一、人类新型Krppel类转录因子hBKLF的cDNA克垄、亚细胞定位及表达特征（论文文献综述）
王茫桔,马晓芸,石永进,武淑兰,贺福初[1]（2006）在《新型人转录因子hBKLF对K562细胞增殖、分化及血红蛋白合成作用的研究》文中提出孕22周的胎肝是胎儿的主要造血器官,其中含有大量与造血相关的调控因子。人碱性Krüppel样因子（humanbasicKrüppel-likefactor,hBKLF）是本研究室从这一时期胎肝cDNA文库中新克隆的转录因子。对其C端的结构分析发现,它含有3个特征性C2H2锌指结构,因此属于KLF转录因子家族。前期的表达谱研究工作显示,hBKLF在成人外周血白细胞、骨髓和胎肝中表达量高,在红系中有表达,这提示它可能与造血相关。本研究以K562细胞为模型,研究hBKLF与造血细胞增殖、分化及血红蛋白合成的关系。构建hBKLF正义及反义真核表达载体,转染K562细胞,经G418筛选4周,得到稳定细胞株;用RT-PCR、Westernblot方法测定转染后K562细胞hBKLF表达水平的变化;以转染空质粒的K562细胞为对照组,在显微镜下直接观察转染正义质粒和反义质粒的两组细胞形态的改变;用MTT法比较增殖速率的变化;用甲基纤维素半固体培养法比较集落形成率的差别;用苯息丁法观察氯高铁血红素（hemin）诱导K562细胞分化后血红蛋白合成水平的差异。结果表明正义质粒和反义质粒经NcoI酶切鉴定构建正确。转染正义质粒的K562细胞（正义组）中hBKLF的mRNA及蛋白质表达水平增加,转染反义质粒的K562细胞（反义组）中hBKLF的mRNA水平降低。增殖活性在反义组、正义组、对照组分别为1.335±0.022、1.067±0.010、1.118±0.014,反义组K562细胞的增殖速率加快,正义组细胞增殖速率减慢（P<0.001）。细胞形态在各组间无明显区别。集落形成率在反义组、正义组、对照组分别为148±13、136±10、141±10,各组间无显着差异（P>0.05）。3组细胞血红蛋白合成水平在hemin诱导后均升高,诱导后血红蛋白升高倍数在对照组、反义组、正义组分别为9.064±1.637、14.360±2.185、4.820±0.404,反义组K562细胞合成血红蛋白能力增加,正义组合成血红蛋白能力下降（P<0.05）。结论hBKLF可以抑制K562细胞的增殖,对血红蛋白合成有负调控作用,但未观察到hBKLF对细胞形态及克隆形成率的影响
周畅,李麓芸,卢光[2]（2005）在《小鼠睾丸和卵巢特异表达基因Zfp474的克隆与特征分析》文中提出运用NCBI中的数据库消减杂交 （DigitalDifferentialDisplay ,DDD）分析方法 ,从小鼠睾丸组织中分离了一个含有C2HC/C3H结构的新型锌指蛋白基因———Zfp4 74 （GenBank登录号 :AY35 0 70 9）。通过推导和进一步的RT PCR实验证实 :该基因含 4个外显子 ,gDNA在染色体上跨度 2 986 9bp ,定位于小鼠染色体 1 8D1。cDNA编码一个含 347个氨基酸的新蛋白 ,带有C2HC/C3H结构域。Northern杂交结果显示 :该基因含有 2 37kb大小的唯一转录本 ,主要在睾丸中强表达 ,卵巢中有表达 ,而在其他组织中该基因无表达。结果提示 :Zfp4 74基因对精子发生和卵母细胞的发育可能起重要作用
王茫桔,瞿祥虎,王立升,翟芸,武淑兰,贺福初[3]（2003）在《人类新型Krppel类转录因子hBKLF的cDNA克垄、亚细胞定位及表达特征》文中研究说明人胎肝cDNA文库FLD45 85克隆可能编码一种造血相关的转录因子 ,本文旨在从 2 2周孕龄人胎肝中获得其编码基因的全长cDNA序列 ,分析其编码蛋白的功能域、基因组结构、染色体定位、亚细胞定位及表达谱特征。采用 5′RACE方法获得FLD45 85克隆全长 ;生物信息学方法确定hBKLF基因结构、染色体定位及功能域特征 ;GFP融合蛋白技术确定hBKLF亚细胞定位 ;Northern杂交、RT PCR、Western印迹方法分析其表达谱。结果获得了FLD45 85克隆编码的hBKLFcDNA全长序列 ,它含 1810bp ,编码 3 45个氨基酸 ,与小鼠BKLF同源 ,C端含 3个特征性C2 H2 结构的锌指 ,是KLF转录因子家族的新成员。hBKLF基因跨越 3 3kb ,含 6个外显子和 5个内含子 ,位于 4号染色体4p15 2～p16 1。GFP hBKLF融合蛋白在COS - 7细胞中呈细小点状分布于核内 ,核仁区无分布。hBKLF含有两个转录本 ,大小为 4 4kb～ 7 5kb和 1 3 5kb～ 2 4kb。大转录本在成人及胎儿组织广泛表达 ,小转录本在外周血白细胞、肝脏和骨髓表达量最高 ,红系和粒系细胞均表达hBKLF。hBKLF表达量随肝脏发育成熟而下降 ,随红系、粒系成熟而升高。以上研究提示hBKLF可能是一种在体内广泛发挥作用的转录因子 ,在造血的调控中可能有重要作用
二、人类新型Krppel类转录因子hBKLF的cDNA克垄、亚细胞定位及表达特征（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人类新型Krppel类转录因子hBKLF的cDNA克垄、亚细胞定位及表达特征（论文提纲范文）
（2）小鼠睾丸和卵巢特异表达基因Zfp474的克隆与特征分析（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 方 法 |
| 1.2.1 数据库消减杂交 (DDD) 和表达序列标签分析 |
| 1.2.2 Zfp474阅读框cDNA的克隆及测序 |
| 1.2.3 总RNA抽提和 RT-PCR分析 |
| 1.2.4 Northern blot分析 |
| 1.2.5 基因信息分析 |
| 1.2.6 Zfp474蛋白的亚细胞定位及对细胞生长周期的影响 |
| 1.2.6.1 pEGFP-C2/Zfp474重组质粒的转染与瞬时表达 |
| 1.2.6.2 pEGFP-C2/Zfp474重组质粒对细胞周期的影响 |
| 2 结 果 |
| 2.1 Zfp474基因全长cDNA序列的克隆 |
| 2.2 基因表达谱分析 |
| 2.2.1 小鼠多组织RT-PCR结果 |
| 2.2.2 Northern印迹分析 |
| 2.3 蛋白质结构的预测 |
| 2.4 Zfp474蛋白的亚细胞定位 |
| 2.5 pEGFP-C2/Zfp474融合基因重组体瞬时转染小鼠精原细胞株细胞周期分布以及凋亡率变化 |
| 3 讨 论 |
四、人类新型Krppel类转录因子hBKLF的cDNA克垄、亚细胞定位及表达特征（论文参考文献）
- [1]新型人转录因子hBKLF对K562细胞增殖、分化及血红蛋白合成作用的研究[J]. 王茫桔,马晓芸,石永进,武淑兰,贺福初. 中国实验血液学杂志, 2006(06)
- [2]小鼠睾丸和卵巢特异表达基因Zfp474的克隆与特征分析[J]. 周畅,李麓芸,卢光. 遗传学报, 2005(02)
- [3]人类新型Krppel类转录因子hBKLF的cDNA克垄、亚细胞定位及表达特征[J]. 王茫桔,瞿祥虎,王立升,翟芸,武淑兰,贺福初. 遗传学报, 2003(01)