静脉注射法进行小鼠体内转染 |
| 4.3.4 样本采集及切片的制作 |
| 4.3.5 H&E染色 |
| 4.3.6 TUNEL细胞凋亡检测 |
| 4.3.7 Ki-67 免疫组化 |
| 4.3.8 数据统计分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 pCEACAM6-PE38KDEL对肿瘤生长及形成的抑制作用 |
| 4.4.2 pCEACAM6-PE38KDEL质粒对肿瘤的体内杀伤作用 |
| 4.4.3 pCEACAM6-PE38KDEL的系统毒性 |
| 4.5 本章小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）肿瘤相关自身抗体检测在肺癌诊断中的临床价值研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 研究对象与方法 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 肺癌组纳入及排除标准 |
| 1.1.1 肺癌的诊断标准 |
| 1.1.2 肺癌组纳入标准 |
| 1.1.3 肺癌组排除标准 |
| 1.2 良性疾病组纳入和排除标准 |
| 1.2.1 良性疾病组纳入标准 |
| 1.2.2 良性疾病组排除标准 |
| 1.3 健康人群组纳入和排除标准 |
| 1.3.1 健康人群组纳入标准 |
| 1.3.2 健康人群组排除标准 |
| 1.4 临床资料收集 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 实验样本的采集、处理及保存条件 |
| 2.2 肺癌自身抗体7 项检测方法 |
| 2.2.1 检测原理 |
| 2.2.2 实验前的准备 |
| 2.2.3 实验步骤 |
| 2.2.4 结果判读 |
| 3 血清肿瘤标志物检测方法 |
| 4 统计学方法 |
| 结果 |
| 1 研究对象的一般资料及临床特征 |
| 2 7 种TAAbs单项及联合判读在三组人群中血清表达水平和阳性率的比较 |
| 2.1 7 种TAAbs在三组人群血清中表达水平的比较 |
| 2.2 7 种TAAbs单项及联合判读在三组人群组间阳性率的比较 |
| 3 7 种TAAbs单项及联合判读在早期肺癌组和健康人群组中血清表达水平和阳性率的比较 |
| 3.1 7 种TAAbs单项在早期肺癌组和健康人群组表达水平比较 |
| 3.2 7 种TAAbs单项及联合判读在早期肺癌组和健康人群组间阳性率比较 |
| 4 7 种TAAbs联合判读和传统肿瘤标志物在不同病理特征肺癌患者中阳性率的比较 |
| 4.1 7 种TAAbs联合判读和传统肿瘤标志物在腺癌组和鳞癌组中阳性率的比较 |
| 3cm组中阳性率的比较'>4.2 7种TAAbs联合判读和传统肿瘤标志物在肿瘤大小≤3cm和>3cm组中阳性率的比较 |
| 4.3 7 种TAAbs联合判读和传统肿瘤标志物在有无淋巴结转移组中阳性率的比较 |
| 4.4 7 种TAAbs联合判读和传统肿瘤标志物在有无远端转移组中阳性率的比较 |
| 4.5 7 种TAAbs联合判读和传统肿瘤标志物在早期肺癌组和晚期肺癌组中阳性率的比较 |
| 5 自身抗体、传统肿瘤标志物单项及联合检测对肺癌的诊断价值 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录1 文献综述 肺癌七种自身抗体在肺癌诊断中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录2 攻读硕士学位期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（5）Tim-3与PD-1在多发性骨髓瘤患者NK细胞及单核细胞上的表达及意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 Tim-3在多发性骨髓瘤患者NK细胞及单核细胞上的表达及意义 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 第二部分 PD-1在多发性骨髓瘤患者NK细胞及单核细胞上的表达及意义 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词对照表 |
| 综述 Tim-3在肿瘤免疫治疗中的应用研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（6）西宁地区NLR、PLR与非小细胞肺癌的关系（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 资料与方法 |
| 2.1 一般资料 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.3 统计学处理 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 两组性别、年龄、BMI、NLR、PLR比较 |
| 3.2 不同指标与非小细胞肺癌关系的单因素分析 |
| 3.3 ROC分析 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 科研成果 |
| 致谢 |
| 附录 综述 外周血NLR、PLR对非小细胞肺癌诊断价值的 研究进展 |
| 参考文献 |
（7）“扶正解毒祛瘀法”参与治疗小细胞肺癌的回顾性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 资料收集 |
| 1.5 观察指标 |
| 1.6 用药规律分析 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 研究结果 |
| 2.1 临床资料特点 |
| 2.2 生存分析 |
| 2.3 多因素Cox回归分析 |
| 2.4 基于“扶正解毒祛瘀法”治疗SCLC用药规律初探 |
| 3 讨论 |
| 3.1 单因素生存分析 |
| 3.2 多因素Cox回归分析 |
| 3.3 基于扶正解毒祛瘀法治疗SCLC用药规律初探 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述一 中医药治疗小细胞肺癌的研究进展 |
| 1 中西医结合临床治疗进展 |
| 1.1 “扶正解毒祛瘀法”联合化疗治疗SCLC进展 |
| 1.2 “扶正解毒祛瘀法”联合放疗治疗SCLC进展 |
| 1.3 “扶正解毒祛瘀法”联合免疫治疗SCLC进展 |
| 2 中医各家对小细胞肺癌的辨证论治经验 |
| 2.1 中医各家SCLC的病机认识及治疗原则 |
| 2.2 中医各家SCLC辨治经验 |
| 3 小结 |
| 综述二 小细胞肺癌免疫及靶向药物相关治疗研究进展 |
| 1 小细胞肺癌的治疗现状 |
| 2 小细胞肺癌免疫治疗研究进展 |
| 2.1 免疫检查点抑制剂(ICIs) |
| 2.2 P53 肿瘤疫苗 |
| 3 小细胞肺癌靶向药物或免疫药物治疗研究进展 |
| 3.1 早期靶向药物或免疫药物治疗药物 |
| 3.2 抗血管生成酪氨酸激酶抑制剂 |
| 3.3 凋亡因子 |
| 3.4 Aurora激酶抑制剂 |
| 3.5 成纤维细胞生长因子受体抑制剂 |
| 3.6 抗血管生成靶向药物癌症干细胞抑制剂 |
| 3.7 聚ADP核糖聚合酶抑制剂 |
| 3.8 新型靶向药物的诞生 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）TIM-3在上皮性卵巢癌发生及其临床预后中的意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 TIM-3在上皮性卵巢癌组织中的表达及其预后关系的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 TIM-3对卵巢癌细胞侵袭转移的影响及机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 TIM-3基因多态性与上皮性卵巢癌遗传易感性及临床预后的关联研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 TIM-3与肿瘤发生发展关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）一、肺癌宿主外周免疫特征及其预后价值的研究 二、人衰老与癌变过程外周免疫系统特征研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 肺癌宿主外周免疫特征及其预后价值的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 外周血样品 |
| 1.2 公共数据库肺癌数据 |
| 1.3 实验耗材与试剂 |
| 1.4 生物信息学分析工具 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 样品收集 |
| 2.2 外周血白细胞分离及总RNA提取 |
| 2.3 RNA文库构建及测序策略 |
| 2.4 RNA测序数据处理 |
| 2.5 数据分析 |
| 2.6 统计学方法 |
| 结果 |
| 1. 入组研究对象信息统计 |
| 2. 肺癌患者存在明显广泛的血液转录组扰动 |
| 3. 肺癌患者外周白细胞转录组存在异质性 |
| 4. 转录组全局性特征改变揭示肺癌外周白细胞转录谱异质性 |
| 5. 两个肺癌亚群抗肿瘤免疫状态存在差异 |
| 6. 外周转录组的特征基因可以预测肺癌患者的预后 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 人衰老与癌变过程外周免疫系统特征研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 外周血样品 |
| 1.2 公共数据库数据 |
| 1.3 实验试剂与耗材 |
| 1.4 生物信息学分析工具 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 样品收集 |
| 2.2 外周血白细胞DNA及RNA提取 |
| 2.3 文库构建及测序 |
| 2.4 测序数据处理 |
| 2.5 数据分析 |
| 2.6 统计学方法 |
| 结果 |
| 第一章 衰老过程中外周免疫系统特征性改变 |
| 1.1 衰老队列样品信息 |
| 1.2 年龄因素是外周免疫细胞转录波动的主要驱动力之一 |
| 1.3 免疫细胞亚型分布偏好随年龄增加发生改变 |
| 1.4 衰老过程中免疫细胞更多地趋于衰老状态 |
| 1.5 衰老过程中基因表达的动态变化特征 |
| 1.6 单细胞水平揭示衰老个体免疫细胞功能衰退 |
| 第二章 癌变过程外周免疫系统的特征及其与免疫衰老的联系 |
| 2.1 癌变队列免疫细胞亚型分布特征 |
| 2.2 癌变队列免疫细胞状态分析 |
| 2.3 癌变队列分子表达谱特征性改变 |
| 2.4 癌变过程的宿主血清学特征剖析 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 基金资助 |
| 已发表与学位论文相关的英文论文及成果 |
| 文献综述 免疫衰老与肿瘤发生发展及相关机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）循环肿瘤细胞与代谢组学的多元分析在早期非小细胞肺癌诊断中的应用价值（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 循环肿瘤细胞与传统肿瘤标志物、细胞因子联合检测对早期NSCLC诊断的意义 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 早期非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞基因突变的二代测序研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 代谢组学多元分析在早期NSCLC诊断中的应用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 循环肿瘤细胞检测技术在肺癌中的研究与应用进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、肺癌癌胚抗原升高对机体免疫系统抑制的研究（论文参考文献）
- [1]冷消融联合中药治疗老年晚期非小细胞肺癌的临床研究和实验研究[D]. 王剑锋. 北京中医药大学, 2021(02)
- [2]电针足三里激活迷走神经调控乳腺癌小鼠炎性水平和抗肿瘤免疫功能的研究[D]. 张知云. 浙江中医药大学, 2021
- [3]CEACAM6启动子介导PE38KDEL毒素基因治疗人舌鳞状细胞癌的研究[D]. 郭琼. 吉林大学, 2021(01)
- [4]肿瘤相关自身抗体检测在肺癌诊断中的临床价值研究[D]. 徐鲁. 湖北中医药大学, 2021(10)
- [5]Tim-3与PD-1在多发性骨髓瘤患者NK细胞及单核细胞上的表达及意义[D]. 陈兴财. 广西中医药大学, 2021(02)
- [6]西宁地区NLR、PLR与非小细胞肺癌的关系[D]. 徐坤保. 青海大学, 2021(02)
- [7]“扶正解毒祛瘀法”参与治疗小细胞肺癌的回顾性研究[D]. 孙一丹. 天津中医药大学, 2021(01)
- [8]TIM-3在上皮性卵巢癌发生及其临床预后中的意义[D]. 吴建磊. 河北医科大学, 2021(02)
- [9]一、肺癌宿主外周免疫特征及其预后价值的研究 二、人衰老与癌变过程外周免疫系统特征研究[D]. 张琦. 北京协和医学院, 2021
- [10]循环肿瘤细胞与代谢组学的多元分析在早期非小细胞肺癌诊断中的应用价值[D]. 万玲玲. 河北医科大学, 2021(02)