一、健脑复方对大鼠缺血性脑损伤的保护作用（论文文献综述）
高强[1]（2021）在《星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究》文中研究指明急性缺血性脑卒中（Acute Ischemic Stroke,AIS）,即急性脑梗死,中医称缺血性中风,是脑组织因局部的血流循环障碍缺血、缺氧而发生的软化、坏死。目前溶栓是治疗缺血性卒中急性期最快、最有效的方法,但由于适应证严格、时间窗短、出血和再灌注损伤风险高,其临床效果受到限制。基础与临床研究证实,中医药治疗中风独具优势。中医认为痰热腑实证是缺血性中风急性期最为常见的证型,而化痰通腑法代表方星蒌承气汤是治疗中风急性期痰热腑实证的代表性方剂。星蒌承气汤“脑病治肠”、“上病治下”的中医理论与现代医学提出的“菌-肠-脑轴”具有异曲同工之妙。诸多临床试验及系统性综述已证实星蒌承气汤治疗缺血性卒中的确切临床疗效与神经保护作用,但是其效应机制研究尚且不足。因此本文基于网络药理学及肠道微生态理论,深入探讨缺血性中风的肠道微生态机制及化痰通腑法代表方星蒌承气汤治疗中风痰热腑实证的效应机理。目的:基于中医“上病治下”理论与现代医学“菌-肠-脑轴”理论,（1）通过中药网络药理学与分子对接技术全面探讨星蒌承气汤治疗缺血性卒中的多组分、多靶点、多通路机制;（2）明确具有“化痰通腑”作用的星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠模型的神经保护作用,并验证网络药理学研究的关键靶点与通路;（3）探讨星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠模型肠道菌群的影响,探讨其治疗中风痰热腑实证“通腑”与“通便”差异的肠道微生态机制;（4）观察星蒌承气汤对伪无菌小鼠急性缺血性中风模型菌-肠-脑轴的影响,验证星蒌承气汤通过直接影响肠道菌群而改善脑卒中预后的假说。方法:（1）借助TCMSP、BATMAN-TCM、ETCM及TCMID等数据库收集星蒌承气汤活性成分及作用靶点,并应用STITCH等对未找到靶点的化合物进行靶点预测。通过6个数据库挖掘缺血性卒中的靶点。通过GO和KEGG富集对交集靶点进行高级功能分析,并用cytoscape3.6.0构建PPI、化合物-靶点及药物-靶点-通路网络。最后进行分子对接验证。（2）雄性C57BL/6小鼠随机分为:假手术（Sham）组、模型（MCAO）组、星蒌承气汤（XCD）组、尼莫地平（Nim）组及舒泰清（PGE）组,通过制备高脂低纤维饮食复合线栓法的小鼠急性缺血性中风痰热腑实证模型,采用神经功能评分、除胶实验、TTC和TUNNEL染色,综合评价星蒌承气汤的神经保护作用,并运用ELISA、W estern blot等技术验证网药关键靶点与通路;（3）雄性C57BL/6小鼠随机分为:Sham组、MCAO组、XCD组、Nim组与PG E组,通过制备高脂低纤维饮食复合线栓法的小鼠急性缺血性中风痰热腑实证模型,采用高通量16srDNA基因测序、代谢组学技术、免疫组化、免疫荧光、ELISA及流式多因子技术分别对肠道菌群、短链脂肪酸（SCFAs）及其受体GPR43、神经-内分泌-免疫途径相关指标（NE及TH、血清MTL、脑IBA-1及GFAP、血清炎症因子）进行分析;（4）雄性C57BL/6小鼠在术前14天服用多种抗生素剔除肠道菌群后,随机分为:伪无菌假手术（ABX-Sham）组、伪无菌模型（ABX-MCAO）组以及伪无菌中药（ABX-XCD）组,通过神经功能评分、除胶实验、TTC染色以及高通量16srDNA基因测序、代谢组学技术、免疫组化、免疫荧光、ELISA及流式多因子技术,观察中药对伪无菌小鼠菌-肠-脑轴相关指标的影响。结果:（1）网络药理学及分子对接结果表明,星蒌承气汤包含51个活性成分及44个治疗缺血性卒中的交集靶点。高级功能分析显示星蒌承气汤抗缺血性卒中的机制与脂多糖介导的信号通路、凋亡过程的调控、炎症反应、内皮屏障的建立以及对脂肪酸的反应有关。星蒌承气汤发挥作用的有10条关键KEGG信号通路。PPI网络分析得到AKT 1,PTGS2,TNF,TP53,CASP3,IL1B等关键靶点。分子对接验证了星蒌承气汤活性成分与关键靶点具有良好的对接能力。（2）星蒌承气汤神经保护作用及对网络药理学关键靶点及通路的影响:①神经功能评分:与MCAO组相比,XCD组及Nim组术后48h及72h Longa评分降低（P<0.05）,PGE组未见变化（P>0.05）。②除胶实验:XCD组和Nim组术后48和72h的接触和去除胶带时间缩短（P<0.05）,PGE组未见变化（P>0.05）。③TTC染色:XCD组梗死面积下降（P<0.05）,Nim组及PGE组未见变化。④TUNNEL:MCAO组梗死区细胞凋亡明显增加,XCD组和Nim组TUNEL阳性染色减少（P<0.05）。⑤网络药理学验证:XCD组及Nim组TNF-α含量具有下降趋势（P>0.05）;XCD组p-AKT、PI3K及NF-κB蛋白表达具有升高趋势。AKT蛋白表达组间未见明显变化（P>0.05）。（3）星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠菌-肠-脑轴影响:①肠道菌群:与MCAO组相比,XCD组α多样性有升高趋势,Nim组及PGE组无显着变化。β多样性显示MCAO组与Sham组PCoA曲线有显着差异（P<0.05）。MCAO组拟杆与变形杆菌门显着增加,厚壁菌门显着减少;XCD组拟杆菌比例显着降低,疣微菌门显着增加,Nim组变形菌门显着增加,厚壁菌门进一步降低,PGE组菌群组成与MCAO相似,变形杆菌略降低。此外,XCD组Akkermansia比率增加,Nim组Klebsiella增加最为显着,而 PGE 组 Parabacteroides 和Escherichia/Shigella增加较为显着。②SCFAs 及GPR43:MCAO组的SCFAs含量显着降低（P<0.05）,XCD组丁酸含量增加（P<0.05）。XCD组及Nim组GPR43表达显着降低（P<0.05）。③自主神经途径:XCD组NE有下降趋势,PGE组NE有上升趋势（P>0.05）。MCAO组及PGE组TH蛋白表达上升（P<0.05）,XCD组及Nim组TH表达未见显着变化趋势（P>0.05）。④神经内分泌途径:MCAO组MTL显着升高（P<0.05）,PGE组有升高趋势（P>0.05）,XCD组及Nim组MTL显着下降（P<0.05）。⑤免疫途径:MCAO组星形胶质细胞增生、肥大,显着活化,小胶质细胞迅速从“静息态”转变为“激活态”,从梗死周边区域向病变部位募集,而XCD组星形胶质细胞及小胶质细胞活化较MCAO组降低。MCAO 组 TNF-α、IL-17A、IL-22 升高（P<0.05）,而 XCD 和 Nim 组的 IL-10显着升高（P<0.05）,TNF-α、IL-17A 和 IL-22 降低。（4）星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证伪无菌小鼠菌-肠-脑轴影响:①神经保护作用:与ABX-MCAO组相比,ABX-XCD组在Longa评分、除胶实验及TTC染色等方面未见显着变化（P>0.05）。②肠道菌群:ABX-MCAO和ABX-XCD组的α多样性低于ABX-Sham,PCoA分析显示ABX-XCD组肠道菌群的β多样性和组成与AB X-MCAO组相似。相对丰度结果显示,在ABX组中,小鼠的微生物区系均以变形杆菌为特征,这与正常小鼠有显着差异。LEfSe分析显示MCAO组富集了更多的病原体或机会性病原体,包括Bacteroidetes,EscherichiaShigella与Helicobacter,而 XCD富集了Verrucomicrobia和Akkermansia等有益菌群。条件致病菌如Streptococcus,Lact ococcus,Morganella,Klebsiella,Proteobacteria,Enterobacteriaceae 等在 ABX-XCD组富集显着增多。PGE组富集菌群主要有oSelenomonadales、cNegativicutes、gRomboutsia及fPeptostreptococcaceae。③SCFAs 及 GPR43:ABX-XCD 的丙酸显着下降（P<0.05）。ABX-MCAO 组 GPR43 表达显着上调（P<0.05）,ABX-XCD 组 G PR43表达显着降低（P<0.05）。④自主神经途径:ABX-XCD组NE含量未见显着变化（P>0.05）,TH蛋白表达未见显着变化（P>0.05）。⑤神经内分泌途径:ABX-MCAO组MTL升高趋势（P>0.05）,ABX-XCD组MTL未见显着变化（P>0.05）。⑥免疫途径:ABX-XCD组IL-22显着升高（P<0.05）,IL-17A有降低趋势（P>0.05）,余未见显着变化趋势（P>0.05）。ABX-MCAO组星形胶质细胞表达显着升高,小胶质细胞显着活化,ABX-XCD组星形胶质细胞及小胶质细胞活化较ABX-MCAO组有降低趋势。结论:星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠具有一定神经保护作用,其效应机制具有多成分、多靶点、多通路特点。其对伪无菌小鼠中风模型则未发现确切的脑保护效应,说明其脑保护的部分机制是通过改善肠道微生态实现的。其具体机制包括提高肠道短链脂肪酸,尤其是丁酸含量,增强肠道短链脂肪酸受体GPR43表达,增加血液IL10、减少TNF-α等炎性因子及MTL水平,最终减少梗死区域胶质细胞活化和神经细胞凋亡,从而达到中风脑保护的作用。本研究成果对中风病的临床治疗具有重要的指导意义——对于中风后便秘患者,仅仅“通便”治疗是不够的,需要结合患者的证候特点进行中医药“化痰通腑”治疗,才能取得好的临床效果。
赵亚林[2]（2021）在《舒筋健脑方对脑瘫患者认知功能影响及机制研究》文中研究说明1 目的1.1文献研究:探讨文献中治疗脑瘫中药的用药规律,为临床中药用药提供依据。1.2药理研究:采用网络药理学探索益智仁治疗脑瘫（CP）作用机制,探寻改善脑瘫的认知功能的可能机制。1.3临床研究:观察舒筋健脑方联合选择性脊神经后根切断（SPR）手术治疗痉挛型脑瘫患者的临床疗效,为中药用于改善痉挛型脑瘫患者的康复提供临床依据。1.4基础研究:基于Bcl-2/Bax、Caspase-3研究舒筋健脑方改善缺血缺氧脑损伤认知功能作用机制。2 方法2.1 文献研究:检索中国知网、万方、维普、Pubmed、Web of science、Co-chrane library数据库中药治疗脑瘫的文献,采用EXCEL表格分析药物的服用方法、频次、四气五味及归经;SPSS Modeler18.0软件进行组方规律分析、SPSS Statistics 24进行药物的因子分析和聚类分析。2.2药理研究:通过中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）获得并筛选益智仁的活性成分及作用靶点,通过Gencards、OMIM、TTD、DRUGBANK数据库获取CP的主要靶点,运用Cytoscape3.7.2软件构建益智仁活性成分-靶点交集网络,利用String平台构建共同靶点蛋白相互作用（PPI）网络,获得关键活性成分与核心蛋白靶点,通过微生信网对共同靶点进行GO分析和KEGG通路富集分析。2.3临床研究:采用前瞻性、单中心、随机对照临床试验,随机数字表将患者分为试验组和对照组,两者都采用SPR手术和康复训练,试验组术后同时给予口服舒筋健脑方颗粒2个月。收集两组的一般资料、中国比内测试评分、GMFM-88评分、CSI评分、ADL评分、肌力、肌张力及患者和母亲的体质量表评分。2.4基础研究:7日的SD大鼠分为对照组、模型组、米诺环素组、舒筋健脑方低、中、高剂量组6组,采用Rice-Vannucci模型建立脑瘫缺血缺氧脑损伤模型,术后给予称重、行为学检测和HE染色,之后对照组、模型组等量的生理盐水灌胃,药物组给予相对应的药物灌胃1周后,复测体重、行为学检测,取脑组织行免疫组化,查看海马CA1区Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。取脑中海马组织,采用WB检测Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白量表达。3结果:3.1文献研究:用药频数前6位:当归、伸筋草、牛膝、黄芪、红花、白芍,用药性温,味为甘、辛、苦,归肝、肾、脾经,补虚药、祛风湿、活血化瘀药最多。关联分析核心用药透骨草、牛膝、伸筋草。提取6个公因子。聚类分析有当归;川芎、甘草、黄芪;杜仲、丹参、桂枝、红花、白芍、牛膝、木瓜、透骨草、鸡血藤、伸筋草。3.2药理研究:共筛选出益智仁有效活性成分8种,关键活性成分为:油酸、胡萝卜苷、β-谷甾醇等,益智仁作用于CP的靶点18个,PPI网络显示TP53、MYC、CASP3、CASP8、ALB等为核心靶点,共富集GO条目84条,KEGG通路292条（均P<0.05）,主要富集在癌症信号通路。3.3临床研究:（1）两组基线未见异常,主要为男性,年龄5-13岁之间,多为头胎顺产,混合喂养,痉挛型脑瘫多为双瘫患者。（2）中国比内测试量表统计的智商分数,治疗后试验组比对照组的智商分数高（P=0.002<0.05）,比治疗前的智商明显提高（P<0.05）。（3）GMFM-88评分中,治疗后试验组比对照组的运动评分均有提高,在评分C、D、E区的功能改善明显（P<0.05）。组内比较,除了对照组GMFM-A区P=0.094>0.05,其余四区及试验组的五个区的运功评分明显改善（P<0.05）。（4）CSI评分、ADL组内比较显示改善明显（P<0.05）。（5）肌力统计,治疗后两组比较,髂腰肌、股二头肌及胫后肌试验组比对照组好转（P<0.05）;组内比较,试验组与对照组都是髂腰肌、股四头肌、股二头肌的肌力治疗后比治疗前好转（P<0.05）。（6）肌张力组内分析,试验组与对照组治疗后较治疗前好转（P<0.05）。（7）体质中试验组治疗前偏气虚和阴虚,治疗后均衡质和偏阴虚,对照组治疗前后都常见偏气虚的体质。母亲的以阴虚质和痰湿质为主。3.4基础研究:（1）体重:术后给予灌胃1周后组间体重均明显改善（F=11.799,P=0.000<0.05）。中剂量和高剂量组体重比模型组改善明显（P<0.05）。（2）行为学:组间比较,术后24小时检测及灌胃1周悬吊实验、倾斜板实验、Longa评分差异明显（P<0.05）。灌胃1周后米诺环素组、中药中剂量组和高剂量组比模型组悬吊时间延长（P<0.05）。中药中剂量组和高剂量缩短了倾斜的时间（P<0.05）。各用药组均可改善神经功能（P<0.05）。（3）HE染色:脑组织的海马CA1区对照组的神经细胞丰富且排列整体,细胞结构清晰。模型组的神经细胞数量减少,细胞外形不规则,胞浆减少,细胞核变小或者消失。（4）免疫组化表达中,米诺环素、中药低剂量组明显减少海马组织CA1区Bax、Caspase-3的表达（P<0.05）,中药中剂量和高剂量增加Bcl-2的表达（P<0.05）,减少Bax、Caspase-3的表达（P<0.05）。（5）WB实验统计分析:中药高剂量组促进Bcl-2的表达,米诺环素组、中药低中高剂量可以减少Bax蛋白的含量（P<0.05）。而药物治疗都可以提高Bcl-2/Bax的比值（P<0.05）,且与中药剂量成正比。Caspase-3蛋白表达量与中药药物的剂量成反比,只有中药高剂量明显降低Caspase-3蛋白表达（P<0.05）。4结论:4.1文献研究:脑瘫患者治疗应扶正与祛邪并用,补益肝脾肾扶助正气,以祛风活血通络祛邪,重视扶助正气药物。4.2药理研究:本研究初步揭示了益智仁的多成分、多靶点、多通路的作用机制,bcl-2、bax、caspase-3是细胞凋亡的主要基因蛋白,是之后基础实验研究的重点。4.3临床研究:中药可以辅助改善术后痉挛型脑瘫患者的运动功能,有效的改善认知功能,有利于患者体质改善。4.4基础研究:在缺血缺氧脑损伤引起的脑部海马细胞损伤中,舒筋健脑方药物可以通过提高Bcl-2/Bax 比值比,降低Caspase-3的蛋白表达保护海马神经细胞,减轻细胞的凋亡,而且与药物的剂量成正相关性。
张丹丹[3]（2020）在《通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究》文中研究说明脑梗死又称缺血性脑卒中,是指因脑部供血障碍,缺血、缺氧所导致的局限性脑组织缺血性坏死或软化,属中医“中风病”范畴。通络化痰胶囊（Tongluo Huatan Capsule,THC）有活血通络、化痰熄风的功效,用于治疗中风病中经络痰瘀阻络证。团队课题组前期已完成该药Ⅳ期临床试验资料采集,但未对数据进行总结,现基于前期收集的临床数据进行系统性总结及分析,进一步评价通THC治疗中风恢复期的疗效和安全性。同时,基于中医“异病同治”思想,痰瘀阻络证也是缺血性卒中后引发血管性痴呆（Vescular Dementia,VD）常见证型,由此提出假设:THC对VD是否也会有效?据最新研究显示,上调网格蛋白（clathrin）及其内吞标记物Rab5B能够促进神经元表面N-甲基D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR）的内吞,减少神经元膜表面的NMDAR分布,从而减轻兴奋性氨基酸毒性造成的神经元损伤,改善VD大鼠学习记忆能力,但是clathrin和NMDA受体在这一过程中各个时点的变化还未明确。故本研究拟针对VD大鼠模型,早期给药干预后造模,取海马组织,按照造模后3h/1d/3d/7d/14d不同时点,采用动物行为学及Western blotting（WB）、RT-PCR检测clathrin及其内吞标记物Rab5B、NMDAR1（NMDAR功能亚单位）的表达,探索脑缺血再灌注海马神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程动态变化特点,同时探讨THC在VD早期干预中可能存在的作用,从而从微观表征层面证明中药异病同治的疗效。临床研究目的:进一步评价THC治疗中风病中经络恢复期痰瘀阻络证患者的疗效和安全性,为临床用药提供参考。方法:采用多中心、前瞻性、单臂队列临床研究,纳入34家二级甲等以上医院中符合西医脑梗死恢复期及中医中风病中经络痰瘀阻络证诊断标准的病例,予THC治疗4周。运用统计学方法对课题组前期采集的临床试验数据进行分析。以美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评定神经功能缺损,中医证候评分及改良Rankin量表（Modified Rankin Scale,mRS）为疗效评价指标;以血常规、肝功能、肾功能为安全性评价指标。结果:（1）2012年01月-2016年12月于34家二级甲等以上的医院纳入的受试者共2169例,THC治疗后神经功能缺损综合疗效、中医证候疗效总有效率分别为84.09%、81.01%;mRS总分减少50%及以上者817例（37.67%）,总分下降至0-1者1187例（54.73%）;（2）影响NIHSS综合疗效的多因素分析显示年龄（OR=1.024,95%CI 1.009-1.039,P=0.002）、基线合并高血压（OR=4.720,95%CI 3.513-6.341,PP=0.000）、冠心病（OR=2.601,95%CI 1.530-4.421,P=0.000）、高脂血症（OR=2.234,95%CI1.234-4.407,P=0.008）、基线 NIHSS 评分（OR=0.902,95%CI 0.849-0.957,P=0.001）影响临床神经功能缺损程度综合疗效。（3）影响中医证候疗效的多因素分析显示基线中医证候评分对中医证候疗效有影响（OR=62.023,95%CI 37.407-113.026,P=0.000）;（4）影响mRS改善的多因素分析显示年龄（OR=1.019,95%CI 1.007-1.031,P=0.001）、基线合并高血压（OR=2.898,95%CI 2.144-3.917,P=0.000）冠心病（OR=3.625,95%CI 1.516-8.673,P=0.004）对 mRS 的改善有影响;（5）THC不良反应总体发生率为0.00%。结论:（1）THC在中风恢复期的治疗中单用或联用其他西医基础治疗对于改善患者神经功能缺损程度、减轻残障及中医症状均有较好的疗效及安全性。（2）THC在中风恢复期的治疗中,年龄小、基线病情轻、没有基础疾病的患者疗效越好。实验研究目的:（1）探索VD大鼠海马区神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程动态变化特点;（2）探索THC在VD早期干预中可能存在的作用。方法:大鼠适应性饲养7天后随机分为假手术组、模型组、THC组、美金刚组（MH组）、参知健脑方组（SZJN组）,分别予相应药物灌胃,假手术组、模型组予等量的蒸馏水灌胃,1次/日,连续7日。采用2VO+腹腔注射硝普纳的方法制备VD大鼠模型,假手术组大鼠分离双侧颈总动脉但不夹闭血管,不注射硝普钠。造模后进行跳台实验、新物体识别实验、Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力;造模后3h、1d、3d、7d、14d分别取大鼠海马组织通过RT-PCR、WB检测海马clathrin、NMDAR1、Rab5B在造模后不同时间点的表达水平。结果:（1）行为学①跳台试验（模型评价）结果显示:假手术组大鼠与正常组大鼠相比潜伏期以及错误次数无统计学差异;VD大鼠与正常组、假手术组相比,潜伏期缩短,错误次数增加（P<0.05）;②新物识别实验,模型组与假手术组比较,新物辨别指数下降（P<0.01）;THC组、SZJN组、MH组辨别指数均比模型组高（P<0.01）;③水迷宫:各组大鼠逃避潜伏期均有不同程度缩短（P<0.01）。不同分组对逃避潜伏期的影响有差异（P<0.05）,模型组与其他四组大鼠相比逃避潜伏期延长;撤去平台后,模型组与其他四组大鼠相比在目标限停留时间缩短（P<0.01）。和模型组相比,假手术组、SZJN组穿越平台次数增加（P<0.01）。（2）病理学HE染色显示,假手术组海马CA1区结构形态未见异常,神经元形态完整,排列整齐,胞核与胞质界限清晰可见无坏死。VD大鼠海马CA1区神经元形态不完整,排列紊乱,间隙增大,胞质稀少,神经元胞核深染,固缩呈三角形或不规则形,核仁不明显。造模后随着时间延长,VD大鼠海马CA1区神经元形态排列紊乱程度加重,间隙增加明显。与模型组比较,THC组、SZJN组大鼠海马CA1区整体组织损伤情况均有明显改善,神经元排列较为整齐,细胞形态结构较完整,胞质较均匀,胞核与胞质界限较清晰,少数细胞核深染、固缩,呈三角形或不规则形,核仁不明显。MH组大鼠海马CA1区细胞层次减少,神经元排列稀松,形态较模型组有明显改善,部分细胞核深染、固缩,呈三角形或不规则形。尼氏染色显示,假手术组大鼠海马CA1区神经元细胞排列整齐紧凑,染色后呈现为颗粒或状块状,染色浓密且规则。VD大鼠海马CA1区神经元排列散乱,造模后随着时间延长,细胞带出现了断裂,细胞凋亡数量增加,大量神经细胞出现尼氏体碎裂。THC组、SZJN组海马CA1区神经细胞排列较为整齐,少数细胞间隙增宽,细胞带稍有变薄,少量的神经细胞可见到有尼氏体碎裂、胞质中央尼氏小体消失。MH组海马CA1区神经元细胞形态和排列较模型组有所改善,部分神经元细胞凋亡,细胞带变薄。RT-PCR结果①与假手术组相比,造模后3h、1d、3d、7d、14dVD大鼠clathrin mRNA表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,MHG组（P<0.01）、THC组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）大鼠海马clathrin mRNA相对表达量增加;②与假手术组相比,术后3h、7d、14d模型组大鼠NMDAR1 mRNA表达增加（P<0.01）,术后1d NMDAR1 mRNA表达下降（P<0.01）;与模型组相比,术后3h SZJN组NMDAR1 mRNA 表达降低（P<0.01）,术后 7d、14dMH 组（P<0.01）、THC 组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）NMDAR1 mRNA 表达降低;③与假手术组相比,术后3h、1d、3d、7d、14d VD大鼠Rab5B mRNA表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,术后 3h、1d、3d、7d、14dMH 组（P<0.01）、THC 组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）大鼠海马Rab5B mRNA相对表达量增加。（3）WB结果①与假手术组相比,术后3h、1d、3d、7d、14d模型组大鼠clathrin蛋白表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,THC组大鼠在术后3h（P<0.01）、1d（P<0.05）clathrin 蛋白表达升高,SZJN 组在术后 3h（P<0.01）、1d（P<0.05）、7d（P<0.05）、14d（P<0.05）clathrin蛋白表达升高,MH组在术后3h（P<0.01）clathrin蛋白表达增加。②与假手术组相比,术后3h（P<0.01）、7d（P<0.01）、14d（P<0.01）模型组大鼠的膜蛋白NMDAR1表达增加,术后1d表达减少（P<0.01）;与模型组相比,THC组大鼠术后3h（P<0.05）、7d（P<0.01）NMDAR1表达减少,1d时表达增多（P<0.01）,SZJN组、MH组大鼠术后3h、7d NMDAR1表达减少（P<0.01）。结论:（1）THC早期干预可减轻VD大鼠海马CA1区的病理损伤,提高学习及记忆能力,具有脑保护作用;（2）VD大鼠在脑缺血再灌注损伤后,海马神经元NMDAR1表达的动态演变在造模后先升后降再上升。clathrin及Rab5B表达降低导致神经元表面NMDAR内吞减少加重了兴奋性氨基酸毒性,导致学习记忆能力降低。（3）THC早期干预VD大鼠,可通过上调clathrin表达使神经元表面的NMDAR内吞增加,或下调NMDAR表达来减少兴奋性毒性作用对神经元的损伤,从而起到脑保护作用。
陈宇欣[4]（2020）在《蒙成药嘎日迪-13味丸对大鼠缺血缺氧性脑损伤保护作用的研究》文中研究表明目的:本实验通过蒙成药嘎日迪-13味丸在实验大鼠缺血性脑组织损伤中干预炎症反应机制的研究,探讨其对脑组织损伤的保护作用。方法:选取质量为200±20g清洁级雄性SD（sprague-Dawley）大鼠,随机分为空白组和造模组,建立缺血再灌注脑损伤模型并依照Longa五分制法观察大鼠行为学变化,将造模成功的大鼠（Longa评分1-3分）随机分为模型组、嘎日迪-13味丸高剂量组、嘎日迪-13味丸低剂量组和阿司匹林组。空白组不做手术,模型组只做手术,嘎日迪-13味丸高剂量、嘎日迪-13味丸低剂量、西药阿司匹林对照组、给予手术和药物干预,7天后断头处死大鼠。在实验过程中分别于再灌注24小时、术后3天、术后5天、术后7天分别进行神经功能学评分。用HE染色的方法观察各组大鼠脑组织神经细胞的形态。用TTC染色方法测量各组实验大鼠脑梗死面积范围。通过ELISA方法检测各组大鼠缺血脑组织炎性细胞因子的含量。通过免疫组织化学染色方法,检测实验大鼠缺血脑组织中JAK-2与STAT-3的表达情况。观察实验大鼠脑缺血组织内,细胞因子介导的信号通道Janus激酶-信号转导与转导激活子（JAK-STAT）途径的激活情况。结果:（1）神经功能评分:空白组无神经功能障碍;模型组出现左侧前爪无力,行动向左侧倾斜。嘎日迪-13味丸组神经功能评分与模型组比降低,差异具有显着性（P<0.05）。（2）TTC染色:空白组未见梗死灶;模型组可见灰白色梗死灶;嘎日迪-13味丸高剂量、低剂量组大鼠脑组织梗死面积及水肿程度均减轻。（3）HE染色:空白组脑组织神经细胞形态正常;模型组可见神经细胞坏死。细胞核固缩;嘎日迪-13味丸高剂量组神经细胞坏死、细胞间隙增宽等病理改变均较轻;（4）炎性细胞因子:各组均有炎性细胞因子表达,模型组与空白组比缺血脑组织中IL-1β和TNF-α的含量显着升高;嘎日迪-13味丸高剂量组与模型组比炎性细胞因子的含量降低,差异具有显着性（P<0.05）。（5）免疫组化:空白组脑组织中有少量JAK-2、STAT-3阳性的细胞;模型组缺血脑组织中JAK-2、STAT-3阳性的细胞数量显着升高。嘎日迪-13味丸高剂量组与模型组比阳性细胞数降低（P<0.05）。结论:蒙成药嘎日迪-13味丸通过抑制炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的表达,干预细胞因子介导的信号通道Janus激酶-信号转导与转导激活子（JAK-STAT）途径的激活,继而抑制炎症反应,具有较好的保护神经细胞损伤的作用。
田丹枫[5]（2020）在《参知健脑方对拟血管性痴呆细胞模型的神经保护作用及机制研究》文中提出血管性痴呆（Vascular Dementia,VD）是痴呆常见类型之一,以记忆力进行性衰退、认知功能障碍及性格、情感等精神改变为主要临床表现。VD的病理机制与兴奋性氨基酸毒性损伤、突触可塑性改变、钙超载、氧化应激损伤及细胞凋亡等过程密切相关,早预防、早发现、早治疗可显着提高VD患者的生存率及生活质量,降低死亡率。课题组基于VD的“毒损脑络”中医创新病因病机理论并结合多年临床经验,创制了具有解毒通络作用的参知健脑方。前期动物体内实验研究表明,本方可改善VD大鼠的认知功能,修复受损海马神经元,通过调控谷氨酸突触囊泡转运关键蛋白clathrin介导的NMDA受体内吞过程,减轻谷氨酸所致神经兴奋性毒性而起到神经保护作用。但研究大多仅从单个靶点或通路评估参知健脑方对VD的干预作用,并未完全解释其药效机制;且目前尚未对其进行体外细胞实验深入分析验证,其分子机制值得更深入地探索研究。目的:基于VD“毒损脑络”理论,（1）通过网络药理学探讨参知健脑方治疗VD的药理作用及分子机制;（2）通过体外实验,筛选干预药物的适宜浓度,并探讨参知健脑方对拟VD细胞模型增殖及毒性的影响;（3）研究参知健脑方对拟VD细胞模型周期、凋亡及细胞内游离Ca2+和ROS/Superoxide水平的影响,探讨其对VD细胞模型谷氨酸兴奋性毒性的神经保护作用,并验证参知健脑方的治疗有效性及网络药理学结果的可靠性;（4）研究参知健脑方对拟VD细胞模型clathrin、RAB5B和NMDAR1表达水平的影响,探讨其是否通过调控clathrin介导的NMDA受体内吞过程发挥对VD的治疗作用,并验证网络药理学结果的可靠性。方法:第一部分:依托多种数据库检索并收集参知健脑方的入血化学成分、作用靶点和VD作用靶点,随后整合数据获得参知健脑方治病靶点。通过Cytoscape3.7.1构建参知健脑方-活性化合物-治病靶点网络图,STRING数据库构建蛋白互作网络,DAVID数据库进行基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。第二部分:采用谷氨酸诱导PC12细胞损伤作为VD细胞模型,采用CCK-8法和IncuCyte动态细胞成像技术筛选出谷氨酸适宜造模剂量及参知健脑方低、中、高干预剂量。参知健脑方各剂量与盐酸美金刚分别干预VD细胞模型,观察其对细胞形态、细胞增殖及毒性的作用。第三部分:采用谷氨酸诱导的PC12细胞损伤作为VD细胞模型,参知健脑方各剂量与盐酸美金刚分别干预VD细胞模型,采用流式细胞术等技术观察其对细胞周期、凋亡、细胞内游离Ca2+、活性氧和超氧化物（ROS/Superoxide）水平的影响,qRT-PCR检测caspase-3 mRNA的相对表达水平。第四部分:采用谷氨酸诱导的PC12细胞损伤作为VD细胞模型,参知健脑方各剂量与盐酸美金刚分别干预VD细胞模型。采用免疫荧光和Western blot技术分别检测clathrin、RAB5B和NMDAR1的分布和蛋白表达水平;qRT-PCR技术检测clathrin和NMDAR1在mRNA水平上的表达情况。结果:第一部分:网络药理学研究结果表明,（1）参知健脑方-活性化合物-治病靶点网络图包含3个单味药,18个活性化合物,154个治病靶点。其中,芍药苷、白芍苷和新芒果苷等活性成分关联基因较多,FGF1和FGF2位列治病靶点首位。（2）PPI网络包含154个靶点蛋白,关键蛋白涉及INS、ALB、AKT1、CASP3、JUN、PTGS2等。（3）GO富集分析共有条目4960个,其中生物过程相关条目4176个,细胞组成相关条目306个,分子功能相关条目478个。（4）KEGG富集分析共有相关通路30条,涉及MAPK信号通路、HIF-1信号通路、凋亡通路、神经活性配体-受体相互作用通路、钙信号通路等。第二部分:体外实验结果表明,（1）药物干预剂量筛选:谷氨酸适宜造模剂量为22.5 mM,参知健脑方低、中、高剂量分别为:0.05、0.1、0.2 mg/mL,盐酸美金刚干预剂量为10 μM。（2）细胞形态学:正常PC12细胞呈不规则长梭形,形态完整,突起明显,贴壁牢固;谷氨酸处理的PC12细胞呈圆球形,结构不完整,胞体皱缩,易聚集成团;突起变短或减少、消失,细胞贴壁不牢;随着时间的增加,死细胞数明显增多,细胞死亡率显着上升。与模型组相比,参知健脑方各剂量组细胞胞体均相对完整,部分细胞突起少量存在,存在突触间联系;细胞贴壁较模型组牢固;随着时间的增加,死细胞数增多不明显,细胞死亡率没有显着上升。盐酸美金刚组细胞形态较模型组略有改善。（3）CCK-8增殖实验:谷氨酸可以显着降低PC12细胞活力,抑制细胞增殖（P<0.05）;参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可明显提高PC12细胞活力,促进细胞增殖,降低细胞毒性（P<0.01）。（4）IncuCyte增殖实验:谷氨酸可以持续增加细胞绿色荧光面积和死细胞数,死亡率呈明显上升趋势,细胞融合率持续下降;参知健脑方各剂量均可以有效减少细胞绿色荧光面积和死细胞数,死亡率降低,融合率呈上升趋势;盐酸美金刚的各项结果趋势与谷氨酸类似。（5）CFSE增殖实验:谷氨酸可以明显增高CFSE平均荧光强度（P<0.01）,参知健脑方各剂量和盐酸美金刚CFSE平均荧光强度均呈减弱趋势,但差异无显着统计学意义（P>0.05）。第三部分:体外实验结果表明,（1）细胞周期:谷氨酸可以显着增加S期细胞比例,使细胞阻滞在S期（P<0.01）;参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可以显着降低S期细胞比例（P<0.01）。（2）细胞凋亡:谷氨酸可以明显增加凋亡率（P<0.01）,参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可以显着减少细胞凋亡（P<0.01）。（3）Ca2+和ROS/Superoxide水平:谷氨酸可明显升高细胞内Ca2+和ROS/Superoxide水平（P<0.01）,参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可不同程度降低细胞内Ca2+和ROS水平（P<0.05,P<0.01）。（4）qRT-PCR:谷氨酸可以明显增加caspase-3 mRNA的表达水平（P<0.01）;参知健脑方和盐酸美金刚均可显着降低caspase-3 mRNA的表达水平（P<0.01）。第四部分:体外实验结果表明,（1）免疫荧光:clathrin主要表达于细胞膜和细胞质;RAB5B主要表达于细胞膜和细胞质中的早期内体;NMDAR1主要表达于细胞膜和突触。谷氨酸显着降低clathrin和RAB5B的表达（P<0.01,P<0.01）,增加NMDAR1的水平（P<0.01）;参知健脑方各剂量均可上调clathrin、RAB5B水平（P<0.05,P<0.05）,下调NMDAR1水平（P<0.05）。（2）qRT-PCR:谷氨酸可明显降低clathrin mRNA的表达（P<0.01）,并增加NMDAR1 mRNA的表达水平（P<0.01）;参知健脑方可明显增加clathrin的表达并显着降低NMDAR1的表达水平（P<0.01）。（3）Western Blot:谷氨酸可抑制clathrin和RAB5B的表达,明显增加NMDAR1的表达水平（P<0.01）;参知健脑方各剂量均可以显着上调clathrin、RAB5B表达水平,下调NMDAR1 的水平（P<0.01）。结论:（1）参知健脑方治疗VD的作用靶点和通路机制呈现多角度、多途径、多环节的特点,其治病靶点大多与血管、神经保护及突触可塑性调节相关,且靶点与通路之间相互协同发挥作用,提示这可能是参知健脑方治疗VD的关键,为深入研究参知健脑方治疗VD的其他机制提供了新思路。（2）适宜浓度的谷氨酸可以显着促进PC12细胞增殖,但谷氨酸浓度过高会产生细胞毒性,导致细胞死亡。参知健脑方各剂量能均能明显促进细胞增殖,提高细胞活力及细胞融合率,减少死细胞数目及死亡率,减少细胞毒性损伤;均对细胞形态有一定修复作用,改善细胞贴壁不牢的状态。（3）参知健脑方能有效修复细胞周期循环,下调caspase-3的表达而减少细胞凋亡;降低细胞内Ca2+浓度而阻止Ca2+内流并增强细胞清除ROS和Superoxide的能力,减少谷氨酸毒性积累及氧化应激损伤。参知健脑方可影响上述多种途径发挥神经保护作用;验证了参知健脑方治疗VD的有效性以及网络药理学计算机预测结果的可靠性。（4）Clathrin介导的NMDA受体胞吞障碍导致谷氨酸兴奋性毒性积累,“解毒通络”的参知健脑方可改善谷氨酸损伤PC12细胞clathrin介导的NMDA受体胞吞过程而降低谷氨酸神经兴奋性毒性。其发挥神经保护的作用机制可能与上调clarhrin和RAB5B的表达,促进clathrin介导的NMDA受体胞吞过程有关。验证了参知健脑方治疗VD的有效性以及网络药理学研究结果的可靠性,为“解毒通络”法则治疗VD提供了微观证据。
李月[6]（2020）在《基于JAK2/STAT3信号通路探讨复方当归注射液对缺血性脑卒中炎性反应的作用机制》文中提出复方当归注射液（Compoundangelicainjection,CAI）是由当归、川芎、红花配伍组成的复方制剂,具有活血通络、祛瘀止痛功效。课题组前期研究发现,CAI对大鼠永久性大脑中动脉闭塞（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）所致的缺血性脑卒中模型具有潜在的神经保护作用,但更深入的作用机制仍待阐述。随着对缺血性脑卒中研究的不断深入,越来越多的证据表明炎性反应是促进缺血性脑卒中发生发展的重要因素,而酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3（Janus-activated kinase2/Signal transducer and activator of transcripti3,JAK2/STAT3）信号通路是一条重要的炎性反应相关通路,且研究证实其参与了缺血性脑卒中发生发展的过程。因此本研究基于JAK2/STAT3信号通路,探讨CAI对缺血性脑卒中炎性反应的可能作用,从而揭示CAI对缺血性脑卒中保护作用的机制。目的:基于JAK2/STAT3信号通路探讨CAI对缺血性脑卒中炎性反应的作用。建立大鼠永久性MCAO模型,从神经功能、脑梗死体积、大脑皮层病理形态学观察CAI对缺血性脑卒中大鼠的影响,并从白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、JAK2/STAT3信号通路探讨CAI对缺血性脑卒中大鼠炎性反应的作用;利用CAI作用的脑微血管内皮细胞（Brain microvascular endothelial cells,BMECs）的条件培养液,干预拟缺血损伤小胶质细胞（Microglia,MG）,从细胞形态和细胞活性观察CAI对拟缺血损伤MG的影响,并从细胞迁移、JAK2/STAT3信号通路探讨CAI对拟缺血损伤MG炎性反应的作用。方法:1.研究CAI对缺血性脑卒中大鼠神经功能、脑梗死体积、大脑皮层病理形态学影响:将Sprague Dawley（SD）大鼠随机分为空白对照组、假手术组、造模组。造模组通过线栓法建立大鼠永久性MCAO模型。造模后,将动物随机分为模型组（3 mL·kg-1生理盐水）、CAI组（5 mL·kg-1 CAI）、依达拉奉组（3 mL·kg-1依达拉奉注射液）,给药干预7 d后,通过神经功能评分观察各组大鼠神经功能、氯化三苯基四氮唑（Triphenyl tetrazolium chloride,TTC）染色法观察各组大鼠脑梗死体积、苏木精-伊红（Hematologist eosin staining,HE）染色法观察各组大鼠大脑皮层病理形态学。2.研究CAI对缺血性脑卒中大鼠IL-6和JAK2/STAT3信号通路的影响:通过酶联免疫吸附测定（Enzyme linked immune sorbentassay,ELISA）法检测各组大鼠血浆中IL-6的表达水平、免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠脑组织中JAK2/STAT3信号通路相关蛋白磷酸化酪氨酸激酶 2（Phospho-Janus-activatedkinase2,p-JAK2）、JAK2、磷酸化信号转导子和转录激活子 3（Phospho-Signal transducer and activator of transcripti3,p-STAT3）、STAT3的表达水平。3.研究CAI作用的BMECs条件培养液对拟缺血损伤MG的细胞形态和细胞活性的影响:原代培养BMECs,通过免疫荧光鉴定BMECs的纯度,实验用培养至第三代的BMECs,将其分为正常组、模型组、低剂量CAI组（1.25μL·mL-1）、中剂量CAI组（2.5μL-mL-1）、高剂量CAI组（5μL·mL-1）。模型组和各剂量CAI组通过氧糖剥夺法（Oxygen and glucose deprivation,OGD）建立BMECs拟缺血损伤模型,造模后,收集各组条件培养液,即正常BMECs条件培养液（Normal-Conditioned medium,N-CM）、拟缺血损伤BMECs 条件培养液（Ischemic-Conditionedmedium,I-CM）及低、中、高剂量 CAI 作用后的各拟缺血损伤BMECs条件培养液（Ischemic CAI-Conditioned medium,IC-CM;其中,1.25 μL·mL-1CAI 作用 BMECs 的 IC-CM 作为 IC-CML,2.5 μL·mL-1CAI 作用的 IC-CM作为IC-CMM,5 μL·mL-1CAI作用的IC-CM作为IC-CMH）。原代培养MG,通过免疫荧光鉴定MG的纯度,实验用培养至第三代的MG,分为N-CM组、I-CM组、IC-CML组、IC-CMM组、IC-CMH组,分别用对应的BMECs条件培养液干预MG,除N-CM组,其余各组均通过OGD法建立MG拟缺血损伤模型。通过倒置显微镜观察各组MG的细胞形态,通过细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测各组MG的细胞活性。4.研究CAI作用的BMECs条件培养液对拟缺血损伤MG细胞迁移和JAK2/STAT3信号通路的影响:通过细胞迁移实验技术（Transwell）来观察各拟缺血损伤组MG的迁移,通过Western blot检测各组MG中JAK2/STAT3信号通路相关蛋白p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3的表达水平。结果:1.CAI对缺血性脑卒中大鼠具有神经保护作用,可以改善神经功能及大脑皮层病理形态学损伤,同时具有减小脑梗死体积的趋势。神经功能评分结果显示,与模型组比,CAI组神经评分明显降低（P<0.01）。TTC染色结果显示,与模型组相比,CAI组脑梗死体积具有减小趋势。HE染色结果显示,模型组的大脑皮层细胞排列稀疏且紊乱,细胞核固缩,数量明显减少,而与模型组相比,CAI组大脑皮层细胞排列较为有序,细胞核固缩现象减少,坏死的细胞数量明显减少。2.CAI可以通过抑制IL-6的表达和JAK2/STAT3信号通路的异常激活减轻缺血性脑卒中大鼠的炎性反应。ELISA结果显示,与假手术组比,模型组血浆中IL-6含量明显增多（P<0.01）;与模型组相比,CAI组血浆中IL-6含量明显减少（P<0.01）。Western blot结果显示,与假手术组比较,模型组脑组织中p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3/水平显着升高（P<0.01）;与模型组比较,CAI组脑组织中p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平均显着降低（P<0.01）。3.CAI作用的BMECs条件培养液可以改善拟缺血损伤MG的细胞形态和细胞活性。免疫荧光染色结果显示,原代培养的第三代BMECs和MG纯度均可达95%以上,可以用于后续实验。细胞形态观察结果显示,各剂量IC-CM组均可减轻OGD对MG的损伤,细胞体积增大、细胞间距减小、存活MG数量增多。CCK-8结果显示,各剂量IC-CM组均可提高OGD造模后MG存活率,其中IC-CMM、IC-CMH组明显提高（P<0.05,P<0.01）。4.CAI作用的BMECs条件培养液可以通过抑制MG的迁移以及JAK2/STAT3信号通路的异常激活减轻拟缺血损伤MG的炎性反应。细胞迁移实验结果显示,与I-CM组相比,各剂量IC-CM组均使得穿越滤膜染成紫色即迁移的MG数量明显减少（P<0.05）。Western blot结果显示,与N-CM组比较,I-CM组p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平显着升高（P<0.01）;与I-CM组比较,各剂量IC-CM组p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平呈降低趋势,其中IC-CMM、IC-CMH组明显降低（P<0.01）。结论:1.CAI可以改善缺血性脑卒中大鼠的神经功能及大脑皮层病理形态学损伤,具有神经保护作用,其保护作用机制可能与通过抑制IL-6的表达以及JAK2/STAT3信号通路的异常激活减轻炎性反应有关。2.CAI作用的BMECs条件培养液可以改善拟缺血损伤MG的细胞形态、提高细胞活性,其作用机制可能与通过抑制MG迁移以及JAK2/STAT3信号通路的异常激活减轻炎性反应有关。3.JAK2/STAT3信号通路可能是CAI减轻缺血性脑卒中炎性反应,发挥神经保护作用的药效靶点之一。
孙丽娜[7]（2020）在《消栓健脑冲剂对大鼠脑梗死模型的保护作用及机制研究》文中研究表明目的:本实验研究通过观察消栓健脑冲剂对脑梗死大鼠模型在神经损伤、脑梗死面积、脑水肿、病理学、线粒体膜电位上的改变和NLRP3、caspase-1的基因和蛋白表达差异,探讨消栓健脑冲剂治疗脑梗死的作用机制,以期为今后临床上治疗脑梗死提供实验和理论基础,以完善和推动脑梗死治疗的发展。材料与方法:SPF级SD大鼠40只,6-8周龄,均为雄性,体重为250±20g,随机分为假手术组、模型组、实验组和对照组,每组10只大鼠。采用线栓法建立大鼠脑梗死模型,建模成功后,假手术组和模型组大鼠每日生理盐水灌胃,实验组大鼠消栓健脑冲剂灌胃,对照组大鼠血塞通片灌胃。各组大鼠在术后第1、14d使用Zea Longa评分进行神经功能测试,判断造模是否建立成功及神经功能损伤情况。连续灌胃14d后,HE染色观察脑组织病理变化,TTC染色法检测脑梗死面积,计算脑含水量评估脑水肿程度,检测线粒体膜电位,实时荧光定量PCR法和Western Blot法检测Caspase-1、NLRP3基因和蛋白的表达。结果:1神经功能检测结果造模术后,Longa评分结果显示:假手术组大鼠评分低于模型组、实验组、对照组大鼠术后1d评分,有统计学差异（p<0.01）,说明本次实验所建立的脑梗死模型复制成功。术后14d,与模型组比较,实验组和对照组大鼠Longa评分明显降低（p<0.01）;与对照组比较,实验组大鼠Longa评分无差异（p>0.05）。2 HE染色结果假手术组:神经元形态正常,结构完整,核仁清晰,无明显病理改变;模型组:神经元细胞肿胀,细胞空泡样变,细胞核固缩、消失,神经元细胞数量明显减少;实验组:少量神经元细胞肿胀,细胞核固缩,神经元细胞数量较模型组有显着增加;对照组:偶见少量神经元损伤,整体神经元和组织形态完好,神经元细胞数量较模型组有明显增加。3 TTC染色检测脑梗死体积结果假手术组大鼠双侧脑组织未发生梗死,脑组织均为红染;与假手术组比较,实验组、模型组和对照组大鼠出现明显的脑梗死（p<0.01）;与模型组比较,实验组和对照组大鼠脑梗死面积明显减少（p<0.01）;与对照组比较,实验组大鼠脑梗死面积无明显差异（p>0.05）。4大脑含水量测定结果与假手术组比较,模型组大鼠大脑含水量明显增加（p<0.01）,实验组和对照组大鼠大脑含水量增加（p<0.05）;与模型组比较,实验组和对照组大鼠大脑含水量降低（p<0.05）;与对照组比较,实验组大鼠大脑含水量无明显差异（p>0.05）。5线粒体膜电位检测结果与假手术组比较,模型组和实验组大鼠荧光强度明显降低（p<0.01）,对照组大鼠荧光强度降低（p<0.05）;与模型组比较,实验组大鼠荧光强度升高（p<0.05）,对照组大鼠荧光强度明显升高（p<0.01）;与对照组比较,实验组大鼠荧光强度无明显差异（p>0.05）。6实时荧光定量PCR检测结果6.1实时荧光定量PCR检测Caspase-1结果Caspase-1熔解曲线图表现为单峰曲线,表明其能够特异性扩增。各组大鼠脑组织中Caspase-1的表达结果:与假手术组比较,模型组和实验组大鼠脑组织中Caspase-1的表达明显升高（p<0.01）,对照组大鼠脑组织中Caspase-1的表达升高（p<0.05）;与模型组比较,实验组和对照组大鼠脑组织中Caspase-1的表达明显降低（p<0.01）;与对照组比较,实验组大鼠脑组织中Caspase-1的表达升高,有统计学差异（p<0.05）。6.2实时荧光定量PCR检测NLRP3结果NLRP3熔解曲线图表现为单峰曲线,表明其能够特异性扩增。各组大鼠脑组织中NLRP3的表达结果:与假手术组比较,模型组、实验组和对照组大鼠脑组织中NLRP3的表达明显升高（p<0.01）;与模型组比较,实验组和对照组大鼠脑组织中NLRP3的表达明显降低（p<0.01）;与对照组比较,实验组大鼠脑组织中NLRP3的表达升高,有统计学差异（p<0.05）。7 Western Blot法检测结果7.1 Western Blot法检测Caspase-1结果与假手术组比较,模型组和实验组大鼠脑组织中Caspase-1的表达明显升高（p<0.01）,对照组大鼠脑组织中Caspase-1的表达升高（p<0.05）;与模型组比较,实验组和对照组大鼠脑组织中Caspase-1的表达明显降低（p<0.01）;与对照组比较,实验组大鼠脑组织中Caspase-1的表达升高,有统计学差异（p<0.05）。7.2 Western Blot法检测NLRP3结果与假手术组比较,模型组和实验组大鼠脑组织中NLRP3的表达明显升高（p<0.01）,对照组大鼠脑组织中NLRP3的表达升高（p<0.05）;与模型组比较,实验组和对照组大鼠脑组织中NLRP3的表达明显降低（p<0.01）;与对照组比较,实验组大鼠脑组织中NLRP3的表达升高,有统计学差异（p<0.05）。结论:1.本实验采用线栓法的方法,成功建立了大鼠脑梗死模型,并用于实验。2.消栓健脑冲剂能够明显改善脑梗死大鼠的神经损伤行为,抑制脑水肿的发生,并有效升高脑组织线粒体膜电位,起到减少脑梗死面积的作用。3.消栓健脑冲剂能够保护脑梗死大鼠受损的神经元细胞,改善其病理学损伤形态。4.消栓健脑冲剂能够有效的抑制炎症反应,下调caspase-1和NLRP3炎性因子的基因和蛋白表达。5.通过改善脑梗死大鼠的病理形态学、脑水肿、脑组织线粒体膜电位以及抑制caspase-1和NLRP3炎性因子的表达,从而减少脑梗死面积,这可能是消栓健脑冲剂保护大鼠脑梗死模型脑组织、脑神经元的作用机制之一。
李韵歆[8]（2020）在《复方当归注射液对脑缺血损伤大鼠MMP-2/9以及拟缺血损伤神经元的影响》文中指出缺血性中风是现代医学研究中的一个重大难题,由包括血管阻塞在内的多种原因而造成脑缺血损伤。复方当归注射液（Compound angelica injection,CAI）由当归、川芎、红花三味中药提炼而成,具有良好的活血通络之功。前期研究发现CAI对脑缺血损伤模型具有一定的治疗作用。神经血管单元（Neurovascularunit,NVU）概念的提出扩大了脑缺血损伤研究的视野。血脑屏障（Blood-brainbarrier,BBB）和神经元都是NVU的重要组成部分,也是脑缺血损伤研究中的重要靶点。本研究将以课题组前期的实验结果为基础,从神经血管单元出发,研究CAI对脑缺血损伤的影响。目的:通过建立大鼠永久性大脑中动脉闭塞（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,研究CAI干预后对大鼠神经行为学、病理形态学以及与BBB关系密切的基质金属蛋白酶（Matrix metal protein,MMP）-2和MMP-9表达的影响;利用CAI作用脑微血管内皮细胞（Brainmicrovascularendothelial cells,BMECs）后的条件培养液干预神经元,探究CAI对神经元拟缺血损伤模型的作用及可能的分子机制。方法:（1）MCAO大鼠行为学及形态学观察:SD大鼠随机分出假手术组（生理盐水3mL/kg）,其余建立大鼠右侧MCAO脑缺血模型。采用Z.Longa5级评分法将造模大鼠平均分成模型组（生理盐水3mL/kg）、阳性对照组（依达拉奉注射液3mL/kg）、CAI组（CAI 10 mL/kg）,在干预1d、3d、7 d、14 d后再次评分,评价CAI对脑缺血损伤大鼠神经功能行为学的影响;用苏木素-伊红（Hematoxylin-Eosin,HE）染色法观察各组大鼠脑组织病理形态学变化。（2）采用免疫组化法分析各组大鼠大脑缺血区皮层组织中MMP-2和MMP-9的表达。（3）原代培养BMECs传至第三代,采用CD31相关抗原进行免疫荧光鉴定;将BMECs 分为正常组、模型组和 CAI 低（1.25 μL/mL）、中（2.5 μL/mL）、高（5μL/mL）剂量组。模型组和CAI组采用氧糖剥夺（Oxygen and glucose deprivation,OGD）法建立BMECs拟缺血损伤模型。收集BMECs正常组的条件培养液（Normal-Conditioned medium,N-CM）、拟缺血模型组的条件培养液（Ischemic-Conditionedmedium,I-CM）及不同剂量CAI组拟缺血损伤后的条件培养液（Ischemic CAI-Conditioned medium,IC-CM）,其中,1.25 γL/mLCAI 作用 BMECs 的 IC-CM 作为 IC-CML,2.5 μL/mL CAI 作用的 IC-CM作为IC-CMM,5μL/mLCAI作用的IC-CM作为IC-CMH;原代培养神经元,采用NSE相关抗原对神经元进行免疫荧光鉴定;将神经元分为5组（N-CM、I-CM、IC-CML、IC-CMM、IC-CMH组）,分别将对应的内皮细胞条件液作用神经元,除N-CM组,其余组均用OGD造模6 h,之后通过CCK-8检测各组神经元的活性。（4）神经元PI3K/Akt和MAPK/Erk通路的相关指标检测:采用PCR法检测各组神经元Akt mRNA的表达水平,采用Western blot法检测各组神经元Akt的磷酸化水平（p-Akt/Akt）和 Erk 的磷酸化水平（p-Erk/Erk）。结果:（1）模型组大鼠的神经功能损伤逐渐加重,第7d时最为严重,CAI干预后可减轻大鼠的神经功能损伤,在7 d、14 d时,CAI组同模型组相比较,差异有统计学意义。HE染色结果显示,各时间点模型组的脑组织均呈现明显的损伤性变化,坏死明显。而阳性对照组和CAI组在干预7 d、14d后,对比模型组有较明显改善。（2）脑缺血时,缺血区皮层MMP-2随着缺血时间的增加而表达逐渐增多,在4个时间点中的表达以7d为峰值,到了 14d时表达减少;相较于模型组,CAI药物干预可降低MMP-2的表达,并在3 d、7 d时差异有统计学意义。MMP-9的高表达出现在早期,在1d时最高,3d、7 d都有所下降,14 d有上升趋势,CAI组相较于模型组1d、3d的表达降低,差异具有统计学意义。（3）OGD造模后,I-CM组神经元活性相较于N-CM组显着降低,CAI干预后的IC-CM组神经元活性随着药物浓度增加而逐渐升高。（4）与N-CM组相比,I-CM组神经元Akt mRNA表达显着减少,各IC-CM组神经元的Akt mRNA表达随着药物浓度增加均呈逐渐升高趋势,其中IC-CMH组的Akt mRNA同I-CM组比较差异有统计学意义;神经元的p-Akt/Akt同Akt的mRNA表达结果的趋势相似,同I-CM组比较,IC-CML组差异有统计学意义,IC-CMM和IC-CMH组差异显着。与N-CM组相比,I-CM组神经元p-Erk/Erk显着升高,CAI干预后的各IC-CM组有出现降低趋势,但相较于I-CM组统计均无差异。结论:CAI可改善模型大鼠神经功能和病理损伤,其作用可能与调控脑缺血损伤大鼠皮层与BBB有关的MMP-2和MMP-9表达有关;CAI作用的BMECs条件液活化神经元PI3K/Akt信号通路提高了拟缺血神经元的存活率。
刘海鹏[9]（2020）在《颐脑解郁复方对卒中后抑郁大鼠海马区JAK2和STAT3蛋白干预作用的研究》文中进行了进一步梳理目的卒中后抑郁（Post-stroke Depression,PSD）是指脑卒中后诱发的抑郁症状,是脑卒中后最常见的情感障碍疾病之一。PSD对脑卒中患者神经功能康复、生活质量和生存率有重要影响,明显加重患者本人、家庭及社会的经济负担,因而目前受到越来越多的关注[1]。但PSD发病机制并不十分清楚,课题组前期研究发现,海马结构的损伤与PSD的发生密切相关,“海马神经重塑障碍”是其关键步骤,因JAK/STAT信号通路广泛参与细胞的增殖、分化成熟、凋亡以及免疫调节等过程,且JAK2、STAT3在海马神经元和神经胶质细胞中均有表达,与神经退行性疾病关系密切,故本研究基于JAK2/STAT3信号通路对PSD大鼠行为学及海马进行了研究,以期发现JAK2/STAT3信号通路与PSD的相关性及颐脑解郁复方对PSD的干预机制。方法将270只雄性SPF级SD大鼠随机分为正常组、假手术组、卒中组、PSD组、西药组和中药组,每组各45只。假手术组只分离血管,卒中组仅行MCAO术、PSD组、西药组、中药组在MCAO术后1周应用慢性束缚应激复合单笼饲养的方法制备PSD大鼠模型。自脑卒中造模开始后7天,西药组给予盐酸氟西汀胶囊2.33mg/（kg·d）灌胃,中药组给予9.92g/（kg·d）灌胃,其余各组大鼠给予蒸馏水10mL/kg灌胃,均每日1次。分别于卒中后第2、4、8周进行下列检测:1.蔗糖水试验、旷场试验和强迫游泳实验检测其行为学变化。2.免疫组化法检测海马齿状回区P-JAK2,P-STAT3的表达。3.Western blot 法检测海马区 P-JAK2,P-STAT3 的表达。4.RT-PCR法检测左侧海马JAK2,STAT3基因的表达。1.行为学测试结果1.1蔗糖水偏好试验结果2、4、8周时,相比正常组,假手术组大鼠蔗糖水偏好度均无差异（P>0.05）。2周时,相比假手术组,卒中组大鼠蔗糖水偏好度明显下降（P<0.01）;相比卒中组大鼠,PSD组大鼠蔗糖水偏好度无差异（P>0.05）;相比PSD组,西药组大鼠蔗糖水偏好度明显升高（P<0.05）;颐脑解郁复方组大鼠蔗糖水偏好度无差异（P>0.05）。4周时,相比假手术组,卒中组大鼠蔗糖水偏好度明显降低（P<0.05）;相比卒中组大鼠,PSD组大鼠蔗糖水偏好度明显下降（P<0.05）;相比PSD组,颐脑解郁复方组和西药组大鼠蔗糖水偏好度明显提高（P<0.01）;8周时,卒中组大鼠相比假手术组、西药组和颐脑解郁复方组,蔗糖水偏好度均明显下降（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;相比卒中组大鼠,PSD组大鼠蔗糖水偏好度下降（P>0.05）;相比PSD组,颐脑解郁复方组和西药组大鼠蔗糖水偏好度数值均明显升高（P<0.01）。2、4、8周时,西药组和颐脑解郁复方组大鼠蔗糖水偏好度均无差异（P>0.05）。1.2旷场试验结果2、4、8周时,相比正常组,假手术组大鼠旷场垂直和水平得分均无差异（P>0.05）。2周时,相比假手术组,卒中组大鼠垂直和水平得分均下降（P<0.01）;相比卒中组大鼠,PSD组大鼠垂直和水平得分均下降（P<0.05）;相比PSD组,颐脑解郁复方组和西药组大鼠垂直得分无差异（P>0.05）,水平得分升高（P<0.01,P<0.05）。4周时,相比假手术组,卒中组大鼠垂直下降（P>0.05）,水平得分下降（P<0.05）;相比卒中组大鼠,PSD组大鼠垂直和水平得分明显下降（P<0.01,P<0.05）;相比PS D组,颐脑解郁复方组和西药组大鼠垂直、水平得分明显升高（P<0.05;P<0.01）。8周时,相比假手术,卒中组大鼠垂直和水平得分均明显下降（P<0.01）;相比卒中组大鼠,PSD组大鼠垂直和水平得分无差异（P>0.05）;相比PSD组,颐脑解郁复方组和西药组大鼠垂直和水平得分均明显升高（P<0.01）。2、4、8周时,相比西药组,颐脑解郁复方组大鼠旷场垂直和水平得分均无差异（P>0.05）。1.3强迫游泳试验结果2、4、8周时,相比正常组,假手术组大鼠游泳挣扎时间均无差异（P>0.05）。2周时,相比假手术组,卒中组大鼠游泳挣扎时间无差异（P>0.05）;相比卒中组,PSD组游泳挣扎时间明显缩短（P<0.01,P<0.05）;相比PSD组,西药组大鼠游泳挣扎时间明显延长（P<0.05）,颐脑解郁复方组大鼠游泳挣扎时间无差异（P>0.05）。4周时,相比假手术组,卒中组大鼠游泳挣扎时间游泳挣扎时间明显缩短（P<0.01）;相比卒中组,PSD组大鼠游泳挣扎时间明显缩短（P<0.01）;相比PSD组,颐脑解郁复方组和西组大鼠游泳挣扎时间明显延长（P<0.01）;相比卒中组,颐脑解郁复方组大鼠游泳挣扎时间明显延长（P<0.05）。8周时,相比假手术,卒中组大鼠游泳挣扎时间明显缩短（P<0.01）;相比卒中组大鼠,PSD组大鼠游泳挣扎时间无差异（P>0.05）;相比PSD组,颐脑解郁复方组和西药组大鼠游泳挣扎时间明显延长（P<0.01,P<0.05）;相比卒中组,颐脑解郁复方组大鼠游泳挣扎时间明显延长（P<0.05）。2、4、8周时,颐脑解郁复方组大鼠游泳挣扎时间相比西药组,均无差异（P>0.05）。2.1分子实验结果2.1 JAK2实验结果2、4、8周时,相比正常组,假手术组JAK2免疫组化、WB和PCR结果均无差异（P>0.05）。2周时,相比假手术组,卒中组JAK2免疫组化、WB和PCR结果均明显升高（P<0.05,P<0.05,P<0.01）;相比卒中组,PSD组JAK2免疫组化、WB和PCR结果均没有统计学差异（P>0.05）;相比PSD组,颐脑解郁复方组和西药组JAK2免疫组化、WB 和 PCR 结果均降低（P<0.05,P>0.05,P>0.05）。4周时,相比假手术组,卒中组JAK2免疫组化、WB和PCR结果升高（P<0.05）;相比卒中组,PSD组JAK2免疫组化、WB和PCR结果均升高（P<0.05）;相比PSD组,颐脑解郁复方组JAK2免疫组化、WB和PCR结果均明显降低（P<0.05,P<0.01,P<0.01）;西药组JAK2免疫组化、WB和PCR结果均明显降低（P<0.01,P<0.01,P<0.05）。8周时,相比假手术组,卒中组JAK2免疫组化、WB和PCR结果均升高（P<0.05,P>0.05,P>0.05）;相比卒中组,PSD组JAK2免疫组化、WB和PCR结果均没有差异（P>0.05）;相比PSD组,颐脑解郁复方组JAK2免疫组化、WB和PCR结果均降低（P<0.05）;西药组JAK2免疫组化、WB和PCR结果降低（P<0.01,P<0.05,P<0.05）。2、4、8周时,相比西药组,中药组JAK2免疫组化、WB和PCR结果均无差异（P>0.05）。2.2 STAT3实验结果2、4、8周时,相比正常组,假手术组STAT3免疫组化、WB和PCR结果均无差异（P>0.05）。2周时,相比假手术组,卒中组STAT3免疫组化、WB和PCR结果均明显升高（P<0.05,P<0.05,P<0.01）;相比卒中组,PSD组STAT3免疫组化、WB和PCR结果均无差异（P>0.05）;相比PSD组,颐脑解郁复方组和西药组STAT3免疫组化、WB和P CR 结果均降低（P<0.05,P>0.05,P>0.05）。4周时,相比假手术组,卒中组STAT3免疫组化、WB和PCR结果升高（P>0.05,P<0.05,P>0.05）;相比卒中组,PSD组STAT3免疫组化、WB和PCR结果均升高（P<0.05）;相比PSD组,颐脑解郁复方组STAT3免疫组化、WB和PCR结果均明显降低（P<0.05,P<0.01,P<0.01）;西药组STAT3免疫组化、WB和PCR结果均明显降低（P<0.05,P<0.01,P<0.05）。8周时,相比假手术组,卒中组STAT3免疫组化、WB和PCR结果均升高（P<0.05,P>0.05,P>0.05）;相比卒中组,PSD组STAT3免疫组化、WB和PCR结果均没有统计学差异（P>0.05）;相比PSD组,颐脑解郁复方组STAT3免疫组化、WB和PCR结果均降低（P<0.05）;西药组STAT3免疫组化、WB和PCR结果降低（P<0.05,P>0.05,P<0.05）。2、4、8周时,相比西药组,中药组STAT3免疫组化、WB和PCR结果均无差异（P>0.05）。结论线栓法MCAO术联合束缚应激和孤养的方法,可在术后4周建立稳定的PSD模型。颐脑解郁复方对PSD具有预防和治疗的双重作用。JAK2/STAT3信号通路的过度活化可能阻碍了大鼠海马神经重塑的进程,颐脑解郁复方的治疗作用可能与抑制JAK2/STAT3信号通路相关基因和蛋白的表达、促进海马神经重塑有关。
刘旺华[10]（2019）在《基于微观辨证探讨脑缺血后脾虚病机可能及健脾补土方干预》文中指出目的:采用文献调查法探讨脑缺血损伤后脾虚病机可能;从在体和离体两层次探讨健脾补土方（JPBTF）对脑缺血损伤的保护作用及其对细胞外基质（ECM）及整合素（INT）-黏着斑激酶（FAK）信号通路的干预作用及机理,反证脑缺血损伤后脾虚病机可能,为临床抗脑缺血损伤提供新的治法和切入点。方法:1.通过文献回顾性研究,检索近10年脑卒中急性期相关期刊文献,运用频次分析探讨缺血性脑卒中证素分布规律。2.以《古今名医临证金鉴·中风卷》收录的着名医家治疗脑卒中的经验方为研究对象,运用频次分析、聚类分析探讨缺血性脑卒中用药规律。3.基于微观辨证和取象比类思想,将神经ECM微观结构与中医“脾土”功能之间的相似性进行类比,提出健脾补土法保护ECM抗脑缺血损伤的治法。在体实验中,采用大脑中动脉闭塞法制备大鼠脑缺血再灌注模型。将大鼠分为假手术组、模型组、阳性对照组、JPBTF小剂量组、JPBTF中剂量组、JPBTF大剂量组。神经功能缺损评分采用改良大鼠m-NSS法,脑组织病理形态采用HE染色法观察,血脑屏障采用电镜观察,血脑屏障通透性采用伊文思蓝渗出法检测,细胞外基质胶原（Col Ⅳ）、层粘连蛋白（LN）、纤维蛋白原（FN）、Caspase-3蛋白表达用免疫组化法检测,胶原容积分数（CVF）采用Masson染色法检测,MMP-9 mRNA、MMP-2 mRNA表达用RT-PCR法检测,INTβ3、p-FAK、p-AKT、bcl-2蛋白表达用免疫印迹法检测,神经细胞凋亡检测用TUNEL法。细胞实验中INT、ILK、FAK蛋白表达采用免疫印迹法和免疫细胞化学法检测。结果:1.脑卒中急性期常见证型有13个证型,其中与“痰”有关的证有7个,累积频率占53.8%。与“瘀,”有关的证型有5个,累积频率占50.2%。与“气虚”有关的证型有3个,累积频率占22.9%。2.脑卒中急性期病位证素频次排前3的分别是脑、脾、肝;病性证素频次排前3的分别是痰、瘀血、气虚。3.脑卒中处方中频次排前10的单味药是白芍、牛膝、当归、半夏、茯苓、石菖蒲、胆南星、钩藤、黄芪、熟地。4.脑卒中处方中频次排前5位的药类依次是补虚药、平肝熄风药、活血化瘀药、清热药、化痰药。5.高频使用药物聚类分析聚为6类:分别是涤痰汤加减、羚角钩藤汤加减、天麻枸杞菊花饮、镇肝熄风汤加减、六味地黄丸加减、补阳还五汤加减。6JPBTF各剂量能改善脑缺血再灌注大鼠模型神经功能症状（P<0.01）,改善脑组织病理形态;JPBTF大、中剂量能保护血脑屏障完整性,减轻血脑屏障通透性,减少脑组织伊文思蓝的渗出（P<0.05）;JPBTF各剂量能减轻神经细胞凋亡（P<0.05～0.01）;JPBTF大、中剂量能减轻脑组织Col Ⅳ、LN、FN的降解和丢失（P<0.05～0.01）;JPBTF各剂量能抑制ECM降解酶MMP-9、MMP-2的表达（P<0.05～0.01）;JPBTF大、中剂量促进INT-FAK信号通路关键蛋白INTβ3、ILK、p-FAK、p-AKT、bcl-2 的表达（P<0.05～0.01）;JPBTF 各剂量能降低脑组织 Caspase-3的表达（P<0.05～0.01）。结论:1.文献研究显示,病位证素除了脑,脾排在第一,病性证素痰排第一,气虚排第三。表明脾失健运,气血生化不足以及脾失健运,酿湿生痰是缺血性脑卒中的重要病理环节,脾虚是脑缺血后的一个重要的病机;通过对《当代名医临证金鉴·中风卷》进行数据挖掘显示,健脾益气是治疗脑卒中的重要治法单元,为健脾补土法组方治疗脑卒中提供了理论支撑。2.健脾补土方能改善脑缺血再灌注大鼠脾虚状态、神经功能和脑组织病理形态,减轻ECM降解,抑制神经细胞失巢凋亡。3.健脾补土方可能通过保护ECM和干预INT-FAK信号通路减轻脑缺血神经损伤。4.基于微观辨证和取象比类思想将ECM与“脾土”类比建立的健脾补土法保护神经ECM抗脑缺血损伤具有可行性。
二、健脑复方对大鼠缺血性脑损伤的保护作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、健脑复方对大鼠缺血性脑损伤的保护作用（论文提纲范文）
（1）星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 星蒌承气汤药效物质基础及对缺血性卒中神经保护机制研究进展 |
| 1 大黄 |
| 1.1 中医认识 |
| 1.2 化学成分及神经保护作用 |
| 2 胆南星 |
| 2.1 中医认识 |
| 2.2 化学成分及神经保护作用 |
| 3 瓜蒌 |
| 3.1 中医认识 |
| 3.2 化学成分及神经保护作用 |
| 4 羌活 |
| 4.1 中医认识 |
| 4.2 化学成分及神经保护作用 |
| 5 芒硝 |
| 参考文献 |
| 第二章 基于肠道微生态理论的缺血性卒中病因与发病机制研究进展 |
| 1 肠道微生态与肠道微生态失调 |
| 2 菌-肠-脑轴 |
| 3 从肠到脑的上行通路 |
| 4 从脑到肠的下行通路 |
| 5 脑卒中相关危险因素与肠道菌群 |
| 6 卒中并发症的肠道微生态机制 |
| 7 结论 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 基于网络药理学与分子对接的星蒌承气汤治疗缺血性卒中的机制研究 |
| 1 研究资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 星蒌承气汤化学活性成分的检索与筛选 |
| 2.2 星蒌承气汤化学成分及缺血性卒中靶点筛选 |
| 2.3 交集基因蛋白互作网络(PPI)分析 |
| 2.4 基因本体论(Gene ontology,GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析 |
| 2.5 可视化网络构建与分析 |
| 2.6 分子对接 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 星蒌承气汤潜在化学活性成分的检索与筛选结果 |
| 3.2 星蒌承气汤活性成分靶点及缺血性卒中靶点预测结果 |
| 3.3 GO富集分析及KEGG代谢通路富集分析结果 |
| 3.4 可视化网络构建与分析 |
| 3.5 分子对接 |
| 4 讨论 |
| 4.1 网络药理学在中医药现代化研究中的应用 |
| 4.2 基于网络药理学方法探讨星蒌承气汤活性成分 |
| 4.3 基于网络药理学方法探讨星蒌承气汤效应机制 |
| 5 小结 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠神经保护作用及网络药理学关键靶点及通路实验验证 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 除胶实验 |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及处理 |
| 2.7 TUNEL法检测皮层梗死周围细胞凋亡情况 |
| 2.8 脑组织ELISA |
| 2.9 脑组织Western blot |
| 2.10 统计分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 神经功能评分 |
| 3.2 除胶实验 |
| 3.3 脑梗死体积评价 |
| 3.4 对缺血侧脑组织细胞凋亡的影响 |
| 3.5 星蒌承气汤对缺血侧脑组织TNF-α的影响 |
| 3.6 星蒌承气汤对缺血侧脑组织AKT、p-AKt、PI3K及NF-κB蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 星萎承气汤是治疗中风病急性期痰热腑实证的具有确切临床疗效的代表方剂 |
| 4.2 化痰通腑法代表方星蒌承气汤脑保护作用及中医理论探讨 |
| 4.3 卒中模型神经功能评分探讨 |
| 4.4 卒中模型行为学选择 |
| 4.5 星蒌承气汤与细胞凋亡 |
| 4.6 网络药理学关键靼点及通路实验验证 |
| 5 小结 |
| 实验二 星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠菌-肠-脑轴影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 取材及处理 |
| 2.4 免疫组化 |
| 2.5 免疫荧光 |
| 2.6 ELISA检测 |
| 2.8 肠道菌群分析 |
| 2.9 盲肠内容物短链脂肪酸(SCFAs)检测 |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 星蒌承气汤对中风痰热腑实证小鼠肠道菌群的影响 |
| 3.2 星蒌承气汤对中风痰热腑实证小鼠肠道菌群代谢产物短链脂肪酸及短链脂肪酸受体的影响 |
| 3.3 星蒌承气对菌-肠-脑轴神经-内分泌-免疫途径相关指标影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 基于脑肠互动理论探讨化痰通腑法治疗中风病的理论基础 |
| 4.2 星蒌承气汤对短链脂肪酸影响 |
| 4.3 星萎承气汤对菌-肠-脑轴自主神经途径影响 |
| 4.4 星蒌承气汤对菌-肠-脑轴神经内分泌途径影响 |
| 4.5 星萎承气汤对菌-肠-脑轴免疫途径影响 |
| 5 小结 |
| 实验三 星萎承气汤对中风急性期痰热腑实证伪无菌小鼠菌-肠-脑轴影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 除胶实验 |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及处理 |
| 2.7 免疫组化、免疫荧光 |
| 2.8 ELISA检测 |
| 2.9 肠道菌群分析 |
| 2.10 盲肠内容物SCFAs分析 |
| 2.11 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 神经功能评分 |
| 3.2 除胶实验 |
| 3.3 脑梗死体积评价 |
| 3.4 肠道菌群 |
| 3.5 短链脂肪酸 |
| 3.6 星蒌承气汤对伪无菌小鼠菌-肠-脑轴神经-内分泌-免疫途径相关指标影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 伪无菌模型建立及评价 |
| 4.2 肠道菌群是星蒌承气汤发挥作用的重要靶点 |
| 4.3 星蒌承气汤治疗急性期缺血性卒中机制的初步探讨 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）舒筋健脑方对脑瘫患者认知功能影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 中医认识脑性瘫痪的研究进展 |
| 1 概述 |
| 2 病因病机 |
| 3 辨证分型 |
| 4 体质 |
| 5 治疗 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 第二节 缺血缺氧脑损伤的机制研究进展 |
| 1 细胞凋亡 |
| 2 氧化应激 |
| 3 兴奋性氨基酸 |
| 4 单胺类神经递质 |
| 5 炎症反应 |
| 6 钙离子 |
| 7 NO及NOS酶类 |
| 8 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二章 |
| 第一节 基于因子和聚类分析脑瘫用药规律 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二节 益智仁治疗脑性瘫痪的网络药理学研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三节 舒筋健脑方治疗痉挛型脑瘫临床研究 |
| 1 一般资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四节 基于Bcl-2/Bax、Caspase-3探讨舒筋健脑方改善HIBD的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 中风病恢复期中医治疗进展研究 |
| 1 中药治疗 |
| 2 针灸治疗 |
| 3 推拿按摩治疗 |
| 4 运动疗法 |
| 综述二 血管性痴呆中西医发病机制研究进展 |
| 1 血管性痴呆西医发病机制 |
| 2 中医对血管性痴呆病因病机的认识 |
| 参考文献 |
| 第二章 临床研究通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究 |
| 第一节 资料与方法 |
| 1 病例来源 |
| 2 诊断标准 |
| 3 纳入标准 |
| 4 排除标准 |
| 5 研究设计 |
| 6 治疗方案 |
| 7 观察指标及方法 |
| 8 疗效评价标准 |
| 9 统计学方法 |
| 第二节 研究结果 |
| 1 观察对象入选及完成情况 |
| 2 受试者基本信息 |
| 3 受试者基线生命体征及一般情况 |
| 4 受试者基线合并疾病情况 |
| 5 药品使用情况 |
| 6 基线体格检查情况 |
| 7 基线辅助检查 |
| 8 疗效评价 |
| 9 安全性评价 |
| 第三节 讨论 |
| 1 临床研究完成情况 |
| 2 临床研究治疗方案的设计及实施情况 |
| 3 临床结果讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 实验研究通络化痰胶囊对VD大鼠clathrin介导的NMDA受体作用机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 第二节 结果 |
| 1 行为学实验结果 |
| 2 通络化痰胶囊对VD大鼠海马组织形态学的影响 |
| 3 造模后不同时间点各组大鼠海马组织clathrin、NMDAR1及Rab5b mRNA RT-PCR结果 |
| 4 造模后不同时间点海马组织clathrin、膜蛋白NMDAR1 Western Blot结果 |
| 第三节 讨论 |
| 1 血管性痴呆大鼠行为学特点 |
| 2 组织形态学特点 |
| 3 通络化痰胶囊对脑缺血再灌注早期海马神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程不同时点的动态变化研究 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 创新与优势 |
| 2 不足与展望 |
| 附录 |
| 1. 通络化痰胶囊治疗中风病中经络(脑梗塞)恢复期(痰瘀阻络证)临床研究CRF表 |
| 2. 各组大鼠海马CA1区组织形态观察 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）蒙成药嘎日迪-13味丸对大鼠缺血缺氧性脑损伤保护作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 前言 |
| 2 大鼠脑缺血再灌注模型的制备 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验试剂及药品 |
| 2.1.3 试验仪器及设备 |
| 2.1.4 实验药品配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验分组方法 |
| 2.2.2 大鼠缺血再灌注模型的制备 |
| 2.2.3 神经功能评分 |
| 2.2.4 大鼠脑组织TTC染色 |
| 2.2.5 统计学方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 神经功能评分的结果 |
| 2.3.2 TTC染色结果 |
| 2.4 小结 |
| 3 蒙成药嘎日迪-13味丸对实验大鼠缺血脑组织损伤的保护作用 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 实验试剂及药品 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.1.4 实验药物的配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 分组以及处理方法 |
| 3.2.2 大鼠神经功能学评分 |
| 3.2.3 TTC染色以及脑梗死百分比 |
| 3.2.4 大鼠脑组织蜡块的制备 |
| 3.2.5 HE染色 |
| 3.2.6 统计学方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 大鼠的一般情况 |
| 3.3.2 术后以及实验过程中大鼠的存活情况 |
| 3.3.3 实验后各组实验大鼠神经功能学评分 |
| 3.3.4 TTC染色结果与脑梗死面积百分比 |
| 3.3.5 HE染色结果 |
| 3.4 小结 |
| 4 蒙成药嘎日迪-13味丸对大鼠缺血再灌注损伤的脑组织炎症反应的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验试剂及药品 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 分组以及处理方法 |
| 4.2.2 酶联免疫吸附法检测大鼠缺血脑组织炎性因子的含量 |
| 4.2.3 脑组织免疫组化染色 |
| 4.2.4 统计学方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 实验大鼠脑组织炎性细胞因子IL-1β和TNF-α含量 |
| 4.3.2 大鼠脑组织JAK-2与STAT-3 的表达 |
| 4.4 小结 |
| 5 讨论 |
| 5.1 大鼠缺血再灌注脑损伤模型的建立 |
| 5.2 炎症反应在缺血性脑损伤中的作用 |
| 5.3 蒙成药嘎日迪-13味丸对脑组织的保护作用 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 蒙医药治疗缺血性脑血管疾病的研究进展 |
| 1 蒙医对于缺血性脑血管疾病的认识 |
| 2 蒙医药对于缺血性脑血管疾病的保护作用 |
| 2.1 抗氧化应激作用 |
| 2.2 抗炎症反应作用 |
| 2.3 抑制细胞凋亡的作用 |
| 2.4 抗凝血作用 |
| 3 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（5）参知健脑方对拟血管性痴呆细胞模型的神经保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 参知健脑方各组分药物改善认知机制研究 |
| 1 人参 |
| 1.1 中医认识 |
| 1.2 化学成分 |
| 1.3 改善认知机制 |
| 2 知母 |
| 2.1 中医认识 |
| 2.2 化学成分 |
| 2.3 改善认知机制 |
| 3 赤芍 |
| 3.1 中医认识 |
| 3.2 化学成分 |
| 3.3 改善认知机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 神经元突触囊泡内吞途径对神经系统疾病的影响 |
| 1 网格蛋白介导的内吞作用(CME)与神经系统疾病 |
| 1.1 网格蛋白包被组装 |
| 1.2 质膜内陷和凹窝形成 |
| 1.3 凹陷收缩和剪切 |
| 1.4 囊泡去包被 |
| 2 Kiss and run途径 |
| 3 不依赖网格蛋白的大量内吞作用(clathrin-independent bulk endocytosis,CIE) |
| 4 超速内吞作用 |
| 5 讨论与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 基于网络药理学的参知健脑方治疗血管性痴呆机制研究 |
| 1 研究材料 |
| 1.1 数据库 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 参知健脑方入血活性化学成分的检索与筛选 |
| 2.2 参知健脑方药物成分-靶点、VD疾病-靶点及参知健脑方治病靶点的预测 |
| 2.3 参知健脑方活性成分-VD-靶点的网络构建 |
| 2.4 基因本体论(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 参知健脑方潜在入血活性化学成分的筛选结果 |
| 3.2 参知健脑方药物成分-靶点、VD疾病-靶点及参知健脑方治病靶点预测结果 |
| 3.3 参知健脑方-活性成分-VD靶点的网络构建 |
| 3.4 GO功能及KEGG通路富集分析结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中医药研究与网络药理学 |
| 4.2 参知健脑方的理法方药分析 |
| 4.3 参知健脑方的网络药理学分析 |
| 5 小结 |
| 第二部分 参知健脑方和谷氨酸干预浓度筛选及其对拟VD细胞模型增殖及毒性的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器设备及耗材 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 PC12细胞培养 |
| 2.2 谷氨酸诱导PC12细胞损伤的最适宜造模浓度筛选及参知健脑方低、中、高剂量适宜浓度筛选(CCK-8法) |
| 2.3 谷氨酸造模适宜浓度及干预药物适宜浓度的筛选验证(IncuCyte长时间动态活细胞成像及功能分析系统) |
| 2.4 谷氨酸诱导损伤PC12细胞模型的建立及分组给药 |
| 2.5 CCK-8法检测各组细胞增殖及毒性 |
| 2.6 IncuCyte长时间动态活细胞成像及功能分析系统检测各组细胞增殖及毒性2.7 CFSE细胞增殖实验 |
| 2.7 CFSE细胞增殖实验 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 生理状态下PC12细胞的形态学特征 |
| 3.2 不同浓度谷氨酸和参知健脑方溶液对PC12细胞增殖及毒性的影响 |
| 3.3 参知健脑方对拟VD细胞模型的增殖及毒性影响 |
| 3.4 CFSE细胞增殖实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 “毒损脑络”与VD |
| 4.2 “毒损脑络”的现代生物学内涵 |
| 4.3 “解毒通络”是治疗VD的重要法则 |
| 4.4 谷氨酸诱导损伤PC12细胞模型的建立 |
| 4.5 参知健脑方对谷氨酸损伤PC12细胞的增殖及毒性作用 |
| 5 小结 |
| 第三部分 参知健脑方对拟VD细胞模型周期、凋亡、钙离子浓度及活性氧的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器设备及耗材 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 PC12细胞培养 |
| 2.2 谷氨酸损伤的PC12细胞模型的建立及各组给药 |
| 2.3 流式细胞术检测PC12细胞周期 |
| 2.4 流式细胞术检测PC12细胞凋亡 |
| 2.5 高内涵细胞成像分析系统检测PC12细胞内游离钙离子浓度、活性氧及超氧化物的水平 |
| 2.6 qRT-PCR技术检测PC12细胞caspase-3 mRNA的相对表达水平 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 PC12细胞周期检测结果 |
| 3.2 PC12细胞凋亡检测结果 |
| 3.3 PC12细胞内游离钙离子浓度、活性氧及超氧化物的水平检测结果 |
| 3.4 参知健脑方对谷氨酸损伤PC12细胞caspase-3 mRNA表达水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 参知健脑方与谷氨酸损伤的PC12细胞周期阻滞 |
| 4.2 参知健脑方与谷氨酸损伤的PC12细胞凋亡 |
| 4.3 参知健脑方与谷氨酸诱导的PC12细胞内钙超载及氧化应激损伤 |
| 4.4 “解毒通络”法则的部分生物学内涵 |
| 5 小结 |
| 第四部分 参知健脑方对拟VD细胞模型clathrin介导的NMDA受体胞吞过程的作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器设备及耗材 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞免疫荧光技术检测PC12细胞clathrin、RAB5B和NMDAR1的分布和表达水平 |
| 2.2 qRT-PCR检测PC12细胞clathrin mRNA和NMDAR1 mRNA的表达水平 |
| 2.3 Western Blot检测PC12细胞clathrin、RAB5B及NMDAR1的表达水平 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 PC12细胞的细胞免疫荧光检测结果 |
| 3.2 PC12细胞的qRT-PCR检测结果 |
| 3.3 PC12细胞的Western Blot检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 参知健脑方与clathrin介导的细胞内吞作用 |
| 4.2 参知健脑方与NMDA受体的内吞过程 |
| 4.3 “解毒通络”法则的部分生物学内涵 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）基于JAK2/STAT3信号通路探讨复方当归注射液对缺血性脑卒中炎性反应的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 缺血性脑卒中炎性反应机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 复方当归注射液组方药味对缺血性脑卒中炎性反应的研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 复方当归注射液对缺血性脑卒中大鼠的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 复方当归注射液对缺血性脑卒中大鼠IL-6、JAK2/STAT3信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 复方当归注射液作用的脑微血管内皮细胞条件培养液对拟缺血损伤小胶质细胞形态和活性的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 复方当归注射液作用的脑微血管内皮细胞条件培养液对拟缺血损伤小胶质细胞迁移和JAK2/STAT3信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（7）消栓健脑冲剂对大鼠脑梗死模型的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 脑梗死的中西医诊疗进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（8）复方当归注射液对脑缺血损伤大鼠MMP-2/9以及拟缺血损伤神经元的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写词 |
| 综述一 缺血性中风神经血管单元的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 活血通络方药治疗缺血性中风的药理学研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 技术路线 |
| 实验一 复方当归注射液对脑缺血损伤大鼠行为学以及脑组织形态学的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 复方当归注射液对脑缺血损伤大鼠大脑皮质MMP-2、MMP-9表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 复方当归注射液作用的内皮细胞条件液对拟缺血损伤神经元存活率的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 复方当归注射液作用的内皮细胞条件液对拟缺血损伤神经元PI3K/Akt、MAPK/Erk通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）颐脑解郁复方对卒中后抑郁大鼠海马区JAK2和STAT3蛋白干预作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 PSD的西医研究进展 |
| 1. PSD的临床研究 |
| 2. PSD的发病机制 |
| 3. PSD动物模型的建立与评价 |
| 综述二 PSD的中医药研究进展 |
| 1. PSD的中医源流 |
| 2. PSD的病因 |
| 3. PSD的病位 |
| 4. PSD的病机特点及常见证型 |
| 5. 单一中药或其有效提取物治疗PSD |
| 6. PSD的中药复方治疗 |
| 7. PSD的联合治疗 |
| 8. 结语 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 技术路线图 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及实验环境 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 材料 |
| 1.4 动物模型制备及处理 |
| 1.5 行为学观察 |
| 1.6 免疫组织化学染色法检测p-JAK2、p-STAT3 |
| 1.7 Western Blot方法检测p-JAK2、p-STAT3 |
| 1.8 SYBR荧光实时定量PCR法 |
| 1.9 数据处理与统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 宏观表征观察 |
| 2.2 行为学测试结果 |
| 2.3 免疫组化实验结果 |
| 2.4 Western Blot实验结果 |
| 2.5 RT-PCR实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 肝肾亏虚、气滞血瘀证PSD大鼠模型的建立与评价 |
| 3.2 颐脑解郁复方对肝肾亏虚、气滞血瘀型PSD的治疗作用 |
| 3.3 颐脑解郁复方对JAK2/STAT3信号通路的影响 |
| 4. 结论 |
| 5. 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在校期间主要研究成果 |
（10）基于微观辨证探讨脑缺血后脾虚病机可能及健脾补土方干预（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 基于文献的缺血性脑卒中证素分布规律研究 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献资料来源 |
| 1.2 检索策略 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 筛选方法 |
| 1.6 资料规范化处理 |
| 1.7数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 各证型分布情况 |
| 2.2 病位、病性证素分布规律 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 基于文献的缺血性脑卒中用药规律研究 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 资料规范化处理 |
| 1.5 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 脑卒中处方中药使用步页次分析 |
| 2.2 脑卒中处方药物类别分析 |
| 2.3 高频使用药物聚类分析 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 健脾补土方通过ECM和INT-FAK通路对脑缺血损伤的干预 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 健脾补土方对大鼠脑缺血再灌注模型脑损伤的影响 |
| 1.1.1 健脾补土方对脑缺血再灌注大鼠神经功能和脑组织病理形态的影响 |
| 1.1.2 健脾补土方对脑缺血再灌注大鼠伊文思蓝渗出的影响 |
| 1.1.3 健脾补土方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的影响 |
| 1.1.4 健脾补土方对脑缺血再灌注大鼠脑组织ECM的影响 |
| 1.1.5 健脾补土方对调控ECM降解的酶类的影响 |
| 1.1.6 健脾补土方对INT-FAK信号通路INTβ3、p-FAK、p-AKT、bcl-2表达的影响 |
| 1.2 健脾补土方对体外神经元INT、ILK、FAK表达的影响 |
| 2 结果 |
| 2.1 健脾补土方对大鼠脑缺血再灌注模型脑损伤的影响 |
| 2.1.1 动物一般情况及证候观察 |
| 2.1.2 健脾补土方对脑缺血再灌注大鼠神经功能的影响 |
| 2.1.3 健脾补土方对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织病理形态的影响 |
| 2.1.4 健脾补土方对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响 |
| 2.1.5 健脾补土方对脑缺血灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的影响 |
| 2.1.6 健脾补土方对脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞外基质的影响 |
| 2.1.7 健脾补土方对调控ECM降解的酶类的影响 |
| 2.1.8 健脾补土方对INT-FAK信号通路INTβ3、p-FAK、p-AKT、bcl-2表达的影响 |
| 2.2 健脾补土方对体外神经元INT、ILK、FAK表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 微观辨证 |
| 3.2 取象比类 |
| 3.3 基于微观辨证和取象比类思想的细胞外基质与“脾土”的类比 |
| 3.4 ”脾土”与脑生成的关系 |
| 3.5 “脾土”与脑的经络相通关系 |
| 3.6 “脾土”与脑主情志的关系 |
| 3.7 “脾土”与脑卒中发病的关系 |
| 3.8 脑卒中临床特点与“脾土”的关系 |
| 3.9 ECM和INT-FAK通路与脑缺血损伤的关系 |
| 3.10 中医药防治脑缺血性疾病研究概况 |
| 3.11 健脾补土方通过ECM和INT-FAK通路对脑缺血损伤的干预 |
| 3.12 健脾补土方立法选方理论探讨 |
| 第四部分 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 攻读博士学位期间主要业绩 |
| 综述 中医药防治缺血性脑卒中研究进展 |
| 参考文献 |
四、健脑复方对大鼠缺血性脑损伤的保护作用（论文参考文献）
- [1]星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究[D]. 高强. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]舒筋健脑方对脑瘫患者认知功能影响及机制研究[D]. 赵亚林. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究[D]. 张丹丹. 北京中医药大学, 2020(04)
- [4]蒙成药嘎日迪-13味丸对大鼠缺血缺氧性脑损伤保护作用的研究[D]. 陈宇欣. 内蒙古民族大学, 2020(02)
- [5]参知健脑方对拟血管性痴呆细胞模型的神经保护作用及机制研究[D]. 田丹枫. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]基于JAK2/STAT3信号通路探讨复方当归注射液对缺血性脑卒中炎性反应的作用机制[D]. 李月. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]消栓健脑冲剂对大鼠脑梗死模型的保护作用及机制研究[D]. 孙丽娜. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [8]复方当归注射液对脑缺血损伤大鼠MMP-2/9以及拟缺血损伤神经元的影响[D]. 李韵歆. 北京中医药大学, 2020(04)
- [9]颐脑解郁复方对卒中后抑郁大鼠海马区JAK2和STAT3蛋白干预作用的研究[D]. 刘海鹏. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]基于微观辨证探讨脑缺血后脾虚病机可能及健脾补土方干预[D]. 刘旺华. 湖南中医药大学, 2019(04)