一、HAase、HA在卵巢肿瘤患者血清、组织中的表达及临床意义（论文文献综述）
陈震[1]（2021）在《Hsa＿circ0006332和Hsa＿circ0000069调控宫颈癌发展的机制研究》文中研究说明研究背景和目的宫颈癌（Cervical Carcinoma,CC）是由人乳头瘤病毒（HPV）感染引起的常见的妇科恶性肿瘤。我国是CC患病人数最多的国家之一,CC的预防和治疗任务繁重。HPV疫苗和宫颈涂片筛查虽然能够有效的预防CC发生,但晚期CC预后通常很差。环状RNA（circRNAs）在肿瘤的发生和发展中发挥着重要作用,这也包括在CC中。此外,由于具有高稳定性,特异性表达等特点,circRNAs在肿瘤的治疗与诊断中前景可期。然而,当前很大一部分circRNAs的表达和功能尚不清楚。本研究旨在探讨hsa＿circ＿0006332（Hsa＿circ00063322）和hsa＿circ＿0000069（Hsa＿circ0000069）在CC发展中的作用及其表达升高的相关分子机制。研究方法1.Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069环状性质验证及其在宫颈癌细胞和组织中的表达通过RnaseR消化实验和基因组DNA扩增实验验证Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069的环状结构。放线菌素D实验和核质分布实验检测Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069的高稳定性和细胞分布。采用实时定量聚合酶链反应（qPCR）法分别检测CC和正常组织与细胞中Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069的表达,以确定宫颈组织癌变后Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069的表达变化。2.Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069表达升高的机制研究通过数据库分析,发现Hsa＿circ00063322表达可能受转录因子FOXA1调控,而Hsa＿circ0000069表达受RNA m6A甲基化修饰调控。通过染色质免疫共沉淀实验验证FOXA1与Hsa＿circ00063322启动子结合;qPCR法检测FOXA1对Hsa＿circ00063322表达的调节;荧光素酶实验确认了FOXA1与Hsa＿circ00063322启动子区的结合位点。m6A RNA免疫共沉淀（Me-RIP）检测CC和正常细胞中Hsa＿circ0000069的m6A修饰水平,以及METTL3敲低后Hsa＿circ0000069的m6A修饰变化。qPCR法验证METTL3对Hsa＿circ0000069表达的调节。放线菌素D实验检测METTL3敲低对Hsa＿circ0000069稳定性的影响,以及两个m6A修饰位点处m6A修饰分别对Hsa＿circ0000069稳定性的影响。制备Hsa＿circ0000069 m6A修饰位点单突变体和双突变体,然后通过Me-RIP和qPCR实验检测Hsa＿circ0000069两处m6A修饰之间的关系。3.Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069的细胞功能制备并通过qPCR验证Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069稳定敲低的细胞。制备Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069瞬间过表达细胞。采用细胞计数试剂盒-8（CCK8）和5-乙基-2′-脱氧尿苷（Ed U）检测Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069敲低和过表达细胞的增殖能力。将Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069敲低和过表达细胞进行顺铂和氟尿嘧啶处理,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用划痕和Transwell实验检测Hsa＿circ0000069敲低和过表达细胞的迁移能力。4.Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069分别靶向调节miR-548q和miR-4426,miR-548q靶向抑制L2的表达通过qPCR验证Hsa＿circ00063322和Hsa＿circ0000069分别对miR-548q和miR-4426的调节关系,以及miR-548q对HPV16小衣壳蛋白L2的调节关系。荧光素酶实验验证Hsa＿circ00063322与miR-548q,Hsa＿circ0000069与miR-4426,以及miR-548q与L2的结合位点。qPCR检测肿瘤和正常组织中miR-548q,miR-4426和L2的表达。5.Hsa＿circ00063322/miR-548q/L2和Hsa＿circ0000069/miR-4426信号通路的验证采用qPCR检测Hsa＿circ00063322过表达以及Hsa＿circ00063322和miR-548q同时过表达或者Hsa＿circ00063322敲低以及Hsa＿circ00063322和miR-548q同时敲低后L2表达变化,采用免疫荧光（IF）、Ed U、流式和Transwell实验检测miRNA过表达以及circRNA和miRNA同时过表达或者miRNA敲低以及circRNA和miRNA同时敲低后细胞的功能表型变化。研究结果1.CC组织和细胞中环状RNA Hsa＿circ00063322的表达显着上调,利用Hsa＿circ00063322表达能够准确的区分肿瘤和正常组织（ROC分析AUC=0.8597）。Hsa＿circ00063322具有高稳定性,主要分布在胞浆中。FOXA1是Hsa＿circ00063322的转录因子,与MYBL2（Hsa＿circ00063322亲本基因）启动子区在两个位点结合。2.制备Hsa＿circ00063322稳定敲低细胞系。Hsa＿circ00063322敲低可显着抑制CC细胞的增殖能力,并增加其对顺铂和氟尿嘧啶的敏感性;而Hsa＿circ00063322瞬时过表达可促进其增殖能力,并削弱其对顺铂和氟尿嘧啶的敏感性。3.Hsa＿circ00063322可与miR-548q靶向结合,并且调节miR-548q的表达。与癌旁正常组织相比,宫颈癌组织中miR-548q的表达显着降低,且miR-548q和Hsa＿circ00063322的组织表达水平负相关。4.miR-548q与L2转录本在两个位点结合,介导了Hsa＿circ00063322对L2表达的调节。Hsa＿circ00063322过表达阻遏了miR-548q的抑癌活性,而Hsa＿circ00063322敲低抑制了miR-548q抑制剂的促癌活性。5.CC组织和细胞中环状RNA Hsa＿circ0000069的表达显着上调,利用Hsa＿circ0000069表达能够准确的区分肿瘤和正常组织（AUC=0.7901）。Hsa＿circ0000069具有高稳定性,主要分布在胞浆中。6.相比正常宫颈细胞,CC细胞中Hsa＿circ0000069的m6A修饰水平显着升高。m6A修饰提高了Hsa＿circ0000069稳定性。Hsa＿circ0000069转录本中存在两处m6A修饰位点,二者的作用相互协同。7.制备Hsa＿circ0000069稳定敲低细胞系。Hsa＿circ0000069敲低显着抑制了CC细胞的增殖和迁移能力,而Hsa＿circ0000069瞬时过表达促进了CC细胞的增殖和迁移能力。8.Hsa＿circ0000069可与miR-4426靶向结合,并且调节miR-4426的表达。Hsa＿circ0000069过表达阻遏了miR-4426的抑癌活性,而Hsa＿circ0000069敲低抑制了miR-4426抑制剂的促癌活性。研究结论1.CC中,转录因子FOXA1促进了Hsa＿circ00063322的表达,Hsa＿circ00063322通过吸附miR-548q,防止了L2被降解,并促进了CC细胞的增殖能力,削弱了CC细胞对化疗药物的敏感性。2.CC中,m6A修饰提高了Hsa＿circ0000069的稳定性,Hsa＿circ0000069通过吸附miR-4426,促进了CC细胞的增殖和迁移能力。
王沛婕[2]（2021）在《PTX3调控奶山羊卵巢颗粒细胞功能及分子机理的研究》文中指出PTX3是PTX蛋白家族的成员,作为卵丘细胞-卵母细胞复合体扩张的标志基因在排卵中发挥重要作用。然而,PTX3在奶山羊卵巢颗粒细胞中的表达、功能和调控机理尚不清楚。因此,本研究以体外培养的关中奶山羊卵巢颗粒细胞为研究对象,分析PTX3在有腔卵泡生长发育过程中的表达规律,探究FSH、LH和miRNA对奶山羊卵巢颗粒细胞中PTX3基因表达,以及通过PTX3基因对颗粒细胞增殖、凋亡和类固醇生成的分子调控机制,研究PTX3在卵泡生长发育过程中的生物功能,获得主要研究结果如下:1.PTX3对奶山羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡及类固醇生成的调控作用通过Real-time PCR分析发现PTX3 m RNA在奶山羊各组织中存在差异性广泛表达,其中在卵巢组织中表达量最高;Western Blot分析发现PTX3蛋白在颗粒细胞中的表达量随着有腔卵泡的生长呈下降趋势;CCK8、Ed U和流式细胞术分析发现PTX3抑制颗粒细胞活力和增殖,促进凋亡;ELISA和Western Blot分析发现PTX3通过促进颗粒细胞中类固醇合成关键酶CYP19A1和CYP11A1,而不改变HSD3B和STAR蛋白的表达从而升高E2和P4的分泌水平。2.miR-29靶向PTX3对奶山羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡及类固醇生成的调控作用通过生物信息学分析,构建双荧光素酶野生型和突变型报告载体,利用Real-time PCR和Western Blot分析证明miR-29能够靶向结合PTX3的3’UTR降低PTX3 m RNA和蛋白的表达水平;Real-time PCR分析发现miR-29在颗粒细胞中的表达量随着有腔卵泡的生长呈上升趋势;CCK8、Ed U和流式细胞术分析发现miR-29通过靶向PTX3促进颗粒细胞活力和增殖,抑制凋亡;ELISA和Western Blot分析发现miR-29通过靶向PTX3抑制颗粒细胞中类固醇合成关键酶CYP19A1和CYP11A1,而不改变HSD3B和STAR蛋白的表达从而降低E2和P4的分泌水平。3.miR-29-3p靶向PTX3调控奶山羊卵巢颗粒细胞功能的作用机理利用Western Blot分析发现miR-29靶向PTX3激活PI3K/AKT/m TOR和Erk1/2信号通路;通过PI3K/AKT/m TOR和Erk1/2信号通路抑制剂处理颗粒细胞,CCK8、Ed U、流式细胞术和ELISA分析发现抑制PI3K/AKT/m TOR和Erk1/2信号通路的活性能抵消miR-29和PTX3对颗粒细胞增殖、凋亡和类固醇生成的影响;Western Blot分析发现Erk1/2信号通路通过调控CYP19A1、CYP11A1、HSD3B和STAR的蛋白表达,降低奶山羊颗粒细胞E2和P4分泌水平,而PI3K/AKT/m TOR信号通路通过调控CYP19A1、CYP11A1、HSD3B和STAR的蛋白表达,降低E2水平,升高P4水平;CCK8、Ed U和流式细胞术分析发现PTX3能抑制FGF2的作用从而抑制颗粒细胞活力和增殖,促进凋亡;ELISA和Western Blot分析发现PTX3能抑制FGF2的作用从而促进颗粒细胞中类固醇合成关键酶CYP19A1和CYP11A1,而不改变HSD3B和STAR蛋白的表达进而促进E2和P4的分泌水平。4.PTX3对FSH/LH调控的奶山羊卵巢颗粒细胞类固醇生成的作用FSH处理奶山羊颗粒细胞,利用ELISA分析发现FSH抑制小有腔卵泡的颗粒细胞分泌的E2和P4水平,促进大有腔卵泡的颗粒细胞分泌的E2水平,抑制P4水平;LH处理奶山羊颗粒细胞,利用ELISA分析发现LH促进小有腔卵泡的颗粒细胞分泌的P4水平,大有腔卵泡的颗粒细胞分泌的E2和P4水平;FSH/LH共处理奶山羊颗粒细胞,利用ELISA分析发现FSH/LH抑制小有腔卵泡的颗粒细胞中的E2水平,促进大有腔卵泡的颗粒细胞的E2和P4水平;并且Western Blot分析发现LH和FSH通过调控大、小有腔卵泡的颗粒细胞中的CYP19A1、CYP11A1、STAR和HSD3B蛋白表达来调控E2和P4的分泌;Western Blot分析发现FSH抑制大、小有腔卵泡的颗粒细胞中的PTX3蛋白的表达,LH促进大、小有腔卵泡的颗粒细胞中的PTX3蛋白的表达,FSH/LH抑制小有腔卵泡的颗粒细胞中PTX3蛋白的表达,而促进大有腔卵泡的颗粒细胞中PTX3蛋白的表达,无论LH和FSH单独还是联合处理,PTX3都是通过调控大、小有腔卵泡的颗粒细胞中CYP19A1和CYP11A1蛋白的表达来参与调控E2和P4的分泌水平;PTX3抑制大、小有腔卵泡的颗粒细胞中FSHR的表达,但只促进大有腔卵泡的颗粒细胞中LHR的表达。综上所述,FSH、LH和miR-29能调控奶山羊卵巢颗粒细胞中PTX3的表达,PTX3也能通过调控FSHR和LHR的表达反向调控FSH和LH的作用,PTX3通过抑制FGF2的作用,抑制PI3K/AKT/m TOR和Erk1/2信号通路,从而调控奶山羊卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡,调控类固醇合成关键酶CYP19A1和CYP11A1的表达进而作用于颗粒细胞类固醇生成。以上结果为进一步探究PTX3参与调控奶山羊卵泡生长发育过程的分子机理提供试验依据。
文丽[3]（2021）在《CHAF1A在宫颈癌中的作用和相关机制研究》文中提出目的探寻CHAF1A在宫颈癌中的表达、作用及相关机制。方法通过RT-PCR检测宫颈癌组织和癌旁正常宫颈组织中CHAF1A和ERα的m RNA表达,免疫组织化学染色法检测CHAF1A和ERα在宫颈癌组织中的蛋白表达情况;分析两个基因的表达与临床特征关系,了解其临床意义;进一步根据其表达情况,进行二者的统计分析,了解其表达的相关性。根据CHAF1A在宫颈癌细胞及人正常永生化上皮细胞中的表达,选取Siha和He La细胞进行细胞功能学实验;用慢病毒干扰宫颈癌细胞内CHAF1A的表达,与转染阴性对照病毒的细胞进行对照研究,RT-PCR和Western blot验证明确有效转染效果后予以细胞克隆形成实验、CCK8实验、RTCA（增殖）检测细胞增殖情况;流式细胞仪细胞周期及凋亡情况;划痕实验、RTCA（迁移）实验检测CHAF1A对细胞侵袭力的影响。根据CHAF1A在宫颈癌细胞中的生物学表现,进一步用Western blot检测增殖相关信号通路中与增殖、凋亡相关的关键分子表达水平的变化;为进一步阐明CHAF1A上下游作用关系,运用Western blot检测CHAF1A表达敲低后ERα表达的变化。结果CHAF1A和ERα在CSCC中均有差异表达,CHAF1A在CSCC中的表达趋势是:随着宫颈癌进展表达阳性率升高,CHAF1A表达升高,且与宫颈癌分期及分化相关,P<0.05,差异有统计学意义,而ERα随着宫颈癌进展表达阳性率明显下降,ERα与患者宫颈癌分期,分化程度和淋巴结转移相关（P<0.05）,与患者年龄和浸润深度无明显相关性,统计无差异,利用Spearman检验,r为–0.300两者的表达具有负相,P<0.05,有统计学意义。RT-PCR检测宫颈癌各细胞株及人永生化上皮细胞Ha Ca T细胞中CHAF1A的表达情况显示,CHAF1A在宫颈癌细胞株中的表达高于Ha Ca T细胞株;选取其中表达升高的Si Ha和He La细胞株予以慢病毒敲低CHAF1A的表达,与阴性对照病毒转染的细胞对照进行细胞功能实验,结果提示CHAF1A的表达降低明显抑制了宫颈癌细胞的增殖活力,促进细胞凋亡,使细胞周期中S期细胞减少;并且宫颈癌细胞的迁移能力降低。进一步用Western blot检测增殖相关信号通路关键分子表达情况显示CHAF1A敲除后磷酸化的PI3K（tyr458）和Akt（ser473）水平明显下降,而总蛋白中的PI3K和Akt水平保持不变,总Fox O1水平保持不变,磷酸化的Fox O1水平升高,进一步检测与凋亡相关的Bcl-2基因的表达在CHAF1A基因表达降低后也明显降低,促进凋亡的BAX表达则升高;同时敲低CHAF1A后ERα表达升高,二者表达呈负相关关系。结论CHAF1A在宫颈癌组织和细胞中表达均较正常组织和细胞升高;升高的CHAF1A的表达介导宫颈癌的恶性生物学行为;CHAF1A负向调控ERα表达。
马岚[4]（2020）在《基于肝素化碳量子点的药物递送系统的构建及应用》文中提出纳米技术与生物医学的结合为构建纳米药物递送系统、实现癌症早期诊断、改善药物靶向性和长效性提供了新思路。传统化疗具有特异性差、毒副作用大、血栓易形成的缺点,而纳米药物可以增强药物在肿瘤部位的聚集且实现缓控释放和靶向治疗。碳量子点（CDs）具有小尺寸、易修饰、易溶于水、荧光稳定、低毒等特性,本论文以CDs为药物载体构建了两种双重响应型纳米药物递送系统,具有良好的生物相容性和靶向性,同时达到了药物缓控释放、抗转移、抗血栓的效果,还实现了对药物的视觉追踪。具体研究内容如下:（1）以葡萄糖、乙二醇、聚乙烯亚胺为原料,通过简单的水热法制备出发绿色荧光的CDs,该CDs的粒径约3.9 nm、表面带正电且富含氨基、分散性好、荧光稳定性强且生物相容性好,可以用于生物成像和药物递送,实现对癌细胞的追踪和治疗。（2）引入与癌细胞表面过度表达的CD44受体具有高亲和力的透明质酸（HA）,构建了具有良好靶向性的CDs-HA/DOX药物递送系统。该系统负载性能良好,最大载药率为57%。体外释放实验结果显示,在透明质酸酶（HAase）存在、酸性环境同时满足时,药物才会大量释放,释放率为53%,是一种双重响应型且具有良好稳定性的药物递送系统。在共孵育24 h时,该系统对MGC-803细胞的抑制作用约是GES的2倍;延长至48 h时,抑制作用高达3倍左右,且GES细胞的存活率是游离阿霉素（DOX）的2倍。（3）针对化疗常见的血栓并发症,以CDs-HA/DOX系统为基础,引入抗凝血肝素（Hep）进行辅助治疗,构建了能有效抑制癌细胞生长和迁移的CDs-HA-Hep/DOX药物递送系统。该系统负载性能良好,最大载药率为65%。该系统的溶血率可降低到1.1%,具有较高的生物相容性且能实现抗凝血的功能。在HAase存在的酸性环境下药物释放率为67%,是一种更稳定的双重响应型药物递送系统。在孵育24 h时,该系统对MGC-803细胞的抑制作用约是GES细胞的2.5倍;延长至48 h时,抑制作用高达3.5倍左右,且GES与该系统孵育后的细胞存活率是DOX的2-3倍。该系统治疗效果明显提高,且基于CDs的荧光实现了对药物的视觉追踪。（4）由于对Hep的密切监测非常重要,我们设计了一种基于CDs的可以检测Hep浓度的纳米荧光探针。该探针选择性好、灵敏度高、实际样品回收率高,其检测范围为0-16 U/m L,线性度可以达到0.98,检测限为0.00007 U/m L,回收率高达96%-99%。
姚海[5]（2020）在《基于肿瘤微环境特点的纳米药物构建及其抗肿瘤活性研究》文中研究指明癌症,也称恶性肿瘤,是威胁人类健康的重要疾病之一。实体肿瘤中除了肿瘤细胞,还有大量的成纤维细胞、肌成纤维细胞、神经内分泌细胞、脂肪细胞、免疫细胞和炎症细胞、血液和淋巴管网络以及细胞外基质（ECM）,它们共同构成肿瘤微环境。肿瘤微环境具有独特的生理生化性质,包括间质高压、血管系统异常、丰富的蛋白酶和透明质酸、低p H的酸性环境、乏氧等。近年来研究表明,肿瘤微环境对肿瘤增殖、侵袭及转移等过程密切相关。基于肿瘤微环境特点设计肿瘤治疗药物成为研究重点。与传统肿瘤治疗方法相比,光触发的肿瘤治疗方式具有肿瘤选择性治疗的优势,有效降低治疗对正常组织的副作用。光动力治疗（PDT）和光热治疗（PTT）是两种最重要的光触发的肿瘤治疗方式。PDT疗效依赖于光照富集于肿瘤部位的光敏剂所产生的活性氧。PTT的治疗则依赖光热转换效果,利用热敏剂将光转换为热,杀伤肿瘤。本论文基于增强PDT以及PTT的目的,依据肿瘤微环境的特性,设计两种纳米药物体系,开展体内体外抗肿瘤研究。具体内容及结果如下:（1）使用二硫键交联透明质酸包覆光热材料—钯纳米片（Pd NSs）,合成复合材料（Pd NSs@HA-ss-HA）。通过对Pd NSs表面包裹HA对肿瘤细胞表面高表达的CD44受体的结合作用,改善纳米药物的肿瘤细胞摄取能力。光热纳米材料Pd NSs具有优异的热循环效果且小尺寸的纳米材料有很好的生物相容性。体外实验研究表明,HA包覆能够显着提升Pd NSs的肿瘤摄取效果,有效地增加了Pd NSs的PTT抗肿瘤活性,为本论文基于肿瘤微环境特点设计肿瘤治疗药物奠定基础。（2）将光敏剂锌酞菁（Zn Pc）、气体一氧化碳（CO）供体五碳基溴化锰（I）（COMn）和肿瘤相关成纤维（CAF）抑制剂氯沙坦钾（Dup）通过共载于介孔二氧化硅纳米颗粒（MSNs）中,然后将交联的透明质酸（HA）凝胶壳包覆于MSNs表面,形成ZDCMH NPs。经尾静脉注射进入小鼠血液后,纳米药物通过实体瘤的高通透性和滞留效应（EPR）以及透明质酸对肿瘤表面高CD44受体的靶向作用实现其在肿瘤组织的高效富集。随后,ECM中的透明质酸酶（HAase）降解HA凝胶壳,触发包膜药物释放。经光源照射,Zn Pc发挥PDT活性产生大量活性氧（ROS）,诱导COMn释放CO,扩张肿瘤血管强化EPR效应,促进ZDCMH NP在肿瘤组织中的积累。此外,释放的Dup可以通过抑制CAF活性,下调TME中胶原纤维的浓度,促进ZDCMH NPs在实体瘤内的深度穿透,有助于Zn Pc发挥更好的PDT效果。同时,利用纳米复合药物中Zn Pc的荧光成像以及COMn中Mn离子的核磁共振成像功能为检测药物在体内的分布提供依据。体外和体内的实验研究表明,基于多种策略破坏TME的多功能复合药物ZDCMH NPs取得显着的抗肿瘤活性。
杨小萍[6]（2020）在《CD44v6和HA在结直肠癌中的表达及其对顺铂耐药机制的研究》文中指出目的:本研究旨在通过对CD44v6、透明质酸（Hyaluronic acid,HA）在结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）中表达的检测,探究其对顺铂耐药性的影响,并对耐药机制做初步探索。方法:本研究共收集了66例经病理诊断为CRC的组织标本,采用实时荧光定量PCR（quantity Real-time PCR,qRT-PCR）,蛋白印迹法（western blot,WB）和免疫组织化学（immunohischemistry,IHC）的方法检测CD44v6的表达,分析了CD44v6表达与患者临床病理特征之间的相关性。同时培养CRC细胞系,在细胞系中使用qRT-PCR和western blot法检测CD44v6的表达。研究中通过人透明质酸酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunoassay,ELISA）来检测HA的表达;运用慢病毒转染CRC细胞系来敲减CD44v6基因,验证CD44v6与CRC耐药之间的关系,经过透明质酸酶（Hyaluronidase,HAase）消化CRC细胞系来阻断CD44v6和HA的结合探索CD44v6-HA复合体与CRC耐药之间的关系;对经过慢病毒转染和HAase处理的CRC细胞,通过western blot法检测在PI3K/AKT信号通路中起关键作用的PI3K和AKT蛋白的表达水平。结果:对于正常结直肠粘膜组织,CRC中CD44v6的表达明显增高（p﹤0.001）;CD44v6的表达与血清CEA存在统计学差异（p﹤0.001）,与患者的年龄、性别、TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤发生部位均无统计学差异（p﹥0.05）;HA在CRC细胞系RKO中分泌（p﹤0.001）;对于正常结直肠上皮细胞,在CRC细胞系中CD44v6的表达明显增高（p﹤0.001）;经过CD44v6基因敲减、HAase处理的CRC细胞系均对顺铂药物的耐药性明显下降（p﹤0.05）,同时,引起信号通路中的PI3K和AKT蛋白含量明显下降（p﹤0.01）。结论:CD44v6在CRC中高表达;CD44v6的表达与血清CEA水平存在相关性;CD44v6的低表达使CRC细胞的耐药性降低;阻断CD44v6与HA的结合可以使CRC细胞的耐药性降低;CD44v6的表达及其与HA的结合均参与了PI3K/AKT信号通路介导的CRC对顺铂化疗耐药过程。
芮小慧[7]（2019）在《长链非编码RNA C5orf66-AS1在宫颈癌发生中的作用及其机制研究》文中提出背景宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,已成为重要的公共健康问题。宫颈癌发病率占女性恶性肿瘤的第二位,其死亡率占女性生殖系统恶性肿瘤首位。目前,手术、化疗和放疗是宫颈癌最常用的治疗手段,但由于多数宫颈癌细胞对化疗药物具有耐药性,导致化疗药物对宫颈癌的治疗效果较差。而对于预后较差的晚期及复发性宫颈癌,目前也同样缺乏有效的治疗方法。因此,探索创新型治疗方法可能是宫颈癌治疗突破的关键。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,Lnc RNA）是一类超过200个核苷酸,并具有与m RNA结构特征相似的非编码RNA,大多数是由RNA聚合酶II转录产生的。Lnc RNA可形成复杂的二级结构,可提供与多个核酸或蛋白质结合的空间。Lnc RNA虽然不编码蛋白质,但其可通过转录和转录后水平调控影响多种基因的表达水平。有研究发现,Lnc RNA的表达与多种肿瘤密切相关,如结肠癌、乳腺癌、肝癌等,但在宫颈癌中的机制仍尚未明确。方法:本研究采用TCGA数据库对3对宫颈癌组织和相应的癌旁组织进行差异Lnc RNA的筛选,对筛选出的5个上调和5个下调最明显的lnc RNA进行quantitative real-time reverse transcription PCR（q RT-PCR）验证,最终选取lnc RNA C5orf66-AS1作为研究对象进行研究。通过在体内体外改变lnc RNA C5orf66-AS1的表达,观察其对宫颈癌生物学行为的影响,探讨lnc RNA C5orf66-AS1在宫颈癌增殖中的关键基因,为有效防治宫颈癌提供新的理论依据。结果:1.Lnc RNA C5orf66-AS1在宫颈癌组织和细胞中显着高表达。2.在Si Ha和C-4 I中下调C5orf66-AS1表达后,细胞增殖能力显着下降,而当Si Ha和C-4 I中上调C5orf66-AS1表达后,增殖能力显着上升。此外,在细胞周期实验发现下调C5orf66-AS1的细胞中G1/G0期细胞明显增加,而G2/S期细胞减少;而上调C5orf66-AS1的细胞中G1/G0期细胞明显减少,而G2/S期细胞明显增多。在宫颈癌细胞株Si Ha和C-4 I中下调C5orf66-AS1的表达,可显着促进宫颈癌细胞的凋亡。3.下调C5orf66-AS1的表达水平可显着促进mi R-637的表达;反之,上调C5orf66-AS1的表达水平可显着下调宫颈癌mi R-637的表达。随后我们构建了C5orf66-AS1-WT和与mi R-637结合位点突变掉的C5orf66-AS1-MUT的荧光报告素酶质粒。与对照组相比,上调mi R-637的表达水平可显着降低Si Ha细胞中共转染C5orf66-AS1-WT质粒的荧光素酶活性,而上调mi R-637的表达水平对共转染C5orf66-AS1-MUT质粒的荧光素酶活性无影响,说明C5orf66-AS1可与mi R-637直接结合。我们通过RIP实验检测C5orf66-AS1和mi R-637是否可以在细胞中结合。结果显示,相对于对照Ig G组,C5orf66-AS1和mi R-637优先富集在抗Ago2组中。随后我们通过q RT-PCR检测了20例宫颈癌和癌旁组织中mi R-637的表达,发现mi R-637在宫颈癌中低表达。mi R-637在宫颈癌细胞株中的表达比正常宫颈上皮细胞株表达低。4.在Si Ha和C-4 I中上调或下调mi R-637的表达,发现RING1的m RNA和蛋白表达发生改变。随后我们构建了RING1 3’UTR-WT和与mi R-637结合位点突变掉的RING1 3’UTR-MUT的荧光报告素酶质粒。随后免疫荧光素酶报告实验的结果发现,与对照组相比,上调mi R-637的表达水平可显着降低Si Ha细胞中共转染RING1 3’UTR-WT质粒的荧光素酶活性,而上调mi R-637的表达水平对共转染RING1 3’UTR-MUT质粒的荧光素酶活性无影响,说明RING1可与mi R-637直接结合。5.在Si Ha和C-4 I细胞系中上调或下调C5orf66-AS 1的表达,RING1的m RNA和蛋白表达水平分别显着增加或降。6.单独过表达mi R-637可明显抑制Si Ha或C-4 I细胞的增殖能力,且在过表达C5orf66-AS1的细胞中同时上调mi R-637时,mi R-637能部分逆转C5orf66-AS1引起的细胞增殖功能改变。7.单独过表达RING1可明显增强Si Ha或C-4 I细胞的增殖能力,且在过表达RING1的细胞中同时上调mi R-637时,RING1能完全逆转mi R-637引起的细胞增殖功能改变。8.在实验动物中下调lnc RNA C5orf66-AS1可抑制肿瘤的生长。结论:Lnc RNA C5orf66-AS1作为ce RNA通过吸附mi R-637调控RING1对宫颈癌增殖、凋亡和细胞周期作用的影响,为探索宫颈癌的发病机制和寻找有效的治疗靶点提供新的理论和实验依据。
段亚男[8]（2019）在《miR-122在卵巢上皮癌发生、发展中的作用及机制》文中指出卵巢癌的发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌,在妇科恶性肿瘤中排名第三。由于卵巢位置处于盆腔深部,卵巢癌病情隐匿,缺乏早期的特异表现和成熟的早期筛查方法,发现时多已到晚期,其5年生存率约为40%45%,死亡率居妇科恶性肿瘤之首。卵巢癌的发病机制尚不明确,目前研究认为卵巢癌不是一个单独的疾病,而是可以根据形态学和分子遗传学差异进行分组的一组疾病,因此,寻找敏感及特异的分子标志物,对于卵巢癌的针对性治疗,提高患者生存率,至关重要。miRNAs是一类长约19-25个核苷酸、高度保守的、非编码的单链RNA,大量研究证明,miRNAs在各种恶性肿瘤的发生、发展中起着重要作用。has-miR-122-5p（下文简称miR-122）在多种肿瘤中低表达,包括胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等,其通过作用于下游的靶基因,抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移,近来有报道显示,miR-122在卵巢癌血清中低表达,预示着miR-122在卵巢癌中可能发挥抑癌的作用。但其在卵巢癌中的作用机制尚缺乏研究。因此,本研究拟探讨miR-122在卵巢上皮癌组织以及正常卵巢组织中的表达情况以及miR-122的表达水平与卵巢上皮癌患者临床病理特征、预后的相关性;采用体内外实验检测miR-122对卵巢上皮癌细胞生物学行为的影响并进一步探讨其可能的作用机制。研究结果将为明确卵巢癌的诊治提供前期实验基础。第一部分miR-122在卵巢上皮癌组织中的表达及临床意义目的:研究miR-122在卵巢上皮癌组织中的表达情况,并探讨miR-122表达水平与卵巢上皮癌患者临床病理特征及总生存期的关系。方法:1.采用q RT-PCR法检测42例卵巢浆液性癌组织和36例正常卵巢组织中miR-122的表达水平。2.根据miR-122的表达情况,分为miR-122高表达组和miR-122低表达组,分析miR-122的表达水平与卵巢浆液性癌患者临床病理特征和总生存期的相关性。结果:1.miR-122在卵巢浆液性癌组织和正常卵巢组织中的表达水平q RT-PCR结果显示:miR-122在正常卵巢组织中的表达水平为1.03±0.21,在卵巢浆液性癌组织中的相对表达水平为0.56±0.10,与正常卵巢组织相比,卵巢浆液性癌组织中miR-122的表达水平明显降低（P<0.05）。2.miR-122的表达水平与卵巢浆液性癌患者临床病理特征的相关性在卵巢浆液性癌组织中,组织学分级G3组患者miR-122的高表达者为40.6%明显低于G1+G2患者的80.0%（P<0.05）,淋巴结转移阳性卵巢浆液性癌组织miR-122高表达的比率明显低于淋巴结转移阴性者（26.7%vs 63.0%）（P<0.05）。miR-122的表达与患者的年龄、分期无明显相关性（P>0.05）。3.miR-122的表达水平与卵巢浆液性癌患者总生存期的相关性miR-122高表达组卵巢浆液性癌患者的中位生存时间（32.2±1.6月）较miR-122低表达组患者（25.3±2.0月）明显延长（P<0.05）。结论:1.miR-122在卵巢浆液性癌组织中的表达明显低于正常卵巢组织,表明miR-122与卵巢浆液性癌的发生有相关性。2.miR-122低表达与卵巢浆液性癌患者的组织学分级、淋巴结转移和生存时间相关,表明miR-122可能参与卵巢浆液性癌的侵袭转移,可作为判断预后的分子标志物。第二部分miR-122对卵巢上皮癌细胞生物学行为的影响及机制目的:通过调节miR-122在卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3中的表达情况来探讨其对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其可能的机制。一、miR-122对卵巢上皮癌细胞生物学行为的影响方法:将miR-122 mimics和inhibitor转染卵巢上皮癌细胞,并分别设有阴性对照组。实验分为五组:miR-122 mimics组、miR-122 mimics NC组、miR-122 inhibitor组、miR-122 inhibitor NC组和parental组。q RT-PCR检测miR-122的表达水平,CCK8法、划痕实验、Transwell实验检测miR-122对卵巢上皮癌细胞生物学行为的影响,Western blot检测卵巢癌细胞上皮间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition EMT）相关蛋白E-cadherin、vimentin表达水平,检测MMP2、MMP14表达水平,分析miR-122对卵巢癌细胞EMT的影响。结果:1.本研究通过Lipofectamine?2000转染试剂将miR-122 mimics和inhibitor转染SKOV3和OVCAR3细胞。q RT-PCR技术检测miR-122的表达水平。结果显示在SKOV3细胞中,与miR-122 mimics NC组相比,miR-122 mimics组miR-122的表达水平明显升高（P<0.05）。而inhibitor组miR-122的表达水平明显低于inhibitor NC组,差异具有显着性（P<0.05）。在OVCAR3细胞中得到相同的结论,提示转染成功,细胞可用于后续的实验研究。2.CCK8实验结果显示,转染后48h,72h,miR-122 mimics组较miR-122mimics NC组SKOV3和OVCAR3细胞增殖能力明显降低（P<0.05）,与miR-122 inhibitor NC组相比,miR-122 inhibitor组可显着提高SKOV3和OVCAR3细胞的增殖能力（P<0.05）。3.Transwell小室迁移实验结果显示,miR-122 mimics组高倍镜视野下的SKOV3和OVCAR3细胞数较miR-122 mimics NC相明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）。miR-122 inhibitor组与相应对照组相比,高倍镜视野下的SKOV3和OVCAR3细胞数明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。4.划痕实验结果显示:miR-122 mimics组SKOV3和OVCAR3细胞迁移率明显下降（P<0.05）,miR-122 inhibitor组SKOV3和OVCAR3细胞迁移率明显升高。（P<0.05）。5.Westeren blot结果显示:miR-122 mimics组,EMT相关蛋白E-cadherin的表达量明显升高（P<0.05）,vimentin、MMP2、MMP14表达水平明显降低（P<0.05）。miR-122 inhibitor组,EMT相关蛋白E-cadherin的表达量明显降低（P<0.05）,vimentin、MMP2、MMP14表达水平明显升高（P<0.05）。二、寻找miR-122下游的作用分子方法:检索miRNA数据库发现脯氨酸4-羟化酶亚基α-1（Prolyl-4-hydroxylase subunit alpha-1,P4HA1）为miR-122潜在的靶基因。体外构建含有P4HA1-3’UTR序列或其突变序列的荧光报告载体,与miR-122mimics序列共转染至293T细胞,测定各组Firefly荧光值和Renilla荧光值,并计算Firefly/Renilla。q RT-PCR和Western blot方法检测转染miR-122 mimics、miR-122inhibitor后卵巢癌细胞P4HA1 m RNA及蛋白表达情况,体外验证miR-122可靶向作用于P4HA1 m RNA3’UTR,并抑制卵巢上皮癌细胞中P4HA1的表达。结果:1.荧光素酶报告基因分析显示,在SKOV3细胞中,与UTR+miR-122mimics NC组相比,UTR+miR-122 mimics组,荧光素酶活性明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。而UTR（mutant）+miR-122 mimics组与UTR+miR-122 mimics NC组荧光素酶活性均无明显差异（P>0.05）,证实miR-122与P4HA1的靶向关系。2.转染miR-122 mimics后,P4HA1的表达在转录和翻译水平均明显下降（P<0.05）,而转染miR-122 inhibitor后,其表达水平均明显升高（P<0.05）,证实了miR-122可靶向作用于P4HA1的3’UTR区并引起P4HA1表达下调。三、miR-122抑制卵巢上皮癌细胞EMT的机制方法:通过将P4HA1过表达质粒或其对照载体转染卵巢上皮癌细胞,q RT-PCR检测细胞P4HA1 m RNA表达水平,western blot检测细胞P4HA1蛋白表达水平,评估转染效果。进一步分析miR-122是否通过调节P4HA1的表达影响卵巢癌细胞的生物学行为,miR-122 mimics或其阴性对照与P4HA1过表达载体或对照空载体共转染卵巢癌细胞,实验分为4组,分别为:miR-122 mimics NC+vector,miR-122 mimics NC+P4HA1,miR-122mimics+vector,miR-122 mimics+P4HA1。CCK-8实验检测细胞增殖,划痕实验及Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力,western blot检测细胞MMP2、MMP14、E-cadherin、vimentin表达水平,分析miR-122抑制卵巢上皮癌细胞EMT的分子机制。再次证明miR-122通过调节P4HA1表达影响卵巢上皮癌细胞生物学行为。结果:1.通过将P4HA1过表达质粒或其对照载体转染SKOV3和OVCAR3细胞,RT-PCR及Western blot检测P4HA1在转录及翻译水平均明显提高（P<0.05）,证实质粒转染效果.2.miR-122 mimics或其对照与P4HA1过表达载体或对照空载体共转染卵巢上皮癌细胞后,CCK-8结果显示在第48h、72h后,与miR-122mimics NC+vector组相比,miR-122 mimics NC+P4HA1组SKOV3和OVCAR3细胞的增殖活力均明显升高（P<0.05）,miR-122 mimics+vector组卵巢癌细胞增殖能力明显降低（P<0.05）。而与miR-122 mimics+vector组相比,miR-122mimics+P4HA1组SKOV3和OVCAR3细胞的增殖活力明显升高（P<0.05）。且miR-122mimics+P4HA1组增殖活力介于miR-122mimics+vector组和miR-122 mimics NC+P4HA1组之间。3.划痕试验和Transwell迁移显示,SKOV3和OVCAR3细胞中,与miR-122 mimics NC+vector组相比,miR-122 mimics NC+P4HA1组侵袭转移能力明显增强,而miR-122 mimics+vector组侵袭转移能力明显下降（P<0.05）,与miR-122 mimics+vector组相比,miR-122mimics+P4HA1组的侵袭转移能力明显增加（P<0.05）。且miR-122mimics+P4HA1组的侵袭转移能力介于miR-122 mimics+vector组和miR-122 mimics NC+P4HA1组之间。4.Westeren blot结果显示:与miR-122 mimics NC+Vector组相比,miR-122 mimics NC+P4HA1组,E-cadherin表达水平明显降低（P<0.05）,vimentin、MMP2、MMP14表达水平明显升高（P<0.05）。miR-122mimics+vector组,E-cadherin表达水平明显升高（P<0.05）,vimentin、MMP2、MMP14表达水平明显降低（P<0.05）。miR-122mimics+P4HA1组E-cadherin、vimentin、MMP2、MMP14表达水平均介于miR-122mimics+vector组和miR-122 mimics NC+P4HA1组之间。结论:miR-122可通过靶向作用于P4HA1 3’UTR,下调P4HA1的表达来抑制卵巢上皮癌细胞中的细胞增殖、侵袭和迁移,同时抑制卵巢癌细胞EMT的发生。第三部分miR-122对卵巢上皮癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响及机制目的:检测miR-122对卵巢癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力的影响,通过裸鼠体内实验来探讨其在卵巢癌发生发展中的作用机制。方法:构建miR-122过表达质粒与对照载体稳转细胞系,注射到裸鼠腹腔,建立卵巢癌细胞裸鼠成瘤模型。5周后,杀死动物,然后将每只动物解剖,分离出各个脏器,仔细观察每个器官上的肿瘤并拍照,剥除各个肿瘤,记录数据。q RT-PCR检测肿瘤结节miR-122表达水平,western blot检测肿瘤结节P4HA1蛋白表达水平,分析miR-122对卵巢癌细胞动物体内增殖的影响。结果:1.miR-122组裸鼠腹腔肿瘤数目明显减少（P<0.05）。2.RT-PCR结果显示,与对照组相比,miR-122过表达组m RNA水平明显高于对照组（P<0.05）。3.Western blot显示miR-122组裸鼠肿瘤中P4HA1表达水平明显下降（P<0.05）。结论:miR-122能够显着抑制裸鼠卵巢癌移植瘤的生长。总之,miR-122通过靶向作用于P4HA1 3’UTR,抑制卵巢癌细胞的体内外增殖,同时抑制EMT的发生,miR-122有望成为卵巢上皮癌治疗的新的靶点。
朱雪洁[9]（2018）在《RAGE对宫颈鳞癌生物学行为的影响及其相关机制》文中研究说明目的:在本课题组的前期研究中,发现晚期糖基化终末产物受体（The receptor for advanced-glycation end products,RAGE）在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、宫颈鳞癌中的表达逐渐增高。但RAGE的表达对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响尚未明确。本研究通过调节宫颈鳞癌细胞中RAGE的表达,观察其对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学行为及裸鼠成瘤能力的影响及相关机制,以探讨RAGE在宫颈鳞癌发生发展中的作用。方法:第一部分:分别采用p Lenti-C-m GFP-RAGE质粒转染方法和RNA干扰技术构建稳定过表达和低表达RAGE基因的宫颈鳞癌Si Ha细胞和Ca Ski细胞,然后采用Western blot方法检测细胞中RAGE蛋白表达情况;分别采用CCK-8方法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。第二部分:采用Western blot方法检测RAGE表达改变后Si Ha细胞中增殖相关蛋白PCNA、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9、Fascin、Ezrin蛋白的表达。第三部分:构建裸鼠宫颈癌皮下移植瘤模型,分别将转染RAGE慢病毒的宫颈鳞癌细胞、转染空载体的宫颈鳞癌细胞接种裸鼠,比较两组肿瘤体积的变化和瘤体重量。并采用Western blot方法检测增殖相关蛋白PCNA、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9、Fascin、Ezrin蛋白的表达情况。结果:首先,转染RAGE慢病毒后Si Ha细胞中RAGE蛋白的表达为1.96±0.34,明显高于未转染组（1.18±0.15）和空载体组（1.16±0.18）,差异有统计学意义（P<0.05）;同样,转染RAGE慢病毒后Ca Ski细胞内RAGE蛋白表达量明显高于未转染组和空载体组。提示稳定高表达RAGE的Si Ha和Ca Ski细胞构建成功。而RAGE RNA干扰后Si Ha细胞中RAGE的表达明显下降,干扰组1和干扰组2中RAGE的表达量分别为0.17±0.08、0.23±0.11,均明显低于阴性对照组的1.04±0.11,差异有统计学意义（P<0.05）;同样,Ca Ski细胞RAGE RNA干扰组1和干扰组2中RAGE的表达也均明显低于阴性对照组。第一部分1.与未转染组0.99±0.03和空载体组0.98±0.08比较,转染RAGE慢病毒组Si Ha细胞450nm处的吸光度值明显增高（1.14±0.21）,P<0.05;与阴性对照组（1.02±0.21）相比,RAGE RNA干扰实验组450nm处的吸光度值（干扰组1:0.82±0.23;干扰组2:0.87±0.19）明显减小,P<0.05。在Ca Ski细胞中同样发现RAGE高表达促进细胞增殖,而低表达抑制细胞增殖。2.Si Ha细胞未转染组、空载体组与RAGE过表达组的凋亡率分别为18.33±2.06%、19.81±2.49%和7.10±2.67%,RAGE过表达组的凋亡率明显低于未转染组和空载体组,P<0.05。RNA干扰组1和干扰组2中,Si Ha细胞的凋亡率分别为12.84±0.44%、10.32±0.35%,均明显高于阴性对照组4.34±0.18%,P<0.05。在Ca Ski细胞中同样发现RAGE高表达抑制细胞凋亡,而低表达促进细胞凋亡。3.在Transwell细胞侵袭实验中,与未转染组（356.81±21.30）和空载体组（349.60±42.79）相比,RAGE过表达组Si Ha细胞的穿透数目（603.61±181.73）显着增加,P<0.05。RAGE RNA干扰后Si Ha细胞的细胞穿透数目（干扰组1:216.58±32.16;干扰组2:267.23±52.48）与阴性对照组（446.41±45.23）相比均明显减少,P<0.05。在Ca Ski细胞中同样发现RAGE表达上调后,细胞侵袭能力增加,而RAGE表达下调会抑制细胞侵袭。4.在Transwell细胞迁移实验中,Si Ha细胞RAGE过表达组细胞穿透数目为669.33±41.27,与未转染组的423.0±37.45和空载体组的433.02±57.23相比,均明显增多,P<0.05。RAGE RNA干扰后Si Ha细胞的细胞穿透数目（干扰组1:211.12±16.43;干扰组2:217.52±14.51）与阴性对照组（320.13±12.82）相比均明显减少,P<0.05。在Ca Ski细胞中同样发现RAGE表达上调后,细胞迁移能力增加,而RAGE表达下调会抑制细胞迁移。第二部分1.与未转染组和空载体组相比,RAGE过表达组Si Ha细胞中增殖相关蛋白PCNA、凋亡相关蛋白Bcl-2、及侵袭和迁移相关蛋白Ezrin表达均明显增加（P<0.05）。2.与阴性对照组相比,RAGE RNA干扰后细胞中PCNA、Bcl-2、Ezrin表达均明显减少（P<0.05）。3.而三组细胞中,细胞中凋亡相关蛋白Bax、侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9、Fascin表达变化无统计学意义（P>0.05）。第三部分1.RAGE过表达组裸鼠的肿瘤体积和瘤体重量分别为1599.47±247.97mm3和1.67±0.35g,均明显大于空载体组的629.92±140.59mm3和0.74±0.42g（P<0.05）。2.与空载体组相比,RAGE过表达组肿瘤组织中PCNA、Fascin蛋白的表达量明显升高,P<0.05,Bax蛋白的表达量明显减少,P<0.05。而MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白表达量在两组之间没有差别。结论:1.RAGE可以促进宫颈鳞癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,抑制细胞的凋亡。2.RAGE对宫颈癌细胞生物学行为的影响与增殖相关蛋白PCNA、凋亡相关蛋白Bcl-2和侵袭迁移相关蛋白Ezrin相关。3.RAGE基因具有促进宫颈鳞癌细胞成瘤的能力。该作用和PCNA、Bax、Fascin蛋白相关,而与MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白无关。
陈景[10]（2017）在《光点击化学法构建的多功能透明质酸纳米/微米凝胶用于蛋白质药物的肿瘤靶向高效治疗》文中提出恶性肿瘤在全世界范围内导致的发病率逐年上升,目前临床上治疗肿瘤的主要手段包括外科手术切除、放疗、化疗等。其中化疗是一种常用的治疗手段,但肿瘤选择性差,药物利用率低,在杀死肿瘤的同时也会对正常组织和器官造成损伤,导致很多病人因强烈的毒副作用而难以坚持化疗。蛋白质药物因其高效、高特异性和低毒副作用的特点近年来被越来越多地用于肿瘤治疗。尽管蛋白质药物展现出了巨大的潜力,但其临床应用仍受限于在体内不稳定、容易酶降解以及难以进入肿瘤细胞内等缺点。最近,多种纳米和微米载体被开发用来保护蛋白质药物的生物活性和实现蛋白质药物的肿瘤靶向治疗。论文第一章介绍了蛋白质药物用于肿瘤治疗的现状,着重概述了用于蛋白质包载和控制释放的各种纳米载体和微米载体系统。本论文第二章设计合成了还原响应性自发荧光的透明质酸纳米凝胶（HA NGs）用于实现治疗性蛋白质药物（细胞色素C（CC）和颗粒酶B（GrB））的高效和高选择性递送。该HANGs是用透明质酸-胱胺-甲基丙烯酸酯衍生物（HA-Cys-MA）和透明质酸-赖氨酸-四唑衍生物（HA-Lys-Tet）经反相纳米沉淀法和“四唑-烯”光点击化学交联法制备得到。动态光散射（DLS）结果显示HANGs粒径较小（150 nm）,PDI为0.10,表面带负电荷（-17.6mV）。HANGs在生理环境下和模拟血液环境中稳定,能有效抑制包载的CC蛋白质药物的早释;而在模拟细胞内还原环境下（10 mM GSH）可快速降解,能在10小时内快速释放约80%的CC。而且,从纳米凝胶释放的CC表现出了与自由CC相似的酶催化活性和二级结构。MTT结果显示,包载GrB的纳米凝胶（GrB-NGs）能够有效靶向并且杀死CD44过表达的MCF-7乳腺癌细胞和A549肺癌细胞,其IC50比临床上广泛使用的化疗药物低了几千倍。体内抗肿瘤实验表明GrB-NGs在极低剂量（3.8-5.7 nmol GrB equiv./kg）时就能有效抑制皮下MCF-7乳腺癌和原位A549-luciferase肺癌的生长,同时不会带来明显的毒副作用。该纳米凝胶具有高稳定性、还原敏感性、良好的肿瘤靶向性和自发荧光等优点,在蛋白质药物的细胞内高效递送方面有很好的应用前景。为进一步提高纳米凝胶载体的肿瘤选择性和内吞进入肿瘤细胞的能力,本论文第三章设计了 EGFR和CD44双重靶向的生物响应性自发荧光的透明质酸纳米凝胶（EGFR/CD44-NGs）用来增强治疗性蛋白质药物GrB在卵巢癌和乳腺癌的靶向递送。EGFR/CD44-NGs由透明质酸-四唑衍生物（HA-g-Tet）,透明质酸-四唑/GE11多肽衍生物（HA-g-GE11/Tet）以及透明质酸-胱胺-甲基丙烯酸酯衍生物（HA-g-Cys-MA）通过联用反相纳米沉淀法和“四唑-烯”光点击化学法制得。EGFR/CD44-NGs可定量包载CC和GrB,粒径较小（约165 nm）,在血清中稳定,而在还原条件下快速释放包载的蛋白质药物。流式结果显示EGFR/CD44-NGs内吞进入CD44/EGFR高表达的SKOV-3细胞的量是CD44-NGs单靶向实验组的6倍多。同样,GrB-EGFR/CD44-NGs相比于GrB-CD44-NGs能更好地激活SKOV-3肿瘤细胞内的caspase,更有效地抑制细胞的生长。体内抗肿瘤实验表明GrB-EGFR/CD44-NGs在3.85 nmol GrB equiv./kg的低剂量条件下几乎完全抑制了皮下SKOV-3卵巢癌和MDA-MB-231乳腺癌肿瘤的生长,而且未引起明显的毒副作用。该治疗效果明显优于单靶向的GrB-CD44-NGs。因此,EGFR和CD44双靶向的多功能透明质酸纳米凝胶能显着增强蛋白质纳米药物内吞进入肿瘤细胞的能力,进而提高蛋白质药物的抗肿瘤效果。肿瘤转移是造成大部分癌症患者死亡的主要原因。在第四章,我们用双靶向EGFR/CD44-NGs包载蛋白质药物皂草毒素（Sap）,并详细研究了载Sap的纳米凝胶（Sap-EGFR/CD44-NGs）对4T1-luciferase（4T1-luc）转移性乳腺癌的体内治疗效果。流式结果显示EGFR/CD44-NGs内吞进入CD44/EGFR高表达的4T1-luc细胞的量是CD44-NGs单靶向实验组的6.2倍。MTT结果显示Sap-EGFR/CD44-NGs能有效地抑制4T1-luc细胞的生长,其半致死浓度（IC50）为5.36 nM,这远远小于单靶向的Sap-CD44-NGs（14.4 nM）。体内抗肿瘤实验表明 Sap-EGFR/CD44-NGs 在低剂量（13.3 nmol Sap equiv./kg）的条件下有效抑制了 4T1-luc肿瘤在肺部的转移和生长,并且未表现出明显的毒副作用。这证明了该双靶向纳米凝胶在包载治疗性蛋白质药物后,可高效抑制肿瘤的转移和生长。在第五章,我们设计制备粒径均一的透明质酸微凝胶（HMGs）,来实现赫赛汀（Herceptin）在卵巢癌的局部长效释放。HMGs由透明质酸的甲基丙烯酸-2-氨基乙酯衍生物（HA-AMA）和透明质酸的二甲氨基四唑衍生物（HA-MTet）经微流控法和“四唑-烯”光点击化学交联法制备得到。通过简单调节水相油相速度,可方便制备得到大小均一、粒径在25-50μm的微凝胶。HMGs在透明质酸酶的作用下会降解,并且降解速率随透明质酸酶浓度的增加而加快。HMGs能高效包载Herceptin和IgG蛋白药物,包载量可高达27.2 wt.%。体外释放实验表明HMGs可实现Herceptin和IgG的长效可控释放,在1 U/mL的透明质酸酶的条件下,Herceptin蛋白药物在10天时的释放量为80.6%。圆二色谱（CD）测试显示从微凝胶中释放出的Herceptin和IgG蛋白质具有与自由蛋白质相似的二级结构。体内抗肿瘤实验结果显示局部单剂量的Herceptin-HMGs（30 mg Herceptin equiv./kg）能显着抑制皮下 SKOV-3 卵巢癌移植瘤的增长,抑瘤率高达80.4%。该生物可降解微凝胶在蛋白质药物的局部长效可控释放方面具有较好的应用前景。第六章对本论文工作进行了全面总结,并展望了今后可开展的工作。
二、HAase、HA在卵巢肿瘤患者血清、组织中的表达及临床意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、HAase、HA在卵巢肿瘤患者血清、组织中的表达及临床意义（论文提纲范文）
（1）Hsa＿circ0006332和Hsa＿circ0000069调控宫颈癌发展的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 Hsa_circ00063322 吸附miR-548q促进宫颈癌细胞增殖、减弱药物敏感性并调节HPV L2 表达 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 相关实验仪器及材料 |
| 2.1.2 实验步骤与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 宫颈癌中Hsa_circ00063322 的表达特征及转录调节 |
| 2.2.2 Hsa_circ00063322 影响CC细胞增殖和药物敏感性,以及在体肿瘤生长 |
| 2.2.3 Hsa_circ00063322 作为miRNAs海绵吸附miR-548q |
| 2.2.4 Hsa_circ00063322 通过miR-548q调节L2 表达,以及细胞增殖和药物敏感性 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 Hsa_circ0000069 通过吸附miR-4426 促进宫颈癌细胞增殖和迁移 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 相关实验仪器及材料 |
| 3.1.2 实验步骤与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 宫颈癌中Hsa_circ0000069 的表达特征 |
| 3.2.2 m6A修饰提高了Hsa_circ0000069 转录本的稳定性 |
| 3.2.3 Hsa_circ0000069 促进宫颈癌细胞增殖和迁移 |
| 3.2.4 Hsa_circ0000069 通过吸附miR-4426 促进宫颈癌细胞增殖和迁移 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 妇科肿瘤分子标志物及其个体化精准医疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间学术成果 |
| 致谢 |
（2）PTX3调控奶山羊卵巢颗粒细胞功能及分子机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号对照表 |
| 文献综述 |
| 第一章 卵巢颗粒细胞功能及调控的研究进展 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 卵巢GCs的功能 |
| 1.2.1 GCs与卵泡生长发育 |
| 1.2.2 GCs与卵泡闭锁 |
| 1.2.3 类固醇激素的作用 |
| 1.3 卵巢GCs功能的调控研究 |
| 1.3.1 促性腺激素调控GCs功能 |
| 1.3.2 细胞或生长因子调控GCs功能 |
| 1.3.3 miRNA调控GCs功能 |
| 第二章 PTX3基因的研究进展 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 PTX家族 |
| 2.3 PTX3的表达调节 |
| 2.3.1 激素对PTX3表达的调节 |
| 2.3.2 细胞或生长因子对PTX3表达的调节 |
| 2.3.3 miRNA对PTX3表达的调节 |
| 2.4 PTX3的生物学功能 |
| 2.4.1 PTX3在先天免疫、炎症反应和组织修复中的作用 |
| 2.4.2 PTX3在癌症中的作用 |
| 2.4.3 PTX3在卵巢中的作用 |
| 2.5 本研究的目的意义、研究内容和技术路线 |
| 2.5.1 本研究的目的与意义和研究内容 |
| 2.5.2 本研究的技术路线 |
| 试验研究 |
| 第三章 PTX3调控奶山羊卵巢颗粒细胞功能的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试验仪器与材料试剂 |
| 3.2.2 试验动物 |
| 3.2.3 细胞分离培养与鉴定 |
| 3.2.4 RNA及蛋白提取 |
| 3.2.5 反转录和Real-time PCR(RT-PCR) |
| 3.2.6 Western blot(WB) |
| 3.2.7 过表达载体的构建与siRNA的合成 |
| 3.2.8 细胞转染 |
| 3.2.9 细胞活力(CCK8)与增殖(EdU)检测 |
| 3.2.10 细胞凋亡检测(流式细胞术) |
| 3.2.11 ELISA |
| 3.2.12 数据统计与分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 奶山羊卵巢GCs的鉴定 |
| 3.3.2 PTX3在奶山羊各组织和大、小卵泡中的表达 |
| 3.3.3 PTX3过表达和干扰效率验证 |
| 3.3.4 PTX3对GCs活力和增殖的影响 |
| 3.3.5 PTX3对GCs凋亡的影响 |
| 3.3.6 PTX3对GCs分泌E2和P4水平的影响 |
| 3.3.7 PTX3对GCs中类固醇合成关键酶的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 miR-29靶向PTX3调控奶山羊卵巢颗粒细胞功能的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试验仪器与材料试剂 |
| 4.2.2 试验动物 |
| 4.2.3 野生型和突变型双荧光素酶报告载体的构建 |
| 4.2.4 miR-29-3p模拟物化学合成 |
| 4.2.5 细胞分离培养 |
| 4.2.6 细胞转染及双荧光素酶活性检测 |
| 4.2.7 RNA及蛋白提取 |
| 4.2.8 反转录和Real-time PCR(RT-PCR) |
| 4.2.9 Western blot(WB) |
| 4.2.10 细胞活力(CCK8)与增殖(EdU)检测 |
| 4.2.11 细胞凋亡检测(流式细胞术) |
| 4.2.12 ELISA |
| 4.2.13 数据统计与分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 双荧光素酶报告载体的构建及miR-29转染效率检测 |
| 4.3.2 双荧光素酶活性检测 |
| 4.3.3 miR-29对GCs中PTX3表达的影响 |
| 4.3.4 miR-29靶向PTX3对GCs活力和增殖的影响 |
| 4.3.5 miR-29靶向PTX3对GCs凋亡的影响 |
| 4.3.6 miR-29靶向PTX3对GCs分泌E2和P4水平的影响 |
| 4.3.7 miR-29靶向PTX3对GCs中类固醇合成关键酶的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 miR-29靶向PTX3调控奶山羊卵巢颗粒细胞功能的作用机理 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 试验仪器与材料试剂 |
| 5.2.2 试验动物 |
| 5.2.3 细胞分离培养与鉴定 |
| 5.2.4 细胞转染及通路抑制剂和FGF2处理GCs |
| 5.2.5 Western blot(WB) |
| 5.2.6 细胞活力(CCK8)和增殖(EdU)检测 |
| 5.2.7 细胞凋亡检测(流式细胞术) |
| 5.2.8 ELISA |
| 5.2.9 免疫共沉淀(CO-IP) |
| 5.2.10 数据统计与分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 miR-29靶向PTX3对PI3K/AKT/mTOR和Erk1/2信号通路及凋亡相关基因的影响 |
| 5.3.2 Erk1/2、PI3K信号通路抑制剂对GCs功能的影响 |
| 5.3.3 PTX3对FGF2调控GCs增殖、凋亡和类固醇生成的影响 |
| 5.3.4 PTX3与FGF2在GCs内外的相互结合 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 PTX3参与FSH/LH调控的奶山羊卵巢颗粒细胞类固醇生成的研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 试验仪器与材料试剂 |
| 6.2.2 试验动物 |
| 6.2.3 细胞分离培养与鉴定 |
| 6.2.4 FSH和LH处理GCs |
| 6.2.5 ELISA |
| 6.2.6 Western blot(WB) |
| 6.2.7 细胞转染 |
| 6.2.8 数据统计与分析 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 FSH/LH对大、小有腔卵泡的GCs类固醇生成及PTX3表达的影响 |
| 6.3.2 PTX3对FSH调控大、小有腔卵泡的GCs类固醇生成和合成关键酶的影响 |
| 6.3.3 PTX3对LH调控大、小有腔卵泡的GCs类固醇生成和合成关键酶的影响 |
| 6.3.4 PTX3对FSH/LH调控大、小有腔卵泡的GCs类固醇生成和合成关键酶的影响 |
| 6.3.5 PTX3对大、小有腔卵泡的GCs中FSHR和LHR的影响 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）CHAF1A在宫颈癌中的作用和相关机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 CHAF1A和 ERα在宫颈组织中的表达 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 CHAF1A在宫颈癌细胞中的生物学功能研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 CHAF1A在宫颈癌中的作用机制 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 CHAF1A在肿瘤研究中的进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文 |
（4）基于肝素化碳量子点的药物递送系统的构建及应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 用于癌症治疗的纳米药物递送系统 |
| 1.1.1 癌症化疗中的难点 |
| 1.1.2 纳米技术在药物递送系统中的应用 |
| 1.1.3 抗凝剂肝素在癌症治疗中的作用 |
| 1.2 CDs概述 |
| 1.2.1 CDs的合成与修饰 |
| 1.2.2 CDs的光物理性能 |
| 1.2.3 CDs的生物学性能 |
| 1.3 基于CDs的可视化纳米药物递送系统研究概况 |
| 1.3.1 CDs在纳米药物递送方面的应用 |
| 1.3.2 CDs在可视化分析方面的应用 |
| 1.4 研究内容安排 |
| 第二章 CDs的制备及性能表征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验仪器及试剂 |
| 2.2.2 CDs的制备及表征方法 |
| 2.2.3 细胞培养 |
| 2.2.4 细胞毒性检测 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 CDs的理化性能分析 |
| 2.3.2 CDs的生物相容性分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 CDs-HA/DOX药物递送系统的构建及释药性能研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 CDs-HA/DOX药物递送系统的制备及优化 |
| 3.2.2 体外释放实验 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 CDs-HA/DOX药物递送系统的表征及优化 |
| 3.3.2 CDs-HA/DOX药物递送系统体外释放行为研究 |
| 3.3.3 CDs-HA/DOX药物递送系统对肿瘤细胞抑制效果研究 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 CDs-HA-Hep/DOX药物递送系统的构建及释药性能研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 CDs-HA-Hep/DOX药物递送系统的制备 |
| 4.2.2 溶血性实验 |
| 4.2.3 细胞划痕实验 |
| 4.2.4 细胞成像实验 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 CDs-HA-Hep/DOX药物递送系统的表征 |
| 4.3.2 CDs-HA-Hep/DOX药物递送系统溶血性能研究 |
| 4.3.3 CDs-HA-Hep/DOX药物递送系统体外释放行为研究 |
| 4.3.4 CDs-HA-Hep/DOX药物递送系统对肿瘤细胞抑制效果研究 |
| 4.3.5 CDs-HA-Hep/DOX药物递送系统抗转移能力研究 |
| 4.3.6 CDs-HA-Hep/DOX药物递送系统可视化药物追踪研究 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 基于CDs的荧光探针对肝素检测的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 CDs对肝素的荧光响应性实验 |
| 5.2.2 选择性和实际样品回收实验 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 不同浓度CDs的溶血性能研究 |
| 5.3.2 CDs对肝素的荧光响应性研究 |
| 5.3.3 CDs对肝素的选择性研究 |
| 5.3.4 人体血液样品中对肝素的检测研究 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）基于肿瘤微环境特点的纳米药物构建及其抗肿瘤活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 肿瘤微环境(TME) |
| 1.1.1 肿瘤微环境的定义 |
| 1.1.2 肿瘤微环境(TME)的构成与特点 |
| 1.2 光热疗法(PTT) |
| 1.2.1 基本原理 |
| 1.2.2 基于肿瘤微环境特点的PTT抗肿瘤活性研究 |
| 1.2.3 本文针对肿瘤微环境的特点设计的PTT抗肿瘤体系思路 |
| 1.3 光动力疗法(PDT) |
| 1.3.1 基本原理 |
| 1.3.2 基于肿瘤微环境特点的PDT抗肿瘤活性研究 |
| 1.3.3 本文针对肿瘤微环境的特点设计的PDT抗肿瘤体系思路 |
| 1.4 选题意义及研究内容 |
| 1.4.1 选题意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 第二章 基于肿瘤微环境特点的光热抗肿瘤活性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 仪器、试剂、细胞与动物 |
| 2.2.2 巯基化透明质酸(HA-SH)表面包被Pd纳米片的制备 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 HA-SH的制备与表征 |
| 2.3.2 PdNSs@HA-ss-HA纳米材料的制备与表征 |
| 2.3.3 HA-ss-HA凝胶层包覆PdNSs验证 |
| 2.3.4 PdNSs催化二硫键快速形成的检测 |
| 2.3.5 PdNSs@HA-ss-HA光热转换性能检测 |
| 2.3.6 PdNSs@HA-ss-HA光热稳定性检测 |
| 2.3.7 细胞中的药物摄取检测 |
| 2.3.8 体外抗肿瘤活性研究 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 基于肿瘤微环境特点的光敏抗肿瘤活性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 仪器、试剂、细胞与动物 |
| 3.2.2 ZDCMH纳米药物的合成与组装 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 药物的装载和表征以及药物的释放 |
| 3.3.2 细胞的药物摄取以及亚细胞定位研究 |
| 3.3.3 细胞内活性氧生成的研究 |
| 3.3.4 体外抗肿瘤活性研究 |
| 3.3.5 体内抗肿瘤活性研究 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 总结与展望 |
| 4.1 总结 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 |
| 致谢 |
（6）CD44v6和HA在结直肠癌中的表达及其对顺铂耐药机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第一章 引言 |
| 第二章 CD44v6和HA在 CRC中的表达及CD44v6与CRC患者临床病理特征之间的关系 |
| 第一节 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、方法步骤 |
| 第二节 结果 |
| 一、CD44v6在CRC中的表达水平 |
| 二、CD44v6与CRC患者临床病理之间的关系 |
| 三、HA在 HT29、RKO、NCM460 细胞中的分泌情况 |
| 第三节 讨论 |
| 第三章 CD44v6、CD44v6-HA对 CRC顺铂耐药影响的研究 |
| 第一节 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、方法步骤 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论 |
| 第四章 初步探索CD44v6、CD44v6-HA参与CRC顺铂耐药的机制 |
| 第一节 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、方法步骤 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论 |
| 第五章 问题与不足 |
| 第六章 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 综述 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（7）长链非编码RNA C5orf66-AS1在宫颈癌发生中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第一部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 在宫颈癌中的异常表达的筛选和验证 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 .组织标本 |
| 2.2 细胞复苏、传代和培养 |
| 2.3 主要试剂 |
| 2.4 主要仪器 |
| 2.5 qRT-PCR |
| 2.6 In situ hybridization(ISH) |
| 2.7 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 C5orf66-AS1 在宫颈癌组织中高表达 |
| 3.2 C5orf66-AS1 在宫颈癌细胞中高表达 |
| 3.3 C5orf66-AS1 与宫颈癌患者的预后相关性 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 在宫颈癌中的生物学功能 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 qRT-PCR |
| 2.5 质粒的构建和提取 |
| 2.6 Cell counting kit-8(CCK-8) |
| 2.7 克隆形成实验 |
| 2.8 细胞周期 |
| 2.9 细胞凋亡 |
| 2.10 划痕实验 |
| 2.11 Transwell实验 |
| 2.12 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 构建上调或下调C5orf66-AS1 表达的宫颈癌细胞株 |
| 3.2 C5orf66-AS1 能促进宫颈癌细胞株的增殖能力 |
| 3.3 C5orf66-AS1 能调控宫颈癌的细胞周期 |
| 3.4 下调C5orf66-AS1 能促进宫颈癌细胞的凋亡 |
| 3.5 C5orf66-AS1 对宫颈癌细胞的侵袭转移无影响 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 调控宫颈癌细胞增殖能力的分子机制 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 .细胞培养 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 试剂的配置 |
| 2.5 qRT-PCR |
| 2.6 蛋白质免疫印迹(western blot) |
| 2.7 RNA免疫共沉淀(RIP) |
| 2.8 荧光素酶报告实验 |
| 2.9 免疫组化(IHC) |
| 2.10 核质分离 |
| 2.11 CCK-8 |
| 2.12 动物实验 |
| 2.13 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 LncRNA C5orf66-AS1在宫颈癌细胞核和细胞质中的分布 |
| 3.2 C5orf66-AS1 调控miRNA的筛选 |
| 3.3 C5orf66-AS1 调控miR-637的验证 |
| 3.4 MiR-637在宫颈癌中的表达 |
| 3.5 MiR-637的靶基因筛选 |
| 3.6 MiR-637的靶基因验证 |
| 3.7 C5orf66-AS1 可调控RING1 的表达 |
| 3.8 C5orf66-AS1 通过竞争性结合miR-637调控RING1的表达,最终影响宫颈癌细胞的增殖能力 |
| 3.9 在实验动物中下调lncRNA C5orf66-AS1可抑制肿瘤的生长 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 全文总结 |
| 4.1 主要创新点 |
| 4.2 主要结论 |
| 4.3 研究展望 |
| 第五部分 长链非编码RNA(lncRNA)在宫颈癌中的研究现状 |
| 非编码RNA的生物发生和功能 |
| 宫颈癌中循环lncRNAs下调 |
| LncRNA-HOTAIR |
| LncRNA-H19 |
| LncRNA-XIST |
| LncRNA-CCHE1 |
| LncRNA-EBIC |
| LncRNA-MALAT1 |
| LncRNA-ANRIL |
| LncRNA-LET |
| LncRNA-NEAT1 |
| LncRNA-BLACAT1 |
| LncRNA-UFC1 |
| LncRNA-SNHG16 |
| LncRNA-SNHG20 |
| 结论和展望 |
| 参考文献 |
| 综述一 长链非编码RNA在妇科肿瘤中的调控表达 |
| 参考文献 |
| 综述二 妇科肿瘤中的 miRNA:具有重大影响的小分子 |
| 参考文献 |
| 综述三 趋化因子受体对卵巢癌患者免疫功能的影响 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 攻读博士期间参与的课题研究 |
| 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
（8）miR-122在卵巢上皮癌发生、发展中的作用及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 miR-122在卵巢上皮癌组织中的表达及临床意义 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 miR-122对卵巢上皮癌细胞生物学行为的影响及机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 miR-122对卵巢上皮癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响及机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 miRNAs在卵巢癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）RAGE对宫颈鳞癌生物学行为的影响及其相关机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 RAGE的表达对宫颈鳞癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学行为的影响 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 RAGE的表达对宫颈癌细胞生物学行为影响的相关机制 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 RAGE对宫颈鳞癌细胞的成瘤性的影响及相关机制 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 RAGE在妇科肿瘤中的研究进展和应用前景 |
| 参考文献 |
| 中英文缩写对照 |
| 攻读学位期间本人出版或公开发表的论着、论文 |
| 致谢 |
（10）光点击化学法构建的多功能透明质酸纳米/微米凝胶用于蛋白质药物的肿瘤靶向高效治疗（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 蛋白质药物的研究现状 |
| 1.2 载蛋白的纳米粒子体系 |
| 1.2.1 纳米凝胶 |
| 1.2.2 脂质体纳米粒子和聚合物囊泡 |
| 1.2.3 聚合物纳米粒子 |
| 1.2.4 无机纳米粒子 |
| 1.3 载蛋白质的微球递送体系 |
| 1.3.1 微凝胶 |
| 1.3.2 聚合物微球 |
| 1.4 载蛋白质纳米/微米载体的发展趋势 |
| 1.5 课题的提出及研究内容 |
| 参考文献 |
| 第二章 多功能透明质酸纳米凝胶用于蛋白质药物的靶向递送和肿瘤的高效治疗 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 试剂与仪器 |
| 2.2.2 合成N-叔丁基羰基-N'-甲基丙烯酰基-胱胺(MA-Cys-Boc)小分子 |
| 2.2.3 小分子单体四唑(Tet)的合成 |
| 2.2.4 透明质酸-胱胺-甲基丙烯酯衍生物(HA-Cys-MA)的合成 |
| 2.2.5 透明质酸-赖氨酸-四唑衍生物(HA-Lys-Tet)的合成 |
| 2.2.6 还原敏感自发荧光纳米凝胶(HANGs)的制备 |
| 2.2.7 载蛋白纳米凝胶的体外释放 |
| 2.2.8 释放CC生物活性的测定 |
| 2.2.9 细胞毒性试验(MTT实验) |
| 2.2.10 细胞内吞和内涵体逃逸 |
| 2.2.11 HANGs的药代动力学研究 |
| 2.2.12 HANGs的体内生物分布研究 |
| 2.2.13 载颗粒酶B纳米凝胶(GrB-NGs)对荷瘤小鼠的治疗效果研究 |
| 2.2.14 HANGs穿透能力表征 |
| 2.2.15 组织学分析 |
| 2.2.16 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 HA-Cys-MA与HA-Lys-Tet的合成与表征 |
| 2.3.2 还原敏感自发荧光纳米凝胶的制备 |
| 2.3.3 蛋白质的包裹和释放 |
| 2.3.4 CD44靶向和细胞凋亡实验 |
| 2.3.5 HANGs药代动力学和生物分布研究 |
| 2.3.6 GrB-NGs的体内抗肿瘤疗效 |
| 2.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 EGFR和CD44双重靶向的多功能透明质酸纳米凝胶用于促进蛋白质药物在卵巢癌和乳腺癌的递送 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 试剂与仪器 |
| 3.2.2 合成GE11修饰的透明质酸衍生物(HA-g-GE11/Tet) |
| 3.2.3 制备双靶向还原敏感自发荧光的纳米凝胶(EGFR/CD44-NGs) |
| 3.2.4 蛋白质的包载和体外释放 |
| 3.2.5 细胞表面CD44和EGFR受体的测定 |
| 3.2.6 细胞内吞和内涵体逃逸 |
| 3.2.7 细胞毒性试验(MTT实验) |
| 3.2.8 GrB-EGFR/CD44-NGs体内抗肿瘤效果探究 |
| 3.2.9 组织学分析 |
| 3.2.10 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 HA-g-GE11/Tet的合成与表征 |
| 3.3.2 还原敏感自发荧光的透明质酸纳米凝胶的制备 |
| 3.3.3 蛋白质的包裹和释放 |
| 3.3.4 SKOV-3细胞表面CD44和EGFR受体的测定 |
| 3.3.5 纳米凝胶的细胞内吞和蛋白质的内涵体逃逸 |
| 3.3.6 细胞毒性实验 |
| 3.3.7 载GrB纳米凝胶的体内抗肿瘤效果研究 |
| 3.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 CD44和EGFR双靶向的纳米凝胶用于皂草毒素蛋白的高效包载和转移性肿瘤的治疗 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 制备包载皂草毒素的双靶向还原敏感自发荧光的纳米凝胶(Sap-EGFR/CD44-NGs) |
| 4.2.2 细胞内吞和毒性实验 |
| 4.2.3 血常规的测定 |
| 4.2.4 Sap-EGFR/CD44-NGs体内抗肿瘤效果探究 |
| 4.2.5 统计学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 细胞内吞和毒性实验 |
| 4.3.2 血常规测定 |
| 4.3.3 载Sap纳米凝胶对4T1转移性乳腺癌肿瘤的治疗评价 |
| 4.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 联合微流控和光点击化学法制备透明质酸微凝胶用于赫赛汀在卵巢癌的长效释放 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 试剂与仪器 |
| 5.2.2 合成透明质酸的甲基丙烯酸-2-氨基乙酯衍生物(HA-AMA) |
| 5.2.3 二甲氨基四唑(MTet)的合成 |
| 5.2.4 透明质酸-赖氨酸-二甲氨基四唑衍生物(HA-Lys-MTet)的合成 |
| 5.2.5 微流控芯片的制备 |
| 5.2.6 透明质酸微凝胶(HMGs)和载蛋白质HMGs的制备 |
| 5.2.7 HMGs的酶降解 |
| 5.2.8 载蛋白HMGs的体外释放 |
| 5.2.9 细胞毒性实验 |
| 5.2.10 载赫赛汀透明质酸微凝胶(Herceptin-HMGs)的生物分布 |
| 5.2.11 Herceptin-HMGs的体内抗肿瘤疗效评价 |
| 5.2.12 组织分析 |
| 5.2.13 统计学分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 HA-AMA与HA-Lys-MTet的合成与表征 |
| 5.3.2 自发荧光微米凝胶的制备 |
| 5.3.3 HMGs的酶降解 |
| 5.3.4 蛋白质的包裹和释放 |
| 5.3.5 Herceptin-HMGs的MTT实验 |
| 5.3.6 Herceptin-HMGs的体内分布成像 |
| 5.3.7 Herceptin-HMGs的体内抗肿瘤效果研究 |
| 5.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 全文总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 研究展望 |
| 创新点 |
| 附录 中英文缩写对照表 |
| 攻读学位期间已发表或待发表论文 |
| 致谢 |
四、HAase、HA在卵巢肿瘤患者血清、组织中的表达及临床意义（论文参考文献）
- [1]Hsa＿circ0006332和Hsa＿circ0000069调控宫颈癌发展的机制研究[D]. 陈震. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [2]PTX3调控奶山羊卵巢颗粒细胞功能及分子机理的研究[D]. 王沛婕. 西北农林科技大学, 2021
- [3]CHAF1A在宫颈癌中的作用和相关机制研究[D]. 文丽. 重庆医科大学, 2021(01)
- [4]基于肝素化碳量子点的药物递送系统的构建及应用[D]. 马岚. 太原理工大学, 2020(07)
- [5]基于肿瘤微环境特点的纳米药物构建及其抗肿瘤活性研究[D]. 姚海. 南京师范大学, 2020(03)
- [6]CD44v6和HA在结直肠癌中的表达及其对顺铂耐药机制的研究[D]. 杨小萍. 兰州大学, 2020(01)
- [7]长链非编码RNA C5orf66-AS1在宫颈癌发生中的作用及其机制研究[D]. 芮小慧. 苏州大学, 2019(06)
- [8]miR-122在卵巢上皮癌发生、发展中的作用及机制[D]. 段亚男. 河北医科大学, 2019(01)
- [9]RAGE对宫颈鳞癌生物学行为的影响及其相关机制[D]. 朱雪洁. 苏州大学, 2018(01)
- [10]光点击化学法构建的多功能透明质酸纳米/微米凝胶用于蛋白质药物的肿瘤靶向高效治疗[D]. 陈景. 苏州大学, 2017(06)