一、应用植入后大鼠体外全胚胎培养研究酒精对胚胎发育的影响（论文文献综述）
刘青云,康陈萍,肖倩倩,郝卫东[1]（2021）在《利用全胚胎和微团培养模型评价硝酸铈的发育毒性》文中研究指明目的:利用大鼠植入后全胚胎培养模型和微团培养模型模拟胚胎发育早期和中、晚期过程,评价硝酸铈的发育毒性,以期为进一步开展体内实验研究及合理制定人群稀土接触的健康指导值提供科学依据。方法:取孕9.5 d的SD大鼠胚胎,分别在含0.00、0.50、0.75、1.00 mmol/L硝酸铈的大鼠即刻离心血清中37℃旋转培养,48 h后根据Brown’s评分法对胚胎的生长发育及形态功能进行评分,结合BALB/c 3T3细胞毒性结果,利用欧洲替代方法验证中心（ECVAM）全胚胎预测模型评价硝酸铈胚胎早期发育毒性。分离孕13 d的SD大鼠胚胎肢芽原代细胞进行微团培养,分别用0.03、0.06、0.13、0.25、0.50、1.00、2.00和3.00 mmol/L硝酸铈进行染毒,培养5 d后利用中性红活细胞摄取染色法测定50%细胞增殖受抑制时的浓度(IC50),利用阿利新蓝染色法测定50%细胞分化受抑制时的浓度(ID50),根据ECVAM微团培养预测模型评价硝酸铈胚胎中、晚期发育毒性。结果:全胚胎培养模型中硝酸铈对胚胎生长的无可见有害作用水平（NOAEL）为0.50 mmol/L,0.75 mmol/L以上浓度硝酸铈可显着降低胚胎卵黄囊直径和顶臀长（P<0.05）,抑制胚胎生长,并可致胚胎体节数目减少（P<0.05）,胚胎发育畸形。微团培养模型中硝酸铈对肢芽细胞增殖活性的NOAEL为0.25 mmol/L,对肢芽细胞分化为软骨细胞的NOAEL为0.12 mmol/L,其IC50和ID50分别为1.23和0.76 mmol/L。结论:经全胚胎培养预测模型和微团培养模型评价硝酸铈为弱发育毒性化学物。
王宇飞[2]（2021）在《母体糖尿病通过β-羟丁酸导致神经管畸形的机制研究》文中研究说明目的:1.构建糖尿病孕鼠致神经管畸形（neural tube defects,NTDs）鼠胚模型并检测孕鼠血清及胚胎脑组织β-羟丁酸（β-hydroxybutyrate,BHB）含量。2.研究BHB是否可以诱导NTDs。3.研究BHB是否通过抑制HDAC1、HDAC3的表达,增加H3K27ac水平,随后引起MEST表达水平增加,干扰LRP6的成熟引起NTDs。方法:1.通过腹腔注射链脲佐菌素构建母体糖尿病致NTDs模型,运用体视显微镜进行胚胎形态学观察,运用HE染色的方法观察E10.5胚胎神经管的闭合状态。2.通过Elisa检测正常孕鼠和糖尿病孕鼠血清、正常孕鼠胚胎和糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织匀浆液中BHB含量。3.通过体外全胚胎培养及检测BHB对NTDs的影响,,通过ELisa检测血清BHB对胚胎脑组织BHB含量的影响。4.通过Western blotting、免疫组化检测正常孕鼠胚胎和糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织中HDAC1、HDAC3、H3K27ac的表达水平。5.通过Real-time PCR、Western blotting及免疫荧光法检测不同浓度BHB处理HT-22细胞后HDAC1、HDAC3及H3K27ac表达变化。6通过Real-time PCR法检测正常孕鼠胚胎和糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织中Mest的转录水平。7.通过Western blotting法检测正常孕鼠胚胎和糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织中MEST、成熟LRP6蛋白质的表达水平。8.通过Western blotting法检测BHB处理的HT-22细胞MEST及成熟LRP6的蛋白质表达变化。9.通过Western blotting法检测BHB处理的HT-22细胞回补HDAC1、HDAC3后,H3K27ac、MEST及成熟LRP6的蛋白质表达变化。10.统计学分析方法:通过SPSS16.0软件分析数据,用均数±标准差（X±S）表示,P<0.05代表有统计学意义。结果:1.以200 mg/kg的剂量将链脲佐菌素腹腔注射到E5.5ICR孕鼠体内,孕鼠在E8.5-E10.5血糖值均高于16.7mM,胚胎NTDs率增加至17.2%,NTDs胚胎呈明显的露脑畸形或脊柱裂;HE染色显示NTDs胚胎神经管未闭合。2.糖尿病孕鼠血清中BHB含量显着高于正常孕鼠（E8.5:P<0.05;E9.5:P<0.001;E10.5:P<0.001）。糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织匀浆液中BHB含量显着高于正常孕鼠胚胎（P<0.001）。3.正常血清培养E8.5胚胎2天后,生长状态良好。含2mM BHB的血清培养E8.5胚胎2天后,胚胎生长发育迟缓。含4mM BHB的血清培养E8.5胚胎2天后,胚胎生长发育迟缓且可见NTDs。Elisa结果显示随着血清中BHB浓度的增加,胚胎脑组织BHB含量也增加。4.Real-time PCR结果显示:糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织较正常孕鼠胚胎脑组织中Hdac1、Hdac3 m RNA表达水平下降（Hdac1:P<0.05;Hdac3:P<0.05）。Western blotting结果显示:糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织较正常孕鼠胚胎脑组织中HDAC1、HDAC3蛋白质表达水平下降（HDAC1:P<0.01;HDAC3:P<0.01）。Western blotting及免疫组化结果显示糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织较正常孕鼠胚胎脑组织H3K27ac水平增加（P<0.05）。5.Real-time PCR结果得出:用含2mM和4mM BHB培养基培养的HT-22细胞较正常细胞Hdac1（2mM:P<0.001;4mM:P<0.001）、Hdac3（2mM:P<0.05;4mM:P<0.01）表达均显着降低,表明BHB降低了Hdac1、Hdac3的表达。Western blotting和细胞免疫荧光结果均显示:含4mM BHB培养基培养的细胞较正常细胞H3K27ac水平显着增加（P<0.001）。6.Real-time PCR结果得出:糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织较正常孕鼠胚胎脑组织中Mest mRNA表达水平增加（P<0.05）。7.Western blotting结果显示:糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织较正常孕鼠胚胎脑组织中MEST蛋白质表达水平增加、成熟的LRP6白质表达水平下降（MEST:P<0.05;成熟的LRP6:P<0.05）。8.BHB处理HT-22细胞后,MEST蛋白质表达水平增加（P<0.01）,成熟LRP6的蛋白质表达水平下降（P<0.01）。9.BHB处理的HT-22细胞回补HDAC1、HDAC3后H3K27ac水平降低（HDAC1:P<0.05;HDAC3:P<0.05）、MEST表达降低（HDAC1:P<0.05;HDAC3:P<0.01）及成熟LRP6的蛋白质表达水平上升（HDAC1:P<0.01;HDAC3:P<0.01）。结论:1.腹腔注射200mg/Kg链脲佐菌素导致的糖尿病孕鼠可引起ICR胎鼠NTDs,糖尿病孕鼠血清BHB含量升高,糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织较正常孕鼠胚胎脑组织BHB含量高,与血清中BHB变化正相关。2.增加体外全胚胎培养血清中的BHB含量可导致胚胎NTDS,且血清中高浓度的BHB可引起胚胎脑组织BHB含量增加。3.实验表明糖尿病孕鼠可能通过增加胚胎脑组织BHB含量抑制HDAC1、HDAC3的表达,增加H3K27ac水平,随后引起MEST表达水平增加,干扰LRP6的成熟引起NTDS。
奥瑞芳[3]（2020）在《利用小鼠体外全胚胎培养模型评估神经管畸形发生的机制》文中提出目的:神经管畸形（neural tube defects,NTDs）是一种由多种因素引发的疾病,给社会和家庭带来沉重的经济和精神负担,严重影响着人口质量,但其发生机制并未完全阐明。体外全胚胎培养（Whole embryo culture,WEC）是可以实现高度模拟子宫内胚胎暴露于特定环境的一项技术,通过精准控制遗传和环境因素、精确定位神经管闭合相对狭窄的窗口期、缩小与母婴遗传相关敏感性差异等优势,为研究神经管畸形发病机制提供了便利途径。卵黄囊血循环建立早于神经系统和心血管系统形成,它的发育程度决定着胚胎发育速度,有研究表明卵黄囊发育与胚胎畸形率呈负相关,课题组拟利用WEC平台研究NTDs的发生机制,为干预神经管畸形发生提供新思路。本研究目的主要内容有:1利用小鼠体外WEC平台将E（embryo,E）7.0胎鼠体外培养5天,并在神经管闭合阶段详尽研究其形态学发生。2利用小鼠体外WEC平台分别建立丙戊酸、酒精、stavudine致NTDs模型并研究其发生机制;3利用小鼠体外WEC平台建立高糖诱导NTDs模型并探讨二甲双胍干防效果及机制。方法:1将E 7.0胎鼠体外培养5天和E 8.5胎鼠体外培养2天。1.1采用乙醚麻醉大鼠,腹主动脉采血,即刻离心取上清,制备WEC所需培养基。1.2打开孕鼠腹腔取出子宫,分别提取E 7.0和E8.5胚胎,保持外胎盘锥、脏层卵黄囊、羊膜以及胚胎的完整性;对于E 10.5提取需要保持卵黄囊、胚胎以及脐带的血循环的完整性。1.3将胚胎移入培养基中,充好相应混合气体,37℃滚动无菌培养,观察胚胎卵黄囊血循环及胚胎发育情况。2应用小鼠WEC平台分别建立丙戊酸、酒精、stavudine致NTDs模型并研究其发生机制。2.1提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后,培养基中加入VAP 0.6 mM/ml,连续培养24h后,应用Van-Maele-Fabry评分系统对卵黄囊循环评分并记录NTDs发生率;提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后,加入95%酒精6μl/ml连续培养24h,观察胚胎发育情况拍照,对卵黄囊循环评分并记录NTDs发生率;提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后培养基中分别加入0、5、10、15μM-stavudine,续培养48h,观察胚胎发育情况拍照,并对体节、头臀长、卵黄囊大小以及NTDs发生率进行记录,同时应用Van-Maele-Fabry对胚胎各器官及卵黄囊血循环进行评分。最后应用免疫组化技术以及WB在培养结束后对胚胎分别进行增殖和凋亡的定性和定量检测。2.2对丙戊酸、酒精、stavudine致NTDs模型的卵黄囊进行组织结构、增殖与凋亡的定性与定量分析。3利用小鼠WEC平台建立高糖诱导神经管畸形模型并应用二甲双胍进行干预。3.1提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后,对照培养基含葡萄糖100μg/ml（正常血清血糖浓度）,高糖处理组的培养基中加入300μg/ml葡萄糖（模仿糖尿病血清血糖浓度）,记录胚胎神经管畸形发生率,并应用免疫组化以及WB技术对卵黄囊以及胚胎头部进行PCNA和CC3定性和定量检测。3.2提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后,对照培养基含葡萄糖100μg/ml,二甲双胍处理组浓度分别100μg/ml和200μg/ml,连续培养24h后记录胚胎神经管畸形发生率,评估卵黄囊直径以及血循环的发育状况。3.3提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后,对照培养基含葡萄糖100μg/ml,高糖处理组的培养基中加入300μg/ml葡萄糖,二甲双胍干预组加入二甲双胍浓度为100μg/ml h或200μg/ml到高糖条件的培养基中,连续培养24h,观察胚胎神经管闭合情况拍照,记录胚胎发生神经管畸形率,同时对胚胎应用WB技术进行PCNA和CC3定量检测。结果:1成功将E 7.0胚胎体外培养5天和仔细观察E 8.5体外培养两天胚胎发育变化。1.1我们详细描述了提取E 7.0、E 8.5和E 10.5小鼠胚胎的方法和制备即刻离心血清的技术,展示了E 7.0体外培养5天的胚胎每24h记录的结果;1.2 E 8.5连续培养2天的胚胎,每隔4h我们记录一次胚胎形态,有包含卵黄囊以及去除卵黄囊两种形态,同时制作了胚胎转体、神经管、前后肢芽评分图,尤其是卵黄囊血循环建立彩色评分图。2利用小鼠体外WEC平台建立丙戊酸、酒精、stavudine致NTDs模型并研究其发生机制。2.1卵黄囊血循环评分结果显示:与对照组相比,E 8.5胚胎经VAP培养24h后导致胚胎卵黄囊血循环评分显着下降,外观苍白、血管网稀疏、大血管稀少,斑片状分布,胚胎发育迟缓,胚胎NTDs率升高。与对照组相比,E 8.5胚胎经酒精培养24h后胚胎卵黄囊血循环在形态学方面:血循环建立差,血管极未形成,丰富的血管树状丛未形成,斑块状分布,整体表面苍白,且评分降低,胚胎NTDs发生率升高。E 8.5胚胎在stavudine浓度分别为0、5、10、15μM续培养48h后胚胎体节、头臀长、卵黄囊大小随着浓度的增加而减少,随着处理浓度的增加而胚胎死亡率增加,并对胚胎器官进行评分。而在5μM-stavudine处理组胚胎NTDs发生率显着升高。与对照组相比,免疫组化和WB结果表明用VAP、酒精、5μM-stavudine、分别诱导NTDs胚胎均显示增殖下降,凋亡增加。2.2丙戊酸、酒精、stavudine诱导的NTDs胚胎的卵黄囊在增殖与凋亡与其诱导的NTDs胚胎变化趋势方面基本保持一致。3利用小鼠WEC平台建立高糖诱导神经管畸形模型并应用二甲双胍对高糖诱导NTDs进行干预。3.1与对照组相比,培养基内加入300μg/ml葡萄糖模仿体内高血糖状态,导致胚胎神经管畸形发生率明显增加,卵黄囊血循环评分下降。卵黄囊和胚胎的免疫组化定性研究PCNA阳性细胞数下降而CC3阳性细胞数增加,WB实验也证实了一致结果。3.2二甲双胍浓度实验表明:对照组与二甲双胍在浓度为100μg/ml时胚胎神经管延迟闭合的发生率无区别,卵黄囊直径以及血循环评分也无统计学意义的差异;在二甲双胍浓度为200μg/ml时胚胎卵黄囊直径以及血循环评分与对照组无统计学差异,但是神经管未闭合率增加,有统计学意义。3.3探索二甲双胍干预高糖诱导神经管畸形发生结果显示:高糖条件下二甲双胍浓度为100μg/ml胚胎神经管畸形发生率明显下降,且卵黄囊血循环明显改善,评分上升,WB实验结果表明二甲双胍100μg/ml治疗组胚胎PCNA和CC3表达与正常组相似,而高糖组与二甲双胍治疗组相比:PCNA含量下降,CC3含量增加。二甲双胍浓度为200μg/ml可干预高糖诱导胚胎NTDs发生,包括卵黄囊发育障碍,但是偶有心包膨大发生。结论:1成功利用WEC平台将E 7.0胚胎体外培养5天,符合相关评分标准,对E 8.5胚胎体外培养24小时详细观察胚胎发育形态学变化。2丙戊酸、酒精和stavudine通过增殖和凋亡诱导胚胎NTDs发生,且均伴有卵黄囊发育障碍,在形态学、组织结构学、增殖与凋亡方面均发生不同程度的改变。3成功建立高糖诱导胚胎神经管畸形模型,该条件下卵黄囊与NTDs胚胎均有增殖和凋亡水平的改变。二甲双胍在一定范围内不影响胚胎及其卵黄囊发育的形态学变化,浓度为100μg/ml的二甲双胍可以干预高糖诱导神经管畸形的发生和改善卵黄囊血循环障碍,在增殖与凋亡蛋白的表达水平接近正常胚胎。
刘玉思[4]（2020）在《神经管畸形动物模型中凋亡调控因子（miR-322、PCSK9）的表达规律及作用机制的研究》文中认为目的:神经管畸形（neural tube defects,NTDs）是一种常见的出生缺陷,通常是由胚胎发育早期神经管闭合不完全或者闭合失败引起的。NTDs的发病率在1‰-5‰,其危险因素涉及环境、生物、遗传、辐射和化学药品等。NTDs作为一种复杂的多基因疾病,目前尚不清楚其具体病因,其遗传因素中的基因突变或各信号通路中分子间的相互作用和表达调控机制异常,可能在NTDs的发生中起着重要作用。细胞凋亡又称细胞程序性死亡,在胚胎发育、组织器官形态形成和功能确定等生命活动中普遍存在并发挥着重要作用。研究表明,在神经管发育过程中,由于自身基因缺陷或其他因素引起的细胞凋亡相关基因的功能紊乱,打破了细胞增殖与凋亡的动态平衡,则会导致NTDs的发生。在前期研究中,我们分别发现microRNA-322（miR-322）和前蛋白转化酶枯草溶菌素9型（proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9）在NTDs中低表达:在糖尿病引起的NTDs中,mi R-322低表达,且抑制高糖诱导的小鼠神经干细胞凋亡;在对E11孕鼠血清的蛋白质组的分析中发现,与对照组相比,NTDs组中PCSK9的蛋白表达水平明显降低。这些发现提示mi R-322、PCSK9具有成为NTDs早期筛查的分子标志物及干预治疗新靶点的潜能,但其参与NTDs发生具体分子机制并不清楚。因此,本研究旨在通过全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）建立NTDs动物模型,探索miR-322和PCSK9在NTDs中的表达规律及其对细胞凋亡的影响,明确其参与NTDs发生的具体分子机制。方法:本研究分为以下两个部分:1、miR-322通过沉默NOX4参与NTDs的形成1.1使用ATRA建立小鼠NTDs模型并于胚胎发育的E9.5取材。通过qRT-PCR检测miR-322、NOX4的表达水平;通过western blot方法检测NOX4蛋白的表达水平。1.2生物信息学预测miR-322的靶基因。培养小鼠神经干细胞C17.2并转染生物素标记的mi R-322和阴性对照。收集细胞裂解液,通过RNA pull down验证miR-322与NOX4的结合。1.3将构建的NOX4萤光素酶报告基因质粒与miR-322 mimic或阴性对照共转染C17.2细胞,通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-322与NOX4的相互作用。之后在细胞内进一步明确miR-322与NOX4的负向调控关系。1.4在C17.2细胞中干扰NOX4的表达,通过western blot检测相关凋亡指标的变化情况;在C17.2细胞中过表达NOX4,同时再转染miR-322 mimic,通过western blot检测相关凋亡指标的变化情况,并通过TUNEL实验检测细胞凋亡水平。1.5在体外胚胎培养中,向NTDs组的胚胎羊膜腔内注射miR-322模拟物。通过观察组织形态、western blot检测NOX4和凋亡相关指标的表达、TUNEL检测细胞凋亡水平,从而评估miR-322对减少细胞凋亡及治疗NTDs的效果。2、PCSK9在大鼠NTDs中的表达情况及抑制PCSK9增加NTDs发生风险的机制探究2.1使用ATRA建立大鼠NTDs模型,分别于胚胎发育的E11-E20取脊髓组织。2.2分别采用qRT-PCR、Western Blot检测PCSK9在大鼠胚胎发育过程中E11-E20的表达情况。2.3采用血药浓度测定和Western Blot评价PCSK9抑制剂SBC115076效果。2.4探究PCSK9抑制剂SBC115076与ATRA联合使用,是否能导致NTDs发生率增加,或是否能增加胎鼠对ATRA的致畸敏感性。2.5使用PCSK9敲除小鼠进一步验证PCSK9是否增加胎鼠对ATRA的致畸敏感性。2.6使用Western Blot验证抑制PCSK9后,C17.2神经干细胞和胚胎脊髓组织中caspase3、Bcl2、Bax的表达变化,探究PCSK9与凋亡的关系。2.7使用脂质组学技术分析孕鼠血清样本和胚胎脊髓组织样本中的脂质成分及表达量。结果:1.miR-322通过沉默NOX4参与NTDs的形成1.1在ATRA构建的NTDs小鼠模型中,mi R-322表达下调。相反,NOX4的蛋白表达水平发生了明显上调,但mRNA水平并没有明显改变。1.2 NOX4是miR-322的潜在靶基因,且二者之间的相互作用是通过存在于NOX4 mRNA的3’端非翻译区上的结合位点实现的。当过表达miR-322时,NOX4的蛋白表达水平相应地降低,但mRNA水平没有明显改变;当抑制miR-322时,NOX4的蛋白表达水平明显升高,mRNA水平同样无明显变化。1.2在C17.2细胞中,干扰NOX4的表达,促凋亡蛋白caspase3和Bax的表达水平降低,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增加;而过表达NOX4后,促凋亡蛋白caspase3和Bax的表达水平增加,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达减少,且细胞凋亡水平增加;在此基础上,同时转染miR-322 mimic,可以挽回NOX4过表达导致的凋亡相关蛋白的改变,同时减少细胞凋亡。1.3向胚胎羊膜腔内注射miR-322 mimic治疗后,检测到胚胎中NOX4的蛋白表达明显降低。与此同时,Bcl-2表达水平升高,caspase3和Bax的表达发生下调,细胞凋亡减少。2、PCSK9在大鼠NTDs中的表达情况及抑制PCSK9增加NTDs发生风险的机制探究2.1在胚胎发育的E11-E20,与对照组相比,NTDs组PCSK9的mRNA和蛋白水平发生明显下调。2.2 SBC115076可抑制大鼠体内PCSK9的表达。SBC115076与ATRA联用可以增加胚胎的畸形率。在PCSK9-/-小鼠中也得到一致结论。2.3抑制PCSK9可增加C17.2神经干细胞和胚胎脊髓组织中促凋亡蛋白caspase3、Bax的表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:1.NOX4是mi R-322的新靶点,并通过位于NOX4 mRNA 3’端非翻译区的结合位点与miR-322相互作用2.低表达的miR-322可增加NOX4蛋白表达水平引起细胞凋亡,参与NTDs发生。3.miR-322对NTDs胚胎细胞凋亡的治疗作用,可成为治疗NTDs的新靶点。4.PCSK9在NTDs脊髓组织发育过程中持续低表达。5.抑制PCSK9能够增加胚胎对ATRA的致畸敏感性。6.抑制PCSK9可通过上调Cleaved-Caspase3、Bax/Bcl-2促进细胞凋亡,从而参与NTDs发生。
王卓[5]（2012）在《兔着床后全胚胎培养方法和三种纳米材料对小鼠体外发育毒性的研究》文中认为啮齿动物着床后体外全胚胎培养（Whole Embryo Culture，WEC）方法的研究和作为发育毒性实验系统的应用研究已有三十余年，现已经通过了欧洲替代方法验证中心（ECVAM）验证，表明其与体内结果有良好的一致性，被推荐为发育毒性的替代方法之一。而兔全胚胎培养技术发展和应用相对就滞后很多，近年才在方法学有明显突破。有研究资料显示兔全胚胎培养模型在发育毒性研究的某些方面可能优于啮齿类动物，现行发育毒性实验指南中通常要求实验动物需包括啮齿类和非啮齿类动物，而兔是非啮齿类的首选动物。因此，无论作为发育毒性研究，还是发展替代方法，无疑兔全胚胎体外培养模型都具有重要的发展应用前景。而国内还未见建立兔全胚胎培养研究的报道。为此，本研究的目的之一是引进建立兔全胚胎培养模型，并试用于发育毒性研究。纳米材料由于特有的理化和生物学性质，有广泛的应用价值，但也因为与非纳米材料性质的差异，是否会给生产者和使用者造成未知的健康危害成为人们关注的重要问题。发育毒性是各类化学物安全性评价或危险度评估的重要内容之一，现行评价方法是否适合纳米材料的评价是亟待回答的问题。为此，本研究选择三类纳米材料（金属氧化物类、碳纳米管类、有机物）的代表物，利用小鼠全胚胎培养模型研究其发育毒性，并比较了Nano-TiO2对小鼠和兔的体外发育毒性，目的是揭示纳米材料胚胎发育毒性的特征，为评估现行方法是否适用于纳米材料的决策提供科学依据。本文研究内容分以下三部分。一、兔着床后全胚胎培养模型的建立及其验证采用新西兰孕兔，取GD9孕兔胚胎，参照Carney和Naya的方法稍加修改，主要是在打开子宫壁时改用了从中间向两边切开子宫的方法。剥离胚胎后单瓶培养，形态学评分系统采用Carney建立的兔胚胎形态评分系统。体外培养48h后将观察结果与文献报道的结果进行对比；并用5.0mmol/L浓度的甲氧基乙酸（MAA）作为阳性对照物对所建培养方法作进一步验证。研究结果显示，本研究中23个GD9天龄兔胚胎体外培养48h后，存活率为100%，头长平均增长2.15倍，卵黄囊闭合和胚胎弯曲情况、体节数、自发畸形率、形态评分均数等指标均与文献报道的体外培养发育情况相近。5.0mmol/L浓度的阳性对照MAA能引起兔胚胎明显的发育毒性，包括卵黄囊闭合减少、头部区域肿胀、面部器官缺失、体节紊乱、尾神经管闭合不全等，形态总评分明显低于溶剂对照（P<0.05），畸形率为88.24%，畸形类型和畸形率与文献报道一致。结果表明本研究所建立的兔着床后全胚胎培养方法是成功的。二、三种纳米材料对体外小鼠胚胎生长发育的影响取GD8.5的ICR小鼠胚胎，采用小鼠WEC方法，分别用60nm二氧化钛、60nm聚苯乙烯以及不规则形状的单壁碳纳米管在64.0、160.0、400.0μg/mL剂量下培养48h后收获胚胎，解剖镜下观察监测终点,采用Van小鼠胚胎发育评分法对小鼠胚胎进行评分，研究其对小鼠体外胚胎的生长发育影响。1.纳米二氧化钛（Nano-TiO2）Nano-TiO2在受试浓度下，卵黄囊直径、胚胎颅臀长、头长三项生长指标和体节数与对照组间没有明显差异，但畸形率与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05），而且随着剂量增加畸形率升高，有明显的剂量-反应趋势。在64.0μg/mL浓度开始就观察到胚胎出现发育毒性表现，卵黄囊血循环、体位、心脏、尾神经管、中脑、后肢的评分低于对照组（P<0.05）；中剂量组进一步出现后脑发育较差，评分低于对照组（P<0.05）；高剂量组除上述组织器官外，头部视觉和嗅觉器官评分明显低于其他各组，而且总形态学评分低于其余各组，与对照组相比有统计学差异（P<0.05）。表明随着剂量增加，受影响的胚胎组织器官增多；胚胎组织器官形态分化的受影响程度也有一定加重。2.纳米聚苯乙烯（Nano-PS）60nm Nano-PS在64.0、160.0、400.0μg/mL三种浓度下对小鼠胚胎各生长指标情况没有出现明显的影响；畸形率有增加但与对照组比较差异无统计学意义；各剂量组形态学分化评分均低于对照组但没有统计学差异，主要影响心脏、脑、听觉器官及后肢。3.单壁碳纳米管（SWCNTs）单壁碳纳米管在64.0、160.0、400.0μg/mL受试剂量下，中剂量组严重影响小鼠胚胎体节发育，形态学分化评分也明显降低，畸形发生明显高于其他剂量组，多个器官出现畸形。出现的发育毒性主要表现为：卵黄囊循环血管发育较差、体位翻转不全、体节紊乱、心包积液或发育不良、听觉视觉鳃弓发育不良、后肢芽缺失。低剂量和高剂量组的生长发育指标和组织器官形态分化指标与对照组没有统计学差异。4.三种纳米材料对小鼠发育毒性的比较Nano-TiO2在64.0μg/mL浓度开始就观察到胚胎出现发育毒性；单壁碳纳米管在160.0μg/mL剂量下出现胚胎发育毒性；而Nano-PS在受试剂量下能明显影响少数器官。从致畸性来说，Nano-TiO2在64.0μg/mL浓度就开始与对照组有统计学差异，并有明显的剂量-反应趋势；单壁碳纳米管仅在160.0μg/mL剂量组与对照组有统计学差异，无明显剂量-反应趋势，但致畸发生率和致畸严重程度均比Nano-TiO2高。从致畸类型来说，Nano-TiO2明显影响卵黄囊循环，主要引起中脑、心脏、视觉、嗅觉器官和尾神经管畸形，60nm PS主要影响心脏、脑、听觉器官及后肢，SWCNTs能引起几乎所有的器官畸形，包括脑部、心脏、面部器官、尾神经管等。三、纳米二氧化钛对小鼠和兔体外胚胎发育毒性的比较Nano-TiO2在160.0、400.0、1000.0μg/mL剂量下对兔胚胎头长、体节数的生长发育情况没有出现明显的影响，160.0、400.0μg/mL剂量畸形率与对照组有统计学差异，无明显剂量-反应关系趋势；各组的形态学评分均低于对照组，但均无统计学差异。而小鼠各剂量组畸形率与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）；从致畸类型和受影响的组织器官兔和小鼠相近，但小鼠受影响的组织器官更多。通过研究，主要获得以下成果：结论：（1）在国内首先成功引进建立了兔着床后全胚胎培养方法。（2）三类纳米材料均不影响小鼠胚胎存活，对胚胎生长指标没有明显影响，但Nano-TiO2在64.0μg/mL浓度就可引起体外小鼠胚胎致畸等发育毒性，并有明显的剂量-反应趋势；SWNCT在160.0μg/mL剂量可引起胚胎发育毒性，无明显剂量-反应趋势，但致畸发生率和致畸严重程度均比Nano-TiO2高；而Nano-PS在受试剂量下仅对形态分化有一定迟缓作用，其发育毒性有待进一步验证。（3）Nano-TiO2在受试剂量下均可引起兔和小鼠体外胚胎致畸等发育毒性，毒作用特点相近，但从发生率和引起毒性的剂量及严重性上小鼠比兔似更敏感。
吴成秋[6]（2010）在《居室空气甲醛与苯污染的生殖和胚胎发育毒性及其作用机制研究》文中研究说明目的监测新装修居室空气甲醛、苯系物、挥发性总有机物的污染现状及变化趋势,调查新装修居室内新婚女性的月经功能和妊娠状况,探讨装修居室空气污染对女性生殖功能的影响。方法随机对323个符合条件的住进新装修住房的新婚女性和72个未住进装修新房的新婚女性进行生殖功能调查,并监测她们装修居室空气中甲醛、苯、挥发性总有机物（TVOCs）的污染状况和变化趋势,1、使用自己设计的调查表,调查395个女性的月经状况、妊娠过程及结局和相关的危险因素,并追踪观察1.5年-3年；2、分别在她们入住新房时、入住3个月和6个月三个不同时间点监测装修居室空气中甲醛、苯系物、挥发性总有机物的浓度。污染物的监测采用《室内空气质量标准》规定的方法进行；3、根据她们居室空气中污染物的浓度是否超过《室内空气质量标准》,将调查对象分为暴露组和非暴露组,比较两组月经异常和妊娠结局异常的发生率；4、对可能影响女性月经和生殖功能的相关因素进行Logistic回归分析。结果1、居室装修材料种类多,能产生空气污染物的主要有人造板材、各种油漆、胶水、粘合剂、复合地板等。2、装修居室空气中甲醛浓度在刚入住时超标率为57.89%,在入住3个月和6个月时超标率分别为50.15%和25.39%,三个时间点比较差异有显着性（P<0.05）；苯、甲苯、二甲苯入住时的超标率分别达41.18%、58.82%和51.70%,第3、6个月苯系物浓度及超标率均低于刚入住时的浓度（P<0.05）,到第6个月时,苯的超标率下降到5.57%,甲苯、二甲苯的超标率为21.98%和24.15%；装修居室内苯系物的超标率较甲醛的超标率低（P＜0.05）; TVOCs的超标率在刚入住时达60.06%,第3、6个月TVOCs浓度及超标率也均低于刚入住时的浓度（P<0.05）,到第6个月时,仍然有29.93%的住户室内空气TVOCs浓度超过室内空气质量标准。3、暴露于装修居室空气污染的女性,其月经异常（包括月经周期异常、经期异常、经量异常和痛经）的发生率均高于非暴露组（P<0.05）；自然流产发生率高于非暴露组的发生率（P<0.05）,其相对危险度为2.35,95% CI为1.09-5.05,妊娠合并症的发生率高于非暴露组（P<0.05）,RR为1.86,95% CI为1.22-2.84,出生缺陷的发生率为8.87%,高于未暴露组的发生率（P<0.05）,RR为2.43,95% CI为1.06-5.58。4、经Logistic回归分析显示,影响女性月经和生殖功能的主要危险因素是装修居室空气中甲醛、苯系物、TVOCs、居室通风差、每天在家的时间长,另外,饮酒也是一个主要的危险因素。结论1、装修居室空气甲醛、苯系物、TVOCs污染较严重,随着时间的推移,污染物浓度逐渐降低；2、装修居室空气污染可对女性的月经和生殖功能产生危害,导致月经异常、自然流产率上升、出生缺陷增高。目的研究甲醛和苯对体外培养胚胎的发育毒性,探讨甲醛和苯联合毒作用类型。方法1、采用体外全胚胎培养模型,8.5d小鼠胚胎与含苯、甲醛的小鼠即刻离心血清共培养48hr,观察苯和甲醛单独及联合染毒对小鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化的影响。2、分离12d龄小鼠胚胎的肢芽和中脑细胞,应用微团培养技术,观察苯和甲醛对胚胎肢芽细胞、中脑细胞分化和增殖的影响。3、应用恒温旋转培养装置对12d孕龄小鼠胚胎前肢芽进行培养,观察不同浓度的苯和甲醛对肢芽发育和分化的影响。结果1、在空白和溶剂对照组8.5d龄胚胎体外培养24-48hr后与体内同期发育的胚胎发育一致（P>0.05）。2、甲醛和苯对小鼠胚胎发育具有明显影响,能影响体外器官形成期的小鼠胚胎生长发育且呈剂量-效应关系：苯浓度为1000μmol/L时,各生长发育指标和组织器官形态分化指标均受到抑制,未见正常发育胚胎,畸胎发生率增高,可见中枢神经系统畸形,主要为中脑、后脑、前脑形态异常、体位异常及小头等,并出现胚胎死亡。甲醛能诱发神经管闭合不全、体位、胸部、心脏形态异常。3、苯和甲醛联合作用时,（10+3）μmol／L组即能影响胚胎生长发育,随着苯和甲醛的联合染毒浓度的增加,胚胎卵黄囊直径、颅臀长、头长、体节数均明显下降,胚胎形态分化指标评分值下降,畸胎和死亡率增高。主要表现为头部异常（脑膨出、脑裂、神经管未闭）、心脏发育异常（停留在心管期和心包积液的出现）、肢芽小、眼、耳、鳃弓异常。苯和甲醛可致胚胎脏层VYS内皮细胞结构紊乱,排列不规则,细胞失去极性,出现变性、肿胀,胞浆出现空泡。3、苯与甲醛对胚胎的致死效应：27μmol/L甲醛致胚胎死亡率为11.1%,加苯10、100μmol/L后,死亡率分别上升到33.3%和44.4%,9μmol/L甲醛对胚胎致畸率为11.1%,加苯10、100μmol/L后,畸胎率分别为上升到44.4%和88.9%。可见二者对胚胎的毒性作用和致畸作用强度远超过二者单独的效应之和,表现为协同毒作用。4、苯和甲醛对小鼠胚胎中脑及肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用,并呈较明显的剂量-效应关系；对细胞分化的抑制作用大于对增殖的抑制作用。苯对肢芽细胞的半数分化抑制浓度（IDC50）和半数增殖抑制浓度（IPC50）分别为89.93μmol/L和396.77μmol/L,对中脑细胞的IDC50和IPC50分别为116.29μmol/L和831.46μmol/L。甲醛对肢芽细胞的IDC50和IPC50分别为14.63μmol/L和27.67μmol/L,对中脑细胞IDC50和IPC50分别为16.46μmol/L和26.92μmol/L。5、苯和甲醛都可抑制前肢芽器官的发育和分化,并随着浓度的增加,肢体中各软骨的发育分化越差,Neubert评分越少,在高浓度时,可出现掌指骨缺失、软骨原基均未分化、并有畸形；爪骨比长骨受损更严重。结论1、苯、甲醛对小鼠胚胎具有直接的胚胎毒性和致畸性,二者可抑制胚胎肢芽器官的发育和分化；抑制胚胎中脑及肢芽细胞的分化和增殖；2、苯和甲醛能损害胚胎VYS结构和功能,诱导胚胎细胞变性和死亡；3、苯和甲醛对小鼠胚胎的联合毒效应表现为协同作用。目的探讨甲醛与苯对小鼠的生殖毒性和胚胎发育毒性及其作用机制,为全面评价甲醛和苯的生殖及胚胎发育毒性提供试验及理论依据。方法昆明种小鼠雄性54只,雌性108只,雌、雄性大鼠分别随机等分为9组,雄鼠每组6只,雌鼠每组12只。分别吸入染毒：甲醛为3mg／m3、6mg／m3、9mg／m3,苯为5mg／m3、10mg／m3、15mg/m3,甲醛&苯（3+5）mg／m3、（6+10）mg／m3及吸入染毒柜内空气的对照组,各组每天染毒2hr。雄鼠连续染毒7d,雌鼠于雄鼠染毒后的第28d开始,连续染毒7d。雌鼠染毒完后与染毒了的雄鼠过夜交配,观察交配率,0d-6d期间观察雌鼠受孕及流产情况。雄鼠交配后处死,测睾丸脏器系数、精子死亡率和畸形率；一侧睾丸做常规病理学切片、观察睾丸的形态结构学变化,另一侧睾丸匀浆离心,取上清液用分光光度法检测NO、T-AOC、Ca2+含量、ATPase活性。孕鼠在孕7d-15d再吸入染毒,观察孕鼠的体重,于孕18d处死孕鼠,收集血液分离血清,采用酶联免疫竞争法检测血清中雌二醇和孕酮含量；观察胚胎的生长发育状况、死胎和吸收胎鼠数及畸型率；计算心、肾、脾、肝和卵巢的脏器系数；卵巢和胎盘并进行常规组织病理学观察,采用免疫组织化学方法检测胎盘雌激素受体的表达。结果1、各组雌雄小鼠染毒期间活动、食量未见明显变化,被毛光泽,无死亡与中毒现象。合笼交配频繁,交配率无变化,合笼交配率为100%。对照组受孕率均为100.00%,低、中浓度的单独甲醛或单独苯染毒组小鼠的受孕率、流产率与对照组比较差异均无显着性（P>0.05）,但高浓度的单一毒物组及联合染毒组小鼠的流产率较对照组增高（P<0.05）。2、高浓度苯、甲醛及联合染毒组雄性小鼠的体重增长与对照组比较差异有显着性（P<0.05）。染毒后第一个3d,各组孕鼠的体重增长率差异无显着性（P>0.05）,染毒后的第2个和第3个3d,中、高剂量甲醛组、苯染毒组和两个联合染毒组孕鼠的体重增长率低于对照组（P<0.05）；甲醛和苯联合染毒组孕鼠在孕10-12d、孕13-15d的体重增长率低于相同浓度的单独甲醛或单独苯染毒组（P<0.05）。3、小鼠睾丸脏器系数随染毒剂量增加而降低,低苯组、低甲醛组分别与对照组比较差异均无显着性（P>0.05）,其它各染毒组与对照组比较差异有显着性（P<0.01）,并存在明显的量-效关系。苯和甲醛染毒组及二者联合染毒组精子死亡率、畸型率、睾丸细胞凋亡率均高于对照组（P<0.01）,且量-效关系明显；甲醛和苯对小鼠睾丸脏器系数、精子的致死致畸型及睾丸细胞凋亡的影响均有协同毒作用。4、对照组曲细精管形态规则,边缘完整,管壁内精原母细胞、初级精母细胞和次级精母细胞由外至内排列紧密,层次分明清晰,管腔位于中央处,腔内可见大量成熟的精细胞。染毒组可见曲细精管形态不规则,边缘极不完整,大小不一,管壁内的细胞由外至内排列不紧密,精原母细胞、初级精母细胞和次级精母细胞有些变性,甚至缺失,层次不清晰,管腔偏位或没有管腔,部分管腔内见少量发育成熟的精子,有些管腔内未见成熟精子。染毒浓度越高,病理损害越明显。5、染毒组小鼠睾丸的T-AOC、ATPse活性随染毒剂量增加而降低（P<0.01）,并且存在明显的剂量-效应关系；NO、Ca2+含量随染毒剂量的增加而增高（P<0.01）；联合染毒组小鼠睾丸的T-AOC、ATPse活性、NO、Ca2+含量与同浓度的单一毒物组比较差异均有统计学意义（P<0.01）,甲醛和苯对T-AOC、ATP酶、NO、Ca2+的联合影响表现为协同效应。6、各组孕鼠的心、肾、脾脏器系数均无差异（P>0.05）；肝脏和卵巢重量随染毒剂量的增加而降低,中、高剂量染毒组肝脏和卵巢脏器系数低于对照组（P<0.05）；甲醛和苯的联合染毒组肝脏、卵巢的脏器系数较相同剂量的单一甲醛或苯组更低（P<0.05）,甲醛×苯对肝脏和卵巢的脏器系数的影响表现为协同毒作用（P<0.05）。7、中、高浓度甲醛组、苯染毒组和联合组吸收死胎率、畸胎率均高于对照组（P<0.05）,甲醛和苯联合染毒组的吸收死胎率、畸胎率均高于相同浓度的单一毒物组的吸收死胎率、畸胎率（P<0.05）；中、高浓度甲醛、苯染毒各组和二者联合染毒组均能抑制胎鼠的生长发育,并有剂量-效应关系,胎鼠的体重、身长、尾长均低于对照组（P<0.05）,高浓度甲醛、苯染毒组胎盘的重量也较对照组低（P<0.05）；联合染毒组胎鼠的体重、身长、尾长及胎盘重量均低于同浓度单一甲醛或苯染毒组（P<0.05）。二者对胚胎生长发育的影响也表现为协同毒效应（P<0.05）。8、空气对照组卵巢皮质中各级卵泡发育正常,苯染毒组闭锁卵泡增多、次级卵泡闭锁率升高、但各级卵泡结构未见明显异常；9、对照组小鼠胎盘迷路滋养层含有丰富的子体血管和母体血窦；海绵滋养层由滋养层细胞、糖原细胞及母体血窦共同组成,糖原细胞内糖原多、呈块状或粗大颗粒；巨细胞滋养层由巨细胞和少量的母体血窦组成。苯处理组滋养层细胞变小、紧密排列成行或成团、大部分细胞间界线不清、胞质红染、核固缩、糖原细胞减少甚至消失,血窦腔隙变窄、数量减少；巨细胞层细胞个别脱落,大部分正常染色质浓缩,少数有核内包含体。10、各组孕鼠血清中E2水平及胎盘ERβ表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）；中、高浓度的甲醛组、苯染毒组及甲醛与苯联合染毒组孕鼠血清孕酮水平均低于对照组（P<0.01）,血清中孕酮水平与甲醛或苯染毒剂量存在一定的剂量-效应关系。联合染毒组孕酮水平低于同浓度的单一毒物染毒组（P<0.01）。结论1、甲醛和苯可抑制小鼠的生长,损伤小鼠的睾丸生殖细胞,使精子的死亡率和畸形率增加,甲醛和苯有协同毒效应；2、甲醛和苯具有胚胎发育毒性和致畸性：可导致使胚胎的生长发育延迟、畸形甚至死亡；3、苯和甲醛可能是通过降低睾丸生殖细胞的抗氧化能力、抑制ATP酶活性、钙离子失衡等方式而导致睾丸生殖细胞损伤；可能是通过损伤胎盘的结构、抑制孕酮的分泌及改变胎盘雌激素受体的表达而引起胚胎发育异常。
韩佳寅,梁爱华[7]（2010）在《全胚胎培养技术及其应用研究进展》文中研究说明体外全胚胎培养技术是以体外胚胎替代整体动物进行实验的技术,主要用于研究早期器官的生长发育和化学物质的胚胎毒性及造成胚胎毒性的机制等。本文就大鼠和小鼠的全胚胎培养技术及其应用进行综述,着重介绍了全胚胎培养技术的发展概况,应用全胚胎培养技术的注意事项及全胚胎培养技术在生长发育研究、环境污染物和重金属的胚胎毒性研究、药物安全性评价、中药的胚胎毒性及其机制研究领域的应用,并就该技术在中药生殖毒性研究中的应用前景进行了讨论。
刘鹏[8]（2009）在《温度及酒精对牛卵母细胞和早期胚胎凋亡的影响》文中研究表明对卵母细胞和胚胎的凋亡开展研究,有助于我们把握胚胎发育的规律,从而有目的地调控凋亡,使其向着人类需要的方向发展。尤其是在体外培养过程中,通过对凋亡的抑制,可以获得大量的优良胚胎,加速动物育种进程,同时对临床上治疗不孕、衰老等疾病,提供理论和实验依据。影响牛卵母细胞和胚胎凋亡的因素有许多,本试验主要分析了酒精和温度对卵母细胞和早期胚胎凋亡的影响,并对核移植的供体细胞进行凋亡检测,以及对核移植胚胎和体外受精胚胎的凋亡率做出对比。本试验结果如下:1.本试验首次研究了酒精浸泡卵巢对卵母细胞和胚胎发育的影响。试验表明,酒精洗涤卵巢可以有效预防污染,但洗涤要快速、卵巢接触酒精的时间尽可能缩短。与对照组相比,酒精浸泡10min对刚收集的卵母细胞影响不明显（P>0.05）,但对随后卵母细胞成熟和孤雌激活胚胎的发育影响显着（P<0.05）。正常培养的卵母细胞和胚胎即存在凋亡,酒精浸泡会加重凋亡,且随着时间增加凋亡率升高,卵裂率和囊胚发育率下降。2.本试验首次研究了4℃和室温对成熟卵母细胞凋亡的影响。试验表明,温度的变化会引发卵母细胞的凋亡。4℃和室温（25℃）处理成熟卵母细胞1h,染色分析发现两组的卵母细胞凋亡率与对照组相比均差异极显着（P<0.01）。表明卵母细胞和胚胎离开培养箱在环境中进行操作,会对其造成一定程度的不利影响,增加了凋亡的比例。3.温度的变化也会引发体外受精胚胎的凋亡。与对照组相比,生理范围内的热应激（36.5℃40.5℃）都会引起胚胎凋亡,且随着温度的升高和胚胎发育时期增加,凋亡率升高。热应激引发的凋亡一般发生在4-cell以后,4-cell期前很少发生。凋亡是胚胎发育过程中的必要机制,在清除热应激中受损的细胞方面发挥重要作用。4.供体细胞的质量是影响核移植效率的关键之一。因此有必要在进行核移植前对供体细胞质量进行检测。本试验采用短期培养（4代）的西门塔尔牛成纤维细胞做供体细胞,生物学和凋亡检测均表明,第3代和第4代的细胞形态正常,活率在90%以上,凋亡率在2%以下。5.核移植胚胎和体外受精胚胎凋亡率比较,在4-cell期之前没有显着差异,8-cell期开始一直持续到囊胚期核移植胚胎的凋亡率较体外受精的高,差异显着（P<0.05）。核移植效率低可能与胚胎发生较多的凋亡有关,而凋亡的引发则可能是由于核移植在体外操作过程复杂、时间较长,以及每一步操作所用试剂、液体等都会对卵母细胞和胚胎产生不利影响。
彭树新[9]（2009）在《桑寄生的遗传毒性与胚胎发育毒性实验研究》文中认为目的:探讨中药桑寄生水煎液的遗传毒性和胚胎发育毒性及作用机制,为桑寄生的临床安全用药提供理论依据。方法:1.遗传毒性试验:①急毒试验检测桑寄生对昆明小鼠的最大给药量。②昆明孕鼠30只,随机分为5组,6只/组:桑寄生高、中、低剂量组（40g/kg、20g/kg、10g/kg）和阴性对照组（normal sodium,NS）（0.4ml/20g）白E12天起连续灌胃5天。阳性对照组自E15天起腹腔注射环磷酰胺（cvclophosphamide.CP）（40mg/kg·d）,连续2天。E16天处死各组小鼠,骨髓和胚胎肝转移微核试验检测孕鼠骨髓、胎鼠肝脏中嗜多染红细胞微核率。③昆明雄性小鼠30只,分组及用药剂量同上。各组小鼠均连续用药5天,于第一次给药后第35d处死,精子畸形试验检测精子畸形率。2.胚胎发育毒性试验:①急毒试验检测桑寄生对SD大鼠的最大给药量。②SD孕鼠36只,随机分为6组,6只/组。阴性对照组（NS,2ml/200g）和桑寄生高、中、低剂量组（40g/kg、20g/kg、10g/kg）于E6～18天每天灌胃一次,阳性对照2组（a.环磷酰胺,12.5mg/kg,于E13天腹腔注射一次;b.维甲酸,100mg/kg,于E10天灌胃一次）。各组孕鼠均于E18天处死取胚胎,记录吸收胎数、活胎数、死胎数。观察胚胎外观畸形发生情况,并测量胎鼠体重、身长、尾长。③免疫组化方法检测胚胎脑和脊髓组织的Pax3、Cx43蛋白的表达;TUNEL法荧光标记检测胚胎脑和脊髓组织细胞凋亡情况。结果:1.遗传毒性试验:①桑寄生水煎液的昆明小鼠灌胃最大给药量为80g/kg。②桑寄生水煎液10g/kg剂量组的胎鼠肝微核率、孕鼠骨髓微核率和雄鼠精子畸形率与阴性对照组相比,均无显着性差异。20g/kg剂量组诱发的胚胎肝微核率较阴性对照组显着升高（P＜0.05）,孕鼠骨髓微核率和雄鼠精子畸形率与阴性对照组相比,无显着性差异。而40g/kg剂量组诱发的胎鼠肝微核率、孕鼠骨髓微核率、精子畸形率均较阴性对照组显着升高（P＜0.05）。2.胚胎发育毒性试验:①桑寄生水煎液的SD大鼠灌胃最大给药量为80g/kg。②桑寄生水煎液10g/kg、20g/kg剂量组孕鼠的胚胎植入数、吸收胎率及死胎率与阴性对照组相比,均无显着性差异。胎鼠体重、身长、尾长与阴性对照组相比,无显着性差异。40g/kg剂量组孕鼠的植入胚胎数较阴性对照组显着减少（P＜0.05）,胎鼠体重、身长、尾长较阴性对照组显着性减少（P＜0.05）,但吸收胎率与死胎率与阴性对照组无显着性差异。三个剂量组均无外观畸形发生。③桑寄生水煎液三个剂量组胚胎脑和脊髓组织切片Pax3、Cx43蛋白表达平均灰度值与阴性对照组相比,均无显着性差异。桑寄生水煎液10g/kg、20g/kg剂量组胚胎脑和脊髓组织细胞凋亡指数与阴性对照组无显着性差异。40g/kg剂量组凋亡指数较阴性对照组增高（P＜0.05）。结论:1.桑寄生水煎液的昆明小鼠和SD大鼠灌胃的最大给药量均为80g/kg。2.桑寄生水煎液在低剂量时（相当于人临床用量33.3倍）对成年小鼠与胎鼠均无遗传毒性,中剂量（相当于人临床用量66.7倍）仅对胎鼠有潜在的遗传毒性。高剂量（相当于人临床用量133.3倍）对成年小鼠与胎鼠均有潜在的遗传毒性。3.桑寄生水煎液各剂量组均对大鼠胚胎无致畸作用。中、低剂量对大鼠胚胎发育无毒性作用,高剂量有胚胎毒性作用。4。桑寄生水煎液各剂量组均对大鼠胚胎脑和脊髓组织的Pax3、Cx43蛋白表达无影响。高剂量可引起胎鼠脑组织内凋亡的细胞数增加,这可能是引起胎鼠发育迟滞的原因之一。5.提示孕妇在服用桑寄生时,避免用药剂量过高。
肖凯,严光焰,王莉,刘玉清,彭成,段嘉川,扈正桃,李宏霞[10]（2008）在《应用大鼠体外胚胎培养模型研究生草乌对胚胎发育的影响》文中提出目的探讨生草乌对胚胎发育的毒性作用及机制。方法应用大鼠着床后体外全胚胎培养模型,将9.5dSD大鼠胚胎与含不同浓度（终浓度分别为:0、0.63、1.25、2.5、5mg生药/mL）生草乌的大鼠即刻离心血清共培养48h,观察其对大鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化的影响。结果随着生草乌剂量增加,胚胎生长发育和器官分化的各项指标均呈现下降趋势,有一定的剂量-效应关系。生草乌最大无作用剂量为1.25mg生药/mL,2.5mg生药/mL以上剂量可诱发卵黄囊生长和血管分化不良、生长迟缓及形态分化异常,严重者出现体节紊乱、小头、心脏发育迟滞（心小,停留在心管期）及心脏空泡等。结论较高剂量生草乌对体外培养大鼠胚胎具有一定的毒性作用,建议孕妇妊娠期间（特别是妊娠前3个月）慎用或禁用草乌。
二、应用植入后大鼠体外全胚胎培养研究酒精对胚胎发育的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、应用植入后大鼠体外全胚胎培养研究酒精对胚胎发育的影响（论文提纲范文）
（1）利用全胚胎和微团培养模型评价硝酸铈的发育毒性（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与细胞 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 植入后全胚胎培养试验 |
| 1.3.1 全胚胎培养 |
| 1.3.2 BALB/c 3T3细胞增殖活性检测 |
| 1.3.3 发育毒性预测 |
| 1.4 微团培养试验 |
| 1.4.1 微团培养 |
| 1.4.2 微团细胞增殖分化检测 |
| 1.4.3 胚胎毒性预测 |
| 1.5 数据统计和分析 |
| 2结果 |
| 2.1利用全胚胎培养模型评价硝酸铈的发育毒性 |
| 2.1.1硝酸铈对胚胎生长的影响 |
| 2.1.2硝酸铈对胚胎发育的影响 |
| 2.1.3全胚胎培养模型对硝酸铈发育毒性的评价 |
| 2.2 利用微团培养模型评价硝酸铈的发育毒性 |
| 2.2.1硝酸铈对肢芽细胞增殖和分化的影响 |
| 2.2.2微团培养模型对硝酸铈发育毒性的评价 |
| 3 讨论 |
（2）母体糖尿病通过β-羟丁酸导致神经管畸形的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 母体糖尿病致鼠胚NTDs模型的建立及糖尿病孕鼠血清、胚胎脑组织BHB含量测定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验器材 |
| 1.4 主要试剂配置 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 腹腔注射STZ建立糖尿病鼠胚NTDs模型条件摸索 |
| 2.2 糖尿病孕鼠血糖含量测定 |
| 2.3 正常胚胎与糖尿病致NTDs胚胎形态图 |
| 2.4 正常胚胎与糖尿病致NTDs胚胎HE染色结果 |
| 2.5 糖尿病孕鼠血清BHB含量测定 |
| 2.6 糖尿病孕鼠致NTDs胚胎脑组织BHB含量测定 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 体外全胚胎培养检测β-羟丁酸对神经管发育的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验器材 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 E8.5 正常胚胎体外培养48h后胚胎发育情况 |
| 2.2 高浓度BHB体外全胚胎培养诱导NTDs |
| 2.3 用高浓度BHB血清培养的胚胎脑组织中BHB含量测定 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 β-羟丁酸导致神经管畸形的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 主要试剂配制 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 糖尿病致NTDs胚胎脑组织中HDAC1、HDAC3及H3K27ac的表达水平 |
| 2.2 高BHB对 HT-22 细胞HDAC1、HDAC3及H3K27ac表达水平的影响 |
| 2.3 糖尿病致NTDs胚胎脑组织中Mest的转录水平 |
| 2.4 糖尿病致NTDs胚胎脑组织中MEST及成熟的LRP6 的表达水平 |
| 2.5 高BHB处理的HT-22细胞过表达HDAC1、HDAC3后H3K27ac、MEST及成熟的LRP6的表达水平 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 母体糖尿病致胎儿神经管畸形研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（3）利用小鼠体外全胚胎培养模型评估神经管畸形发生的机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 小鼠体外WEC平台的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验设备 |
| 1.4 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 E7.0 小鼠体外培养5天 |
| 2.2 E8.5+48hrs卵黄囊血循环以及胚胎发育 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 利用WEC建立丙戊酸、酒精以及stavudine致 NTDs模型并研究其机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器与器械 |
| 1.4 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 VPA、Alcohol以及stavudine诱导胚胎形态学异常 |
| 2.2 组织切片分析VPA、Alcohol和 stavudine诱导NTDs胚胎头部结构变化 |
| 2.3 免疫组化检测 VPA、Alcohol 与 stavudine 诱导胚胎增殖与凋亡表达水平 |
| 2.4 VPA、Alcohol 以及 stavudine 诱导 NTDs 胚胎 PCNA 与 CC3 蛋白水平变化 |
| 2.5 组织切片分析VPA、Alcohol和 stavudine诱导NTDs胚胎卵黄囊结构变化 |
| 2.6 定性分析VPA、Alcohol和 stavudine诱导NTDs胚胎卵黄囊PCNA与 CC3 蛋白水平变化 |
| 2.7 定性分析VPA、Alcohol和 stavudine诱导NTDs胚胎头部PCNA与 CC3 蛋白水平变化 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 利用小鼠WEC建立高糖诱导神经管畸形模型及二甲双胍干预的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂、实验设备及试剂配制 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 高糖诱导神经管畸形模型建立 |
| 2.2 Metformin 干预高血糖诱导的胚胎 NTDs 的发生 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）神经管畸形动物模型中凋亡调控因子（miR-322、PCSK9）的表达规律及作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 :miR-322 通过沉默NOX4 减少细胞凋亡治疗神经管畸形 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 小鼠NTDs模型制备及组织样本收集 |
| 2.2.2 体外全胚胎培养 |
| 2.2.3 细胞复苏、培养和传代 |
| 2.2.4 细胞转染 |
| 2.2.5 RNA pull down实验 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告实验 |
| 2.2.7 TUNEL实验 |
| 2.2.8 细胞、组织中总RNA和 microRNA提取 |
| 2.2.9 RNA定量、逆转录及实时荧光定量PCR |
| 2.2.10 蛋白质提取、定量及Western Blot实验 |
| 2.2.11 组织切片制备、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、免疫组化和免疫荧光染色 |
| 2.2.12 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 在ATRA诱导NTDs模型中mi R-322和NOX4 表达改变 |
| 3.2 NOX4是miR-322 新的靶基因且可以与miR-322 相互作用 |
| 3.3 miR-322 抑制NOX4 的翻译 |
| 3.4 miR-322 减少NOX4 诱导产生的细胞凋亡 |
| 3.5 体外miR-322 治疗可减少NTDs胚胎中的细胞凋亡 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :PCSK9 在大鼠NTDs中的表达规律及抑制PCSK9 增加NTDs发生风险的机制探究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠NTDs模型制备及组织样本收集 |
| 2.2.2 细胞复苏、培养和传代 |
| 2.2.3 组织总RNA提取 |
| 2.2.4 RNA定量、逆转录及实时荧光定量PCR |
| 2.2.5 蛋白质提取、定量及Western Blot实验 |
| 2.2.6 SBC115076与ATRA联用对大鼠NTDs发生率的影响实验 |
| 2.2.7 PCSK9~(-/-)鼠与ATRA联用对 NTDs 发生率的影响实验 |
| 2.2.8 血药浓度测定 |
| 2.2.9 脂质组学分析 |
| 2.2.10 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 PCSK9在NTDs大鼠胚胎发育过程中低表达 |
| 3.2 抑制PCSK9 表达可增加大鼠胚胎对ATRA的致畸敏感性 |
| 3.3 抑制PCSK9 可增加神经干细胞和NTDs胚胎组织的细胞凋亡 |
| 3.4 孕鼠血清及胎鼠脊髓组织脂质代谢分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本论文创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）兔着床后全胚胎培养方法和三种纳米材料对小鼠体外发育毒性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 兔着床后全胚胎培养方法的建立 |
| 一、材料与方法 |
| （一）实验材料 |
| （二）实验方法 |
| （三）统计学方法 |
| 二、实验结果 |
| （一）体外培养兔胚胎生长发育情况 |
| （二）阳性物甲氧基乙酸（MAA）对兔胚胎生长发育的影响 |
| 三、讨论 |
| 第二部分 三种纳米材料对体外小鼠胚胎生长发育的影响 |
| 一、纳米二氧化钛对体外小鼠胚胎生长发育的影响 |
| （一）材料与方法 |
| （二）实验结果 |
| （三）讨论 |
| 二、纳米聚苯乙烯对体外小鼠胚胎生长发育的影响 |
| （一）材料与方法 |
| （二）实验结果 |
| （三）讨论 |
| 三、单壁碳纳米管对体外小鼠胚胎生长发育的影响 |
| （一）材料与方法 |
| （二）实验结果 |
| （三）讨论 |
| 第三部分 兔与小鼠着床后全胚胎培养对纳米二氧化钛比较的初步研究 |
| 一、材料与方法 |
| （一）实验材料 |
| （二）实验方法 |
| （三）统计学方法 |
| 二、实验结果 |
| （一）Nano-TiO2对小鼠胚胎生长发育的影响（见第二部分） |
| （二）Nano-TiO2对兔胚胎生长发育的影响 |
| （三）Nano-TiO2对兔、小鼠胚胎生长发育的比较 |
| 三、讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（6）居室空气甲醛与苯污染的生殖和胚胎发育毒性及其作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 主要英文缩略语索引 |
| 居室空气甲醛与苯污染的生殖和胚胎发育毒性及其作用机制研究 |
| 第一章 装修居室空气污染对新婚女性生殖危害的流行病学研究 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 材料和方法 |
| 2.1 研究对象的选择 |
| 2.2 样本含量的估计 |
| 2.3 生殖流行病学调查问卷内容和调查方法 |
| 2.4 室内空气污染物的监测 |
| 2.4.1 监测分析仪器和试剂 |
| 2.4.2 现场监测和采样方法 |
| 2.5 室内微小气候的监测 |
| 2.6 居室空气污染对新婚女性月经和妊娠结局影响的LOGISTIC回归分析 |
| 2.7 质量控制 |
| 2.7.1 污染物的监测 |
| 2.7.2 调查员培训 |
| 2.7.3 资料核查、整理、录入计算机 |
| 2.7.4 相关生殖名词、术语的规范 |
| 2.8 统计分析方法 |
| 第三节 结果 |
| 3.1 研究对象的一般特征和信息的可靠性 |
| 3.2 室内装修装饰材料的材质类型分布情况 |
| 3.2.1 居室内家具及门窗、墙面等装修材料材质构成 |
| 3.2.2 居室内地面装饰材料的构成 |
| 3.2.3 居室内家具和装修材料使用油漆种类的构成 |
| 3.2.4 居室内墙面装饰用涂料分类构成 |
| 3.3 装修居室空气甲醛、苯系物和TVOCs的污染情况 |
| 3.3.1 居室空气中甲醛浓度的超标情况 |
| 3.3.2 居室空气中苯系物浓度的超标情况 |
| 3.3.3 居室空气中挥发性总有机物浓度的超标情况 |
| 3.4 居室空气污染对女性生殖和生育功能的影响 |
| 3.4.1 居室空气污染对新婚女性月经的影响 |
| 3.4.2 居室空气污染对新婚女性妊娠经过与结局的影响 |
| 3.4.3 新婚女性月经和妊娠结局影响因素的非条件Logistic回归分析 |
| 第四节 讨论 |
| 4.1 研究样本的代表性和调查信息的可靠性 |
| 4.2 居室内装修材料材质构成 |
| 4.3 新装修居室中甲醛、苯系物的污染状况 |
| 4.4 居室空气污染对女性生殖和生育功能的影响 |
| 4.5 本章研究之不足及进一步研究的设想 |
| 第五节 结论 |
| 第二章 甲醛和苯的体外胚胎发育毒性研究 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 动物 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.2 甲醛和苯对体外培养胚胎的发育的影响 |
| 2.2.1 即刻离心血清的制备 |
| 2.2.2 动物交配及胎龄确定 |
| 2.2.3 实验分组方法 |
| 2.2.4 胚胎的分离方法 |
| 2.2.5 体外全胚胎的培养与染毒处理 |
| 2.3 甲醛和苯对胚胎中脑和肢芽细胞的抑制作用 |
| 2.3.1 中脑细胞和肢芽细胞的制备 |
| 2.3.2 中脑细胞和肢芽细胞染毒浓度的设定及分组 |
| 2.3.3 细胞分化实验方法 |
| 2.3.4 细胞增值实验方法 |
| 2.4 甲醛和苯对胚胎肢芽器官发育和分化的影响 |
| 2.4.1 染毒浓度的设定及分组 |
| 2.4.2 肢芽培养及染毒处理 |
| 2.4.3 观察方法 |
| 2.5 统计分析 |
| 第三节 结果 |
| 3.1 甲醛和苯对体外培养胚胎生长发育的影响 |
| 3.1.1 体内与体外胚胎发育状况的比较 |
| 3.1.2 苯对小鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化的影响 |
| 3.1.3 甲醛对小鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化的影响 |
| 3.1.4 甲醛、苯对胚胎的致畸作用 |
| 3.1.5 苯和甲醛对小鼠胚胎的联合毒作用 |
| 3.1.6 苯和甲醛联合染毒对卵黄囊(VYS)组织结构的影响 |
| 3.2 苯和甲醛对小鼠胚胎肢芽细胞分化和增殖的影响 |
| 3.2.1 苯对小鼠胚胎肢芽细胞分化和增殖的影响 |
| 3.2.2 苯对小鼠胚胎中脑细胞分化和增殖的影响 |
| 3.2.3 甲醛对小鼠胚胎肢芽细胞分化和增殖的影响 |
| 3.2.4 甲醛对小鼠胚胎中脑细胞分化和增殖的影响 |
| 3.3 苯和甲醛对小鼠胚胎肢芽器官发育的影响 |
| 3.3.1 苯对小鼠胚胎前肢芽形态分化的影响 |
| 3.3.2 苯对小鼠胚胎前肢芽发育分化的影响 |
| 3.3.3 甲醛对小鼠胚胎前肢芽形态分化的影响 |
| 3.3.4 甲醛对小鼠胚胎前肢芽发育分化的影响 |
| 第四节 讨论 |
| 4.1 体外全胚胎培养方法的可靠性 |
| 4.2 苯和甲醛对体外培养胚胎的毒作用 |
| 4.3 苯和甲醛对体外培养胚胎的交互毒性作用 |
| 4.4 苯和甲醛对胚胎肢芽细胞的损伤作用 |
| 4.5 苯和甲醛对胚胎中脑细胞微团培养的作用 |
| 4.6 甲醛和苯对胚胎肢芽体肢芽器官的影响 |
| 4.7 苯、甲醛的胚胎发育毒作用方式 |
| 4.7.1 直接攻击胚胎细胞 |
| 4.7.2 破坏卵黄囊的结构和功能 |
| 第五节 结论 |
| 第三章 苯与甲醛对小鼠生殖毒性和胚胎发育毒性的研究 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 材料与方法 |
| 2.1 材料及实验动物 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 实验动物及分组 |
| 2.2 实验染毒浓度和染毒方法 |
| 2.3 雌、雄鼠的一般情况观察 |
| 2.4 雄鼠生殖功能损伤的检测方法 |
| 2.4.1 小鼠睾丸脏器系数测定 |
| 2.4.2 小鼠精子头畸变率和精子死亡率试验 |
| 2.4.3 苯和甲醛对小鼠睾丸组织病理学观察 |
| 2.4.4 分光光度法测定小鼠睾丸T-AOC |
| 2.4.5 分光光度法测定小鼠睾丸NO的含量 |
| 2.4.6 分光光度法测定Na~+-K~+-ATP、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性 |
| 2.4.7 分光光度法测定小鼠睾丸Ca~(2+)含量 |
| 2.4.8 睾丸细胞凋亡检测 |
| 2.5 甲醛和苯对小鼠胚胎发育的影响及其机制检测方法 |
| 2.5.1 孕鼠的处死及观察指标 |
| 2.5.2 孕鼠主要脏器系数的测定 |
| 2.5.3 胚胎的生长发育状况的观察 |
| 2.5.4 孕鼠卵巢和胎盘组织病理学检测 |
| 2.5.5 孕鼠雌激素分泌水平的检测 |
| 2.5.6 孕鼠孕激素分泌水平的测定 |
| 2.5.7 孕鼠胎盘雌激素受体蛋白表达水平的检测 |
| 2.6 统计分析 |
| 第三节 结果 |
| 3.1 甲醛和苯对小鼠一般情况及交配受孕的影响 |
| 3.2 苯和甲醛对雄性小鼠体重增长的影响 |
| 3.3 苯和甲醛对小鼠睾丸脏器系数和精子的影响 |
| 3.4 苯和甲醛对小鼠睾丸组织结构的损伤作用 |
| 3.5 甲醛和苯对小鼠睾丸T-AOC、ATP酶、C_A~(2+)的影响 |
| 3.6 甲醛和苯对孕小鼠体重增长百分率的影响 |
| 3.7 甲醛和苯对孕鼠肝、肾、脾和卵巢脏器系数的影响 |
| 3.8 甲醛和苯对孕鼠胚胎发育结局的影响 |
| 3.9 甲醛和苯对鼠胚胎生长发育的影响 |
| 3.10 甲醛和苯对血清中雌二醇和孕酮含量及雌激素受体表达的影响 |
| 3.11 孕鼠卵巢组织病理学观察 |
| 3.12 孕鼠胎盘组织病理结构观察 |
| 第四节 讨论 |
| 4.1 对小鼠生长发育状况及受孕、流产的影响 |
| 4.2 对小鼠精子的影响 |
| 4.3 对小鼠睾丸的影响 |
| 4.4 对孕鼠主要脏器的影响 |
| 4.5 对孕鼠胚胎的毒性 |
| 4.6 苯和甲醛对雄性小鼠生殖毒性的作用机制 |
| 4.6.1 抑制机体抗氧化能力,导致脂质过氧化损伤 |
| 4.6.2 抑制ATP酶的活性,使睾丸生殖细胞能量代谢障碍 |
| 4.6.3 使钙离子平衡失调,干扰细胞的第二信使 |
| 4.7 甲醛和苯的胚胎毒作用机制 |
| 4.7.1 损伤孕鼠卵巢的结构与功能 |
| 4.7.2 抑制胎盘的发育、损伤胎盘的结构,从而导致胚胎发育异常 |
| 4.7.3 干扰孕鼠孕激素的分泌和雌激素受体的表达 |
| 4.8 研究不足之处及进一步研究设想 |
| 第五节 结论 |
| 参考文献 |
| 附调查表 |
| 综述 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的论文、课题及编写的教材 |
（7）全胚胎培养技术及其应用研究进展（论文提纲范文）
| 1 WEC技术及其发展概况 |
| 1.1 培养方法 |
| 1.2 胚胎期的选择 |
| 1.3 培养基和气体条件 |
| 1.4 胚胎发育评价方法 |
| 2 WEC中应注意的问题 |
| 2.1 培养温度、时间和pH |
| 2.2 考虑母体代谢 |
| 2.3 麻醉剂的替代应用 |
| 2.4 有机溶剂的选择 |
| 3 WEC技术在生长发育和毒理学中的应用 |
| 3.1 生长发育研究 |
| 3.2 环境污染物和重金属的胚胎毒性研究 Hunter |
| 3.3 药物的安全性评价 |
| 3.4 中药的胚胎毒性及其机制研究 |
| 4 结语 |
（8）温度及酒精对牛卵母细胞和早期胚胎凋亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 凋亡概述 |
| 1.1.1 卵母细胞和胚胎的凋亡 |
| 1.1.2 凋亡的调控因素 |
| 1.1.3 凋亡的检测方法 |
| 1.1.4 凋亡的生物学意义 |
| 1.2 酒精对卵母细胞和胚胎的影响 |
| 1.3 温度对卵母细胞和胚胎的影响 |
| 1.3.1 热应激引起的胚胎超微结构的变化 |
| 1.3.2 热应激引发卵母细胞和胚胎凋亡并阻滞发育的机理 |
| 第二章 酒精对牛卵母细胞凋亡的影响分析 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 主要仪器设备 |
| 2.1.2 主要试剂及配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 卵母细胞的采集 |
| 2.2.2 卵母细胞的体外成熟培养 |
| 2.2.3 卵母细胞的成熟鉴定 |
| 2.2.4 卵母细胞的孤雌激活及培养 |
| 2.2.5 试验设计 |
| 2.2.6 数据分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 酒精洗涤时间对卵母细胞凋亡的影响 |
| 2.3.2 酒精洗涤时间对卵母细胞成熟和发育的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 温度对牛卵母细胞和体外受精胚胎凋亡的影响分析 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 主要仪器设备 |
| 3.1.2 主要试剂及配制 |
| 3.1.3 精子来源 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 卵母细胞的采集、体外培养成熟 |
| 3.2.2 卵母细胞的体外受精 |
| 3.2.3 试验设计 |
| 3.2.4 数据分析 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.3.1 温度对成熟卵母细胞凋亡的影响 |
| 3.3.2 温度对体外受精胚胎凋亡的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 核移植供体细胞检测及NT 胚胎与IVF 胚胎凋亡率比较 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 主要仪器设备 |
| 4.1.2 主要试剂及配制 |
| 4.1.3 供体细胞来源 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 细胞复苏 |
| 4.2.2 细胞检测 |
| 4.2.3 核移植 |
| 4.2.4 核移植胚的激活及培养 |
| 4.2.5 试验设计 |
| 4.2.6 数据分析 |
| 4.3 试验结果 |
| 4.3.1 复苏后细胞的形态学特征 |
| 4.3.2 细胞检测结果 |
| 4.3.3 核移植胚胎与IVF 胚胎凋亡率的比较 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（9）桑寄生的遗传毒性与胚胎发育毒性实验研究（论文提纲范文）
| 1 桑寄生的遗传毒性与胚胎发育毒性实验研究 |
| 1.1 英汉缩略词对照表 |
| 1.2 中文摘要 |
| 1.3 英文摘要 |
| 1.4 前言 |
| 1.5 第一部分 桑寄生的遗传毒性研究 |
| 1.5.1 材料与方法 |
| 1.5.2 结果 |
| 1.5.3 讨论 |
| 1.5.4 结论 |
| 1.6 第二部分 桑寄生的胚胎发育毒性研究 |
| 1.6.1 材料与方法 |
| 1.6.2 结果 |
| 1.6.3 讨论 |
| 1.6.4 结论 |
| 1.7 参考文献 |
| 1.8 附图 |
| 2 中药胚胎毒性的研究进展(综述) |
| 3 致谢 |
| 4 已发表论文 |
（10）应用大鼠体外胚胎培养模型研究生草乌对胚胎发育的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 受试药物 |
| 1.1.2 实验动物 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.1.4 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 即刻离心血清 (immediately centrifugal serum, ICS) 的制备 |
| 1.2.2 实验分组 |
| 1.2.3 体外胚胎培养[7] |
| 1.2.4 胚胎发育终点观察 |
| 1.2.4.1 胚胎生长发育终点 |
| 1.2.4.2 胚胎组织器官形态分化终点 |
| 1.2.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 生草乌对体外培养大鼠胚胎生长发育的影响 |
| 2.2 生草乌对体外培养大鼠胚胎组织器官形态分化的影响 |
| 2.3 生草乌对体外培养大鼠胚胎的发育毒性 |
| 3 讨论 |
四、应用植入后大鼠体外全胚胎培养研究酒精对胚胎发育的影响（论文参考文献）
- [1]利用全胚胎和微团培养模型评价硝酸铈的发育毒性[J]. 刘青云,康陈萍,肖倩倩,郝卫东. 癌变·畸变·突变, 2021(03)
- [2]母体糖尿病通过β-羟丁酸导致神经管畸形的机制研究[D]. 王宇飞. 山西医科大学, 2021(01)
- [3]利用小鼠体外全胚胎培养模型评估神经管畸形发生的机制[D]. 奥瑞芳. 山西医科大学, 2020(11)
- [4]神经管畸形动物模型中凋亡调控因子（miR-322、PCSK9）的表达规律及作用机制的研究[D]. 刘玉思. 中国医科大学, 2020(01)
- [5]兔着床后全胚胎培养方法和三种纳米材料对小鼠体外发育毒性的研究[D]. 王卓. 第二军医大学, 2012(10)
- [6]居室空气甲醛与苯污染的生殖和胚胎发育毒性及其作用机制研究[D]. 吴成秋. 中南大学, 2010(11)
- [7]全胚胎培养技术及其应用研究进展[J]. 韩佳寅,梁爱华. 中国中药杂志, 2010(05)
- [8]温度及酒精对牛卵母细胞和早期胚胎凋亡的影响[D]. 刘鹏. 中国农业科学院, 2009(10)
- [9]桑寄生的遗传毒性与胚胎发育毒性实验研究[D]. 彭树新. 遵义医学院, 2009(07)
- [10]应用大鼠体外胚胎培养模型研究生草乌对胚胎发育的影响[J]. 肖凯,严光焰,王莉,刘玉清,彭成,段嘉川,扈正桃,李宏霞. 四川大学学报(医学版), 2008(03)