一、Harris苏木素配方的改进及配制中的注意事项（论文文献综述）
任非非[1]（2021）在《基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响》文中指出目的:观察AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路介导的线粒体生物合成对抑郁大鼠海马神经元突触可塑性的影响及醒脾解郁方干预效应。方法:实验研究分为四部分。第一部分:140只雄性SD大鼠随机分为空白组（CON）、模型组（MOD）、醒脾解郁方组（XPJYF）、草酸艾司西酞普兰组（EOT）、醒脾解郁方联合草酸艾司西酞普兰组（XPJYF+EOT）。每组根据应激时间各分为3w、6w组。除CON外,其余各组采用慢性束缚应激（CRS）造模,共21d。各组造模的同时给予相应药物干预。造模前及造模第3 w、6 w时进行行为学观察。造模3 w时评价脾虚程度,结合行为学实验,评价模型成功与否。取材后以HE染色和尼氏染色观察海马CA1区神经元病理变化及XPJYF干预效应。第二部分:大鼠分组及干预同研究一。取材后观察海马CA1区神经元突触及线粒体超微结构;分析线粒体及神经元突触体视学指标;高尔基染色观察神经元轴树突分支变化;提取海马突触体,免疫荧光染色观察突触重塑蛋白表达;Western blot检测线粒体合成蛋白含量;检测海马线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ～Ⅳ及线粒体酶活性。第三部分:制备XPJYF低、中、高剂量组含药血清;体外分离、培养原代海马神经元细胞并鉴定;采用CCK8法进行XPJYF细胞毒性实验;建立皮质酮（CORT）诱导海马神经元损伤模型,分为 CON、CORT、CORT+X（H）、（M）、（L）、CORT+E、CORT+E+X（H）、（M）、（L）共9组。以细胞免疫荧光观察SYN、PSD-95表达及海马神经元线粒体成像;Western blot检测线粒体生物合成及突触重塑蛋白表达;ELISA及RT-PCR检测5-HT、DA及其受体情况。第四部分:大鼠分组及干预同研究一。取材后以免疫荧光三标染色观察海马CA1区NeuN/CD31/GFAP表达;RT-PCR检测海马AMPK/SIRT1/PGC-1α通路基因表达;免疫组化及 Western blot 检测 NeuN、GFAP、VEGF、Collagen Ⅳ蛋白表达。结果:1.第一部分1.1宏观表征:造模前大鼠状态良好,反应灵敏,活动自如。造模3 w后,反应降低,神态倦怠,活动减少,毛发干枯或发黄,粪便逐渐变稀,至6 w时表现更明显,各用药组较模型组有改善。1.2体质量变化:模型各组大鼠体重较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,各用药组体重增加（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,西药3 w、联合各组体重增加（P<0.01,P<0.05）,西药6 w组降低（P<0.05）。联合各组体重较西药组增加（P<0.01,P<0.05）。1.3行为学:模型各组糖水偏好率（SPT）较空白组降低（P<0.01）,强迫游泳不动时间（FST）延长（P<0.01）。与模型组比较,西药、联合各3 w及各用药6w组SPT升高,FST缩短（P<0.01,P<0.05）。联合各组SPT较中药、西药组升高（P<0.01,P<0.05）,FST缩短（P<0.01,P<0.05）。与同组别基线比较,各组各时间点SPT降低（P<0.01）,模型各组及中药、西药各6 w组FST延长（P<0.01,P<0.05）。1.4血清淀粉酶、尿D-木糖排泄率比较:造模3 w后血清淀粉酶和尿D-木糖排泄率均降低（P<0.01）,至造模6周时更低（P<0.01）。1.5海马CA1区病理改变:HE染色:空白组海马CA1区神经元数量、分布、形态均无异常,圆形胞核清晰居中。模型3w组神经元数量减少,排列及形态不规则,细胞大小不一,部分呈三角形,细胞核深染、固缩,核仁显示不清;至6w时损伤进一步加重。各用药组有不同程度改善,以中药6 w组和联合组较为明显。尼氏染色:空白组海马CA1区神经元正常分布,胞质内可见丰富的尼氏小体,近胞核处呈“虎斑样”,远端呈细颗粒样,核仁清晰。模型3 w组细胞排列散乱,胞质内尼氏小体减少。至6w时,损伤加重,细胞皱缩明显,部分细胞尼氏体减少,并可见中央性染色质溶解现象。各用药组损伤逐渐恢复,以西药3 w组及中药6 w组明显。2.第二部分2.1神经元超微结构:正常组神经元突起较多,线粒体正常,突触结构完整,突触小泡较多。造模3 w后,线粒体肿胀,嵴断裂,突触小泡数量减少。至造模6 w,损伤加重,突触间隙显示不清,突触小泡减少,聚集分布,线粒体膜破坏,嵴断裂,基质空泡样变。各用药组上述损伤减轻。2.2线粒体体视学:模型各组Vvm较空白组升高（P<0.01）,NM、δ、δm降低（P<0.01）。与模型组比较,各给药组Vvm降低（P<0.01,P<0.05）,各6 w组NM升高（P<0.01）,中药、联合各组及西药6 w组δ、δm升高（P<0.01,P<0.05）。较中药组,西药6 w组δ、联合6 w组Vvm降低（P<0.01）,联合各组δm升高（P<0.01,P<0.05）。2.3突触体视学:模型各组数密度（Nv）、面密度（Sv）、突触小泡面数密度（NS）均较空白组降低（P<0.01）。中药、联合各6 w组Nv、Sv、Ns较模型组升高（P<0.01,P<0.05）。2.4高尔基染色:模型各组Sholl交点数及树突棘较空白组减少（P<0.01）。中药、联合各组Sholl交点数较模型组增多（P<0.01,P<0.05）,中药、西药各6 w组及联合各组树突棘密度升高（P<0.01,P<0.05）,且联合6 w组较中药、西药各6w组升高（P<0.05）。2.5突触体突触重塑蛋白:与空白组比较,模型3 w组GAP-43、PSD-95增加（P<0.01）,6w组降低（P<0.05）,各组SYN、syntaxin 1均降低（P<0.01）。与模型组比较,中药、联合各组及西药3 w组GAP-43、PSD-95增加（P<0.01,P<0.05）,中药、联合各组SYN升高（P<0.01）,中药、西药及联合各6 w组syntaxin 1升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,西药6 w组SYN降低（P<0.05）,联合6 w组GAP-43增加（P<0.01）。2.6线粒体生物合成蛋白:模型各组SIRT1、PGC-1α、AMPK-α1、Tfam、NRF1较空白组均降低（P<0.01）。与模型组比较,西药3 w组SIRT1和AMPK-α1、联合各组SIRT1、PGC-1α、Tfam升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,联合3 w组AMPK-α1、6w组PGC-1α表达升高（P<0.01）。3.第三部分3.1细胞毒性实验:经免疫荧光鉴定,培养的海马神经元符合神经元细胞特征。经CCK8实验,确定醒脾解郁方含药血清浓度为高剂量组10%、中剂量组10%和低剂量组20%,作用时间确定为24h。3.2线粒体生物合成蛋白表达:与CON组比较,CORT组、CORT+E组SIRT1、PGC-1α、NRF1、Tfam 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X 的 H、M 组 SIRT1、NRF1、Tfam 升高（P<0.01）,CORT+E 组 SIRT1 降低（P<0.05）,CORT+X（H）组PGC-1α 升高（P<0.01）。与 CORT+E 组比较,CORT+E+X（H）组 PGC-1α、Tfam 升高（P<0.05）,CORT+E+X（M）组 NRF1、Tfam 升高（P<0.01）。3.3突触重塑蛋白表达:与CON组比较,CORT组、CORT+E组GAP-43、SYN、PSD-95 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X 的 H、M 各组 GAP-43、SYN 升高（P<0.01）,CORT+X（H）组 PSD-95 升高（P<0.01）。与 CORT+E 组比较,CORT+E+XPJYF 的 H、M、L 组 GAP-43、SYN、PSD-95 升高（P<0.01,P<0.05）。3.4 5-HT、DA及其受体mRNA含量:与CON组比较,CORT组、CORT+E组5-HT、DA、5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X（H）组 5-HT、DA 升高（P<0.05）,CORT+E 组 5-HT 降低（P<0.05）,CORT+X 的 H、M组 5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 升高（P<0.01）。与 CORT1+E 组比较,CORT+E+X（H）组 5-HT 升高（P<0.05）,CORT+E+XPJYF 的 H、M、L 组 5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 升高（P<0.01,P<0.05）。4.第四部分4.1线粒体合成基因表达:模型各组SIRT1 mRNA、PGC-1α mRNA较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,各给药组 SIRT1 mRNA、PGC-1αmRNA、AMPK-α1 mRNA 均升高（P<0.01）,中药6w组、西药及联合各组NRF1 mRNA升高（P<0.01）,西药3 w组、中药及联合各组Tfam mRNA表达均升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,联合各组SIRT1 mRNA、PGC-1α mRNA、NRF1 mRNA 均升高（P<0.01）,西药 3 w 组 SIRT1 mRNA升高（P<0.01）。4.2突触微环境蛋白表达:模型各组NeuN、GFAP、VEGF较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,中药及联合各组NeuN、GFAP、VEGF均升高（P<0.01,P<0.05）,西药各组GFAP升高（P<0.01）,西药3 w组VEGF升高（P<0.01）。与中药组比较,西药各组GFAP 降低（P<0.05）,联合各组 GFAP 升高（P<0.01）,联合 3 w 组 VEGF 升高（P<0.05）。结论:1.慢性束缚应激3周时,动物模型符合肝郁脾虚型抑郁症标准,脑内海马CA1区神经元损伤,且随应激时间延长,损伤程度加重。中药醒脾解郁方和西药草酸艾司西酞普兰均可不同程度减轻神经元损伤,改善抑郁样行为,中药的远期保护优势较西药明显,且以两者联合应用作用更为显着;2.抑郁模型大鼠脑内海马CA1区神经元突触超微结构破坏,线粒体损伤,突触重塑功能降低,与AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路介导的线粒体生物合成减少直接相关。中药醒脾解郁方和西药草酸艾司西酞普兰均可动态调控该信号通路,促进海马神经元突触重塑,但二者作用的优势环节不同,西药在调节神经递质方面更具优势,而中药在改善线粒体功能方面更为明显,且中药的远期作用效果优于西药。3.抑郁症海马神经元突触微环境中星形胶质细胞、微血管内皮细胞及微血管基底膜损伤,与神经元突触重塑相关。中药醒脾解郁方可通过调控AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路增加线粒体生物合成,保护突触微环境,促进抑郁症神经重塑,作用较西药草酸艾司西酞普兰更具优势,且中西药联合应用效果显着。
安君霞[2]（2020）在《促性腺激素释放激素激动剂在冻融胚胎移植周期中的临床疗效和作用机制研究》文中研究表明背景:中国人口协会发布的调查显示,我国患不孕不育症的夫妻人数在急剧增加。不孕不育患者由于受家庭和社会舆论的双重压力而普遍存在多种心理问题,严重影响家庭和社会和谐。近年来,辅助生殖技术为不孕夫妇带来了福音,冻融胚胎移植周期（FET）因能减少并发症、提高累积妊娠率等优点越来越受青睐。在胚胎予以冷冻保存并无法控制质量的情况下,子宫内膜条件的好坏直接关系着FET周期的成功与否。促性腺激素释放激素激动剂（gonadotrophin releasing hormone agonist,Gn RH-a）因可抑制垂体功能使异位子宫内膜处于休眠状态,是治疗子宫内膜异位症药物的首选。近年来,Gn RH-a也被逐渐应用于FET周期。目前常用的内膜准备方法有激素治疗法（hormone therapy cycle,HT）及降调节激素治疗法（HT with gonadotropin-releasing hormone agonist,HT+Gn RH-a）。但由于缺乏以分子机制为基础的研究,对于哪种方法最优一直存在争议。目的:本文拟以临床和基础研究相结合的方式研究Gn RH-a在FET周期中的临床疗效和作用机制,以探寻FET周期最佳内膜准备方案。方法:回顾性研究近年于我院行FET周期的患者,按照内膜准备方案分为六组,HT组338例为单纯雌孕激素替代周期（HT）,HT+1 Gn RH-a组323例、HT+2 Gn RH-a组329例、HT+3 Gn RH-a组323例、HT+4 Gn RH-a组316例、HT+5Gn RH-a组313例分别为经1、2、3、4、5周期Gn RH-a垂体降调节后激素替代治疗的周期,收集并统计分析各组临床妊娠结局及胚胎移植日子宫内膜下血流参数,同时收集黄体期或胚胎移植日子宫内膜组织以评估内膜容受性。最后利用体外细胞模型研究Gn RH-a预处理对人内膜细胞增殖、容受性及蜕膜化的影响及机制。结果:1.HT+3 Gn RH-a组有更优的临床妊娠结局和内膜容受性。主要表现在同一治疗周期:1)有更高的胚胎种植率、临床妊娠率和活产率;2)胚胎移植日内膜下血流灌注更佳;3)移植日内膜组织中容受性标志分子如LIF、整合素β3、OPN、Hoxa10等表达量更高;4)治疗后移植日内膜组织和血清中抑制内膜容受性的mi RNA如mi R-125b-5p、mi R-223-3p、mi R-27a-3p表达量更低。2.Gn RH-a虽能通过线粒体途径诱导内膜细胞凋亡,但当联合雌、孕激素处理后对内膜细胞增殖的影响不显着。3.Gn RH-a预处理能促进内膜细胞尤其腺上皮细胞中容受性标志分子如LIF、整合素β3、OPN、VEGF、Hoxa10等表达量。4.Gn RH-a能以时间依赖的方式促进人子宫内膜基质细胞蜕膜化,且是ERK1/2依赖的。结论:研究结果表明FET周期中3周期Gn RH-a降调节的内膜准备方式在改善临床妊娠结局和提高内膜容受性方面效果最佳。本文为进一步提高FET周期临床妊娠率和活产率奠定良好基础,为在FET周期中选择内膜准备方式提供参考。
王芳[3]（2020）在《孕酮脂联素受体7在小鼠生殖中的作用》文中研究指明背景:孕酮-脂联素受体7（progestin–adiponectin Q receptor 7,PAQR7）是一类新命名的膜受体家族PAQR的孕酮受体亚群中的重要家族成员。PAQR7最初在海鳟鱼卵巢中克隆。它具有典型的G蛋白偶联受体的7次跨膜结构,与抑制性G蛋白偶联,调控腺苷酸环化酶活性,作为孕酮膜受体参与孕酮介导的卵细胞成熟。PAQR7也存在于海鳟鱼精子中,与一种嗅觉相关的兴奋性G蛋白(Golf)偶联,介导孕酮诱导的精子超活化运动。这些结果说明PAQR7在鱼类生殖中扮演重要角色。此外,PAQR7在小鼠和人的生殖组织中高表达,但其在哺乳动物生殖中的作用尚不清楚。实验目的:本文旨在利用小鼠PAQR7基因敲除模型揭示PAQR7在小鼠生殖中的作用。实验方法:1.通过实时荧光定量PCR检测PAQR7在小鼠各种组织的表达情况。2.通过免疫印迹检测PAQR7在小鼠精子、睾丸和卵巢中的表达情况。3.通过PAQR7抗体检测其对小鼠精子运动和体外受精的影响。4.通过（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/cas9,CRISPR/cas9）基因编辑技术构建PAQR7全身性敲除的C57/BL6J小鼠,通过基因型鉴定,实时荧光定量PCR和免疫印迹以及免疫荧光验证敲除结果。5.对PAQR7敲除小鼠进行表型鉴定:（1）不同基因型小鼠进行合笼,观察其生育表型;（2）通过体外受精技术检测生育表型;（3）计算机辅助分析仪检测小鼠精子运动相关参数;（4）对睾丸,精子,卵巢进行形态学观察,天平称量睾丸,卵巢质量;（5）苏木素-伊红组织化学染色评估其生殖组织生理状态;（6）酶联免疫分析检测雌鼠外周血中激素水平的变化。6.实时荧光定量PCR分别检测雌性和雄性不同基因型小鼠PAQR7家族中孕酮亚家族成员以及孕酮受体家族的表达情况。7.实时荧光定量PCR分别检测雌性和雄性不同基因型小鼠中生殖相关基因表达情况。实验结果:1.实时定量PCR结果表明PAQR7在小鼠睾丸和卵巢中高表达。2.通过免疫印迹在小鼠睾丸、卵巢和精子的总蛋白和膜蛋白中均能检测到PAQR7。3.PAQR7特异性抗体能够抑制小鼠精子前向运动（P<0.05）,显着降低体外受精成功率（P<0.05）。4.利用CRISPR/cas9基因编辑技术成功构建了全身性PAQR7敲除小鼠。纯合敲除小鼠PAQR7-/-缺失了PAQR7基因的第三个外显子中812bp,导致移码突变翻译提前终止,预测翻译蛋白质缺失39-345氨基酸序列（野生型PAQR7具有345氨基酸）。5.（1）合笼结果显示PAQR7-/-雄鼠生育能力未受影响,但PAQR7-/-雌鼠与野生型雄鼠或PAQR7-/-雄鼠合笼后的平均胎数与平均每胎只数均显着下降（P<0.05）;（2）体外受精的结果显示PAQR7-/-雌鼠卵与野生型雄鼠精子或PAQR7-/-雄鼠精子在体外受精过程中受精率显着降低（P<0.05）;（3）计算机辅助精子分析仪检测结果显示PAQR7-/-雄鼠精子浓度,总活力,前向运动率、运动速率、头部侧摆幅度均显着下降（P<0.05）;而摆动性显着升高（P<0.05）;（4）睾丸,卵巢以及精子的形态学结果显示PAQR7-/-雄鼠睾丸质量显着降低（P<0.05）,睾丸系数下降（P<0.05）,卵巢变小,精子折尾畸形明显,折尾率显着高于野生型小鼠（P<0.05）;（5）苏木素-伊红组织化学染色结果显示PAQR7-/-雄鼠睾丸的部分曲细精管出现空腔,PAQR7-/-雌鼠卵巢内有腔卵泡数量减少,原始卵泡,黄体数量升高,大部分卵泡呈现闭锁和凋亡状态;（6）PAQR7-/-雌鼠血清中抗穆勒氏管激素和雌二醇激素显着低于野生型小鼠,孕酮和卵泡刺激素的水平与野生型相比没有统计学差异（P>0.05）。6.实时荧光定量PCR结果显示PAQR7-/-雄鼠睾丸中孕酮受体PGRMC1、PGRMC2、NENF表达量显着升高（P<0.05）,CYB5D2显着降低（P<0.05）,PAQR家族孕酮受体亚家族成员PAQR5、PAQR6、PAQR8、PAQR9的表达量显着降低（P<0.05）,孕酮核受体PGR表达量没有统计学差异;PAQR7-/-雌鼠卵巢中孕酮受体相关蛋白PGR、NENF、PAQR5、PAQR6、PAQR8、PAQR9的表达量对比野生型显着升高（P<0.05）,PGRMC1、PGRMC2、CYB5D2没有统计学差异。7.PAQR7-/-雄鼠睾丸中精子发生,运动及形态相关基因Spata25、Tex19.2、Znrf4、Tssk6、InsI3表达量显着降低（P<0.05）;PAQR7-/-雌鼠卵巢中卵泡生长,卵巢发育以及正常受精密切相关基因DMC1、POU5F1、GDF-9、ZP3、SYCP3、NOBOX表达量显着降低（P<0.05）。结论:PAQR7在小鼠生殖过程中起到非常重要的作用,对小鼠精子发生,形态,运动以及卵巢功能的维持至关重要。
高崇婷[4]（2020）在《黄芪皂苷Ⅱ对糖尿病大鼠的肾脏保护作用研究》文中提出研究背景糖尿病肾病（Diabetic nephropathy,DN）是糖尿病（Diabetes mellitus,DM）常见的微血管并发症,足细胞损伤在DN的发生和发展中起着关键作用。大量研究表明,线粒体功能障碍与自噬缺陷和DN肾损害密切相关。我国传统中药因其多靶点、整体调节等特点在DN的防治中具有一定的优势。黄芪具有补气固表的功效,被广泛用于临床DN的治疗。黄芪皂苷Ⅱ（AstragalosideⅡ,AS-Ⅱ）是黄芪的一种主要有效成份,目前有关于其对DN肾脏的保护作用及机制的研究尚少。本研究通过建立糖尿病大鼠模型,探究AS-Ⅱ对DN肾脏的保护作用及机制。研究目的研究AS-Ⅱ对糖尿病大鼠模型的肾脏保护作用及其分子机制,为DN的预防及治疗提供一条新的策略。实验方法本研究通过建立STZ诱导的1型糖尿病大鼠模型,对大鼠给予AS-Ⅱ治疗9周。观察大鼠肾脏病理改变、足细胞超微结构、检测尿蛋白排泄情况及相关蛋白表达水平等,从而阐明AS-Ⅱ对DN足细胞损伤的疗效及其机制。实验结果AS-Ⅱ可降低糖尿病模型大鼠的尿蛋白,改善肾脏形态学的病理改变,减轻足细胞损伤,改善线粒体功能,恢复自噬水平,调控Nrf2/PINK1通路,对DN肾损伤具有保护作用。结论AS-Ⅱ的肾脏保护作用机制与其对肾小球足细胞的保护作用有关,其作用可能与其调控Nrf2/PINK1通路有关。
陈美姿[5]（2020）在《GGPPS在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用及机制研究》文中提出研究背景和目的:特发性肺纤维化（IPF）是一种原因不明的慢性、进行性肺间质纤维化疾病,全球有超过500万名患者。IPF常见于中老年人,预后差,病死率高,诊断后平均生存期仅24年,大多数患者最终死于呼吸衰竭。香叶基香叶基焦磷酸合成酶（GGPPS）是甲羟戊酸代谢途径中重要的分支酶,主要催化法尼基焦磷酸（FPP）合成香叶基香叶基焦磷酸（GGPP）,其表达异常会扰乱蛋白质法尼基化和香叶基香叶基化之间的平衡。研究证实GGPPS参与炎症、肿瘤、不孕不育和肝纤维化等多种疾病的发生,对胎儿肺的发育至关重要。目前尚不清楚GGPPS是否参与肺纤维化进程,因此,我们的研究旨在探讨GGPPS在肺纤维化形成中的作用,并寻求可能的作用机制。研究方法:1、我们构建了博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型,利用免疫组化、Western blot等方法检测GGPPS在各时间点野生型小鼠肺组织中的表达情况;2、利用肺泡上皮特异性GGPPS敲除小鼠造模,通过qRT-PCR、免疫组化、免疫荧光、Western blot、Masson染色、ELISA等方法检测GGPPS敲降对肺部炎症、肺纤维化指标的影响以及肺成纤维细胞增殖、活化的影响,并探究TGF-β/BMP信号通路在GGPPS调控肺纤维化中的作用;3、行挽救实验,观察提前补充GGPP对GGPPS敲除诱导的小鼠肺纤维化程度和TGF-β/BMP信号通路的影响。研究结果:1、在博来霉素诱导的小鼠肺损伤和肺纤维化过程中,GGPPS表达上调:博来霉素给药后24小时,野生型小鼠肺组织中GGPPS表达即有轻度升高,第7天时明显升高,约升高2倍,直至第21天,一直呈持续高表达状态,提示GGPPS可能在肺纤维化形成中发挥作用。2、GGPPS缺失促进细胞外基质沉积增加,肺纤维化程度加重:与WT鼠比较,GGPPS敲除鼠肺组织匀浆中羟脯氨酸含量明显增高,Masson染色显示蓝色胶原沉积增多,肺纤维化评分更高,Ⅰ型胶原蛋白和纤连蛋白的mRNA和蛋白水平均有明显升高。而提前补充GGPP可有效预防GGPPS敲除诱导的小鼠肺纤维化。3、GGPPS缺失加重肺部炎症反应:与WT鼠比较,造模后第7天,GGPPS敲除小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数和中性粒细胞比例增加,总蛋白水平升高,IL-1β增高。4、GGPPS缺失促进成肺纤维细胞的活化和增殖:免疫组化、WB及PCR结果均显示GGPPS敲除鼠肺组织α-SMA表达增高,免疫荧光双重染色亦显示GGPPS敲除鼠肺组织中肌成纤维细胞数量明显增多。5、GGPPS通过TGF-β1/BMP-4信号通路调控肺纤维化:GGPPS缺失后,TGF-β1表达增加,p-Smad2水平升高,而p-Snmad1/5水平下降,TGF-β1/Smad2信号通路激活,而BMP-4/Smad1/5信号抑制,TGF-β1和BMP之间的信号平衡被破坏,补充GGPP后两者之间的平衡得到恢复。结论:我们的研究证实了 GGPPS在肺纤维化形成过程中发挥保护性作用,GGPPS缺失通过激活TGF-β1信号和抑制BMP-4信号促进肺纤维化进程。
许晨[6]（2019）在《基于生物小分子构建多羟基阳离子基因载体》文中指出基因治疗作为一种新型的医学手段可以用于治疗遗传性疾病,心血管疾病以及癌症等严重疾病,其主要是通过导入治疗性的基因取代突变基因或补充缺失基因,或者通过抑制相关病变蛋白的表达来实现根源上的治疗。基因治疗中最为重要的是要寻找到高效安全的基因载体。相比于安全性不高,具有免疫原性的病毒类载体,越来越多的非病毒类载体开始逐渐被人们引入治疗体系的构建。近年来我们组报道了一系列关于乙醇胺（EA）功能化的甲基丙烯酸缩水甘油酯（PGMA）衍生物（PGEA）拥有较好的基因转染效率。同时其结构中大量的羟基可以保证载体具有较好的血液循环性和较低的毒性。然而这类载体的功能比较单一,转染效率仍然没有达到预期的目标,需要进一步功能化修饰。脂质是一类优异的生物小分子,也是细胞膜的重要组成部分。由于这类生物小分子具有优良的生物特性,其被广泛的应用于各种生物应用中。通过将膜脂质引入基因载体体系可以有效的增加载体的生物相容性,细胞吞噬效率和转染效率。在第二章中,我们通过原子转移自由基活性聚合（ATRP）方法构建了 一系列膜脂质胆固醇基和磷脂酰肌醇基的PGEA,分别为CHO-PGEA和PI-PGEA。这两种载体相比于国际金标PEI（25 kDa）和单纯的PGEA而言这两者都具有更好的转染效率。此外,在体内外两个载体与抑瘤基因p53形成的络合物都有良好的抗肿瘤效果,相比较于对照组肿瘤的质量可以平均降至0.15g以下。基于在肿瘤治疗中的良好的性能,我们又探究了 CHO-PGEA在心血管疾病中的应用。CRISPR/Cas9系统作为一类高效的工具可以通过基因编译对基因突变的疾病进行治疗。但是由于血管内皮结构完整这一生理障碍,目前递送CRISPR/Cas9系统治疗血管遗传病仍然是一个挑战,尤其是在胸主动脉上。在第三章中,我们提出可以利用CHO-PGEA携带pCas9-sgFbn1在体外编译Fbn1基因的10号外显子。更为重要的是,在血管紧张素（Ang Ⅱ）的辅助下,CHO-PGEA/pCas9-sgFbn1纳米系统可以有效的在体内实现血管基因的编译,编辑后的血管扩张约0.01 mm,与预期结果一致。在这章中,我们同时证明了 CHO-PGEA可以被当作心脏肥厚基因治疗的有效载体,以防止其过度发展导致心脏衰竭和猝死。在体内治疗中,CHO-PGEA载体可以有效的递送miR-182-in进入心肌细胞,拮抗心脏中过量的miR-182从而上调FOX03因子。相比于未经治疗组心脏体重比扩大到正常组1.5倍的情况,该治疗可以有效的改善心脏肥厚的状况。CHO-PGEA在这类疾病中有两大优点,首先是由于心肌细胞中有大量的胆固醇的存在,这种载体可以更有效的进行转染。其次,大量的羟基可以使耐受力较差的心肌细胞能在低毒性下被有效的转染。主动脉夹层（TAD）是一种危及生命的急性血管疾病,需要早期诊断和有效的治疗。但是由于病变血管结构的复杂性和狭小性,目前还没有较好的药物治疗体系。在第四章,我们构建了一种多功能的核酸递送系统（TP-Gd/miRNA-ColIV）。这个系统中以钆螯合的生物小分子单宁酸作为基体,包括低毒性的阳离子聚合物PGEA以及IV型胶原的靶向多肽ColIV,通过组装的方式形成的纳米复合物可以对TAD进行靶向治疗,早期诊断和病情监控。TP-Gd/miR-145-ColIV可以有效的携带miR-145对TAD进行治疗,在治疗后下TAD模型小鼠的胸主动脉夹层发生率可以有效的降低到不足20%。除此之外,实验数据证明TP-Gd/miRNA-ColIV拥有很好的核磁造影能力并且能够无伤的监控核酸系统对TAD的治疗效果。综上所述,我们使用不同的生物小分子修饰PGEA阳离子基因载体,构建出一系列效率更高,功能更丰富的基因载体,可以有效的针对不同的严重疾病。这些工作为将来的基因治疗策略的设计提供了借鉴意义
童越[7]（2019）在《不同浓度冷冻保护剂对未成熟大鼠睾丸组织玻璃化冷冻效果的影响》文中研究表明目的:比较不同浓度冷冻保护剂对未成熟大鼠（2周龄）睾丸组织玻璃化冷冻效果的影响,并推荐较适宜的冷冻保护剂方案。初步探索不同浓度保护剂对冻融睾丸组织氧化应激损伤和抗氧化酶系统的影响。方法:使用二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxide,DMSO）和乙二醇（ethylene glycol,EG）作为主要冷冻保护剂成分配制三种不同浓度的玻璃化冻存液,低、中、高三种浓度冻存液依次命名为A、B、C冻存液:A液中DMSO和EG的浓度均为7.5%,B液均为15%,C液均为25%。两周龄大鼠麻醉后取出睾丸,分割为8mm3～9mm3大小的组织块,分配到新鲜对照组、冻存A组,冻存B组和冻存C组中。经过对应浓度的平衡液处理后,用1ul接种环盛载睾丸组织直接浸入液氮中进行玻璃化冷冻。冻存两周后复苏,样本固定后通过H&E染色比较各组睾丸组织形态学改变,免疫荧光染色比较细胞特异性标志物（UCHL-1,SOX9,StAR）和细胞增殖标志物（PCNA）的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。复苏或新鲜的组织体外培养24h后,ELISA法检测睾酮分泌,生化试剂盒比色法检测组织中T-SOD活性和MDA（丙二醛）含量,实时荧光定量PCR检测SOD1,HO-1基因mRNA的表达,免疫印迹法检测HO-1,SOD1蛋白的表达。结果:玻璃化冻存后,未成熟大鼠睾丸组织形态发生一定程度改变,生精细胞及支持细胞标志物表达下降,凋亡增加。三个玻璃化冷冻组中,B组形态学改变最小,细胞标志物表达水平与新鲜对照最接近,凋亡最少。A组的结构损伤明显,生精上皮与基底膜分离;C组的细胞标志物表达明显下降,凋亡增加最显着。冻存后的睾丸组织睾酮分泌水平均有下降,其中C组降低最为明显。T-SOD活性检测结果显示冷冻组织的SOD活性较新鲜组织下降,B组的T-SOD活性相对保存较好;而冷冻组织的MDA含量上升,其中B组含量相对较少,A组含量最多。实时荧光定量PCR结果显示冷冻组SOD1表达较新鲜对照组减少,而HO-1的表达增加。其中B组的SOD1和HO-1 mRNA表达水平均为最高。免疫印迹检测HO-1,SOD1蛋白的表达结果与转录水平的变化趋势基本一致。结论:冷冻保护剂浓度改变对未成熟睾丸组织玻璃化冷冻效果有明显影响。玻璃化冷冻-复苏过程对各类抗氧化酶可能会产生不同影响。15%DMSO和15%EG冻存液方案对于未成熟大鼠睾丸组织玻璃化冷冻较为适宜,可为进一步的实验研究和临床应用提供参考。
杨星哲[8]（2019）在《黄芩苷治疗痤疮丙酸杆菌引起痤疮的分子机制研究》文中研究指明研究背景痤疮是发生在皮脂腺的一种炎症性疾病,是最常见的皮肤病。中国大陆痤疮患病率为39.2%,欧洲为57.8%,在青少年中的发病率可以达到90%以上,在成年人中,发病率甚至可以达到50%。痤疮好发于面部和胸背部。痤疮病变部位常伴有丘疹、脓疱、结节、囊肿等类型的皮疹,导致患者产生生理性病变和心理上的痛苦。痤疮丙酸杆菌（Propionibacterium acne,P.acnes）被认为是痤疮的病原菌,在痤疮的发生发展过程中,扮演了重要的角色。P.acnes能够诱导局部炎症,在毛囊管上皮角化过度的进程中,也有P.acnes的参与。痤疮发生的重要病理过程是炎症,和肿瘤坏死因子（TNF）通路的激活、补体系统的激活、中性粒细胞的迁移密切相关,控制炎症是治疗痤疮的主要方法。临床上,黄芩是治疗痤疮等皮肤炎症性疾病的常用中药。黄芩苷（C21H18O11）是从黄芩根中提取出来的一种黄酮类化合物,是黄芩的主要活性成分,具有很强的抗炎作用。黄芩苷治疗痤疮的分子机制还有待进一步研究。目的运用Kligman法在新西兰兔中构建兔耳痤疮模型,评估黄芩苷对痤疮的治疗作用。通过对治疗前后兔耳痤疮样本的转录组测序分析并结合免疫组织化学实验和Western blot实验,系统揭示黄芩苷治疗痤疮的分子机制,为黄芩苷治疗痤疮的有效性提供实验证据,为黄芩苷治疗痤疮的临床应用提供依据。方法1.运用Kligman法来建造新西兰兔的兔耳痤疮模型,评价黄芩苷对痤疮的治疗作用。2.通过H&E染色方法评估兔耳痤疮模型建立成功与否,在组织学角度评价黄芩苷对兔耳痤疮模型的治疗效果。3.观察经高、中、低剂量的黄岑苷治疗以后,兔耳痤疮的个数变化,以此为基础,计算出对黄芩苷对痤疮的治愈率。4.游标卡尺测量兔耳痤疮模型和黄芩苷高、中、低剂量治疗后的兔耳厚度变化和痤疮直径变化,评价黄芩苷对兔耳痤疮模型的治疗效果。5.采用酶联免疫吸附法（ELISA）来测定痤疮新西兰兔模型血清中TNFA,IL1B,NFKB1和IL8等炎症因子的表达情况。6.采用转录组测序的方法,检测黄芩苷治疗前后的兔耳痤疮样本中基因的差异表达情况。7.采用免疫组织化学法检测兔耳痤疮模型和黄芩苷治疗后TNFA,IL1B,NFKB1和IL8在痤疮组织中的表达情况。8.采用Western blot实验检测TNFA,IL1B,NFKB1和IL8在兔耳痤疮组织和黄芩苷治疗后兔耳组织中的表达情况。结果1.黄芩苷能够治疗兔耳模型的痤疮。Kligman法构建的新西兰兔耳痤疮模型与正常对照组相比,兔耳的肿胀程度明显加强。经黄芩苷治疗后,兔耳痤疮模型的肿胀程度和痤疮表现得到明显改善,即痤疮模型中的兔耳厚度、痤疮病损的直径明显减小,痤疮病灶的个数明显减少。2.痤疮兔耳模型组织学分析:我们发现痤疮兔耳模型较对照组相比,出现了典型的痤疮造模成功的表现。比如皮肤组织过度角化,表皮及毛囊上皮的颗粒层发生比较明显的增生,毛囊口有角化物堆积,漏斗部扩大如壶状,真皮内部发生炎性细胞浸润较多的现象。经高、中、低不同剂量的黄芩苷治疗后,痤疮兔耳毛囊口的扩张状况明显减轻,其内部的角化物发生明显的疏松现象,炎症细胞也显着减少。3.黄芩苷对新西兰兔痤疮模型血清中炎性细胞因子表达的影响:经酶联免疫吸附法（ELISA法）检测,TNFA、IL1B、IL6、IL8在兔耳痤疮模型血清中的表达量明显升高,经高、中、低剂量黄芩苷治疗后,其含量均显着降低。4.黄芩苷对兔耳痤疮组织基因表达的影响:经转录组测序分析,我们发现对照组、痤疮模型组和黄芩苷治疗组之间有大量的差异表达基因。痤疮模型组和对照组相比,上调基因有1325个,下调基因有1187个。黄芩苷用药组和痤疮组相比,上调基因有350个,下调基因有411个。在痤疮组上调的基因里（和对照组相比）,应用黄芩苷后下调的有179个,占黄芩苷用药组下调基因总数的43.6%。和对照组相比,在痤疮模型组下调的基因里,应用黄芩苷后上调的有105个,占黄芩苷用药组下调基因总数的30%。黄芩苷治疗痤疮的有效机制可能是使痤疮组上调的基因得到下调,下调的基因得到上调。5.黄芩苷对兔耳痤疮组织TNF通路的调节作用:对差异表达基因进行KEGG富集通路分析,可以发现,和对照组相比,痤疮模型组差异表达基因主要富集的通路包括TNF信号通路。对差异表达基因进行表达量分析可知,TNF通路中多个关键基因（如TNFA、IL1B、IL8、TNFRSF1B、NFKB1、REL等）的表达量均被上调,而黄芩苷可以显着抑制这些基因的上调。免疫组织化学实验和Western blot实验表明,黄芩苷能显着抑制痤疮发病时TNF通路中TNFA、IL1B和NFKB1的上调。6.黄芩苷对痤疮兔耳模型金黄色葡萄球菌感染途径的抑制作用:经对照组、痤疮模型组和黄芩苷用药组差异表达基因KEGG富集通路分析表明,黄芩苷组差异表达基因主要富集在金黄色葡萄球菌感染途径、吞噬细胞途径、细胞粘附分子、细胞因子受体相互作用和补体凝血级联途径,其中富集最显着的是金黄色葡萄球菌感染途径。金黄色葡萄球菌感染途径包括中性粒细胞的募集、抗原的提呈、补体系统的激活和FCγ受体介导的吞噬作用。经差异表达基因表达量分析可知,参与中性粒细胞募集的4个基因在痤疮组表达上调,应用黄芩苷后下调。免疫组化结果也显示,大量中性粒细胞募集到痤疮部位,并被黄芩苷抑制。补体系统富集了8个差异表达基因,包括5个经典途径特异性基因（C1QA、C1QB、C1QC、C1R和CC1S）、1个旁路途径特异性基因（CFB）、2个经典途径和凝集素途径共有基因（C2和C4BPA）。痤疮组和对照组比,除C2上调不明显外,其他7个补体系统基因均发生了明显上调;痤疮组和黄芩苷组比,除C4BPA下调不明显外,其他7个补体系统基因在黄芩苷处理后明显下调。结论1.黄芩苷可以显着抑制兔耳痤疮模型的痤疮炎症表现。2.黄芩苷可以显着抑制新西兰兔痤疮模型血清中炎性细胞因子的表达。3.痤疮发生过程中多条感染、炎症相关通路被激活,如TNF信号通路、金黄色葡萄球菌感染途径等,黄芩苷治疗能够显着抑制这些通路的活化。研究表明,黄芩苷通过显着抑制痤疮发生过程中多条炎症反应通路的激活,进而改善痤疮症状。我们的研究进一步揭示了黄芩苷治疗痤疮的分子机制,为黄芩苷的临床应用提供了实验依据。
何超[9]（2019）在《β2GPI/抗β2GPI抗体复合物在巨噬细胞脂质积累和粘着斑激酶活化中的作用与机制研究》文中认为研究目的:抗磷脂综合征（anti-phospholipid syndrome,APS）等自身免疫性疾病被认为与动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的发生发展有关。其中,APS中主要的免疫复合物β2糖蛋白I/抗β2GPI抗体复合物（β2-glycoprotein I/anti-β2-glycoprotein I antibody complex,β2/aβ2）被证实能够通过TLR4依赖的方式促进AS中的血管内皮炎症和血栓形成。然而,尽管APS患者常伴有血管内膜炎症等病理改变,但其AS的总体发病率并未显着提高。我们猜测,这可能与β2/aβ2复合物和TLR4对内膜下脂质积累的抑制作用有关。为了验证这一设想,我们选择THP-1巨噬细胞作为体外模型,以介导巨噬细胞脂质摄取的CD36和介导巨噬细胞内膜下定植的粘着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）作为切入点,以此深入分析β2/aβ2复合物对ox LDL引起的巨噬细胞脂质积累与FAK活化的影响,并对TLR4在这一过程中的作用进行探讨。研究方法:（1）利用肝素亲和层析法从健康人混合血浆中提取β2GPI,并采用SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot对所得β2GPI进行鉴定。用提取的β2GPI免疫新西兰大兔,并采用Protein G亲和层析法从经免疫新西兰大白兔的血清中分离抗β2GPI抗体（anti-β2GPI antibody,aβ2）,再通SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot对所得aβ2进行鉴定。（2）利用PMA刺激法使THP-1单核细胞分化为THP-1巨噬细胞。随后,对所得THP-1巨噬细胞的形态进行观察,分别采用Western blot和Dil-ox LDL吞噬试验对该细胞的表面标志和吞噬功能进行鉴定。（3）利用RPMI 1640、ox LDL、ox LDL+β2/aβ2、ox LDL+LPS刺激经或未经TLR4阻断剂预处理的THP-1巨噬细胞。通过细胞免疫荧光、Western blot和RT-q PCR检测THP-1巨噬细胞上清道夫受体CD36的表达;通过油红O染色和Trinder胆固醇定量法检测和分析THP-1巨噬细胞内胆固醇积累;通过RT-q PCR检测THP-1巨噬细胞中胆固醇酯化酶ACAT1和胆固醇逆向转运相关蛋白ABCA1和ABCG1的m RNA表达。据此分析β2/aβ2复合物和TLR4对ox LDL引起的CD36活化的影响,以及该影响导致的生物学效应。（4）利用RPMI 1640、ox LDL、ox LDL+β2/aβ2、ox LDL+LPS刺激经或未经TLR4阻断剂预处理的THP-1巨噬细胞。通过细胞免疫荧光、Western blot和RT-q PCR检测THP-1巨噬细胞中FAK的表达和磷酸化;通过Transwell检测THP-1巨噬细胞的逆向迁移能力;通过ELISA检测THP-1巨噬细胞培养上清MMP-2和MMP-9的浓度。据此分析β2/aβ2复合物和TLR4对ox LDL引起的FAK活化的影响,以及该影响导致的生物学效应。（5）利用RPMI 1640、ox LDL、ox LDL+β2/aβ2等刺激经或未经TLR4阻断剂预处理的THP-1巨噬细胞。通过Western blot检测THP-1巨噬细胞中PPAR-γ的蛋白表达;通过ELISA检测THP-1巨噬细胞培养上清中IL-6和TNF-α的浓度;通过细胞免疫荧光检测CD36的亚细胞定位。以此探讨β2/aβ2复合物通过TLR4影响CD36表达和功能的机制。研究结果:（1）经与标准品比较,提取得到的人β2GPI和抗β2GPI抗体生物学活性良好,适用于实验研究。（2）本研究中诱导的THP-1巨噬细胞形态典型,高表达巨噬细胞表面标志,且具有良好的脂质吞噬能力。（3）相比单独的ox LDL,经ox LDL+β2/aβ2处理的THP-1巨噬细胞的CD36表达明显减低,其胞内脂质减少、胆固醇酯比例降低,并伴有胆固醇酯化酶ACAT1的表达降低和胆固醇逆向转运相关蛋白ABCG1的表达增高。此外,在刺激前利用TLR4阻断剂TAK-242预处理可以部分逆转上述差异。（4）相比单独的ox LDL,经ox LDL+β2/aβ2处理的THP-1巨噬细胞的FAK表达和磷酸化明显减低,细胞逆向迁移能力增强,且伴有MMP-2和MMP-9分泌的增多。此外,在刺激前利用TLR4阻断剂TAK-242预处理可以部分逆转上述差异。（5）相比单独的ox LDL,经ox LDL+β2/aβ2处理的THP-1巨噬细胞的PPAR-γ蛋白表达减低,而IL-6和TNF-α的分泌以及CD36的胞质定位则有所增加。此外,在刺激前利用TLR4阻断剂TAK-242预处理可以部分逆转上述差异。结论:（1）β2/aβ2复合物既能促进ox LDL引起的THP-1巨噬细胞炎症反应和MMPs表达,又能抑制该细胞的CD36表达、脂质蓄积和FAK活化,在巨噬细胞的动脉粥样硬化相关改变中起到双重作用。（2）β2/aβ2复合物对THP-1巨噬细胞CD36表达、炎症反应、MMPs分泌、脂质蓄积和FAK活化的作用依赖于TLR4的功能。
郜留泽[10]（2018）在《小鼠BOULEβ蛋白和Boule环状RNA在精子发生中的功能研究》文中研究说明mRNA介导的蛋白合成对于基因的表达和真核细胞正常功能的维持都是至关重要的,真核细胞mRNA的翻译大都以“AUG”作为起始其密码子,偶尔出现的非“AUG”起始被认为是翻译错误所致。近期,随着Ribosome profiling技术兴起,非“AUG”翻译被发现广泛存在于真核细胞多数基因的5’UTR（untranslated region）区域,而这一现象在应激或者肿瘤中更为常见,提示非“AUG”翻译不是单纯的mRNA错误的起始翻译,但非“AUG”翻译的产生的蛋白是否具有重要的生理功能仍有待进一步研究,尤其是缺乏对于非“AUG”翻译出来蛋白的个体水平的功能研究。Boule基因是一个广泛存在于所有动物的生殖基因,保守存在从果蝇到人的几乎所有物种中,参与调控精子发生。本研究发现小鼠Boule基因编码一组非“AUG”作为起始密码子的BOULE蛋白亚型（isoforms）,命名为BOULEβs;我们发现这一组BOULEβs能以“AUU”作为起始密码子,同时“AUU”下游碱基形成的发卡结构对于维持BOULEβs的翻译是至关重要的,但敲除小鼠BOULEβs后,精子发生和育性并无明显改变,说明小鼠BOULEβs蛋白对于维持正常环境下的精子发生是非必需的。环状RNA,作为ncRNA（non-coding RNA）家族最新的成员,由单链RNA5’和3’末端共价相连形成的闭合结构。虽然在40年前有少量报道环状RNA的存在,但一直被认为是m RNA剪切过程中的副产物,直到最近研究发现环状RNA存在于几乎所有的真核生物中,才引起大家对环状RNA的研究热潮。环状RNA产生是依赖于单链RNA的反向剪切,5’和3’末端通过3’,5’磷酸二酯键连接形成的闭合环状结构。真核细胞中环状RNA产生的机制有多种,依赖剪切体的反向剪切、内含子中的反向互补匹配序列促进反向剪切以及RBPs（RNA binding proteins）介导的反向剪切。在真核细胞中,研究发现环状RNA主要通过吸附micro RNA、促进其母基因转录、编码翻译成短肽、调控细胞周期进程、调控核糖体成熟以及参与疾病的发生发展等方式发挥其功能。然而,目前在生物体中研究环状RNA的生理功能的报道相对较少,尤其在精子发生中的生理功能方面的研究未见报道。本项研究中,我们在保守的生殖基因Boule上发现外显子环状RNA,且保守存在于从果蝇到人的各个物种中,呈现睾丸特异或者高表达。通过将bol基因内含子序列敲除的方式,我们得到了环状RNA敲除的果蝇模型。发现环状RNA敲除的雄蝇,其保持长期育性的能力下降,这一现象在高温环境下更为严重;分析发现,在高温环境下环状RNA敲除果蝇精囊中的成熟精子产生减少、凋亡增加以及精子核形态明显异常。综上,我们发现一个保守的bol基因环状RNA,在常温和高温环境下对于果蝇长期育性的维持是必需的。
二、Harris苏木素配方的改进及配制中的注意事项（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Harris苏木素配方的改进及配制中的注意事项（论文提纲范文）
（1）基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 抑郁症现代医学研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 抑郁症中医药研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 1. 抑郁症病理机制中的线粒体损伤 |
| 2. 线粒体能量代谢障碍与突触可塑性损伤 |
| 3. 线粒体生物合成异常与抑郁症神经元突触重塑 |
| 4. 从“脾”论治抑郁症或成为中医治疗的新途径 |
| 参考文献 |
| 实验一 醒脾解郁方对肝郁脾虚抑郁大鼠行为学及海马神经元损伤的保护作用研究 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α介导的线粒体生物合成研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路探讨醒脾解郁方含药血清对皮质酮诱导海马神经元损伤突触重塑的影响 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路探讨突触微环境对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响及醒脾解郁方干预效应 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 结语 |
| 一、研究总结 |
| 二、初步结论 |
| 三、存在不足 |
| 四、创新点 |
| 五、展望 |
| 第四部分 附录 |
| 附录1: 致谢 |
| 附录2 攻读学位期间发表的学术论文及参与课题情况 |
| 附录3 个人简历 |
（2）促性腺激素释放激素激动剂在冻融胚胎移植周期中的临床疗效和作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.2 研究现状 |
| 1.2.1 GnRH-a在冻融胚胎移植周期中的临床疗效 |
| 1.2.2 GnRH-a对子宫内膜容受性的影响 |
| 1.2.3 GnRH-a对蜕膜化的影响 |
| 1.3 本论文主要研究内容 |
| 1.4 本文章节安排 |
| 第二章 回顾性分析Gn RH-a在 FET周期中的临床疗效 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 研究对象与方法 |
| 2.2.1 研究对象 |
| 2.2.2 研究方法 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.3 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 胚胎移植日子宫内膜下血流参数比较 |
| 2.4.2 临床妊娠结局比较 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 子宫内膜组织容受性比较 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 研究材料与方法 |
| 3.2.1 研究材料 |
| 3.2.2 研究方法 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.3 统计学方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 黄体期内膜中LIF、整合素β3等容受性标志分子表达量比较 |
| 3.4.2 移植日内膜内膜容受性比较 |
| 3.4.3 内膜中p-ERK1/2和p-stat3 表达 |
| 3.4.4 has-mi R-125b-5p的调控作用 |
| 3.4.5 has-mi R-223-3p的调控作用 |
| 3.4.6 has-mi R-27a-3p的调控作用 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 GnRH-a联合雌、孕激素对内膜细胞增殖及容受性标志物表达的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 研究材料与方法 |
| 4.2.1 研究材料 |
| 4.2.2 研究方法 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.3 统计学方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 人子宫内膜细胞分离、纯化和鉴定结果 |
| 4.4.2 GnRH-a抑制内膜细胞增殖 |
| 4.4.3 GnRH-a诱导子宫内膜细胞凋亡 |
| 4.4.4 GnRH-a联合雌、孕激素对子宫内膜细胞增殖的影响 |
| 4.4.5 GnRH-a联合雌、孕激素对子宫内膜细胞容受性的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 GnRH-a对子宫内膜基质细胞蜕膜化的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 研究材料与方法 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验方法 |
| 5.3 统计学方法 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 基质细胞蜕膜化模型的构建 |
| 5.4.2 GnRH-a对基质细胞蜕膜化的影响 |
| 5.4.3 GnRH-a对基质细胞蜕膜化影响的机制研究 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（3）孕酮脂联素受体7在小鼠生殖中的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 研究问题的由来 |
| 1.2 哺乳动物精子发生、成熟和受精相关功能 |
| 1.3 哺乳动物卵巢功能与卵母细胞成熟 |
| 1.4 类固醇激素孕酮对哺乳动物受精过程的调控 |
| 1.5 PAQR7 作为孕酮受体调控哺乳动物受精过程 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验小鼠 |
| 2.1.2 主要仪器设备与试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 小鼠合笼 |
| 2.2.2 体外受精(in vitro fertilization) |
| 2.2.3 基因型鉴定 |
| 2.2.4 TRIzol法提取RNA |
| 2.2.5 RNA逆转录 |
| 2.2.6 PCR |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR(Real-Time PCR) |
| 2.2.8 计算机辅助精子分析仪测小鼠精子活力、浓度以及运动参数 |
| 2.2.9 免疫印迹(Western Blot) |
| 2.2.10 免疫荧光 |
| 2.2.11 石蜡切片 |
| 2.2.12 苏木素-伊红组织化学染色 |
| 2.2.13 小鼠外周血中激素水平检测 |
| 2.3 数据处理与统计分析 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 小鼠生殖组织中存在PAQR7 转录本和蛋白 |
| 3.2 PAQR7 特异性单克隆抗体能抑制小鼠精子前向运动和体外受精成功率 |
| 3.3 PAQR7 敲除以及结果验证 |
| 3.4 检测PAQR7 敲除对小鼠生育的影响 |
| 3.4.1 合笼检测PAQR7 敲除对小鼠生殖的影响 |
| 3.4.2 体外受精检测PAQR7 敲除对小鼠生育的影响 |
| 3.5 PAQR7 敲除对雄性生殖的影响 |
| 3.5.1 PAQR7 敲除影响雄性小鼠睾丸指数及精子生成 |
| 3.5.2 PAQR7 敲除对睾丸结构的影响 |
| 3.5.3 PAQR7 敲除对小鼠精子形态及运动的影响 |
| 3.5.4 PAQR7 敲除对折尾精子运动的影响 |
| 3.5.5 PAQR7 敲除影响孕酮受体及精子功能相关基因表达 |
| 3.6 PAQR7 敲除对雌鼠生殖的影响 |
| 3.6.1 PAQR7 敲除对雌鼠卵巢指数的影响 |
| 3.6.2 PAQR7 敲除对雌鼠卵巢结构的影响 |
| 3.6.3 PAQR7 敲除影响雌鼠卵巢激素水平 |
| 3.6.4 PAQR7 敲除影响孕酮受体及卵巢功能相关基因表达 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 进一步工作方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 论文综述 |
| 参考文献 |
（4）黄芪皂苷Ⅱ对糖尿病大鼠的肾脏保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 符号说明 |
| 绪论 |
| 第一部分 AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏的保护作用研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料与耗材 |
| 2.主要实验仪器与设备 |
| 3.实验动物 |
| 4.实验动物样本的收集与保存 |
| 5.实验方法 |
| 实验结果 |
| 1.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠尿ACR及血糖的影响 |
| 2.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏病理损伤的影响 |
| 3.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏足细胞超微结构的影响 |
| 4.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏WT-1 蛋白表达的影响 |
| 5.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏Nephrin蛋白表达的影响 |
| 讨论 |
| 第二部分 AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏的保护作用的机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料与耗材 |
| 2.主要实验仪器与设备 |
| 3.实验动物 |
| 4.实验动物样本的收集与保存 |
| 5.实验方法 |
| 实验结果 |
| 1.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏Caspase3 蛋白表达的影响 |
| 2.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏足细胞线粒体形态的影响 |
| 3.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏足细胞自噬小体的影响 |
| 4.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏Fis1 蛋白表达的影响 |
| 5.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏Mfn2 蛋白表达的影响 |
| 6.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏P62 蛋白表达的影响 |
| 8.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏TOMM20 蛋白表达的影响 |
| 9.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏Nrf2 蛋白表达的影响 |
| 10.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏Keap1 蛋白表达的影响 |
| 11.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏PINK1 蛋白表达的影响 |
| 12.AS-Ⅱ对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏Parkin蛋白表达的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 |
（5）GGPPS在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 特发性肺纤维化发病机制 |
| 1.2 肺泡上皮细胞在特发性肺纤维化中的重要作用 |
| 1.3 TGF-μ信号通路在特发性肺纤维化中的作用 |
| 1.4 GGPPS在人类疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二章 GGPPS在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中的表达 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 敲除GGPPS基因对肺纤维化的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 GGPPS调控肺纤维化的初步机制研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 附录一 引物序列 |
| 附录二 主要仪器和设备 |
| 附录三 主要试剂 |
| 附录四 缩写词简表 |
| 附录五 试齐配方 |
| 博士研究生期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（6）基于生物小分子构建多羟基阳离子基因载体（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 两大重要疾病与基因治疗的简介 |
| 1.2 基因递送体系 |
| 1.2.1 基因的种类 |
| 1.2.1.1 DNA |
| 1.2.1.2 RNA |
| 1.2.1.3 mRNA |
| 1.2.1.4 siRNA和shRNA |
| 1.2.1.5 miRNA和lncRNA |
| 1.2.1.6 CRISPER/Cas9 |
| 1.2.2 基因载体 |
| 1.2.2.1 病毒载体 |
| 1.2.2.2 非病毒载体 |
| 1.2.3 递送基因过程中非病毒类载体需要克服的障碍 |
| 1.3 生物小分子 |
| 1.3.1 脂质 |
| 1.3.2 多酚类 |
| 1.3.3 小分子糖类 |
| 1.3.4 小分子活性肽 |
| 1.4 原子转移自由基活性聚合(ATRP)在生物材料构建中的应用 |
| 1.5 分子影像学在疾病中的应用 |
| 1.6 本课题的设计和意义 |
| 第二章 基于细胞膜脂质构建多羟基阳离子基因载体 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 引发剂(CHO-Br和PI-Br)的合成 |
| 2.2.4 CHO-PGMA,PI-PGMA和PGMA及其各自衍生物的制备 |
| 2.2.5 合成的聚阳离子以及聚阳离子/pDNA复合物的表征 |
| 2.2.6 细胞毒性分析 |
| 2.2.7 体外转染分析 |
| 2.2.8 细胞吞噬分析 |
| 2.2.9 体外抗肿瘤细胞分析 |
| 2.2.10 体内抗肿瘤实验 |
| 2.2.11 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 脂质基PGEA载体的制备和表征 |
| 2.3.2 CHO-PGEAs/pDNA和PI-PGEAs/pDNA复合物的表征 |
| 2.3.3 细胞毒性分析 |
| 2.3.4 细胞转染分析 |
| 2.3.5 细胞内吞分析 |
| 2.3.6 体外抗肿瘤实验 |
| 2.3.7 体内抗肿瘤实验 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 CHO-PGEA阳离子载体在心血管疾病中的应用 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 聚阳离子/核酸的复合物的筛选和表征 |
| 3.2.4 体内CRISPR/Cas9质粒的吞噬效率 |
| 3.2.5 体内Ang Ⅱ刺激下CRISPR/Cas9质粒的表达效率 |
| 3.2.6 体内编译实验 |
| 3.2.7 体内安全性实验 |
| 3.2.8 体内心脏肥厚治疗实验 |
| 3.2.9 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 体内CRISPR/Cas9质粒的吞噬效率 |
| 3.3.2 体内Ang Ⅱ刺激下CRISPR/Cas9质粒的表达效率 |
| 3.3.3 体内编译实验 |
| 3.3.4 体内安全性实验 |
| 3.3.5 体内心脏肥厚治疗实验 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 多功能阳离子纳米核酸系统用于胸主动脉夹层治疗 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 引发剂TA-Br的合成 |
| 4.2.4 引发剂TA-Br-Gd的再修饰 |
| 4.2.5 TA-PGMA及其衍生物TA-PGEA的合成 |
| 4.2.6 钆螯合的TA-PGEA的合成 |
| 4.2.7 TA-E,TP-ColⅣ和TA-ColⅣ-RhB的合成 |
| 4.2.8 聚阳离子/miRNA复合物的构建 |
| 4.2.9 材料及其复合物理化性质的表征 |
| 4.2.10 抗蛋白吸附实验 |
| 4.2.11 溶血实验 |
| 4.2.12 体外毒性分析 |
| 4.2.13 细胞吞噬分析 |
| 4.2.14 体外miR-145的基因递送效率 |
| 4.2.15 体外miR-145调控下游蛋白KLF4表达 |
| 4.2.16 体内miRNA的递送效率 |
| 4.2.17 体内治疗实验 |
| 4.2.18 体外材料核磁造影能力的检测 |
| 4.2.19 体内核磁诊断与监控 |
| 4.2.20 体内毒性分析 |
| 4.2.21 统计学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 复合物TP-Gd/miRNA-ColIV的制备和表征 |
| 4.3.2 蛋白吸附,溶血和体外毒性实验 |
| 4.3.3 体外吞噬实验和目的蛋白调控实验 |
| 4.3.4 体内摄取实验 |
| 4.3.5 体内TAD治疗 |
| 4.3.6 体外核磁能力检测 |
| 4.3.7 体内诊断与监控 |
| 4.3.8 体内毒性检测 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究成果及发表的学术论文 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
| 附件 |
（7）不同浓度冷冻保护剂对未成熟大鼠睾丸组织玻璃化冷冻效果的影响（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器和耗材 |
| 1.3 主要实验试剂和溶液的配制方法 |
| 1.3.1 实验试剂及药品 |
| 1.3.2 溶液配制 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 睾丸组织取材 |
| 2.2 实验分组与玻璃化冷冻和复苏步骤 |
| 2.2.1 玻璃化冻存液和平衡液的配制 |
| 2.2.2 复苏液的配制 |
| 2.2.3 睾丸组织样本玻璃化冷冻 |
| 2.2.4 冷冻睾丸组织的复苏过程 |
| 2.3 睾丸组织形态学分析 |
| 2.3.1 睾丸组织的取材和固定 |
| 2.3.2 组织样本石蜡包埋和切片 |
| 2.3.3 石蜡切片的H&E染色 |
| 2.3.4 图像采集和形态学分析 |
| 2.4 免疫荧光染色 |
| 2.5 睾丸组织的体外培养和睾酮浓度测定: |
| 2.6 睾丸组织匀浆液 |
| 2.7 睾丸组织匀浆的蛋白定量(BCA法) |
| 2.8 总超氧化物歧化酶活性(T-SOD)检测 |
| 2.9 丙二醛(MDA)检测 |
| 2.10 细胞凋亡原位检测(TUNEL法) |
| 2.11 实时荧光定量PCR(Real-time PCR,qPCR) |
| 2.12 蛋白免疫印迹(Western Blot) |
| 3. 统计学分析 |
| 结果 |
| 1. 大鼠睾丸组织形态学结果 |
| 2. 大鼠睾丸组织中细胞特异性标志物表达的结果 |
| 3. 睾丸组织睾酮分泌的检测结果 |
| 4. 睾丸组织细胞凋亡检测结果 |
| 5. 睾丸组织氧化应激相关指标的结果 |
| 6. 抗氧化酶SOD1、HO-1基因mRNA的表达结果 |
| 7. 抗氧化酶SOD1和HO-1的蛋白表达结果(Western-Blot) |
| 讨论 |
| 1. 未成熟大鼠睾丸组织玻璃化冷冻不同冷冻保护剂浓度的比较 |
| 2. 冷冻保护剂对冻存睾丸组织氧化损伤及抗氧化酶的影响 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 人类睾丸组织冷冻保存的研究进展 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表论文及参加科研项目情况 |
| 致谢 |
（8）黄芩苷治疗痤疮丙酸杆菌引起痤疮的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一、痤疮的中西医研究进展 |
| 1. 痤疮的西医研究进展 |
| 1.1 痤疮是一种高发的炎症性疾病 |
| 1.2 痤疮丙酸杆菌在痤疮的多个致病因素中起核心作用 |
| 1.3 免疫机制参与了痤疮的发病过程 |
| 1.4 一些胞外酶是引起痤疮炎症的作用物 |
| 1.5 中性粒细胞参与了痤疮的炎症反应 |
| 1.6 基因研究的进展证实痤疮皮损局部存在基因水平的改变 |
| 2. 中医对痤疮的认识和诊疗 |
| 2.1 中医对痤疮的认识 |
| 2.2 中医对痤疮的辨证论治 |
| 综述二、黄芩苷治疗痤疮及其药理作用 |
| 1. 黄芩苷治疗痤疮优势明显 |
| 1.1 黄芩苷是从黄芩根中分离的黄酮类化合物 |
| 1.2 黄芩苷抗炎和免疫调控作用突出 |
| 1.3 黄芩苷具有较高的应用价值 |
| 2. 黄芩苷治疗痤疮的药理作用 |
| 2.1 抑制P.acnes |
| 2.2 抑制雄激素水平 |
| 2.3 抗炎作用 |
| 2.4 免疫调节作用 |
| 2.5 治疗循环系统疾病 |
| 2.6 抗癌作用 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验一、黄芩苷对痤疮动物模型的治疗作用研究 |
| 前言 |
| 1. 材料 |
| 2 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验二、黄芩苷对痤疮动物模型治疗作用的转录组分析 |
| 前言 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验三、黄芩苷对痤疮动物模型TNF通路的作用研究 |
| 前言 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验四、黄芩苷对痤疮动物模型金黄色葡萄球菌感染途径的调节作用 |
| 前言 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）β2GPI/抗β2GPI抗体复合物在巨噬细胞脂质积累和粘着斑激酶活化中的作用与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要英文缩略词索引（按字母顺序排列） |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 动脉粥样硬化概述 |
| 1.1.1 心血管疾病与动脉粥样硬化 |
| 1.1.2 动脉粥样硬化的传统危险因素 |
| 1.1.3 动脉粥样硬化的病理机制 |
| 1.2 巨噬细胞在动脉粥样硬化中的作用 |
| 1.2.1 单核细胞的内膜下浸润和分化 |
| 1.2.2 CD36 介导的巨噬细胞的脂质摄取 |
| 1.2.3 巨噬细胞的脂质蓄积和泡沫化 |
| 1.2.4 巨噬细胞的粘着斑激酶活化 |
| 1.3 动脉粥样硬化的自身免疫性质 |
| 1.3.1 自身免疫性疾病与动脉粥样硬化 |
| 1.3.2 动脉粥样硬化中的适应性免疫 |
| 1.3.3 动脉粥样硬化中的固有免疫 |
| 1.4 抗磷脂综合征 |
| 1.4.1 抗磷脂综合征概述 |
| 1.4.2 β2 糖蛋白I |
| 1.4.3 β2 糖蛋白I/抗β2GPI抗体复合物 |
| 1.4.4 Toll样受体 |
| 1.5 抗磷脂综合征与动脉粥样硬化 |
| 1.5.1 β2/aβ2 复合物和TLR4 在内皮炎症和斑块稳定性改变中的作用 |
| 1.5.2 β2/aβ2 复合物和TLR4 在血管内膜下脂质积累中的作用 |
| 1.5.3 抗磷脂综合征与动脉粥样硬化关系的临床研究 |
| 1.6 结语 |
| 第二章 研究目的、方法、实验方案设计与意义 |
| 2.1 研究目的 |
| 2.2 研究方法与技术 |
| 2.3 实验方案设计 |
| 2.3.1 THP-1 巨噬细胞的诱导与鉴定 |
| 2.3.2 β2GPI和抗β2GPI抗体的制备 |
| 2.3.3 β2/aβ2 复合物对oxLDL引起的THP-1 巨噬细胞CD36 表达和脂质积累的影响 |
| 2.3.4 β2/aβ2 复合物对oxLDL引起的THP-1 巨噬细胞FAK活化及其生物学效应的影响 |
| 2.3.5 β2/aβ2 复合物通过TLR4 影响THP-1 巨噬细胞CD36 表达和功能的机制探讨 |
| 2.4 研究意义 |
| 第三章 THP-1 巨噬细胞的诱导与鉴定 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 主要材料 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要溶液及配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 THP-1 单核细胞的培养 |
| 3.2.2 THP-1 巨噬细胞的诱导 |
| 3.2.3 Western blot分析 |
| 3.2.4 Dil-oxLDL吞噬试验 |
| 3.2.5 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 PMA浓度对THP-1 细胞CD14和CD163 蛋白表达的影响 |
| 3.3.2 THP-1 巨噬细胞的形态学鉴定 |
| 3.3.3 THP-1 巨噬细胞脂质吞噬能力的鉴定 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 β2GPI和抗β2GPI抗体的制备 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 主要材料 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.1.4 主要溶液及配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 β2GPI的提取和鉴定 |
| 4.2.2 抗β2GPI抗体的制备 |
| 4.2.3 提取的β2GPI和提取的抗β2GPI抗体之间的反应性验证 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 β2GPI的鉴定 |
| 4.3.2 抗β2GPI抗体的鉴定 |
| 4.3.3 提取的β2GPI和提取的抗β2GPI抗体之间的反应性验证 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 β2/aβ2复合物对oxLDL引起的THP-1巨噬细胞CD36表达和脂质积累的影响 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 主要材料 |
| 5.1.2 主要仪器 |
| 5.1.3 主要试剂 |
| 5.1.4 主要溶液及配制 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 THP-1 巨噬细胞的刺激 |
| 5.2.2 油红O染色 |
| 5.2.3 细胞免疫荧光 |
| 5.2.4 Western blot分析 |
| 5.2.5 Trinder法分析THP-1 巨噬细胞内的脂质含量和组成 |
| 5.2.6 实时荧光定量PCR分析 |
| 5.2.7 统计学分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 β2/aβ2 复合物对THP-1 巨噬细胞TLR4 表达的影响 |
| 5.3.2 β2/aβ2 复合物对oxLDL引起的THP-1 巨噬细胞CD36 表达的影响 |
| 5.3.3 β2/aβ2 复合物对oxLDL引起的THP-1 巨噬细胞胆固醇蓄积的影响 |
| 5.3.4 β2/aβ2 复合物对oxLDL引起的THP-1 巨噬细胞ACTA1、ABCG1和ABCA1 mRNA表达的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 β2/aβ2复合物对oxLDL引起的THP-1巨噬细胞FAK活化及其生物学效应的影响 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 主要材料 |
| 6.1.2 主要仪器 |
| 6.1.3 主要试剂 |
| 6.1.4 主要溶液及配制 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 HUVEC的培养 |
| 6.2.2 细胞免疫荧光 |
| 6.2.3 实时荧光定量PCR分析 |
| 6.2.4 Transwell检测 |
| 6.2.5 ELISA |
| 6.2.6 Western blot分析 |
| 6.2.7 统计学分析 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 β2/aβ2复合物对oxLDL引起的THP-1巨噬细胞FAK表达和磷酸化的影响 |
| 6.3.2 β2/aβ2 复合物对THP-1 巨噬细胞逆向迁移的影响 |
| 6.3.3 β2/aβ2复合物对oxLDL引起的THP-1巨噬细胞MMP-2和MMP-9 表达的影响 |
| 6.4 讨论 |
| 第七章 β2/aβ2 复合物通过TLR4 影响THP-1 巨噬细胞CD36 表达和功能的机制探讨 |
| 7.1 材料 |
| 7.1.1 主要材料 |
| 7.1.2 主要试剂 |
| 7.1.3 主要溶液及其配制 |
| 7.2 方法 |
| 7.2.1 Western blot分析 |
| 7.2.2 细胞免疫荧光 |
| 7.2.3 实时荧光定量PCR分析 |
| 7.2.4 统计学分析 |
| 7.3 结果 |
| 7.3.1 β2/aβ2 复合物通过TLR4 抑制THP-1 巨噬细胞中PPAR-γ的表达 |
| 7.3.2 β2/aβ2 复合物通过TLR4 促进THP-1 巨噬细胞炎性因子的表达 |
| 7.3.3 β2/aβ2 复合物通过TLR4 抑制THP-1 巨噬细胞中CD36 的胞膜定位 |
| 7.4 讨论 |
| 第八章 主要结论、学术创新与展望 |
| 8.1 主要结论 |
| 8.2 学术创新 |
| 8.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（10）小鼠BOULEβ蛋白和Boule环状RNA在精子发生中的功能研究（论文提纲范文）
| 第一章 非经典“AUG”起始编码的BOULE蛋白的发现及其功能研究 |
| 1.中文摘要 |
| 2.英文摘要(Abstract) |
| 3.前言 |
| 4. |
| 4.1 实验材料与方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 小鼠Boule基因RNA水平有8 个转录本 |
| 4.2.2 小鼠睾丸BOULE蛋白有3 条主带,6 个蛋白isoforms |
| 4.2.3 “AUU”是小鼠BOULEβs的起始密码子 |
| 4.2.4 小鼠BOULEβs起始密码子下游Hairpin结构促进其翻译 |
| 4.2.5 Boule Exon1d敲除小鼠的成功构建 |
| 4.2.6 敲除BOULEβs不影响雄性小鼠育性和精子发生 |
| 4.3 小结 |
| 4.4 分析与讨论 |
| 4.4.1 “AUU”起始编码BOULEβs的翻译调控 |
| 4.4.2 小鼠BOULEαs和 BOULEβs蛋白在功能上是冗余的? |
| 4.4.3 保守的BOULEβs是否具有生物学功能? |
| 第二章 Boule环状RNA在精子发生中的功能研究 |
| 1.中文摘要 |
| 2.英文摘要(Abstract) |
| 3.前言 |
| 4. |
| 4.1 实验材料与方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 小鼠Boule环状RNA的发现、种类和表达分布 |
| 4.2.2 Boule位点环状RNA在果蝇、鸡、小鼠、猪和人各物种中均存在且呈睾丸优势表达 |
| 4.2.3 果蝇boule(bol)环状RNA敲除模型的成功构建 |
| 4.2.4 bol环状RNA缺失雄蝇,25℃环境下维持长期育性能力下降,2 9 ℃环境下更甚 |
| 4.2.5 2 9℃环境下,bol环状RNA缺失雄蝇持续产生精子能力显着下降 |
| 4.2.6 2 9℃环境下,bol环状RNA缺失雄蝇精囊中成熟精子能力凋亡比例显着上升 |
| 4.2.7 2 9℃环境下,bol环状RNA缺失雄蝇精囊中精子核形态异常比例显着上升 |
| 4.2.8 Boule环状RNA敲除小鼠模型的构建 |
| 4.3 小结 |
| 4.4 分析与讨论 |
| 4.4.1 Boule环状RNA的形成机制 |
| 4.4.2 bol环状RNA敲除果蝇模型的构建 |
| 4.4.3 bol环状RNA敲除雄蝇精子发生缺陷 |
| 4.4.4 Boule环状RNA在精子发生中的生理功能是否保守 |
| 4.5 参考文献 |
| 综述:环状RNA的形成机制和功能研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
四、Harris苏木素配方的改进及配制中的注意事项（论文参考文献）
- [1]基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响[D]. 任非非. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]促性腺激素释放激素激动剂在冻融胚胎移植周期中的临床疗效和作用机制研究[D]. 安君霞. 兰州大学, 2020(04)
- [3]孕酮脂联素受体7在小鼠生殖中的作用[D]. 王芳. 南昌大学, 2020(08)
- [4]黄芪皂苷Ⅱ对糖尿病大鼠的肾脏保护作用研究[D]. 高崇婷. 上海交通大学, 2020(01)
- [5]GGPPS在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用及机制研究[D]. 陈美姿. 南方医科大学, 2020(01)
- [6]基于生物小分子构建多羟基阳离子基因载体[D]. 许晨. 北京化工大学, 2019(06)
- [7]不同浓度冷冻保护剂对未成熟大鼠睾丸组织玻璃化冷冻效果的影响[D]. 童越. 北京协和医学院, 2019(02)
- [8]黄芩苷治疗痤疮丙酸杆菌引起痤疮的分子机制研究[D]. 杨星哲. 北京中医药大学, 2019(04)
- [9]β2GPI/抗β2GPI抗体复合物在巨噬细胞脂质积累和粘着斑激酶活化中的作用与机制研究[D]. 何超. 江苏大学, 2019(03)
- [10]小鼠BOULEβ蛋白和Boule环状RNA在精子发生中的功能研究[D]. 郜留泽. 南京医科大学, 2018(01)