一、不脱钙骨组织免疫组织化学与原位杂交的方法研究（论文文献综述）
朱福余,袁暾,张杰,蒲林云,车国喜,刘成虎,王昕,王阁奇,孙立魁,梁洁,金毅[1]（2020）在《含植入物不脱钙骨组织病理切片技术在骨组织形态学研究中的应用》文中研究指明进行脱钙处理的常规石蜡包埋组织切片,会对骨缺损修复过程中矿化程度的研究造成一定的影响,可能导致骨修复关键信息的丢失。在与骨整合相关的骨修复材料的实验研究中,采用不脱钙骨组织病理切片技术可能具有独特的优势,其已被广泛应用于骨修复材料的临床前动物实验研究中。该研究就含植入物不脱钙骨组织病理切片技术及该技术在骨修复材料的骨组织工程研究中的应用情况作简要概述。
李创坤[2]（2020）在《基于骨组织工程构建人源性乳腺癌骨转移小鼠模型》文中提出背景乳腺癌是全球最常见的肿瘤之一,并且能扩散到其他器官。而骨转移在乳腺癌转移病例中的发生频率最高,并且会给患者带来许多并发症。目前乳腺癌骨转移的分子机制尚未清楚,治疗方法效果不佳。一直以来,人们致力于解决这个问题,而目前较为迫切的是需要合适的乳腺癌骨转移动物模型来研究乳腺癌向骨骼转移的相关分子机制和进行抗肿瘤药物筛选。然而,用于模拟人癌组织与骨组织之间相互作用的乳腺癌骨转移的人源化动物模型的构建仍然是一个挑战。目的通过组织工程手段构建一种可标准化的人源化乳腺癌骨转移动物模型,用于研究乳腺癌骨转移的分子机制以及进行药物筛选。方法1.制备掺杂二氧化硅纳米颗粒的人脱钙骨基质复合材料。对所制备的二氧化硅纳米颗粒和复合材料的表征、性能以及对细胞的作用等进行研究。2.将人成骨肉瘤细胞与掺杂二氧化硅纳米颗粒的人脱钙骨基质复合材料复合形成组织工程骨,进一步研究该复合材料在体内和体外的成骨诱导能力。3.在移植了组织工程骨的裸鼠腋下原位注射人乳腺癌细胞,构建人源化的乳腺癌骨转移小鼠模型。结果1.制备的二氧化硅纳米颗粒粒径大小为100nm-150nm,呈规则球形,与人脱钙骨基质复合后,可在支架上均匀分布。掺杂二氧化硅纳米颗粒的人脱钙骨基质复合材料具有较好的生物相容性。2.与单纯的人脱钙骨基质相比,掺杂二氧化硅纳米颗粒的人脱钙骨基质复合材料有较强的诱导成骨能力,可明显上调成骨相关标志蛋白的表达,在裸鼠体内形成了更多的新生骨组织。3.在移植了组织工程骨的裸鼠的腋下原位注射人乳腺癌细胞2周后,在组织工程骨中观察到人乳腺癌细胞的转移。结论通过组织工程手段制备了复合人成骨肉瘤细胞的组织工程骨,并成功构建人源化的乳腺癌骨转移小鼠模型。
唐利,王鸿度,陈庄[3]（2012）在《骨质疏松动物模型形态学与计量学研究及其应用》文中研究表明骨质疏松是一种以骨量减少、骨组织微结构退行性变（松质骨骨小梁变细、数量减少、断裂;皮质骨多孔、变薄）为特征,以致骨脆性增加、骨折危险性增高的全身代谢性骨病〔1〕。随着人均寿命延长、老龄化社会的到来及骨质疏松并发症发病率的
王勇平,李晓琴,张辉,蒋垚[4]（2012）在《塑料包埋结合四环素荧光标记制作不脱钙骨组织切片的实验研究》文中研究说明目的探讨塑料包埋技术结合四环素荧光标记制作不脱钙骨组织切片的关键步骤及应用。方法选取四环素荧光标记的兔股骨进行塑料包埋,Leica SP 1600切片机切片,荧光显微镜观察后用苦味酸品红染色,并与常规石蜡包埋切片相比较。结果四环素荧光标记不脱钙骨组织经塑料包埋技术处理后,可清楚地观察类骨质形成、植入体及周围骨组织的整合程度,与常规石蜡包埋相比,染色层次分明,组织移位形变小。结论应用塑料包埋技术制作四环素荧光标记不脱钙骨组织切片,有利于行骨形态计量分析以及植入体与骨整合的研究。
张绪斌,熊正文,张华东[5]（2011）在《骨组织脱钙技术及其应用》文中研究表明骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐（骨盐）形成的。无机盐以羟基磷灰石结晶的形式存在,其中绝大部分为水合磷酸钙,此外还包括微量碳酸盐和柠檬酸盐等[1,2],因此骨和其他一些已钙化的组织在脱水、
刘梅洁[6]（2009）在《滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠Wnt信号传导的影响》文中进行了进一步梳理目的通过体内实验和体外实验,从对成骨细胞具有重要调控作用的Wnt信号通路传导的角度,揭示滋阴补肾法治疗糖皮质激素性骨质疏松症的作用机理,并为阐明中医“肾主骨”机理的科学内涵提供进一步的实验依据。方法1体内实验将55只雌性Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组12只、模型组15只、阳性对照组13只、滋补肾阴组15只。模型组大鼠肌注地塞米松0.1ml/100g体重,给药浓度为1mg/ml,给药剂量为1mg/kg体重,每周2次,连续8w;正常对照组则相应肌注等体积的生理盐水。阳性对照组及滋补肾阴组除按以上方法肌注地塞米松外,阳性对照组灌胃给予阿法骨化醇1ml/100g体重,给药浓度为0.005μg/ml,给药剂量为0.05μg/kg体重;滋补肾阴组灌胃给予左归丸水煎剂1ml/100g体重,给药浓度为0.952g生药/ml,给药剂量为9.52g生药/kg体重,以上给药每天1次,每周6天,连续8w。各组大鼠于处死前16天和前3天分别腹腔注射盐酸四环素30mg/kg体重,以对骨进行荧光标记。给药结束后,采用大鼠麻醉后股动脉取血法,所取全血静置1h后,经2000rmp离心10 min后取血清,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠血清中BGP、E2、PTH、IGF-Ⅰ的水平。取血后将各组大鼠处死,取右侧胫骨近端1/3,制作不脱钙骨切片,采用骨组织形态计量学方法,检测各组大鼠胫骨骨小梁体积百分比（TBV%）、骨小梁吸收表面百分比（TRS%）、骨小梁形成表面百分比（TFS%）、骨小梁矿化率（MAR）、类皮质平均宽度（OSW）、骨皮质矿化率（mAR）,以观察各组大鼠骨形成及骨吸收等骨代谢情况。取左侧胫骨近端1/3,制作大鼠胫骨脱钙骨的冰冻切片,分别采用免疫组化、原位杂交法检测各组大鼠胫骨成骨细胞及骨髓基质细胞中Wnt1、LRP-5及β-catenin蛋白及mRNA的表达。2体外实验2.1左归丸含药血清的制备雌性Wistar大鼠20只,随机分为2组:正常对照组和左归丸治疗组,每组10只。左归丸治疗组大鼠:地塞米松0.1mg/100g肌注,每周2次,连续8w,然后灌服左归丸,一日2次,连续5次,于末次给药1h,乙醚麻醉,无菌条件下,经腹主动脉采血,冷置1h后,离心（2500r/min,25min）,分离血清,是为左归丸含药血清,56℃灭活30min,-20℃冰箱保存备用。正常对照组按以上程序,灌服等容积的蒸馏水,所取血清即正常对照组血清。2.2 MTT法测定不同实验条件对成骨细胞增殖的影响本实验分为6组:成骨细胞（OB）+正常血清组,OB+10-7 mol/L地塞米松组,OB+10-8mol/L地塞米松组,OB+5%左归丸含药血清组、OB+10%左归丸含药血清组、OB+15%左归丸含药血清组,每组8个样本。将成骨细胞悬液浓度调节至为1×104/ml,将其接种至96孔细胞培养板,每孔200μl,培养12h细胞贴壁后,分别用正常对照组血清、10-7mol/L地塞米松、10-8mol/L地塞米松、5%左归丸含药血清、10%左归丸含药血清、15%左归丸含药血清处理各组细胞,5%CO2,37℃,继续培养96h,然后用MTT法于酶标仪上检测波长为570nm处各种细胞的OD值。2.3左归丸含药血清对成骨细胞Wnt3α、LRP-6、β-catenin蛋白及mRNA表达的影响本实验分为3组:正常血清组,地塞米松组,左归丸含药血清组。培养12h后,分别用正常对照组血清、10-7mol/L地塞米松、15%左归丸含药血清处理各组细胞,继续培养96h。随后分别采用免疫印迹法及荧光实时定量PCR（Realtime PCR）技术检测各组细胞中Wnt3α、LRP-6、β-catenin蛋白及mRNA的表达。3统计学分析以上实验结果皆以均数±标准差（（?）±s）表示,采用单因素方差分析（ANOVA）进行数据处理,组问两两比较,采用q检验。结果1体内实验1.1滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠骨组织形态计量学指标的影响1.1.1滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠胫骨TBV%的影响模型组大鼠胫骨TBV%显着低于正常对照组。阳性对照组及滋补肾阴组的TBV%均显着高于模型组,但与正常对照组相比仍有显着差异;与阳性对照组比较,滋补肾阴组的TBV%显着降低。见表1。注:与正常对照组比较:*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较:△P<0.05,△△P<0.01;与阳性对照组比较:▲P<0.05,▲▲P<0.01;下同。1.1.2滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠胫骨TRS%的影响与正常对照组比较,模型组大鼠胫骨TRS%显着增高。阳性对照组的TRS%明显高于正常对照组,但显着低于模型组。滋补肾阴组的TRS%与正常对照组及阳性对照组相比,显着增高;与模型组相比,没有差异,但有明显的降低趋势。见表2。1.1.3滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠胫骨TFS%和MAR的影响模型组大鼠胫骨TFS%和MAR较正常对照组皆显着降低。与模型组相比,阳性对照组的TFS%和MAR皆显着增高,而与正常对照组相比,TFS%仍显着降低,MAR则无显着差异。滋补肾阴组与模型组相比,TFS%和MAR均显着增高,与阳性对照组相比,无显着性差异;但与正常对照组相比,仍明显降低。见表3。1.1.4滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠胫骨mAR和OSW的影响模型组大鼠胫骨mAR和OSW显着低于正常对照组。阳性对照组及滋补肾阴组的mAR和OSW与模型组相比皆显着增高,但比正常对照组仍显着降低。与阳性对照组相比,滋补肾阴组的mAR和OSW无显着性差异。见表4。1.2滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠胫骨OB及MSC Wnt1、LRP-5及β-catenin蛋白和mRNA表达的影响1.2.1滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠胫骨OB及MSC Wnt1蛋白和mRNA表达的影响模型组大鼠胫骨OB及MSC的Wnt1蛋白和mRNA表达阳性密度较正常对照组皆显着降低。阳性对照组及滋补肾阴组OB、MSC的Wnt1蛋白和mRNA表达阳性密度皆显着高于模型组;但与正常对照组相比,仍显着降低。滋补肾阴组OB及MSC Wnt1蛋白表达的阳性密度与阳性对照组相比,明显降低。见表5。1.2.2滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠胫骨OB及MSC LRP-5蛋白和LRP mRNA表达的影响与正常对照组相比,模型组大鼠胫骨OB及MSC的LRP-5蛋白和LRP mRNA表达阳性密度皆显着降低。阳性对照组及滋补肾阴组OB及MSC的LRP-5蛋白和LRP mRNA表达阳性密度皆显着高于模型组;但与正常对照组相比,仍显着降低。与阳性对照组相比,滋补肾阴组LRP-5蛋白和LRP mRNA表达的阳性密度显着降低。见表6。1.2.3滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠胫骨OB及MSCβ-catenin蛋白和mRNA表达的影响与正常对照组相比,模型组大鼠胫骨OB及MSC的β-catenin蛋白和mRNA表达阳性密度皆显着降低。阳性对照组OB及MSC的β-catenin蛋白和mRNA表达阳性密度皆显着高于模型组;但与正常对照组相比,仍显着降低。滋补肾阴组OB及MSCβ-catenin蛋白和mRNA表达的阳性密度与模型组相比,明显增高,但显着低于正常对照组;且与阳性对照组相比,β-catenin蛋白表达的阳性密度明显降低。见表7。1.3滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠血清中BGP、E2、PTH、IGF-Ⅰ含量的影响1.3.1滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠血清中BGP含量的影响模型组大鼠血清中BGP的含量比正常对照组显着降低。与模型组相比,阳性对照组大鼠血清中BGP的含量显着增高;且与正常对照组相比,无显着性差异。滋补肾阴组大鼠血清中BGP的含量与模型组相比明显增高,但仍明显低于正常对照组,而与阳性对照组相比,无显着差异。见表8。1.3.2滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠血清中E2含量的影响模型组大鼠血清中E2的含量比正常对照组显着降低。滋补肾阴组大鼠血清中E2的含量与模型组相比,显着增高;但较之正常对照组仍显着降低。与阳性对照组相比,滋补肾阴组大鼠血清中E2的含量显着增高。见表9。1.3.3滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠血清中PTH含量的影响模型组大鼠血清中PTH的含量比正常对照组显着增高。阳性对照组及滋补肾阴组大鼠血清中PTH的含量与模型组相比,显着降低;但较之正常对照组仍明显增高。滋补肾阴组大鼠血清中PTH的含量与阳性对照组相比仍明显增高。见表10。1.3.4滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠血清中IGF-Ⅰ含量的影响模型组大鼠血清中IGF-Ⅰ的含量比正常对照组显着降低。与模型组相比,阳性对照组及滋补肾阴组大鼠血清中IGF-Ⅰ的含量皆显着增高;但较之正常对照组仍明显降低。滋补肾阴组大鼠血清中IGF-Ⅰ的含量与阳性对照组相比,无显着性差异。见表11。2体外实验2.1 MTT法测定不同实验条件对成骨细胞增殖的影响OB+10-6mol/L地塞米松组及OB+10-7mol/L地塞米松组的OD值均显着低于OB+正常血清组,但两者之间无显着性差异。OB+5%左归丸含药血清组、OB+10%左归丸含药血清组及OB+15%左归丸含药血清组的OD值均显着高于OB+10-6mol/L地塞米松组及OB+10-7mol/L地塞米松组,其中以OB+15%左归丸含药血清组增高最为明显;但与正常血清组相比,仍明显降低。这一结果说明:10-6mol/L地塞米松及10-7mol/L地塞米松均对成骨细胞的增殖有明显的抑制作用,而5%、10%及15%的左归丸含药血清均可明显促进成骨细胞的增殖,其中,15%的左归丸含药血清促进成骨细胞增殖的作用最为明显。所以下一步的实验选用10-7mol/L地塞米松以及15%左归丸含药血清作为干预条件。注:与OB+正常血清组比较:*P<0.05,**P<0.01;与OB+10-6mol/L地塞米松组比较:△P<0.05,△△P<0.01;与OB+5%左归丸含药血清组比较:▲P<0.05,▲▲P<0.01。2.2左归丸含药血清对成骨细胞Wnt3α、LRP-6、β-catenin蛋白表达的影响2.2.1左归丸含药血清对成骨细胞Wnt3α蛋白表达的影响较之正常血清组,地塞米松组Wnt3α蛋白的表达显着下调。左归丸含药血清组Wnt3α蛋白的表达与地塞米松组相比明显上调,但与正常血清组相比,仍明显降低。见图1。2.2.2左归丸含药血清对成骨细胞LRP-6蛋白表达的影响与正常血清组相比,地塞米松组LRP-6蛋白的表达显着下调。左归丸含药血清组LRP-6蛋白的表达较之地塞米松组明显上调,但与正常血清组相比,仍明显降低。见图2。2.2.3左归丸含药血清对成骨细胞β-catenin蛋白表达的影响地塞米松组β-catenin蛋白的表达较之正常血清组明显下调。与地塞米松组比,左归丸含药血清组β-catenin蛋白的表达明显上调,且与正常血清组相比,无显着性差异。见图3。2.3左归丸含药血清对成骨细胞Wnt3α、LRP-6、β-catenin mRNA表达的影响2.3.1 RNA提取纯度的检测和质量鉴定使用NanoDrop（?）ND-1000微量分光光度计测定RNA浓度及纯度,系统自动计算出A260/280,定量分析结果,见表13、图4。所有样本总RNA的A260/280均在1.8-2.0之间,说明所提取的RNA纯度高,无蛋白质和DNA的污染。经琼脂糖电泳成像后可看到清楚的两条带（见图4）:28S、18S,除此之外无其他杂带,且28S:18S≈2:1,证实所提总RNA完整,无异常断裂和丢失。1、2、3:正常血清组样本;M:marker;4、5、6:地塞米松组样本;7、8、9:左归丸含药血清组样本2.3.2扩增产物的溶解曲线各样品扩增产物的溶解曲线如图5,均为单一吸收峰,说明产物专一,单一片段反应特异性合格,无二聚体等杂带样品,可进行下一步荧光定量PCR反应。（a） Wnt3α（b） LRP-6（c）β-catenin（d）β-actin2.3.3左归丸含药血清对成骨细胞Wnt3αmRNA表达的影响与正常血清组相比,地塞米松组芹归丸含药血清组Wnt3αmRNA的表达均明显下调;但左归丸含药血清组Wnt3αmRNA的表达较之地塞米松组显着上调。见图6。1、2、3正常血清组样本;4、5、6地塞米松组样本;7、8、9左归丸含药血清组样本;下同。2.3.4左归丸含药血清对成骨细胞LRP-6 mRNA表达的影响地塞米松组LRP-6 mRNA的表达较之正常血清组显着下调。与地塞米松组比,左归丸含药血清组LRP-6 mRNA的表达明显上调,但与正常血清组相比,仍明显下调。见图7。如下:对文献中较多的10个证候,应用方剂树形分析算法进行分析,对获得的计算结果总结如下。基本方
胥维勇,杨群[7]（2008）在《两种骨髓活检组织制片方法的比较》文中指出
谢玲,邹丽宜,张志平,崔红晶,林坚涛[8]（2008）在《改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较》文中研究指明目的:常规的脱钙骨切片制作方法在脱钙、组织结构完整性等方面存在一定的缺陷。比较用改良后方法制作的脱钙骨组织切片与常规制作的脱钙骨组织切片质量的差异。方法:①实验材料:实验于2004-12/2007-12在广东医学院组织和胚胎学教研室及药理教研室完成。SPF级雌性SD大鼠10只,鼠龄6个月。②实验方法:取大鼠左右股骨和胫骨标本各20个,分为两组,左股骨和右胫骨为实验组,右股骨和左胫骨为对照组。实验组经过常规固定,而后应用改良脱钙液（甲酸10mL、浓盐酸（相对密度1.19）8mL、氯化铝3g、体积分数为0.4的甲醛20mL、冰乙酸3mL,加生理盐水至总体积200mL）脱钙、脱水、氯仿透明、包埋时间延长、染色、封固和切片;对照组进行常规固定、脱钙、脱水、透明、包埋、染色、封固和切片。③实验评估:比较两组切片的质量和效果。结果:①实验组大鼠的脱钙骨切片与对照组比较,标本脱钙时间缩短,脱水时间变化不大,而透明效果明显改善。②与对照组比较,实验组骨组织切片标本薄均匀、平坦完整,脱蜡完整均匀。染色成功的切片,骨与骨周围的组织形态保持完整。结论:改良的脱钙大鼠股骨和胫骨石蜡切片制作方法能使标本脱钙更彻底、结构更清晰、组织完整性更好。
于福禄[9]（2007）在《滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢所致骨质疏松大鼠OPG、RANKL表达的影响》文中研究表明目的从破骨细胞分化调控因子OPG、RANKL的角度，探讨滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢所致大鼠骨质疏松症的作用机理及其所存在的差异，进而为揭示中医“肾主骨”的机理提供进一步的实验依据。方法选用雌性Wistar大鼠66只，随机分为3组：正常对照组10只、假手术组10只、造模型组46只。造模型组大鼠以45mg／kg剂量的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，在其麻醉状态下摘除双侧卵巢，而假手术组只摘除卵巢附近的脂肪组织，但不摘除卵巢。在术后2周，再将造模型组大鼠随机分为4组：模型组11只、己烯雌酚组11只、滋补肾阴组12只、温补肾阳组12只。然后，开始给大鼠灌胃给药。己烯雌酚组灌胃给予己烯雌酚0.045mg／kg，给药浓度为0.0045mg／ml；滋补肾阴组灌胃给予左归丸9.52g生药／kg，给药浓度为0.952g生药／ml；温补肾阳组灌胃给予右归丸11.96g生药／kg，给药浓度为11.196g生药／ml。以上给药体积均为1ml／100g。每天一次，连续6天，休息1天后，再连续给药6天，每周称重一次，据此调整给药量。如此给药3个月。正常对照组、假手术组和模型组按同法灌服等体积的蒸馏水。各组大鼠于处死前16天和前3天分别腹腔注射盐酸四环素30mg／kg体重，以对骨进行荧光标记。给药结束后，将各组大鼠迅速处死。取右侧胫骨制作不脱钙骨切片，用于骨组织形态计量学指标的测定；取左侧胫骨制作脱钙骨石蜡切片，用于免疫组织化学和核酸原位杂交染色，以观察胫骨的OPG和RANKL的蛋白及mRNA的表达。统计学处理方法：实验结果皆以均数±标准差（（?）±s）表示，采用单因素方差分析（ANOVA）进行数据处理，组间两两比较，采用q检验。结果1骨组织形态计量学检测结果1．1滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨TBV％的影响模型组大鼠胫骨TBV％显着低于假手术组。滋补肾阴组、温补肾阳组、己烯雌酚组的TBV％均显着高于模型组，但滋补肾阴组和温补肾阳组明显低于假手术组，而己烯雌酚组无显着性变化。与己烯雌酚组比较，滋补肾阴组和温补肾阳组TBV％均明显降低。与滋补肾阴组比较，温补肾阳组的TBV％明显增高。见表1。表1各组大鼠胫骨TBV％的变化注：与假手术组比较：*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较：△P＜0.05，△△P＜0.01；与己烯雌酚组比较：▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与滋补肾阴组比较：☆P＜0．05；下同。1．2滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨TRS％的影响与假手术组比较，模型组大鼠胫骨TRS％显着增高。滋补肾阴组和温补肾阳组的TRS％均显着高于假手术组，但明显低于模型组。己烯雌酚组的TRS％显着低于模型组，而与假手术组相比，无显着性差异。与己烯雌酚组比较，滋补肾阴组和温补肾阳组的TRS％明显增高。与滋补肾阴组比较，温补肾阳组的TRS％明显降低。见表2。表2各组大鼠胫骨TRS％的变化1．3滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨TFS％、AFS％和MAR的影响模型组大鼠胫骨TFS％、AFS％和MAR较假手术组皆显着增高。与模型组相比，温补肾阳组的TFS％、AFS％和MAR皆明显降低，滋补肾阴组的TFS％和MAR则明显降低，但AFS％无显着性变化；与假手术组相比，滋补肾阴组和温补肾阳组的TFS％、AFS％和MAR均显着增高。与模型组相比，己烯雌酚组的TFS％、AFS％和MAR皆显着降低，而与假手术组相比，TFS％和MAR无显着性差异。与己烯雌酚组相比，滋补肾阴组和温补肾阳组的AFS％和MAR皆明显增高。与滋补肾阴组比较，温补肾阳组的TFS％和MAR皆明显降低。见表3。表3各组大鼠胫骨TFS％、AFS％和MAR的变化1．4滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨mAR和OSW的影响模型组大鼠胫骨mAR和OSW显着高于假手术组。温补肾阳组和己烯雌酚组的mAR和OSW均明显低于模型组。滋补肾阴组和温补肾阳组的mAR均明显高于己烯雌酚组。与滋补肾阴组比较，温补肾阳组的mAR和OSW无显着性差异。见表4。表4各组大鼠胫骨mAR和OSW的变化2滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨OB及MSC的OPG、RANKL蛋白和mRNA表达的影响2．1滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨OB及MSC的OPG蛋白和mRNA表达的影响模型组大鼠胫骨OB、MSC的OPG蛋白和mRNA表达阳性密度较假手术组皆显着降低。滋补肾阴组和温补肾阳组的OB、MSC的OPG蛋白和mRNA表达阳性密度显着高于模型组；己烯雌酚组的OPG蛋白和mRNA表达的阳性密度与模型组相比显着增高。见表5、6。表5各组大鼠胫骨OB OPG蛋白和mRNA表达阳性密度的变化表6各组大鼠胫骨MSC OPG蛋白和mRNA表达阳性密度的变化2．2滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨OB、MSC的RANKL蛋白和mRNA表达的影响模型组大鼠胫骨OB、MSC的RANKL蛋白和mRNA表达阳性密度较假手术组皆显着增高。温补肾阳组的阳性密度明显低于模型组；滋补肾阴组与模型组无显着性差异。己烯雌酚组的RANKL蛋白和mRNA表达阳性密度显着低于模型组，而与假手术组无显着性差异。见表7、8。表7各组大鼠胫骨OB RANKL蛋白和mRNA表达阳性密度的变化表8各组大鼠胫骨MSC RANKL蛋白和mRNA表达阳性密度的变化假手术组与正常对照组比较，以上指标均无显着性差异，从而排除手术因素对实验的影响。结论1．滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢所致大鼠骨质疏松症均具有治疗作用，但温补肾阳法的效果要明显优于滋补肾阴法。2．温补肾阳法对骨质疏松症的治疗作用是通过提高OB和MSC的OPG表达以及抑制其RANKL表达实现的；而滋补肾阴法的作用途径是：提高OB和MSC的OPG表达，使之与RANKL结合增多，进而抑制OC的分化、成熟及活性。温补肾阳法的治疗效果之所以优于滋补肾阴法，其机理之一是前者对OPG和RANKL均具有调节作用，而后者只对OPG产生调节作用。
胥维勇,杨群,范小莉[10]（2006）在《塑料包埋聚合方法的改进与应用价值》文中指出
二、不脱钙骨组织免疫组织化学与原位杂交的方法研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、不脱钙骨组织免疫组织化学与原位杂交的方法研究（论文提纲范文）
（1）含植入物不脱钙骨组织病理切片技术在骨组织形态学研究中的应用（论文提纲范文）
| 1 含植入物不脱钙的骨组织病理切片制作技术 |
| 2 硬组织病理切片的多种染色方法在骨组织形态学研究中的应用 |
| 2.1 HE染色法在硬组织病理切片中的应用 |
| 2.2 亚甲基蓝-酸性品红染色法在含植入物不脱钙骨组织病理切片中的应用 |
| 2.3 Goldner's三色染色法在含植入物不脱钙骨组织病理切片中的应用 |
| 2.4 甲苯胺蓝染色法在含植入物不脱钙骨组织病理切片中的应用 |
| 2.5 Van Gieson苦味酸-品红染色法在含植入物不脱钙骨组织病理切片中的应用 |
| 2.6 茜素红染色法在含植入物不脱钙骨组织病理切片中的应用 |
| 2.7 亲骨荧光素标记在含植入物不脱钙骨组织病理切片中的应用 |
| 2.8 免疫组化在含植入物不脱钙骨组织病理切片中的应用 |
| 3 骨组织形态计量学 |
| 4 讨论 |
（2）基于骨组织工程构建人源性乳腺癌骨转移小鼠模型（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 掺杂二氧化硅纳米颗粒的人脱钙骨基质的制备与表征 |
| 1 实验准备 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 基本用液的配制 |
| 2 实验方法和步骤 |
| 2.1 二氧化硅纳米颗粒(SiNPs)的制备 |
| 2.2 掺杂Si NPs的人脱钙骨基质(DBM)复合材料(Si/DBM)的制备 |
| 2.3 Si NPs以及Si/DBM的表征 |
| 3 实验结果与讨论 |
| 4 结论 |
| 第二章 掺杂二氧化硅纳米颗粒的人脱钙骨基质的生物相容性以及成骨性能研究 |
| 1 实验准备 |
| 1.1 主要仪器及设备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 基本用液的配制 |
| 1.4 实验动物 |
| 2 实验方法和步骤 |
| 2.1 Si/DBM的制备 |
| 2.2 人成骨肉瘤细胞系(SaOS-2 cells)的培养 |
| 2.3 Si/DBM的生物相容性检测 |
| 2.4 成骨相关指标检测 |
| 2.5 组织工程骨皮下移植 |
| 2.6 组织学评价 |
| 2.7 数据处理方法 |
| 3 实验结果与讨论 |
| 3.1 Si/DBM支架的生物相容性检测 |
| 3.2 Si/DBM支架体外成骨能力的检测 |
| 3.3 Si/DBM支架体内成骨能力的检测 |
| 4 结论 |
| 第三章 乳腺癌骨转移小鼠模型的构建与验证 |
| 1 实验准备 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 基本用液的配制 |
| 1.4 实验动物 |
| 2 实验方法和步骤 |
| 2.1 Si/DBM的制备 |
| 2.2 人乳腺癌细胞系MDA-MB-231 cells的培养 |
| 2.3 人成骨肉瘤细胞的培养 |
| 2.4 构建乳腺癌骨转移小鼠模型 |
| 2.5 小动物活体成像验证 |
| 2.6 组织学评价 |
| 2.7 数据处理方法 |
| 3 实验结果与讨论 |
| 3.1 人乳腺癌骨转移小鼠模型的构建 |
| 3.2 人乳腺癌骨转移小鼠模型的验证与分析 |
| 4 结论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 成果 |
| 致谢 |
（4）塑料包埋结合四环素荧光标记制作不脱钙骨组织切片的实验研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 Leica SP |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 四环素荧光标记 |
| 1.2.2 制作不脱钙骨组织切片 |
| 2 结果 |
| 2.1 荧光显微镜下观察 |
| 2.2 Van Gieson苦味酸品红染色 |
| 2.3 塑料包埋技术与HE染色石蜡切片相比 |
| 3 讨论 |
（5）骨组织脱钙技术及其应用（论文提纲范文）
| 1 骨组织的组织学特点[1, 2] |
| 2 骨组织的固定 |
| 3 骨组织的常用脱钙方法及脱钙液 |
| 3.1 单纯酸类脱钙剂 |
| 3.2 混合酸类脱钙剂 |
| 3.3 螯合剂脱钙技术 |
| 3.4 离子交换树脂技术 |
| 3.5 电解脱钙技术 |
| 3.6 脱钙机脱钙技术 |
| 4 骨组织的低温-微波快速脱钙技术研究 |
| 4.1 微波特性生物物理学持性与应用 |
| 4.2 骨组织的低温-微波快速脱钙技术研究 |
| 4.3 低温MW-硝酸快速脱钙的方法[2, 6, 14] |
| 5 脱钙方法的对比研究 |
| 6 骨组织脱钙的注意事项 |
（6）滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠Wnt信号传导的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略表 |
| 综述一 Wnt信号转导通路研究进展 |
| 综述二 糖皮质激素性骨质疏松症的发病机制及中药对其的影响 |
| 前言 |
| 第一部分 体内实验 |
| 材料方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 结果 |
| 1 滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠骨组织形态计量学指标的影响 |
| 2 滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠胫骨OB及MSC Wnt1、LRP-5及β-catenin蛋白和mRNA表达的影响 |
| 3 滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠外周血血清中BGP、E2、PTH、IGF-Ⅰ含量的影响 |
| 讨论 |
| 1 糖皮质激素性骨质疏松症的中医机理探讨 |
| 2 滋阴补肾法对糖皮质激素性骨质疏松症的治疗作用 |
| 3 滋阴补肾法治疗糖皮质激素性骨质疏松症的作用机理 |
| 小结 |
| 第二部分 体外实验 |
| 材料方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 结果 |
| 1 MTT法测定不同实验条件对成骨细胞增殖的影响 |
| 2 左归丸含药血清对成骨细胞Wnt3α、LRP-6、β-catenin蛋白表达的影响 |
| 3 左归丸含药血清对成骨细胞Wnt3α、LRP-6、β-catenin mRNA表达的影响 |
| 讨论 |
| 1 Wnt信号传导通路与成骨细胞 |
| 2 糖皮质激素(GC)对成骨细胞的抑制作用及滋阴补肾法对其的调节 |
| 3 糖皮质激素(GC)对Wnt信号传导通路的影响及滋阴补肾法对其的调节 |
| 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附图 |
（8）改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组标本切片前处理效果比较见表1。 |
| 2.2 两组标本切片效果比较见表2。 |
| 3 讨论 |
| 3.1 脱钙液的选择 |
| 3.2 透明液的选择 |
| 3.3 浸蜡程度的掌握 |
（9）滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢所致骨质疏松大鼠OPG、RANKL表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文略缩表 |
| 文献综述 |
| 中医药防治骨质疏松症的研究进展 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 分组及处理 |
| 2.2 指标的检测方法 |
| 2.2.1 骨组织形态计量学指标的测定 |
| 2.2.1.1 不脱钙骨切片的制作及染色 |
| 2.2.1.2 骨组织形态计量方法 |
| 2.2.2 OPG和RANKL蛋白表达的检测 |
| 2.2.2.1 脱钙骨石蜡切片的制作 |
| 2.2.2.2 OPG蛋白表达的检测 |
| 2.2.2.3 RANKL蛋白表达的检测 |
| 2.2.3 OPG和RANKL mRNA表达的检测 |
| 2.2.3.1 OPG mRNA表达的检测 |
| 2.2.3.2 RANKL mRNA表达的检测 |
| 2.3 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 骨组织形态计量学检测结果 |
| 1.1 滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨TBV%的影响 |
| 1.2 滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨TRS%的影响 |
| 1.3 滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨TFS%、AFS%和MAR的影响 |
| 1.4 滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨mAR和OSW的影响 |
| 2 滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨OB和MSC OPG和RANKL蛋白及mRNA表达的影响 |
| 2.1 滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨OB和MSC OPG蛋白和mRNA表达的影响 |
| 2.2 滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠胫骨OB和MSC RANKL蛋白和mRNA表达的影响 |
| 讨论 |
| 1 滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗作用 |
| 2 滋补肾阴法和温补肾阳法对破骨细胞分化调控因子OPG、RANKL的调节作用 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附图 |
（10）塑料包埋聚合方法的改进与应用价值（论文提纲范文）
| 1 常用塑料包埋剂 |
| 1.1 环氧树酯 |
| 1.2 聚酯类树酯 |
| 1.3 丙烯酸树酯 |
| 2 甲基丙烯酸酯及其衍生物 |
| 3 塑料包埋聚合反应的条件 |
| 4 塑料包埋聚合液类型 |
| 4.1 早期塑料包埋方法 |
| 4.1.1 GMA技术聚合液 |
| 4.1.2 HEMA聚合液 |
| 4.2 低温塑料包埋方法 |
| 4.2.1 GMA聚合液 |
| 4.2.2 HEMA聚合液 |
| 4.2.3 GMA冷包埋聚合液 |
| 4.3 混合包埋方法 |
| 4.4 MMA塑料包埋方法 |
| 4.4.1 MMA聚合液 |
| 4.4.2 MMA低温聚合液 |
四、不脱钙骨组织免疫组织化学与原位杂交的方法研究（论文参考文献）
- [1]含植入物不脱钙骨组织病理切片技术在骨组织形态学研究中的应用[J]. 朱福余,袁暾,张杰,蒲林云,车国喜,刘成虎,王昕,王阁奇,孙立魁,梁洁,金毅. 医疗装备, 2020(19)
- [2]基于骨组织工程构建人源性乳腺癌骨转移小鼠模型[D]. 李创坤. 南方医科大学, 2020
- [3]骨质疏松动物模型形态学与计量学研究及其应用[J]. 唐利,王鸿度,陈庄. 中国老年学杂志, 2012(17)
- [4]塑料包埋结合四环素荧光标记制作不脱钙骨组织切片的实验研究[J]. 王勇平,李晓琴,张辉,蒋垚. 临床与实验病理学杂志, 2012(05)
- [5]骨组织脱钙技术及其应用[J]. 张绪斌,熊正文,张华东. 医学理论与实践, 2011(11)
- [6]滋补肾阴法对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠Wnt信号传导的影响[D]. 刘梅洁. 中国中医科学院, 2009(11)
- [7]两种骨髓活检组织制片方法的比较[J]. 胥维勇,杨群. 实用医技杂志, 2008(33)
- [8]改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较[J]. 谢玲,邹丽宜,张志平,崔红晶,林坚涛. 中国组织工程研究与临床康复, 2008(11)
- [9]滋补肾阴法和温补肾阳法对去卵巢所致骨质疏松大鼠OPG、RANKL表达的影响[D]. 于福禄. 中国中医科学院, 2007(06)
- [10]塑料包埋聚合方法的改进与应用价值[J]. 胥维勇,杨群,范小莉. 诊断病理学杂志, 2006(06)