一、EFFECTS OF CHRONIC STRESS ON THE ACTIVITIES OF SOD, GSH-Px AND MDA LEVEL IN FEMALE RATS' BRAIN（论文文献综述）
李志鑫[1]（2021）在《CircGLI3竞争性结合miR-339-5p调控VEGFA表达在仔猪空肠氧化应激中的作用研究》文中研究表明现代规模化养猪生产中,氧化应激是影响断奶仔猪健康生长的重要因素。肠道作为氧化应激反应的重要器官,其结构和功能的改变对仔猪的生长性能有着重要影响。氧化应激可以通过影响仔猪肠道内相关circRNAs、miRNAs和mRNAs的调控表达,影响DNA合成,造成细胞氧化损伤,从而导致仔猪的生长发育缓慢等问题。circRNA作为一种新型非编码RNA,在细胞内稳定存在,不易被降解,而且能够通过竞争结合miRNA,从而调控其靶基因的表达。目前,circRNA在断奶仔猪肠道氧化应激机制中的作用机理尚不明确。因此,本研究中以长白猪仔猪作为研究对象,通过腹腔注射敌草快（Diquat,DQ）建立仔猪氧化应激模型,通过转录组测序手段挖掘了大量与氧化应激相关的circRNAs、miRNAs和mRNAs。随后,我们通过DQ诱导猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）构建氧化应激细胞模型,并利用该细胞模型验证circGLI3-miR-339-5p-VEGFA三者的ceRNA调控关系,具体结果如下:（1）DQ诱导的氧化应激反应显着降低了长白猪断奶仔猪的生长性能,与对照组相比,氧化应激组仔猪7日内体重增幅显着低于对照组。此外,氧化应激破坏了长白猪断奶仔猪的肠道结构,氧化应激组断奶仔猪的小肠绒毛高度显着降低,隐窝深度显着增加;氧化应激组仔猪血清中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）和总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）均显着低于对照组,二胺氧化酶（diamine oxidase,DAO）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）的含量显着高于对照组（P<0.01）。（2）仔猪空肠粘膜的转录组学分析。完成对照组和处理组共6个样品的circRNA测序,经过测序质量控制,共获得133.70 Gb Clean Data,将各样品的Clean Reads与猪的参考基因组进行序列比对,比对效率从99.98%到99.99%不等,共检测到circRNAs2559个,以|log2FC|≥2.0和FDR<0.05作为筛选差异circRNAs的标准,筛选到差异表达的环状RNA751个,其中上调432个,下调319个;通过对差异环状RNA来源基因的GO富集分析,差异表达circRNAs来源基因的GO富集分析多集中于生物学过程的细胞过程、代谢过程、生物调控和刺激反应,关联到的分子功能主要是催化活性和蛋白结合;KEGG富集分析表明显着富集的信号通路是DNA复制、内质网中蛋白质合成、碳代谢、谷胱甘肽代谢和氨基酸的生物合成等;完成氧化应激组和对照组6个样品的mRNA测序,共获得133.69 Gb Clean Reads,各样品Clean Reads均达到16.02 Gb,各样品Q30碱基百分比均不小于93.24%,各样品的Reads与参考基因组的比对效率从94.31%到95.65%。共筛选到表达的mRNAs 164个,其中上调基因60个,下调基因104个;对差异基因进行GO富集分析发现,差异基因主要注释到细胞进程、细胞组分组织或生物来源、生物调控、催化活性、刺激反应和结构分子活性。进一步对差异基因所在通路进行KEGG富集分析,其中富集所占比例较高的通路分别是谷胱甘肽代谢、戊糖和葡萄糖醛酸酯的相互转化、氨基酸的生物合成、碳代谢和DNA复制。（3）miRNA测序结果。完成氧化应激组和对照组6个样品的miRNA测序,共得到201.39 M Clean Reads,共检测到miRNAs 2708个,以|log2FC|≥1和FDR<0.01作为筛选标准,筛选到差异表达的miRNAs43个,其中上调miRNAs19个,下调miRNAs24个。对差异表达miRNAs的靶基因进行GO分析发现,含有差异基因最多的分别是细胞过程、代谢过程、刺激反应和免疫系统过程、催化活性、蛋白结合、蛋白结合转录因子活性和核酸结合转录因子活性;对差异表达miRNAs靶基因的KEGG注释结果表明,靶基因主要富集的信号通路是过氧化物酶体、胞吞作用、内质网中蛋白质合成、剪接体、泛素介导的蛋白水解和RNA转运等。（4）对鉴定的差异基因中的11个circRNAs、13个micro RNAs和10个mRNAs的表达水平变化通过实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）进行验证,结果与高通量测序结果趋势基本一致。miR-339-5p和靶基因在长白猪和大蒲莲猪中的组织表达谱表明:DQ诱导处理后,miR-339-5p在长白猪仔猪和大蒲莲猪仔猪的空肠、回肠、脾脏和肝脏组织中均有差异表达。而且,在长白猪和大蒲莲猪空肠、回肠和脾脏组织中的表达量均显着低于对照组（P<0.01）;VEGFA在长白猪仔猪和大蒲莲猪仔猪的空肠、回肠、脾脏和肝脏组织中均有表达;而且,长白猪仔猪回肠和空肠中的表达量显着上调,在大蒲莲猪仔猪回肠和脾脏组织中显着上调（P<0.05）。（5）成功构建了IPEC-J2细胞氧化应激模型,确定氧化应激反应条件为250.7μmol/L的DQ处理IPEC-J2细胞24h,此时IPEC-J2细胞存活率为50%,符合氧化应激反应标准。同时,显微镜观察到DQ处理破坏了IPEC-J2细胞完整性和紧密连接性,导致细胞形态由菱形改变为圆形,且脱壁漂浮。（6）过表达circGLI3可以促进IPEC-J2细胞增殖,增加S期细胞比例（P<0.01）,并降低ROS的产生;同时,circGLI3可促进GSH-PX的活性上升,提高IPEC-J2细胞内T-AOC水平,减少了IPEC-J2细胞内MDA含量,并降低细胞内炎症因子IL-2和TNF-α和DAO水平,从而降低氧化损伤。过表达miR-339-5p可抑制IPEC-J2增殖,引起IPEC-J2细胞的G0/G1期阻滞,减少S期的细胞比例;此外,miR-339-5p可导致SOD和GSH-PX的活性显着下降,降低IPEC-J2细胞总抗氧化能力水平,促使MDA含量显着上升,细胞内炎症因子IL-2、IL-6、IL-1β、TNF-α和DAO水平显着上升,从而加剧氧化损伤。（7）根据RNAhybrid和Target Scan预测circGLI3的靶基因为miR-339-5p,亚细胞共定位显示circGLI3行使功能的区域主要是在细胞质内,而miR-339-5定位在细胞核和细胞质。miR-339-5p的靶基因为VEGFA;通过构建双荧光素酶报告基因载体,成功验证circGLI3可以结合miR-339-5p,miR-339-5p靶向结合在VEGFA的3’UTR区域。过表达circGLI3可下调miR-339-5p的表达（P<0.01）,并显着上调VEGFA基因和蛋白水平的表达;抑制miR-339-5p的表达同样可以上显着调VEGFA的表达;共转染circGLI3过表达载体和miR-339-5p mimics可以降低miR-339-5p mimics对IPEC-J2细胞增殖的抑制作用;共转染circGLI3过表达载体和miR-339-5p mimics可逆转miR-339-5p mimics对IPEC-J2 S期细胞比例的降低,同时降低G0/G1期的细胞比例;共转染circGLI3过表达载体和miR-339-5p mimics也可逆转miR-339-5p mimics对IPEC-J2细胞内ROS含量的提升。综上所述,通过构建长白猪仔猪个体水平的氧化应激模型和IPEC-J2的细胞氧化应激模型,发现氧化应激显着破坏了仔猪肠道结构和机体内的氧化还原平衡稳态;导致空肠粘膜组织的circRNAs、miRNAs和mRNAs异常表达。根据高通量测序结果和RNAhybrid、Target Scan预测以及生物信息学分析,设计circGLI3、miR-339-5p和VEGFA组成的ceRNA调控网络,验证了circGLI3通过直接结合miR-339-5p,调控靶基因VEGFA的表达,进而影响到IPEC-J2细胞增殖、细胞周期、ROS含量和与氧化应激相关的抗氧化酶、炎症因子的活性及含量变化。本研究揭示了仔猪肠道氧化应激的ceRNA分子机制,为深入研究氧化应激对仔猪肠道功能的影响提供了理论基础。
郭璞[2]（2021）在《基于T-2毒素所致垂体氧化应激及血脑屏障损伤的研究及小分子拮抗剂的发现》文中提出T-2毒素是由多种镰刀菌（主要是拟枝孢镰刀菌）产生的次级代谢产物。近年来,T-2毒素的神经毒性受到研究人员特别关注。体内动物试验研究表明,T-2毒素的暴露使小鼠或大鼠出现包括肌无力、共济失调和厌食在内的神经系统症状,甚至在大脑中枢神经系统血管周围出现显着水肿等明显脑损伤现象。此外,T-2毒素的暴露增加血脑屏障（BBB）通透性,使得甘露醇和伊文思蓝等可以跨越BBB。体外细胞模型研究发现,T-2毒素可以在神经侧累积,表明T-2毒素可能跨越BBB而损伤大脑和垂体等器官。然而,T-2毒素是否可以直接进入大脑而损伤脑部组织器官尚不清楚。PGC-1α是一种有效的线粒体生物合成和呼吸作用的激活剂,能够调控多种ROS代谢解毒酶（SOD-1、SOD-2、GPX-1、CAT）和线粒体UCP-2的表达,降低细胞内的ROS水平和氧化应激损伤。此外,PGC-1α与脑部损伤密切相关,在多种疾病引起的BBB损伤中起保护作用。因此,保持和增加PGC-1α水平是改善由其他疾病或外界刺激等造成的脑部损伤,尤其是BBB损伤及BBB通透性改变的重要手段。本实验室前期基因组结果显示,T-2毒素孵育GH3细胞可提高细胞内PGC-1α的基因表达水平。然而,PGC-1α是否可以作为靶点减轻T-2毒素的脑损伤毒性作用尚待进一步研究。因此,本研究以T-2毒素诱导的神经毒性为切入点,研究T-2毒素在体内是否可以直接跨越BBB及PGC-1α在T-2毒素引起的脑部损伤中的作用,并以PGC-1α为靶点筛选拮抗T-2毒素毒性的小分子化合物并进行体内外验证。此外,研究小分子化合物对其他有毒有害物质引起的BBB损伤是否也具有保护作用,为开发小分子化合物作为缓解BBB损伤的药物奠定基础。1 T-2毒素进入大鼠大脑引起大鼠大脑自噬和垂体凋亡本研究采用LC-MS/MS的方法检测到实验组大鼠脑部T-2毒素的含量为0.012μg/m L。T-2毒素对大脑的损伤作用随着暴露时间的增加而减弱,表现为T-2毒素暴露后3天大脑实质明显出血,7天后出血情况有所改善;T-2毒素暴露1天后,大脑皮层线粒体出现肿胀、空泡、嵴脱落、膜结构受损等损伤,暴露7天后,大多数线粒体的结构已经恢复正常。基因和蛋白表达结果显示,T-2毒素可以显着增加脑部自噬相关基因LC3、atg5和m TOR的基因表达,并增加LC3的蛋白表达,显着降低caspase-3和Bcl-x的基因表达,caspase-9和bax表达水平无明显变化。T-2毒素对垂体的损伤作用随着暴露时间的增加而增加,T-2毒素处理后,大鼠垂体前叶充血,且在T-2毒素处理7天后,充血最明显,细胞核深染,表明垂体细胞可能已发生凋亡;T-2毒素暴露1天后,部分线粒体开始肿胀;3天后,线粒体出现肿胀、空泡、嵴脱落、膜结构受损的现象;7天后,线粒体嵴排列无序,且线粒体区变成了电子透明区。垂体组织中LC3和atg5的基因表达仅在特定时间增加表达,LC3蛋白表达无明显变化,bax、Bcl-x和caspase-3表达水平显着升高,结果表明T-2毒素可抑制大鼠脑皮层细胞凋亡,引起大鼠垂体细胞凋亡。综合分析凋亡和自噬的关系,表明T-2毒素对垂体的损伤大于其对大脑皮层的损伤作用,且T-2毒素能直接进入大脑而对脑部造成损伤作用。2 PGC-1α是GH3细胞抵抗T-2毒素引起的氧化应激的重要因子本研究采用LC-MS/MS的方法检测了GH3细胞内外T-2毒素的含量。10 n M（4.66μg/kg）和40 n M（18.66μg/kg）的T-2毒素进入GH3细胞的含量达到了7.37%和11.82%,即0.34±0.09μg/kg和2.09±0.13μg/kg,说明T-2毒素可以直接进入GH3细胞,且随着T-2毒素浓度的升高,进入细胞的T-2毒素浓度和比例增加,表明随着T-2毒素浓度的升高,可能带来更大的细胞毒性。10和40 n M的T-2毒素孵育24 h,对GH3细胞氧化应激水平进行检测,包括检测细胞ROS水平,抗氧化应激酶SOD和GSH-Px的活性,及线粒体相关抗氧化应激基因PGC-1α和Tfam的表达水平。结果显示,T-2毒素剂量依赖性增加GH3细胞ROS水平、抗氧化酶活性及PGC-1α和Tfam的表达。随后,在GH3细胞中分别沉默PGC-1α和Tfam,结果显示,GH3细胞中沉默PGC-1α的表达能显着降低抗氧化酶的活力,并抑制Tfam的表达。然而,T-2毒素加入后,氧化酶的活力会代偿性的增加。GH3细胞中沉默Tfam的表达能显着降低抗氧化酶的活力,并增加ROS的水平。上述结果说明,PGC-1α通过正调控Tfam的表达而发挥抗氧化应激的作用,提示PGC-1α是GH3细胞抵抗氧化应激的一个重要因子。3 PGC-1α是h BMEC细胞抵抗T-2毒素细胞紧密性损伤的重要基因CCK-8试验结果显示,随着T-2毒素孵育浓度的增加,h BMEC细胞的活力随剂量依赖性降低。体外构建BBB模型结果显示,T-2毒素显着降低h BMEC细胞的TEER,并增加Na F渗透系数,表明T-2毒素破坏了BBB的紧密性。此外,T-2毒素剂量依赖性增加PGC-1α、SOD、GSH-Px、IL1β、TNFα、IL6、CCL2、CLCX1和CCL3基因表达。T-2毒素剂量依赖性下调TJs（ZO-1、CLDN5和occuldin）基因和蛋白表达。上述试验结果表明T-2毒素可引起h BMEC细胞的毒性并通过降低TJs的表达而引起BBB损伤。本研究应用过表达或抑制PGC-1α的表达结合间接免疫荧光技术进一步研究PGC-1α对TJs的影响。h BMEC细胞中过表达PGC-1α能显着增加细胞膜处TJs（ZO-1、CLDN5和occludin）的荧光强度,并改善T-2毒素引起的细胞膜模糊的现象。然而,PGC-1α的抑制剂SR-18292则进一步加重T-2毒素引起的TJs表达降低,细胞间的TJs更加模糊不清甚至失去细胞间TJs。结果表明PGC-1α是h BMEC细胞抵抗T-2毒素引起的BBB损伤的重要保护因子。4中药小分子化合物激活PGC-1α而抵抗T-2毒素和LPS引起的BBB损伤双荧光素酶结合分子对接技术从166份中药小分子化合物中筛选到化合物3-131直接与人PGC-1α的启动子结合并激活PGC-1α的转录,点突变试验对结合位点进行验证,发现71-73位（-1100 bp～-1000 bp）碱基突变后,双荧光素酶活性较P7降低了70%,提示3-131与PGC-1α转录起始位点上游-1100 bp～-1000 bp（71-73位碱基）直接以氢键结合而激活PGC-1α的转活性。采用T-2毒素和LPS构建体内体外BBB损伤模型,检测细胞和动物水平Na F的渗透情况及体内外TJs的表达情况来综合分析小分子化合物3-131对BBB的保护作用。体外BBB模型结果显示,T-2毒素和LPS可以显着降低TEER,增加Na F通透性,降低TJs（ZO-1、CLDN5和occludin）的表达,加入3-131后可以增加细胞间的TJs,使细胞膜结构清晰,缓解T-2毒素或LPS带来的BBB损伤。体内动物试验模型结果显示,T-2毒素和LPS引起小鼠脑内Na F增加;脑组织结构异常,大量海马区神经元出现变性且排列出现疏松紊乱现象,胞体固缩深染,并可见纤维缠结;ZO-1、CLDN5和occludin的蛋白表达降低,IL1β和TNFα蛋白表达增加。3-131可以增加小鼠血脑屏障紧密性、减轻大脑病理损伤、缓解大脑炎症反应从而缓解T-2毒素或LPS带来的脑损伤。综上所述,本文研究了T-2毒素直接跨越BBB对脑和垂体造成的损伤作用、PGC-1α在T-2毒素引起的垂体细胞氧化应激中的作用、PGC-1α在T-2毒素引起的BBB损伤中的作用、基于PGC-1α为靶点的小分子拮抗剂筛选及小分子拮抗剂在T-2毒素和LPS外界有毒有害物质损伤BBB中的保护作用。本文从神经毒性角度出发,以PGC-1α为靶点、以BBB损伤为研究对象,为T-2毒素引起的垂体和脑部损伤提供了新的依据,为研究T-2毒素拮抗剂提供了新的研究方向,同时为研究BBB保护剂奠定了基础。
卢肖蒙[3]（2021）在《脱油葵花籽缓解慢性应激小鼠5-羟色胺转化异常及机制研究》文中研究说明大脑5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）功能降低是情绪压力和情感障碍发生的易感生物学因素。近年来,色氨酸（tryptophan,Trp）代谢和高Trp饮食与慢性应激相关疾病的关系受到广泛的关注。既往研究表明摄入单剂量Trp或富含Trp的乳清蛋白能增强脑中5-HT的合成与释放,从而预防慢性应激引起的脑5-HT耗竭。葵花籽富含Trp,可能成为预防和缓解慢性应激的营养干预食物原料。本研究旨在考察脱油葵花籽作为食物主要蛋白来源时,对慢性不可预知温和应激模型（chronic unpredictable mild stress,CUMS）小鼠的缓解作用,并探索其可能的作用机制,以期为葵花籽及预防慢性应激相关食品的开发和利用提供科学依据。具体研究内容及结果如下:首先,研究了脱油葵花籽缓解慢性应激引起小鼠5-HT耗竭、氧化应激和炎症反应的效果。将60只6周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为6组（10只/组）:正常组（CON,正常饮食）、模型组（MOD,正常饮食）、脱油葵花籽组（DSFS）、脱油脱绿原酸葵花籽组（DDSFS）、乳清蛋白组（WPC,阳性对照）、鱼胶原蛋白组（FCP,阴性对照）。预饲喂4周后,除正常组外,其余各组小鼠均单笼饲养并将其暴露于CUMS模型持续3周。结果显示,脱油葵花籽显着改善CUMS引起的小鼠糖水偏好降低、悬尾和强迫游泳不动时间延长、旷场和高架十字迷宫自发活动性降低及焦虑样行为,其效果与WPC相当。脱油葵花籽处理组小鼠血浆Trp和Trp/大中性氨基酸的比值提高,海马5-HT、多巴胺、去甲肾上腺素和脑源性神经营养因子水平增加,而可引起5-HT耗竭的吲哚胺2,3-双加氧酶活性降低。这些变化还伴随着炎症异常、氧化应激和血浆皮质酮的改善。进一步探究了脱油葵花籽对小鼠肠黏膜屏障功能和结肠菌群组成的影响。结果显示,脱油葵花籽显着降低了小鼠血浆内毒素和二胺氧化酶水平,上调了结肠紧密连接相关蛋白和粘液素2 m RNA表达水平,改善肠黏膜屏障和肠道通透性。同时脱油葵花籽引起CUMS小鼠肠道菌群β多样性显着改变、丁酸弧菌属、别样杆菌属和幽门螺杆菌属显着升高,拟普雷沃菌属显着降低,同时显着增加了结肠内容物丙酸和戊酸含量。DSFS和DDSFS对肠道菌群组成和肠黏膜屏障的影响与WPC效果相当。最后,利用广泛靶向代谢组探究了脱油葵花籽对小鼠海马和结肠内容物代谢物的影响。结果显示,脱油葵花籽可显着改善CUMS引起的小鼠海马和结肠内容物内源性代谢物异常。从海马中筛选出28种与应激相关的差异代谢物,主要涉及甘油磷脂代谢、氨酰基t RNA生物合成、支链氨基酸生物合成、嘧啶代谢和嘌呤代谢等代谢通路。从结肠内容物筛选出18种标志物,主要涉及色氨酸代谢、氨酰基t RNA生物合成、支链氨基酸生物合成、芳香氨基酸生物合成、嘧啶代谢、嘌呤代谢等代谢通路。脱油葵花籽能使异常代谢产物恢复至正常水平,显着改善应激小鼠氨基酸代谢、核苷酸代谢、脂质代谢等多条代谢途径,从而改善小鼠应激状态。综上所述,脱油葵花籽可有效增加Trp生物利用度,缓解CUMS引起海马5-HT耗竭,从而预防愉悦感降低、焦虑行为、氧化应激和炎症反应。同时,脱油葵花籽改善了应激小鼠肠黏膜屏障功能、肠道通透性和结肠菌群组成、氨基酸代谢、核苷酸代谢、脂质代谢等代谢途径。
张峻榕[4]（2021）在《Au@TPM的构建及抗阿尔兹海默症活性作用的机制研究》文中研究表明阿尔兹海默症（Alzheimer’s Disease,AD）是一种慢性进行性的神经退行性疾病,其发病的原因十分复杂,与自身因素,遗传条件和环境影响都有关系。目前研究表明,氧化应激现象在老年斑和神经原纤维缠结出现之前就已发生,是AD发病机制最早的变化之一。值得注意的是,在AD患者大脑中会经常检测出丙二醛、过氧化亚硝酸盐和硫巴比土酸等一系列的氧化应激标记物,这说明AD患者脑死亡的主要诱因与抗氧化系统失衡有关。因此通过研发一种介导抑制氧化应激产生的抗氧化剂,已成为预防AD治疗的有效途径。金纳米颗粒（AuNPs）作为细胞内药物或基因递送的纳米载体,具有毒性低,大的比表面积,表面易可控组装和高特异性等特征,这使得它被广泛应用于生物医学领域。本论文通过采用柠檬酸钠还原四氯金酸的经典方法,对两种不同粒径大小的Au NPs进行合成,而后为了使良好抗氧化特性的玉米源单体肽TPM（Leu-Asp-Tyr-Glu）能够与Au NPs自组装在一起,我们将TPM亮氨酸的N端连接一分子3-巯基丙酸组合成为s-TPM,这样重组之后的玉米源活性肽可稳定装载到Au NPs的表面,并由此构建成为功能型的两种纳米抗氧化剂S-Au@TPM和L-Au@TPM。同时利用研究该抗氧化剂分别在细胞和动物模型中的活性作用效果,最终验证出S-Au@TPM和L-Au@TPM在用于抗AD领域应用中具备一定的可行性和适用性。具体研究内容如下:本论文首先对PC12低分化细胞给药后的形态学进行了观察,发现经S-Au@TPM和L-Au@TPM处理48小时后,对细胞具有促分化的作用,细胞轴突会随给药剂量的增加,类似神经元突触一样而伸长,初步证明构建的纳米抗氧化剂对PC12低分化细胞具备一定的神经保护作用,为此我们继续对体外AD细胞模型中的具体抑制作用进行更深入的探究。实验选择L-谷氨酸（L-Glu）作为细胞模型建立药物,利用MTT方法筛选出最优建模剂量为25 m M。在细胞类AD模型中,给药0.25 n M和0.5 n M的S-Au@TPM和L-Au@TPM可显着抑制由L-Glu诱导产生的细胞凋亡率,此时细胞的存活率分别可达90.02±13.89%和86.89±13.24%。本论文的阳性对照药物是盐酸多奈哌齐（Donepezil hydrochloride,DH）。它是一种可逆性中枢乙酰胆碱酯酶抑制剂,被广泛应用于治疗AD患者的认知功能障碍。我们使用Hochest 33342荧光染色法对细胞凋亡形态和数量进行观察,发现与阳性对照药DH和阴性对照药s-TPM相比,纳米抗氧化剂能够显着抑制模型细胞内凋亡核的固缩数目。同时利用系列实验再次验证,结果表明在L-Glu诱导损伤细胞中,通过给药不同浓度的S-Au@TPM和L-Au@TPM预处理3小时后,可显着降低细胞内乳酸脱氢酶（LDH）漏出量和丙二醛（MDA）生成量的增多,抑制胞内Ca2+浓度的升高,改善线粒体跨膜电位以及过氧化氢酶（CAT）活性的异常,从而缓解建模药物所致的细胞内活性氧（ROS）的过量淤积。以上研究说明,S-Au@TPM和L-Au@TPM能够显着抑制体外细胞类AD模型中的系列损伤,进而对抗氧化应激所造成的氧化系统的失衡。在抗AD动物模型活性研究中,采用Al Cl3与D-半乳糖联合给药的方式,对雌性昆明小鼠进行AD模型的建立。该模型可以充分复制AD主要的病理特征和临床表现,会造成实验小鼠氧化与抗氧化系统失衡、海马和大脑皮层神经元变性坏死、胆碱能系统异常、大脑皮层老年斑病变以及行为学方面的动作障碍等。在本部分实验中,结果表明,AD模型小鼠在给药浓度为0.5 mg/kg、0.7 mg/kg和1.0 mg/kg的S-Au@TPM和L-Au@TPM治疗16天后,会显着改善动物行为学中的系列指标:（1）在水迷宫测试中,能够增强模型小鼠的空间学习和记忆的能力;（2）在疲劳转棒行为学中,能够改善模型小鼠运动的协调能力以及对转棒旋转速度的迟缓应激能力;（3）在自主活动测试中,能够增加模型小鼠在陌生黑暗环境中的适应能力,并对环境做出适时的灵敏应激行为;综上所述,S-Au@TPM和L-Au@TPM能够改善AD模型小鼠神经系统功能性损伤所导致的行为障碍。进一步我们对胆碱能相关指标进行了检测,发现AD模型小鼠经过给药不同剂量的S-Au@TPM和L-Au@TPM治疗后,在下丘脑及血清中缺失的乙酰胆碱（ACh）和乙酰胆碱转移酶（Ch AT）的含量会有所提升,而神经元突触中过度释放的乙酰胆碱酯酶（Ach E）含量被得到了抑制,说明纳米抗氧化剂对胆碱能系统的活性可以进行有效的调控。此外,我们研究了纳米抗氧化剂对Nrf-2/Keap-1途径蛋白干扰表达的影响。结果显示,与AD模型小鼠相比,S-Au@TPM和L-Au@TPM能够上调Nrf-2和HO-1的表达,增加超氧化物歧化酶（SOD）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和CAT的活性,并降低MDA含量以及Keap-1的蛋白水平。以上结果表明,S-Au@TPM和L-Au@TPM可通过Nrf-2或Keap-1的途径,来减轻由Al Cl3-和D-半乳糖所诱导产生的损伤。同时我们通过电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）方法分析发现,实验小鼠经给药S-Au@TPM和L-Au@TPM处理后,在体内组织（小肠、肝、脾、肺、肾、脑）中都有纳米抗氧化剂的分布,其中,在小肠中二者的积累较多。在其余器官中,S-Au@TPM的富集量要低于L-Au@TPM,表明小尺寸的S-Au@TPM在体内可以实现较长时间的血液循环,进而达到更加有效的生物利用度。纳米抗氧化剂的富集分布量会随着给药时间的推移而降低,证明它最终会被逐渐的排出体外,避免产生过多的纳米毒性。综上所述,本论文构建的S-Au@TPM和L-Au@TPM具有良好的抗氧化保护作用,可有效抑制细胞体内外AD模型中所引发的系列损伤。S-Au@TPM的抗氧化活性强于L-Au@TPM,这可能是由于小粒径的Au NPs,会与装载的功能性活性肽进行更有效地结合。并且,与大粒径Au NPs相比,小粒径Au NPs更容易穿透细胞膜进入病患组织从而发挥疗效。因此,本论文的研究为开发治疗或预防AD的新型药物提供了新的思路。
师铭咸[5]（2021）在《规模化猪场限位饲养致妊娠母猪慢性应激调查及褪黑素疗效观察》文中进行了进一步梳理慢性应激（Chronic Stress,CS）指刺激持续时间较长,且引起机体反应持续时间也较长的应激。在妊娠期,限位栏饲养会造成母猪CS,导致妊娠母猪免疫能力下降、疾病发病率增加,产仔量减少,产弱仔,仔猪发育不良等,影响养猪业经济利益。由于CS导致免疫能力下降发病机理未明,所以,探究限位饲养导致妊娠母猪CS进而引发免疫能力下降的致病机理,以及探索有效的治疗药物至关重要。研究表明CS可引起脾脏内质网发生未折叠蛋白反应,线粒体、内质网是细胞内两个能够决定细胞命运的细胞器,在病理情况下,细胞发生氧化应激,二者相互靠近,形成线粒体-内质网结构偶联（MAMs）,并在此区域迅速搭建IP3R/GRP75/VDAC1钙离子快速通道,将两个细胞器在结构和功能上紧密连接,以应对外界刺激,但此机制是否参与CS致脾脏损伤病理过程尚未明确。褪黑素（Melatonin,MT）可直接作用于线粒体外膜,减少ROS生成,在抗氧化、免疫及HPA轴调节方面发挥重要作用,故推测MT可通过减少线粒体ROS生成、减弱内质网未折叠蛋白反应、减少MAMs生成以及调节线粒体动力学失衡对CS致脾脏损伤起到保护作用。然后通过猪场CS防治试验,探究MT在缓解限位栏饲养导致妊娠母猪CS中的作用效果。前期猪场试验,对限位饲养妊娠母猪及圈养妊娠母猪进行行为学观察及信息录入,然后进行耳缘静脉采血,检测其血常规指标、HPA轴相关指标、氧化应激相关指标以及免疫相关指标,将结果进行比对分析。为探究CS对免疫系统的影响及解决方式,在实验室阶段,课题组将4组SD孕鼠,C组、CS组、CS+M组（10 mg/kg MT）、CS+A组,采取将大鼠束缚18 d,每天6 h,建立大鼠CS模型,每天在束缚前1 h腹腔注射给药。在第19 d,每组选取6只孕鼠,进行旷场试验,然后进行心脏采血和取样。检测血常规、脾脏结构、HPA轴相关指标、氧化应激相关指标、免疫相关指标、线粒体动力学、内质网应激、线粒体-内质网结构偶联（MAMs）相关因子的m RNA及蛋白的表达情况。为了验证MT对CS导致免疫能力下降的治疗效果,进行猪场CS防治试验。课题组根据前期猪场试验的统计结果,以限位饲养五产妊娠母猪为研究对象,在限位的第21 d（妊娠第50 d）,按照3 mg/d的剂量,将MT添加在早上的饲料里,进行饲喂,连续饲喂21 d,在妊娠的第71 d早上饲喂前,耳缘静脉采血,检测其血常规指标、HPA轴相关指标、氧化应激相关指标以及免疫相关指标,比较MT对限位饲养妊娠母猪造成的CS及免疫功能的影响。试验结果表明:（1）限位饲养妊娠母猪采食量减少,食槽剩余饲料,精神萎靡,反应迟钝,对周边事物失去兴趣,常表现出啃栏、啃槽和无食咀嚼的规癖行为。HPA轴相关指标中,CRF、ACTH和CORT水平显着上升,DA、5-HT水平显着下降,HPA轴激活,表明限位饲养导致妊娠母猪CS。（2）限位饲养导致妊娠母猪CS后,血清中GSH、GSH-Px含量,CAT、SOD、GSH-Px活性显着降低,MDA含量显着升高,表明限位饲养可导致妊娠母猪机体内部发生氧化应激反应。血浆中白细胞数、淋巴细胞数、淋巴细胞百分比降低,中性粒细胞百分比升高,血清CD3、CD4含量显着降低,CD8显着升高,CD4/CD8比值显着降低,表明限位饲养可致妊娠母猪免疫能力下降。（3）CS大鼠在旷场试验中,静止时间显着延长,运动总路程、跨格次数和站立次数显着减少,血清中CORT、CRF和ACTH水平显着升高,DA、5-HT水平显着下降,表明大鼠探索欲降低,HPA轴激活,CS模型造模成功。（4）CS大鼠脾脏GSH、GSH-Px含量显着降低,CAT、SOD活性显着降低,MDA、ROS含量显着升高。给予MT后,GSH含量显着升高,CAT、SOD、GSH-Px活性显着升高,MDA和ROS含量显着降低,表明CS可导致大鼠脾脏发生氧化应激,MT起到保护作用。CS大鼠血液中白细胞、淋巴细胞显着减少,淋巴细胞百分比显着降低,中性粒细胞百分比显着升高,血清CD3含量显着降低,CD4含量显着降低,CD8显着升高,CD4/CD8比值显着降低,给予MT后,逆转了指标异常,表明CS可导致大鼠免疫能力下降,MT起到缓解作用。（5）CS大鼠脾脏显着肿大,脾脏系数显着升高;病理组织学观察显示脾脏结构受损,白髓结构疏松紊乱,中央动脉肿胀,边缘区部分消失,白髓、红髓分界不清;电镜结果显示,脾脏细胞超微结构受损,细胞核固缩浓染,内质网和线粒体肿胀且数量增多,线粒体-内质网结构偶联增多。给予MT后,形态结构恢复正常。表明MT对CS大鼠脾脏结构起到保护作用。（6）CS大鼠脾脏细胞中Drp1、Fis1的m RNA表达量显着升高,Opa1、Mfn1、Mfn2的m RNA表达量显着降低,p-Drp1 S616/Drp1比值显着升高,Fis1的蛋白表达量显着升高,Opa1、Mfn1和Mfn2的蛋白表达量显着降低,给予MT后,逆转了指标异常,表明CS可致大鼠脾脏细胞线粒体动力学失衡,MT对其起到缓解作用。IRE1、ATF6、PERK的m RNA表达量显着升高,GRP78的m RNA表达量无显着变化;p-IRE1a、ATF6a、p-EIF2a的蛋白表达量显着升高,GRP78的蛋白表达量无显着变化。给予MT后,逆转了指标异常,恢复至对照组水平,表明CS可致大鼠脾脏细胞发生未折叠蛋白反应,MT对其起到缓解作用。IP3R、GRP75、VDAC1的m RNA和蛋白表达量显着升高,给予MT后,逆转了指标异常,表明CS可致大鼠脾脏细胞发生线粒体-内质网偶联,MT对其起到缓解作用。（7）限位饲养五产妊娠母猪血清CRF、ACTH和CORT水平显着上升,DA、5-HT水平显着下降,MT逆转了HPA轴相关指标异常,表明MT对限位饲养导致的妊娠母猪CS起到保护作用。（8）限位饲养五产妊娠母猪血清GSH含量、CAT、GSH-Px活力显着降低,SOD含量降低,但无显着差异,MDA含量显着升高。给予MT后,GSH含量显着升高,GSH-Px活性显着升高,其他指标也有一定程度恢复,但无显着性差异。表明MT对限位饲养致五产妊娠母猪机体发生氧化应激具有一定的缓解作用。限位饲养五产妊娠母猪白细胞数显着降低,淋巴细胞数和淋巴细胞百分比显着降低,中性粒细胞百分比显着升高,给予MT后,白细胞数显着升高,中性粒细胞百分比显着下降,淋巴细胞数和淋巴细胞百分比升高,但无差异显着性变化。血清CD3、CD4含量显着降低,CD8含量显着升高,CD4/CD8比值显着降低,给予MT后,各指标均得到一定程度恢复,表明MT可缓解限位饲养导致的妊娠母猪免疫能力下降。结果表明,限位饲养可致妊娠母猪CS,并引起血清CD3、CD4、CD8含量变化,CD4/CD8比值降低,影响机体免疫能力,其中五产妊娠母猪发病率最高,初产妊娠母猪发病率次之。在大鼠CS模型上,MT可抑制大鼠行为学异常、HPA轴紊乱、脾脏组织病理学变化、氧化应激及免疫相关指标异常,且MT可以通过纠正CS大鼠脾脏细胞线粒体动力学失衡、减轻内质网未折叠蛋白反应以及减弱线粒体-内质网结构偶联的方式,来维持大鼠脾脏细胞稳态,从而对CS大鼠脾脏起到保护作用。在猪场MT防治试验中,MT能够抑制限位饲养导致的妊娠母猪CS,且对妊娠母猪免疫相关指标异常起到一定的缓解作用,表明MT是一种具有潜力的缓解限位饲养致妊娠母猪CS以及提高妊娠母猪免疫能力的药物。
刘玥欣[6]（2021）在《基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究》文中研究指明目的:本研究基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽（Velvet antler peptide,VAP）对神经元修复及保护作用,阐释VAP改善轻度认知功能障碍（Mild Cognitive Impairment,MCI）作用机制,为临床鹿茸防治MCI提供依据。方法:本研究利用体内、体外实验,探讨VAP通过调控PI3K/AKT信号通路改善MCI作用机制。1 VAP鉴定及检测利用双缩脲法鉴定VAP理化性质;利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验（SDSPolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）测定VAP分子量;利用柱前衍生化-高效液相色谱法（Precolumn derivatization-High performance liquid chromatography,PD-HPLC）测定VAP不同成分含量。2基于网络药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制利用TCMID数据库、Pubchem数据库筛选鹿茸活性成分及靶点;利用OMIM数据库、Disgenet数据库、Genecards数据库筛选MCI作用靶点;利用Venny 2.1在线作图工具平台筛选鹿茸-MCI作用靶点;利用STRING 11.0蛋白质互作平台构建蛋白-蛋白相互作用（Protein-protein interaction,PPI）网络,利用Cytoscape 3.8.0网络拓扑属性分析软件,基于拓扑分析、聚类分析筛选PPI网络核心靶点;利用Cytoscape 3.8.0网络拓扑属性分析软件构建“中药-成分-靶点-疾病”网络模型,分析核心成分;利用R语言及Bioconductor生物信息软件,进行基因本体论（Gene ontology,GO）富集分析以及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）富集分析,对共同靶点所涉及的生物学过程、主要代谢通路等进行归纳。3基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制采用腹腔注射东莨菪碱法、单侧颈总动脉结扎法分别诱导不同MCI大鼠模型。利用旷场实验、Morris水迷宫实验观察VAP对不同MCI模型大鼠行为学变化的影响;利用苏木精-伊红染色法（Hematoxylin-eosin staining,HE）观察VAP对不同MCI模型大鼠海马区病理学变化的影响;利用ELISA检测VAP对不同MCI模型大鼠血清中SOD、MDA、脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、睾酮（Testosterone,T）、皮质醇（Cortisol）含量变化的影响;利用Western Blot检测VAP对不同MCI模型大鼠海马区PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。4基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制利用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间二级质谱联用（UPLC-Q/TOF-MS）代谢组学技术对由腹腔注射东莨菪碱法复制的MCI模型大鼠脑组织、肾脏进行检测,分析各组间差异代谢物、代谢通路动态变化情况。5基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由冈田酸（Okadaic acid,OA）诱导的受损HT22细胞的作用机制利用OA诱导HT22细胞损伤建立模型,给药后,利用CCK-8法检测HT22细胞活性,WST-1法、可分光光度法检测HT22细胞中超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-PX）活力或含量变化的影响,Western Blot检测HT22细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平。结果:1 VAP鉴定及检测实验中选用的VAP理化性质为蛋白质,分子量约为3.2k Da,由17种氨基酸组成,其中必须氨基酸共有7种,含量为393.39±1.65g/kg,氨基酸总含量为826.55±10.75g/kg,不同成分含量稳定,可用于本实验研究。2基于网络药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制鹿茸中多数活性成分为VAP中的重要构建物质,利用交互网络发现鹿茸活性成分可能通过PI3K/AKT信号通路发挥改善MCI作用,作用机制可能与调控体内神经信号转导、神经元损伤、氧化应激过程、性激素类作用等途径相关,为本研究探讨VAP对MCI的改善作用提供方法与思路。3基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制VAP能够提高不同MCI模型大鼠学习、记忆能力,改善海马区固缩现象,增加不同MCI模型大鼠血清中SOD、BDNF、NGF、VEGF、T、Cortisol含量（P<0.05或P<0.01）,减少MDA含量（P<0.05或P<0.01）,升高Bcl-2、m TOR表达水平（P<0.05或P<0.01）,降低Bad、Bax、Caspase-3蛋白表达水平（P<0.05或P<0.01）,上调PI3K/AKT信号通路的表达（P<0.05或P<0.01）。4基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍作用机制可能与调控脑内叶酸及脂质代谢、环磷酸腺苷能量循环、氨基酸生物合成,以及肾脏中性激素分泌等多种途径相关。5基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由冈田酸（Okadaic acid,OA）诱导的受损HT22细胞的作用机制VAP能够提高受损HT22细胞存活率（P<0.01）,增强受损HT22细胞中SOD、GSH-PX活力（P<0.01）,减少MDA含量（P<0.01）,降低Bad、Bax、Caspase-3蛋白表达水平（P<0.01）,上调PI3K/AKT信号通路的表达（P<0.01）。结论:VAP可能通过“填精补髓”作用调控PI3K/AKT信号通路,拮抗由OA诱导的受损HT22细胞,并提高不同MCI模型大鼠学习、记忆能力,调节肾脏功能、促进神经元细胞生长、增殖与分化,保护中枢神经系统,作用机制可能与调控脑内叶酸及脂质代谢、环磷酸腺苷能量循环、氨基酸生物合成,以及肾脏中性激素分泌等多种途径相关。
李萌茹[7]（2021）在《基于脑组织谷氨酸代谢通路和Nrf2信号通路的黄芩叶抗衰老作用机制研究》文中提出选题依据:衰老过程中,机体内多个组织、器官功能发生退行性变化,对心脑血管、神经退行性等疾病的易感性增加,进而影响老年人的生活质量。其中,脑是受衰老影响最大的器官之一,海马和皮层组织与学习记忆、情绪调节能力密切相关。随着年龄不断增长,脑组织在形态以及神经生化等多方面发生一系列改变后,可引起认知损伤,影响机体的学习记忆能力,进而诱发多种神经退行性疾病的发生,严重者会影响人们的日常生活。因此,深入探索脑衰老机制,从天然产物中筛选具有神经保护作用的活性成分,对于防治与增龄相关的神经退行性疾病以及提高老年人的生活质量具有重大意义。多年生草本植物黄芩以根作为传统药用部位,具有消炎、清除自由基、抗氧化、神经保护等多种药理作用。这类植物主要生长于山西、陕西、山东、河北等地区,其中山西省的黄芩资源极为丰富,占全国产量40%以上,其茎叶生长茂盛,产量极大,在我国北方地区已作为别样茶,使用有近千年的历史,但由于黄芩茎叶还未批准成为新食品原料,目前黄芩茶仍然主要在民间使用。本课题组前期庞溢媛等人对黄芩茎叶的化学成分及抗衰老作用进行研究,发现茎叶的化学成分大多为黄酮类,并具有延缓衰老的作用。冯雪等人基于自然衰老果蝇模型,发现黄芩叶水提物具有良好的抗衰老作用。但是目前对于黄芩叶抗衰老的作用机制尚未阐述清楚。因此,从资源的综合利用角度出发,开展黄芩叶抗衰老作用研究,对于进一步挖掘黄芩叶资源的潜在药理活性具有重要的现实意义。因此,本课题通过LC-MS液质联用技术,分析海马和皮层组织样本中的内源性代谢物变化以及黄芩叶醇提物对代谢物的调节作用,并对涉及的代谢物进行通路富集分析。结合代谢组学结果以及文献调研,选择谷氨酸代谢作为待验证的关键通路,采用试剂盒检测该通路的代谢物及代谢酶的变化。此外,核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2）信号通路是保护脑部免受氧化应激的防御系统中的重要调节剂,并且其下游蛋白的表达能调节某些参与谷胱甘肽合成的相关酶的表达,进而影响谷氨酸合成谷胱甘肽的过程。因此,本研究拟从Nrf2信号通路进一步探索衰老的作用机制以及黄芩叶醇提物对该通路关键蛋白表达的调节作用。综上所述,本研究从谷氨酸代谢通路和Nrf2信号通路两方面深入探讨脑衰老的机制以及黄芩叶醇提物对衰老的改善作用,为黄芩叶资源的进一步开发利用提供实验依据。目的:1.基于D-半乳糖（D-galactose,D-gal）致衰老大鼠模型评价不同剂量黄芩叶醇提物的抗衰老作用;2.基于液质联用（LC-MS）代谢组学技术探讨黄芩叶醇提物对差异代谢物的调节作用,并从代谢通路角度探讨黄芩叶醇提物发挥抗脑衰老作用的作用机制;3.从与关键代谢通路密切相关的信号通路角度出发,探讨黄芩叶醇提物抗脑衰老的作用机制。方法:1.采用连续7周皮下注射高剂量的D-gal建立衰老大鼠模型,并基于该模型评价黄芩叶醇提物的抗脑衰老作用。实验将40只大鼠随机分为4组,空白组、模型组、黄芩叶醇提物低剂量组(生药量0.4g·kg-1)、高剂量组(生药量0.8g·kg-1)。通过水迷宫和旷场实验观察各组大鼠的行为学指标,评判不同剂量的黄芩叶醇提物对衰老大鼠认知能力的改善作用。在此基础上,观察海马组织的病理切片,进一步探讨黄芩叶醇提物对衰老大鼠脑组织的保护作用。2.基于液质联用（LC-MS）技术,对各组大鼠的海马和皮层组织样本进行代谢组学分析,寻找与脑衰老相关的潜在生物标志物以及黄芩叶醇提物调节的差异代谢物,进一步对这些潜在的生物标志物进行通路富集分析,寻找与脑衰老密切相关的关键代谢通路。3.根据海马、皮层代谢组学结果,选择与脑衰老最相关的代谢通路,作为关键代谢通路进行验证。主要对海马和皮层样本中该通路涉及的代谢物含量以及代谢酶活性进行试剂盒测定。4.根据代谢组学结果以及试剂盒定量结果,确定与关键代谢通路密切相关的信号通路。从分子生物学角度出发,采用蛋白免疫印迹技术,分析该信号通路涉及的关键蛋白的表达,深入探讨黄芩叶醇提物对D-gal诱导的衰老大鼠模型海马和皮层组织中关键蛋白的调节作用。结果:1.行为学实验结果表明,连续高剂量注射D-gal诱导的衰老模型大鼠的认知功能受损,而黄芩叶醇提物能显着改善衰老大鼠的学习记忆和自主活动能力,且高剂量的改善效果明显优于低剂量。此外,病理切片结果显示黄芩叶醇提物能改善海马组织神经元损伤。2.海马和皮层组织的代谢组学结果显示,衰老大鼠皮层中有22种差异代谢物发生代谢紊乱,其中不同剂量的黄芩叶醇提物可以回调13种代谢物,主要参与调节苯丙氨酸,酪氨酸和色氨酸的生物合成;谷氨酰胺-谷氨酸代谢等;海马组织中有21种差异代谢物发生代谢紊乱,黄芩叶醇提物可以回调14种代谢物,参与调节丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢;谷氨酰胺-谷氨酸代谢等。在这些代谢通路中,海马和皮层样本中的谷氨酸代谢均发生显着变化。此外,谷氨酸作为一种神经递质,对脑功能和中枢神经系统的发育等具有重要的调节作用。故本研究选择谷氨酸代谢作为验证的关键通路。3.对谷氨酸代谢通路中涉及的关键代谢物的定量验证结果显示,与对照组相比,模型组大鼠的海马（p<0.05）和皮层（p<0.001）组织中谷氨酸含量均显着升高,这与代谢组学的结果一致,而两种组织中谷胱甘肽（p<0.05）含量显着降低,进一步说明该代谢发生代谢紊乱。皮层中半胱氨酸（p<0.01）含量显着降低,而海马中虽有降低趋势,但各组之间无显着性差异。给药黄芩叶醇提物后,海马和皮层组织中的谷氨酸、半胱氨酸以及谷胱甘肽含量出现不同程度的回调,说明黄芩叶能有效改善脑组织中的谷氨酸代谢及谷胱甘肽合成。进一步对谷氨酸代谢通路中涉及的关键酶的活性进行定量,结果显示,与对照组相比,模型组大鼠的皮层中谷氨酰胺酶（Glutaminase,GLS,p<0.01）和谷氨酰胺合成酶（Glutamine synthetase,GS,p<0.001）的酶活性显着降低,推测这两种代谢酶活性降低会影响谷氨酸-谷氨酰胺代谢;此外,皮层（p<0.01）和海马（p<0.05）组织中谷氨酰半胱氨酸连接酶（Glutamylcysteine ligase,GCL）活性均显着降低,提示谷氨酸合成谷胱甘肽代谢紊乱,机体的氧化防御系统紊乱。给药黄芩叶醇提物后,海马和皮层组织中的以上代谢酶活性出现不同程度的回调,说明黄芩叶醇提物可能通过改善代谢酶的活性来影响谷氨酸代谢及谷胱甘肽合成。4.Western bolt结果显示黄芩叶醇提物可显着抑制海马和皮层组织中Keap1蛋白的表达,显着增加Nrf2、血红素氧合酶（Heme oxygenase-1,HO-1）、醌氧化还原酶1（NAD（P）H:quinone oxidoreductase 1,NQO-1）以及谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基GCLC的表达。结论:1.D-gal造模会引起脑衰老,大鼠的认知能力受损。给药黄芩叶醇提物后,能不同程度的改善大鼠的脑衰老。2.黄芩叶醇提物能改善衰老大鼠海马和皮层代谢紊乱。3.黄芩叶醇提物能调节谷氨酸代谢和其下游谷胱甘肽代谢,改善氧化应激。4.黄芩叶醇提物能调节Nrf2信号通路相关蛋白的表达。创新点:1.基于液质联用代谢组学技术,对衰老大鼠海马和皮层的代谢物变化进行分析,探讨黄芩叶醇提物对代谢物及代谢通路的调节作用。对富集的关键代谢通路中涉及的主要代谢物及代谢酶进行试剂盒定量,从代谢通路角度验证代谢组学的结果并深入探讨黄芩叶醇提物的作用机制。2.采用分子生物学手段对与代谢通路相关的信号通路涉及的关键蛋白进行分析,从信号通路角度探讨黄芩叶醇提物的作用机制。
陈逸伦[8]（2021）在《壳寡糖对新生大鼠酒精性神经损伤的缓解作用研究》文中进行了进一步梳理大脑发育期的酒精暴露可以引起一系列中枢神经发育损伤,可能会导致胎儿酒精谱系综合症（Fetal alcohol spectrum disorder,FASD）。酒精暴露对发育中的中枢神经系统造成多种影响包括影响脑容量,损害海马,皮层和小脑等大脑区域的发育,引起脑部氧化应激损伤和炎症反应,引起脑部神经细胞广泛的非正常死亡,并对认知和学习记忆能力产生重要影响。壳寡糖（Chitooligosaccharide,COS）为天然碱性氨基寡糖,由于其良好的水溶性、易降解和极其微小的细胞毒性受到广泛关注。COS具有多种生理活性,如抗氧化、抗炎、免疫调节以及神经保护活性等。COS具有良好的血脑屏障穿透能力,能够直接到达大脑发挥其神经保护作用。本论文探究COS对酒精诱导的新生大鼠神经损伤的缓解作用,为进一步开发利用壳寡糖的神经保护活性提供理论依据。本论文的主要研究内容与结果如下:（1）通过对新生SD大鼠在出生后第5-9天连续进行酒精灌胃处理,建立胎儿酒精谱系综合症模型,酒精造模前分别进行COS干预和二十二碳六烯酸干预,在出生后第21-26天进行行为学实验。通过测定饲养过程中新生大鼠体重、脑重、行为学实验数据,并对新生大鼠脑组织进行病理组织学检查,分析新生大鼠体重增长情况,大脑发育和形态变化以及学习记忆能力状况。结果表明:COS可以缓解酒精暴露导致的新生大鼠体重增长滞缓、减轻酒精对新生大鼠大脑发育造成的损伤;改善酒精暴露导致的新生大鼠大海马区和皮质区神经细胞凋亡与变形;显着降低新生大鼠在Morris水迷宫中逃避潜伏期,提高目标象限停留时间,增加穿越目标平台的次数,改善酒精暴露导致的新生大鼠学习记忆和认知障碍。（2）在新生大鼠胎儿酒精谱系综合症模型中研究了COS对酒精暴露导致的大脑中脑神经营养因子（Brain derived neurotrophic factor,BDNF）和神经递质异常的干预作用。通过测定大鼠脑组织中BDNF、乙酰胆碱（Acetycholine,A-Ch）、乙酰胆碱酯酶（Acetylcholin esterase,A-ch E）水平的变化,分析新生大鼠的中枢神经系统发育环境和神经递质代谢情况。结果表明:COS可以缓解酒精暴露导致的BDNF含量降低,抑制酒精暴露所导致的新生大鼠脑组织中神经递质A-Ch的降低以及A-ch E提高,维持神经信号的正常传递。（3）在新生大鼠胎儿酒精谱系综合症模型中研究了COS对酒精暴露诱导大脑氧化应激损伤的干预作用。通过测定脑组织中谷胱甘肽（Glutathione,GSH）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）水平和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活力、过氧化氢酶（Catalase,CAT）活力以及总抗氧化能力（Total antioxidant capacity,T-AOC）活力、核因子E2相关因子（NF-E2-related factor 2,Nrf2）蛋白表达和P53、氨基末端激酶（Jun N-terminal kinases,JNK）m RNA表达来观察新生大鼠的脑组织氧化损伤情况。结果表明:COS干预可以提高新生大鼠脑组织中GSH水平,降低MDA含量,提高的SOD、CAT、T-AOC活力,抑制P53,JNK在m RNA水平上的表达,显着提高Nrf2的蛋白表达,缓解酒精暴露导致的新生大鼠脑组织中的氧化损伤。以上研究说明COS可能通过抑制P53和JNK的表达和提高Nrf2的表达来抑制酒精暴露所导致的氧化应激,进而缓解发育中新生大鼠脑组织的神经细胞凋亡。（4）在新生大鼠胎儿酒精谱系综合症模型中研究了COS对酒精暴露诱导的炎症损伤的干预作用及机制。通过测定COS干预后新生大鼠脑组织中炎症因子水平的变化,测定炎症介质的表达,探究壳寡糖对酒精诱导造成新生大鼠脑组织炎症损伤的调节作用。结果表明:COS可以降低脑组织中白介素6（Interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）水平,提高IL-10水平;此外,COS可以通过下调IL-1β、IL-4、IL-5、环氧合酶（Cyclooxygenase,COX-2）和诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase,i NOS）m RNA表达,从而缓解酒精暴露诱导的新生大鼠脑组织炎症损伤。（5）在新生大鼠胎儿酒精谱系综合症模型中研究了COS通过影响固有的酒精诱导神经细胞凋亡通路的激活来抑制神经细胞凋亡。结果表明,COS可有效抑制酒精暴露引起的γ-氨基丁酸受体（Gamma-aminobutyric acid receptor,GABAR）激活表达,提高N-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-Methyl-D-Aspartate receptor,NMDAR）的表达。此外,COS干预显着抑制了Cleaved Caspase-3和Caspase-3的表达,抑制了Bax表达的激活和Bcl/2的下调。因此,本研究结果表明COS能够通过调节GABAR、NMDAR和Bcl/2-Bax-Caspase-3信号通路来缓解酒精暴露所导致的新生大鼠脑神经细胞凋亡,缓解新生大鼠的学习记忆与认知障碍。
任小娟[9]（2020）在《肾不藏志不寐的理论及实验研究》文中研究指明目的:（1）探讨肾不藏志不寐论治的理论依据、因机证治和常用安肾志方药。（2）采用D-半乳糖联合对氯苯丙氨酸（PCPA）建立肾不藏志不寐大鼠模型,观察肾不藏志不寐模型大鼠衰老方面、睡眠方面和海马转录组变化,衰老方面包括记忆能力、氧化应激、凋亡基因,睡眠方面包括睡眠时间、脑电图、炎症因子和神经递质。（3）观察远志对肾不藏志不寐大鼠睡眠、神经递质和炎性因子的影响,以及远志对肾不藏志不寐大鼠海马转录组的影响。方方法:（1）收集、归纳和探讨肾不藏志不寐的理论依据和论治方药。（2）将实验动物随机分为空白对照组、D-半乳糖组、对氯苯丙氨酸组、肾不藏志不寐组,采用D-半乳糖120mg/kg/d皮下注射42d联合PCPA 300mg/kg/d腹腔注射3d建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）通过Morris水迷宫（MWM）观察肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力,检测肾不藏志不寐大鼠脑氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）的含量,海马超氧化物歧化酶1（SOD1）、超氧化物歧化酶2（SOD2）、CAT、B淋巴细胞瘤相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3）m RNA的表达,观察肾不藏志不寐大鼠衰老方面的变化。（4）采用戊巴比妥实验观察肾不藏志不寐大鼠睡眠情况,通过脑电图观察大鼠觉醒（Wake）、慢波睡眠I期（SWS1）、慢波睡眠II期（SWS2）、快速动眼睡眠（REMS）和睡眠总时间（TST）,检测肾不藏志不寐大鼠血浆白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量,脑5-羟色胺（5-HT）、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量,海马白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核转录因子-κB（NF-κB）、5羟色胺1A受体(5-HT1AR)、γ-氨基丁酸A受体α1亚型(GABAARα1)、代谢型谷氨酸受体2（m Glu R2）m RNA的表达,观察肾不藏志不寐大鼠进行睡眠方面的变化。（5）对空白对照组和肾不藏志不寐组大鼠海马提取总RNA进行转录组测序和分析。（6）观察远志对肾不藏志不寐大鼠的影响:将实验动物随机分为空白对照组、肾不藏志不寐组、远志低剂量组（0.0875g/kg）、远志中剂量组（0.175g/kg）、远志高剂量组（0.35g/kg）、地西泮组（0.92mg/kg）,通过MWM观察远志对肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力的影响,检测各组大鼠海马5-HT、Glu、GABA的含量,血浆IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。（7）对空白对照组、肾不藏志不寐组、远志中剂量组、地西泮组大鼠海马提取总RNA进行转录组测序和分析。结结果:（1）肾志对寐寤具有调节作用,肾不藏志不寐的主症为夜寐早寤,病位在肾,病因是肾脏虚损,肾志不入于舍是肾不藏志不寐的核心病机。肾不藏志不寐常见临床证型包括肾气不固型、肾精不足型、肾阳虚型、肾阴虚型、肾虚水泛型和肾不纳气型六种证型。远志、刺五加、人参、茯神、五味子、交泰丸、黄连阿胶汤、六味地黄丸、磁朱丸和孔圣枕中丹是治疗肾不藏志不寐常用方药。（2）D-半乳糖120mg/kg/d皮下注射42d联合PCPA 300mg/kg/d腹腔注射3d可以建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）肾不藏志不寐大鼠模型衰老方面的变化:与空白对照组比较,模型大鼠体重减轻,MWM中逃避潜伏期延长、穿台次数减少,脑SOD、CAT、GSH-px含量减少、MDA含量增加,海马SOD1、SOD2、CAT m RNA表达上调,海马Bax、Caspase-3 m RNA的表达上调、Bcl-2 m RNA表达下调。（4）肾不藏志不寐大鼠模型睡眠方面的变化:戊巴比妥实验发现肾不藏志不寐大鼠睡眠潜伏期延长、睡眠时间缩短,肾不藏志不寐大鼠脑电图WAKE增加、SWS1、SWS2、REMS和TST减少,血浆IL-1β、IL-6、TNF-α含量增加,脑5-HT、GABA含量减少、Glu含量增加,海马IL-6、TNF-αm RNA表达上调,海马5-HT1AR、GABAARα1m RNA表达下调、m Glu R2 m RNA表达上调。（5）肾不藏志不寐大鼠海马转录组分析结果:与空白对照组相比,肾不藏志不寐组的差异基因共有1628个,其中上调基因上调887个,下调741个;差异基因的功能涉及神经发育、细胞发育、甘油三酯代谢、核糖体、氧化应激、炎性因子;并与帕金森病、阿尔茨海默病、逆行神经的信号通路、慢性进行性舞蹈病有密切联系。通过组间差异基因GO分析、KEGG Pathway分析、蛋白互作分析以及肾不藏志不寐内涵,筛选肾不藏志不寐组的关键差异基因并进行验证,发现肾不藏志不寐大鼠海马显着差异基因为Gnb3、Faah、Mmp9、Twist1。（6）远志可以提高肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力,增加模型大鼠海马5-HT、GABA的含量、降低Glu的含量,降低血浆IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。（7）药物干预肾不藏志不寐大鼠的海马转录组分析结果:（1）与肾不藏志不寐组相比,远志组的差异基因共有663个,其中上调240个,下调423个;差异基因主要涉及神经发育、昼夜节律调控、细胞凋亡与增殖、氧化磷酸化、能量代谢、免疫调节;并与帕金森病、阿尔茨海默病、慢性进行性舞蹈病、非酒精性脂肪肝、I型糖尿病、哮喘的发生有密切联系。（2）与肾不藏志不寐组相比,地西泮组的差异基因共有1660个,其中上调基因732个,下调基因928个;差异基因主要涉及神经系统发育的调控、氧化磷酸化、神经元凋亡、氧化应激、能量代谢;并与帕金森病、慢性进行性舞蹈病、阿尔茨海默病、非酒精性脂肪肝有密切联系。（3）远志对肾不藏志不寐干预作用的差异基因235个,其中显着治疗作用的基因37个;差异基因的功能涉及神经元发育、γ-氨基丁酸信号通路、细胞生长调控、参与免疫球蛋白介导的免疫应答、能量代谢;并与慢性进行性舞蹈病、帕金森病、阿尔茨海默病、I型糖尿病、非酒精性脂肪肝等有关。（4）地西泮对肾不藏志不寐干预作用的差异基因753个,其中显着治疗作用的基因49个;差异基因涉及中枢神经系统发育、老化、突触的调节、凋亡的调控、多巴胺、糖原、脂肪酸、嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸代谢。并与慢性进行性舞蹈病、帕金森病、阿尔茨海默病、非酒精性脂肪肝、心肌收缩、单纯疱疹病毒感染等有关。（5）肾不藏志不寐与远志、地西泮关联的靶标基因及分子通路分析:通过组间差异基因GO分析、KEGG Pathway分析以及肾不藏志不寐内涵,筛选肾不藏志不寐组、远志组和地西泮组的关键差异基因并进行验证,发现远志有效靶基因为Faim、Pcp2、Elovl6;地西泮有效靶基因为Npr3、Trh;两药共同作用的靶点为BDNF、Gabra6。结结论:（1）肾志与不寐有着密切联系,肾不藏志是肾不藏志不寐的核心病机,补益肾脏、安神定志为肾不藏志不寐的治疗原则,远志是归经入肾的的安肾志药物,具有安神、强志、益肾的功效,是治疗志异常的首选药物。（2）D-半乳糖联合PCPA可以建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）肾不藏志不寐大鼠模型与衰老相关的学习记忆能力、氧化应激、凋亡记忆基因的表达发生了改变,与睡眠相关的睡眠时间、脑电图、神经递质和炎性因子的表达发生了改变。（4）肾不藏志不寐大鼠模型海马存在基因转录水平上的变化,显着差异基因功能涉及神经系统、代谢和炎症等。（5）远志可以改善肾不藏志不寐大鼠的睡眠、调节神经递质、降低炎性因子的表达。（6）远志和地西泮对肾不藏志不寐大鼠海马的神经系统和炎症相关基因具有一定的干预效应,远志更侧重对神经功能相关靶基因的调节。
程蕊[10]（2020）在《基于“嫉妒不孕”理论探讨心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平及早期胚胎发育的影响》文中研究说明目的（1）通过观察不同程度心理应激刺激下雌性小鼠体重、旷场试验及糖水偏好试验,证实心理应激小鼠模型制备成功,促排卵收集卵母细胞,检测卵母细胞内活性氧（ROS）浓度、超氧化物歧化酶2（SOD2）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）m RNA水平,以研究不同程度心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平的影响;（2）小鼠体内受精,收集受精卵进行体外培养,通过检测不同程度心理应激刺激后小鼠早期胚胎2细胞率、8细胞率、囊胚形成率、囊胚孵出率、囊胚分级,以及囊胚凋亡程度,以研究不同程度心理应激对小鼠早期胚胎发育的影响。基于心理应激与中医肝郁理论的紧密联系,为临床从肝郁-心理应激角度治疗女性生殖功能下降提供新思路。方法实验一心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平的研究选取4～5周龄健康雌性未孕的ICR小鼠80只,随机分为4组,即正常组,心理应激强、中、弱刺激组,每组20只。正常组不给予任何干预,实验组按照心理应激模型制备方法,给予不同程度且不可预知性刺激,连续刺激6周。刺激前后分别记录各组小鼠的体重;刺激后各组小鼠在旷场中随机5分钟内小鼠的静止时间、运动时间、运动总距离、中央活动时间、外周活动时间的变化;以及刺激后各组小鼠的糖水偏好指数,以证实心理应激小鼠模型制备成功。造模成功后,对小鼠促排卵获取卵母细胞,采用化学荧光法测定小鼠卵母细胞内ROS浓度,应用实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定卵母细胞内SOD2、CAT、GSH-Px三种抗氧化酶m RNA水平,以研究不同程度心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平的影响。实验二心理应激对小鼠早期胚胎发育的研究根据实验一心理应激小鼠造模成功后,进行体内受精,次日晨检阴栓后收集并处理受精卵,显微镜下观察各组小鼠的受精卵数、2细胞胚胎数、8细胞胚胎数、囊胚数及形态评分,记录各组小鼠早期胚胎2细胞率、8细胞率、囊胚形成率、囊胚孵出率、囊胚分级,采用原位脱氧核苷酸末端转移酶介导的d UTP缺口末端标记法（TUNEL）测定各组小鼠囊胚的凋亡程度,以研究不同程度心理应激对小鼠早期胚胎发育的影响。结果所有实验数据均采用SPSS24.0统计软件进行分析。定量资料以均数±标准差（<sub>x±s）表示,方差齐时组间比较采用单因素方差分析（one-way anova）,组间两两比较采用LSD检验,方差不齐时组间比较采用Welch’s anova,组间两两比较采用Games-Howell检验。等级资料组间比较及组间两两比较采用Kruskal-Wallis H检验。P<0.05为差异有统计学意义。实验一1.刺激前后各组小鼠体重的比较刺激前,4组小鼠体重比较,差异无统计学意义（P>0.05）;刺激6周后,心理应激强、中、弱刺激组小鼠体重均低于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;中、弱刺激组小鼠体重高于强刺激组,差异有统计学意义（P<0.05）。2.刺激6周后各组小鼠旷场试验结果的比较刺激6周后,心理应激强、中、弱刺激组小鼠的静止时间和外周活动时间均高于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;中、弱刺激组小鼠的静止时间低于强刺激组,差异有统计学意义（P<0.05）;刺激6周后,心理应激强、中、弱刺激组小鼠的运动时间、中央活动时间和运动总距离均低于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;中、弱刺激组小鼠的运动时间和运动总距离高于强刺激组,差异有统计学意义（P<0.05）;中刺激组小鼠的中央活动时间高于强刺激组,差异有统计学意义（P<0.05）。3.刺激6周后各组小鼠糖水偏好指数的比较刺激6周后,心理应激强、中、弱刺激组小鼠的糖水偏好指数均低于正常组,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.各组小鼠卵母细胞内ROS浓度的比较心理应激强、中、弱刺激组小鼠卵母细胞内ROS浓度均高于正常组,差异具有统计学意义（P<0.05）;且随着刺激强度的增加,小鼠卵母细胞内ROS浓度升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。5.各组小鼠卵母细胞内SOD2、CAT、GSH-Px表达水平的比较心理应激强、中、弱刺激组小鼠卵母细胞内SOD2、CAT、GSH-Px表达水平均低于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;且随着刺激强度的增加,小鼠卵母细胞内SOD2、CAT、GSH-Px表达水平降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。实验二1.各组小鼠早期胚胎发育的比较4组小鼠的2细胞率、8细胞率和囊胚形成率比较,差异有统计学意义（P<0.05）。两两比较显示,心理应激强刺激组小鼠的2细胞率低于正常组,强、中刺激组小鼠的8细胞率、囊胚形成率均低于正常组,差异均有统计学意义（P<0.05）;中、弱刺激组小鼠的2细胞率、8细胞率、囊胚形成率均高于强刺激组,差异有统计学意义（P<0.05）;4组小鼠的囊胚孵出率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。2.各组小鼠囊胚分级结果的比较4组小鼠的囊胚分级比较,差异有统计学意义（P<0.05）。正常组、心理应激强、中刺激组小鼠的囊胚均以4级为主,弱刺激组小鼠的囊胚以2级和4级为主。两两比较显示,强、中刺激组小鼠的囊胚分级与正常组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。3.各组小鼠囊胚凋亡程度的比较心理应激强、中、弱刺激组小鼠的囊胚凋亡荧光强度均高于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;且随着刺激强度的增加,小鼠的囊胚凋亡荧光强度增强,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论1.心理应激导致小鼠卵母细胞内ROS水平升高,引发卵母细胞内氧化应激反应,损伤卵母细胞的抗氧化系统,降低卵母细胞内SOD2、CAT、GSH-Px三种抗氧化酶的含量,从而损害卵母细胞功能。2.心理应激导致小鼠早期胚胎发育能力减退,降低小鼠早期胚胎2细胞率、8细胞率及囊胚形成率,影响各级囊胚占比,进而影响囊胚发育进程,并增强囊胚凋亡程度,从而使胚胎质量下降。3.心理应激造成卵母细胞氧化应激损伤,降低早期胚胎发育潜能,进而导致不孕症的发生,与中医“嫉妒不孕”学说存在共通性。通过此研究为临床从肝郁-心理应激角度治疗女性不孕症提供新的思路和方法,并为中医“情志致病”理论在现代医学模式下的推广应用提供科学依据。
二、EFFECTS OF CHRONIC STRESS ON THE ACTIVITIES OF SOD, GSH-Px AND MDA LEVEL IN FEMALE RATS' BRAIN（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、EFFECTS OF CHRONIC STRESS ON THE ACTIVITIES OF SOD, GSH-Px AND MDA LEVEL IN FEMALE RATS' BRAIN（论文提纲范文）
（1）CircGLI3竞争性结合miR-339-5p调控VEGFA表达在仔猪空肠氧化应激中的作用研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 引言 |
| 2 氧自由基的概念、来源与产生机制 |
| 2.1 氧自由基的概念 |
| 2.2 氧自由基的来源 |
| 2.3 氧自由基的产生机制 |
| 3 肠道氧化应激机制 |
| 3.1 氧化应激对动物肠道的损伤 |
| 3.2 氧化应激对动物肠道抗氧化体系的影响 |
| 4 断奶仔猪中氧化应激的产生 |
| 5 氧化应激对断奶仔猪的危害 |
| 6 Diquat诱导氧化应激研究进展 |
| 7 非编码RNA的分类 |
| 8 circRNA的研究进展 |
| 9 miRNA的研究进展 |
| 10 ceRNA调控机制的研究进展 |
| 第二章 DQ诱导对长白猪仔猪生长性能的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.2 试验猪的选择与分组 |
| 1.3 试验猪的饲养管理 |
| 1.4 血液抗氧化酶的活性测定 |
| 1.5 试验猪生长性能测定 |
| 1.6 小肠组织结构形态分析 |
| 1.7 小肠组织切片和HE染色 |
| 1.8 数据处理与分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 氧化应激对长白仔猪血清中抗氧化酶活性和丙二醛含量的影响 |
| 2.2 氧化应激对长白仔猪直肠温度和体重的影响 |
| 2.3 氧化应激对长白仔猪肠道结构的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 DQ诱导对于仔猪生长性能的影响 |
| 3.2 DQ诱导对于血清中抗氧化酶活性和肠道组织结构的影响 |
| 第三章 仔猪空肠粘膜全转录组测序 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 RNA的提取与检测 |
| 1.2 转录组测序 |
| 1.3 生物信息学分析工具 |
| 1.4 数据处理与分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 仔猪空肠粘膜高通量测序数据及生物信息学分析 |
| 2.2 荧光定量验证高通量结果 |
| 2.3 miR-339-5p和VEGFA在大蒲莲猪和长白猪组织中的表达分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 DQ诱导引起circRNAs的变化 |
| 3.2 与氧化应激相关的差异表达mRNAs |
| 第四章 ceRNA的构建与调控关系验证 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞系 |
| 1.2 IPEC-J2细胞功能研究的处理分组 |
| 1.3 细胞转染所用的circRNA载体 |
| 1.4 细胞增殖检测相关研究方法 |
| 1.5 蛋白质免疫印迹技术(Western Blot) |
| 1.6 细胞样品RNA提取 |
| 1.7 生物信息学相关工具 |
| 1.8 数据处理与分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 DQ诱导IPEC-J2氧化应激 |
| 2.2 circGLI3对IPEC-J2 细胞的功能影响 |
| 2.3 miR-339-5p对IPEC-J2的功能研究 |
| 2.4 circGLI3与miR-339-5p的亚细胞共定位 |
| 2.5 circGLI3与miR-339-5p结合关系验证 |
| 2.6 miR-339-5p与VEGFA的结合关系验证 |
| 2.7 circGLI3、miR-339-5p与VEGFA的ceRNA机制研究 |
| 2.8 circGLI3与miR-339-5p在IPEC-J2细胞中的功能拯救 |
| 3 讨论 |
| 3.1 细胞氧化应激模型的建立 |
| 3.2 circGLI3的功能研究 |
| 3.3 miR-339-5p的功能研究 |
| 3.4 VEGFA的功能研究 |
| 3.5 ceRNA调控机制的作用 |
| 第五章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（2）基于T-2毒素所致垂体氧化应激及血脑屏障损伤的研究及小分子拮抗剂的发现（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 常用中英文缩略词表 |
| 1 前言 |
| 1.1 立题依据 |
| 1.2 研究进展 |
| 1.2.1 单端孢霉烯族毒素概述 |
| 1.2.2 T-2 毒素概述 |
| 1.2.3 T-2 毒素神经毒性与氧化应激研究进展 |
| 1.2.4 T-2 毒素诱导BBB损伤研究进展 |
| 1.2.5 转录共激活因子PGC-1α与氧化应激和BBB损伤的研究进展 |
| 1.2.6 基于PGC-1α的激动剂的筛选 |
| 1.3 研究内容和目标 |
| 1.3.1 研究内容 |
| 1.3.2 研究目标 |
| 2 T-2 毒素对大鼠大脑和垂体的毒性作用研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 药物与试剂 |
| 2.1.2 试剂配制 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.1.4 试验动物 |
| 2.1.5 动物分组与试验设计 |
| 2.1.6 观测指标 |
| 2.1.7 qRT-PCR检测相关基因的mRNA表达 |
| 2.1.8 Western blot方法测定蛋白表达水平 |
| 2.1.9 HE染色切片观察 |
| 2.1.10 TEM观察 |
| 2.1.11 免疫组织化学 |
| 2.1.12 T-2 毒素检测方法 |
| 2.1.13 大脑T-2 毒素提取方法 |
| 2.1.14 数据处理 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 临床观察 |
| 2.2.2 T-2 毒素对大鼠大脑和垂体的病理学损伤 |
| 2.2.3 脑和垂体超微结构观察 |
| 2.2.4 自噬相关基因表达 |
| 2.2.5 凋亡相关基因表达 |
| 2.2.6 大脑中T-2 毒素含量的检测 |
| 2.3 讨论 |
| 3 PGC-1α 在 T-2 毒素引起的 GH3 细胞氧化应激中的作用 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 细胞株 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 试剂配制 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.1.5 细胞复苏、传代和冻存 |
| 3.1.6 利用siRNA干扰PGC-1α或 Tfam基因表达 |
| 3.1.7 细胞内氧自由基检测 |
| 3.1.8 抗氧化酶SOD活性检测 |
| 3.1.9 细胞GSH-Px含量检测 |
| 3.1.10 qRT-PCR检测相关基因的m RNA表达 |
| 3.1.11 Western blot方法测定蛋白表达水平 |
| 3.1.12 T-2 毒素检测方法 |
| 3.1.13 细胞T-2 毒素提取方法 |
| 3.1.14 数据处理 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 细胞内外T-2 毒素的浓度 |
| 3.2.2 T-2 毒素引起GH3 细胞氧化应激 |
| 3.2.3 T-2 处理GH3 细胞后对PGC-1α和 Tfam表达的影响 |
| 3.2.4 PGC-1α干扰对下游基因及GH3 细胞氧化应激的影响 |
| 3.2.5 Tfam干扰对GH3 细胞氧化应激的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 4 PGC-1α 在 T-2 毒素引起的 hBMEC 细胞毒性中的作用 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 细胞株 |
| 4.1.2 质粒 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.1.4 试剂配制 |
| 4.1.5 主要仪器 |
| 4.1.6 细胞复苏、传代和冻存 |
| 4.1.7 CCK-8 法检测T-2 毒素和PGC-1α抑制剂SR-18298对h BMEC细胞活力的影响 |
| 4.1.8 h-pc DNA3.1(+)-PGC-1α过表达载体的构建 |
| 4.1.9 h-pc DNA3.1(+)-PGC-1α过表达载体转染到hBMEC细胞中 |
| 4.1.10 间接免疫荧光试验 |
| 4.1.11 细胞跨膜电阻测定 |
| 4.1.12 细胞荧光素钠透过试验 |
| 4.1.13 qRT-PCR检测相关基因的mRNA表达 |
| 4.1.14 Western blot方法测定蛋白表达水平 |
| 4.1.15 数据处理 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 T-2 毒素对HBMEC细胞毒性 |
| 4.2.2 T-2 毒素对体外BBB模型的损伤作用研究 |
| 4.2.3 PGC-1α在 T-2 毒素引起的h BMEC细胞BBB损伤中的作用 |
| 4.3 讨论 |
| 5 中药小分子化合物激活PGC-1Α在 T-2 毒素和LPS引起的血脑屏障损伤中的作用 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 细胞株 |
| 5.1.2 质粒 |
| 5.1.3 主要试剂 |
| 5.1.4 试剂配制 |
| 5.1.5 主要仪器 |
| 5.1.6 细胞复苏、传代和冻存 |
| 5.1.7 双荧光素酶报告基因试验 |
| 5.1.8 启动子活性研究 |
| 5.1.9 细胞跨膜电阻测定 |
| 5.1.10 细胞荧光素钠透过试验 |
| 5.1.11 试验动物 |
| 5.1.12 动物分组与试验设计 |
| 5.1.13 HE染色切片观察 |
| 5.1.14 免疫组织化学 |
| 5.1.15 组织荧光素钠透过试验 |
| 5.1.16 qRT-PCR检测相关基因的mRNA表达 |
| 5.1.17 数据处理 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 qRT-PCR筛选PGC-1α激活剂 |
| 5.2.2 双荧光素酶报告基因试验筛选直接激活PGC-1α的小分子化合物 |
| 5.2.3 小分子化合物作用的核心启动子区域的确定 |
| 5.2.4 3-131在T-2 毒素和LPS毒性引起的体内外Na F含量升高中的作用 |
| 5.2.5 3-131 在T-2 毒素和LPS毒性引起的细胞紧密性降低中的作用 |
| 5.2.6 3-131 在T-2 毒素和LPS毒性引起的脑组织损伤中的作用 |
| 5.3 讨论 |
| 6 全文总结 |
| 6.1 本研究的主要结果 |
| 6.2 本研究的创新点 |
| 6.3 本研究的不足之处与进一步工作计划 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（3）脱油葵花籽缓解慢性应激小鼠5-羟色胺转化异常及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略语对照表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 色氨酸代谢与5-羟色胺功能 |
| 1.1.1 色氨酸代谢 |
| 1.1.2 5-HT功能 |
| 1.2 慢性应激 |
| 1.2.1 慢性应激和5-HT功能 |
| 1.2.2 慢性应激与炎症反应 |
| 1.2.3 慢性应激与肠道菌群 |
| 1.2.4 慢性应激与代谢组 |
| 1.3 国内外研究现状 |
| 1.4 葵花籽概述 |
| 1.5 立题意义和研究内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验材料与试剂 |
| 2.1.3 实验主要设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 葵花籽基本成分测定 |
| 2.2.2 葵花籽水解氨基酸测定 |
| 2.2.3 脱油葵花籽的制备 |
| 2.2.4 动物分组及饲养 |
| 2.2.5 慢性不可预知温和应激 |
| 2.2.6 糖水偏好实验 |
| 2.2.7 悬尾实验 |
| 2.2.8 强迫游泳实验 |
| 2.2.9 旷场实验 |
| 2.2.10 高架十字迷宫实验 |
| 2.3 指标测定 |
| 2.3.1 组织及样品收集 |
| 2.3.2 血浆氨基酸含量的测定 |
| 2.3.3 海马组织生化指标的测定 |
| 2.3.4 肝脏和皮层组织氧化还原相关指标的测定 |
| 2.3.5 血浆炎症因子和皮质酮的测定 |
| 2.3.6 血浆黏膜屏障相关指标的测定 |
| 2.3.7 结肠内容物短链脂肪酸的测定 |
| 2.3.8 回肠组织病理学切片 |
| 2.3.9 实时荧光定量PCR |
| 2.3.10 结肠内容物16S r DNA高通量测序分析 |
| 2.3.11 小鼠海马组织广泛靶向代谢组的检测 |
| 2.3.12 小鼠结肠内容物广泛靶向代谢组的检测 |
| 2.4 数据处理 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 葵花籽基本成分组成 |
| 3.1.1 不同品种葵花籽蛋白和氨基酸组成 |
| 3.1.2 葵花籽的主要组成成分 |
| 3.2 脱油葵花籽对小鼠生长性能和行为活动的影响 |
| 3.2.1 脱油葵花籽对小鼠体重的影响 |
| 3.2.2 脱油葵花籽对小鼠快感缺失的影响 |
| 3.2.3 脱油葵花籽对小鼠静止不动时间的影响 |
| 3.2.4 脱油葵花籽对小鼠自主活动及探究行为的影响 |
| 3.2.5 脱油葵花籽对小鼠焦虑样行为的影响 |
| 3.2.6 讨论 |
| 3.2.7 小结 |
| 3.3 脱油葵花籽对小鼠生化指标的影响 |
| 3.3.1 血浆氨基酸水平 |
| 3.3.2 海马组织生化指标 |
| 3.3.3 小鼠肝脏氧化还原状态 |
| 3.3.4 小鼠皮层氧化还原状态 |
| 3.3.5 血浆炎症因子水平 |
| 3.3.6 小鼠血浆皮质酮水平 |
| 3.3.7 讨论 |
| 3.3.8 小结 |
| 3.4 脱油葵花籽对小鼠肠黏膜屏障的影响 |
| 3.4.1 小鼠肠黏膜屏障和相关基因表达 |
| 3.4.2 回肠H&E染色 |
| 3.4.3 小结 |
| 3.5 行为学、色氨酸代谢与生化指标相关性分析 |
| 3.6 脱油葵花籽对小鼠结肠菌群的影响 |
| 3.6.1 稀释曲线和Rank-Abundance曲线 |
| 3.6.2 α多样性分析 |
| 3.6.3 β多样性分析 |
| 3.6.4 基于门水平的肠道菌群分析 |
| 3.6.5 基于科属水平的肠道菌群分析 |
| 3.6.6 结肠内容物SCFA含量 |
| 3.6.7 结肠菌群与生化指标相关性分析 |
| 3.6.8 小结 |
| 3.7 脱油葵花籽对小鼠海马代谢组的影响 |
| 3.7.1 海马代谢物的多变量统计学分析 |
| 3.7.2 代谢通路和相关性分析 |
| 3.7.3 代谢差异物分析 |
| 3.7.4 小结 |
| 3.8 脱油葵花籽对小鼠结肠内容物代谢组的影响 |
| 3.8.1 结肠内容物代谢物的多变量统计学分析 |
| 3.8.2 代谢通路和相关性分析 |
| 3.8.3 代谢差异物分析 |
| 3.8.4 结肠菌群和代谢组内源性代谢物相关性分析 |
| 3.8.5 小结 |
| 3.9 预防作用及机制总结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 |
（4）Au@TPM的构建及抗阿尔兹海默症活性作用的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 阿尔茨海默症 |
| 1.1.1 阿尔兹海默症概述与发展趋势 |
| 1.1.2 阿尔兹海默症的发病机制 |
| 1.1.3 阿尔兹海默症的建模药物 |
| 1.1.4 阿尔兹海默症治疗药物的应用进展 |
| 1.2 金纳米粒子 |
| 1.2.1 金纳米粒子的特异性 |
| 1.2.2 金纳米粒子在生物医药领域中的应用 |
| 1.3 生物活性肽 |
| 1.3.1 生物活性肽的概述 |
| 1.3.2 功能性玉米肽 |
| 1.3.3 生物活性肽的治疗优势 |
| 1.4 立题依据与研究内容 |
| 第二章 Au@TPM纳米抗氧化剂的构建与表征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 S-Au@TPM抗氧化剂的构建与表征 |
| 2.3.2 L-Au@TPM抗氧化剂的构建与表征 |
| 2.4 实验结果与讨论 |
| 2.4.1 S-Au@TPM抗氧化剂的合成表征结果 |
| 2.4.2 L-Au@TPM抗氧化剂的合成表征结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 Au@TPM对L-谷氨酸诱导AD细胞模型的活性作用及相关机制的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.2.4 试剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 PC12 低分化细胞的培养 |
| 3.3.2 Au@TPM对 PC12 低分化细胞作用48 小时的形态学检测 |
| 3.3.3 L-谷氨酸对体外细胞模型建立的最适给药浓度筛选 |
| 3.3.4 盐酸多奈哌齐作为阳性对照药对PC12 低分化细胞最适给药剂量的筛选 |
| 3.3.5 s-TPM作为阴性对照药对PC12 低分化细胞最适给药浓度的筛选 |
| 3.3.6 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导体外AD模型的细胞活力变化影响 |
| 3.3.7 细胞凋亡形态的分析检测 |
| 3.3.8 细胞内LDH含量的检测 |
| 3.3.9 细胞内Ca~(2+)内流浓度的检测 |
| 3.3.10 细胞内线粒体跨膜电位的检测 |
| 3.3.11 细胞内MDA含量的检测 |
| 3.3.12 细胞内CAT含量的检测 |
| 3.3.13 细胞内ROS含量的测定 |
| 3.3.14 统计学分析 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 Au@TPM诱导PC12 低分化细胞作用48 小时的形态学观察 |
| 3.4.2 L-谷氨酸对PC12 低分化细胞体外建模的最适给药浓度结果 |
| 3.4.3 盐酸多奈哌齐作为阳性对照药对PC12 低分化细胞最适给药浓度的筛选结果 |
| 3.4.4 s-TPM作为阴性对照药对PC12 低分化细胞最适给药浓度的筛选结果 |
| 3.4.5 Au@TPM抑制由L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞损伤的活力变化结果 |
| 3.4.6 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞凋亡形态的影响 |
| 3.4.7 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞LDH的影响 |
| 3.4.8 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞Ca~(2+)内流的影响 |
| 3.4.9 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞线粒体跨膜电位的影响 |
| 3.4.10 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞中MDA的影响 |
| 3.4.11 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞中CAT的影响 |
| 3.4.12 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞中ROS的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 Au@TPM对 Al Cl_3与D-半乳糖联合建立AD小鼠模型的神经保护作用及相关机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.2.4 试剂的配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 阿尔兹海默症模型小鼠的建立和各组给药办法 |
| 4.3.2 实验小鼠给药后的体重指标检测 |
| 4.3.3 Morris水迷宫检测 |
| 4.3.4 自主活动实验 |
| 4.3.5 疲劳转棒行为学实验 |
| 4.3.6 实验各组小鼠的样本收集处理 |
| 4.3.7 乙酰胆碱(ACh)含量在下丘脑及血清中的检测 |
| 4.3.8 乙酰胆碱转移酶(Ch AT)含量在下丘脑及血清中的检测 |
| 4.3.9 乙酰胆碱酯酶(Ach E)含量在下丘脑及血清中的检测 |
| 4.3.10 Au@TPM对 AD模型小鼠脑组织中MDA含量的影响 |
| 4.3.11 超氧化物歧化酶(SOD)在下丘脑及血清中含量的检测 |
| 4.3.12 Au@TPM对 AD模型小鼠脑组织中CAT含量的影响 |
| 4.3.13 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)在下丘脑及血清中含量检测 |
| 4.3.14 Western Blot的检测分析 |
| 4.3.15 Au@TPM的体内生物分布研究 |
| 4.3.16 数据统计处理 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 各组实验小鼠给药后对体重指标的影响 |
| 4.4.2 Au@TPM改善实验小鼠水迷宫行为的结果 |
| 4.4.3 Au@TPM对实验小鼠疲劳转棒的影响 |
| 4.4.4 Au@TPM改善实验小鼠自主活动行为的结果 |
| 4.4.5 Au@TPM对 AD模型小鼠下丘脑及血清中ACh的检测结果 |
| 4.4.6 Au@TPM对 AD模型小鼠下丘脑及血清中Ch AT的检测结果 |
| 4.4.7 Au@TPM对 AD模型小鼠下丘脑及血清中Ach E的检测结果 |
| 4.4.8 Au@TPM抑制AD模型小鼠脑内MDA的含量 |
| 4.4.9 Au@TPM上调AD模型小鼠下丘脑及血清中SOD的含量 |
| 4.4.10 Au@TPM上调AD模型小鼠脑内CAT的含量 |
| 4.4.11 Au@TPM上调AD模型小鼠下丘脑及血清中GSH-Px的含量 |
| 4.4.12 Au@TPM对 AD模型小鼠脑组织中氧化应激信号通路相关蛋白表达的影响 |
| 4.4.13 Au@TPM的体内生物分布影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）规模化猪场限位饲养致妊娠母猪慢性应激调查及褪黑素疗效观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 动物限位饲养的相关概述 |
| 1.1.1 限位饲养导致相关疾病的研究概况 |
| 1.1.2 限位饲养导致母猪发生慢性应激的评价标准 |
| 1.2 慢性应激相关概述 |
| 1.2.1 慢性应激研究概况 |
| 1.2.2 慢性应激相关实验模型的建立 |
| 1.3 脾脏慢性应激的相关研究 |
| 1.3.1 脾脏的结构及功能 |
| 1.3.2 慢性应激与脾脏 |
| 1.3.3 慢性应激模型中脾脏的免疫机制研究 |
| 1.3.4 与脾脏相关的抗慢性应激药物的研发 |
| 1.4 细胞内线粒体与内质网相关机制研究 |
| 1.4.1 线粒体动力学 |
| 1.4.2 内质网应激 |
| 1.4.3 线粒体-内质网结构偶联 |
| 1.5 褪黑素相关概述 |
| 1.5.1 褪黑素在HPA轴调节方面的作用 |
| 1.5.2 褪黑素在抗氧化方面的作用 |
| 1.5.3 褪黑素在免疫调节方面的作用 |
| 1.6 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要药品与试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 母猪试验分组及给药方法 |
| 2.2.2 限位饲养母猪的状态及行为学观察 |
| 2.2.3 限位饲养母猪的血液样品采集 |
| 2.2.4 限位饲养母猪的血常规检测 |
| 2.2.5 限位饲养母猪的血清HPA轴相关指标检测 |
| 2.2.6 限位饲养母猪的血清氧化应激相关指标检测 |
| 2.2.7 限位饲养母猪的血清免疫相关指标检测 |
| 2.2.8 大鼠试验分组及模型建立 |
| 2.2.9 大鼠旷场试验 |
| 2.2.10 大鼠的血液及组织样品采集 |
| 2.2.11 大鼠的脾脏系数检测 |
| 2.2.12 大鼠的血常规检测 |
| 2.2.13 大鼠的脾脏组织病理学观察 |
| 2.2.14 大鼠的血清HPA轴相关指标检测 |
| 2.2.15 大鼠的脾脏氧化应激相关指标检测 |
| 2.2.16 大鼠的脾脏免疫相关指标检测 |
| 2.2.17 大鼠的脾脏超微结构电镜观察 |
| 2.2.18 大鼠的脾脏RNA提取和基因表达检测 |
| 2.2.19 大鼠的脾脏蛋白样品的制备及蛋白表达检测 |
| 2.3 数据统计与分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 限位与妊娠母猪主要状态 |
| 3.2 限位栏中妊娠母猪的状态观察 |
| 3.3 限位妊娠母猪的血常规检测结果 |
| 3.4 限位妊娠母猪的血清HPA轴相关指标检测结果 |
| 3.5 限位妊娠母猪的血清氧化应激相关指标检测结果 |
| 3.6 限位妊娠母猪的血清免疫相关指标检测结果 |
| 3.7 限位饲养中妊娠母猪发生慢性应激情况统计结果 |
| 3.8 MT干预CS大鼠行为学测试结果 |
| 3.9 MT干预CS大鼠脾脏图片及脾脏系数 |
| 3.10 MT干预CS大鼠血常规检测结果 |
| 3.11 MT干预CS大鼠脾脏组织病理观察结果 |
| 3.12 MT干预CS大鼠血清HPA轴相关指标检测结果 |
| 3.13 MT干预CS大鼠脾脏氧化应激相关指标检测结果 |
| 3.14 MT干预CS大鼠血清免疫相关指标检测结果 |
| 3.15 MT干预CS大鼠脾脏组织超微结构的观察结果 |
| 3.16 MT干预CS大鼠脾脏组织线粒体动力学相关指标检测结果 |
| 3.16.1 MT干预CS大鼠脾脏组织线粒体动力学相关基因检测结果 |
| 3.16.2 MT干预CS大鼠脾脏组织线粒体动力学相关蛋白检测结果 |
| 3.17 MT干预CS大鼠脾脏组织内质网应激相关指标检测结果 |
| 3.17.1 MT干预CS大鼠脾脏内质网应激相关基因检测结果 |
| 3.17.2 MT干预CS大鼠脾脏内质网应激相关蛋白检测结果 |
| 3.18 MT干预CS大鼠脾脏组织MAMs相关指标检测结果 |
| 3.18.1 MT干预CS大鼠脾脏组织MAMs相关基因检测结果 |
| 3.18.2 MT干预CS大鼠脾脏组织MAMs相关蛋白检测结果 |
| 3.19 猪场CS防治试验结果 |
| 3.19.1 MT缓解五产妊娠母猪CS血常规检测结果 |
| 3.19.2 MT缓解五产妊娠母猪CS血清HPA轴相关指标检测结果 |
| 3.19.3 MT缓解五产妊娠母猪CS血清氧化应激相关指标检测结果 |
| 3.19.4 MT缓解五产妊娠母猪CS血清免疫相关指标检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 限位饲养可致妊娠母猪CS |
| 4.2 限位饲养可致妊娠母猪发生氧化应激 |
| 4.3 限位饲养可致妊娠母猪免疫功能障碍 |
| 4.4 CS大鼠模型的建立及药物浓度的选择 |
| 4.5 MT对CS大鼠脾脏结构形态、病理组织学以及超微结构的影响 |
| 4.6 MT对CS大鼠脾脏氧化应激相关指标的影响 |
| 4.7 MT对CS大鼠血常规及免疫相关指标的影响 |
| 4.8 MT对CS大鼠脾脏线粒体动力学相关指标的影响 |
| 4.9 MT对CS大鼠脾脏内质网应激相关指标的影响 |
| 4.10 MT对CS大鼠脾脏线粒体-内质网偶联相关指标的影响 |
| 4.11 MT对猪场限位饲养五产妊娠母猪CS的影响 |
| 5 结论 |
| 5.1 特色与创新之处 |
| 5.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（6）基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 第一章 VAP鉴定及检测 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 基于网路药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第四章 基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 数据处理 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第五章 基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由OA诱导的受损HT22细胞的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（7）基于脑组织谷氨酸代谢通路和Nrf2信号通路的黄芩叶抗衰老作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词中英文对照表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 立题背景和依据 |
| 1.2 研究内容、技术路线图和创新点 |
| 1.2.1 研究内容 |
| 1.2.2 技术路线图 |
| 1.2.3 创新点 |
| 第二章 文献综述 |
| 2.1 衰老的研究现状 |
| 2.2 衰老与氧化应激 |
| 2.2.1 基于代谢通路角度探讨衰老脑组织氧化应激的防御机制 |
| 2.2.2 基于信号通路角度探讨衰老脑组织氧化应激的防御机制 |
| 2.3 谷氨酸代谢通路和Nrf2信号通路在衰老过程中的作用 |
| 2.3.1 谷氨酸代谢和谷胱甘肽合成在衰老过程中的作用 |
| 2.3.2 Nrf2信号通路和谷胱甘肽合成在衰老过程中的作用 |
| 第三章 基于LC-MS代谢组学的黄芩叶醇提物抗脑衰老作用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和仪器 |
| 3.2.1 植物材料 |
| 3.2.2 实验动物 |
| 3.2.3 实验试剂 |
| 3.2.4 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 黄芩叶醇提物的制备 |
| 3.3.2 造模与给药 |
| 3.3.3 行为学测试 |
| 3.3.4 样本收集与组织病理学检查 |
| 3.3.5 样本制备 |
| 3.3.6 LC-MS检测条件 |
| 3.3.7 LC-MS/MS数据处理 |
| 3.3.8 统计学处理 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 黄芩叶醇提物对衰老大鼠行为学的影响 |
| 3.4.2 黄芩叶醇提物对衰老大鼠海马组织病理学的影响 |
| 3.4.3 基于LC-MS/MS的皮层和海马组织代谢组学研究 |
| 3.4.4 黄芩叶醇提物对衰老大鼠脑组织中代谢通路的影响 |
| 3.5 小结与讨论 |
| 第四章 黄芩叶醇提物调控脑组织谷氨酸代谢通路的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和仪器 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 脑组织中谷氨酸代谢通路关键代谢物的测定 |
| 4.3.2 脑组织中谷氨酸代谢通路关键代谢酶的测定 |
| 4.3.3 脑组织中氧化应激指标的测定 |
| 4.3.4 统计学处理 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 黄芩叶醇提物对脑组织中谷氨酸代谢通路关键代谢物的影响 |
| 4.4.2 黄芩叶醇提物对脑组织中谷氨酸代谢通路关键代谢酶的影响 |
| 4.4.3 黄芩叶醇提物对脑组织中氧化应激指标的影响 |
| 4.5 小结与讨论 |
| 第五章 黄芩叶醇提物调控Nrf2信号通路的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料和仪器 |
| 5.2.1 材料 |
| 5.2.2 仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 蛋白免疫印迹分析 |
| 5.3.2 抗原抗体反应 |
| 5.3.3 蛋白检测及分析 |
| 5.3.4 数据处理 |
| 5.4 结果 |
| 5.4.1 黄芩叶醇提物对Nrf2/keap1蛋白表达的影响 |
| 5.4.2 黄芩叶醇提物对Nrf2/keap1通路下游相关蛋白的影响 |
| 5.5 小结与讨论 |
| 5.5.1 小结 |
| 5.5.2 讨论 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 研究内容总结 |
| 6.2 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简况及联系方式 |
（8）壳寡糖对新生大鼠酒精性神经损伤的缓解作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略语对照表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 酒精暴露与神经损伤的研究进展 |
| 1.1.1 酒精及其代谢物对神经系统的影响 |
| 1.1.2 酒精代谢影响神经系统的作用机制 |
| 1.1.3 酒精暴露与胎儿神经损伤与发育 |
| 1.1.4 胎儿酒精谱系综合症的治疗与干预研究现状 |
| 1.2 壳寡糖神经保护活性研究进展 |
| 1.2.1 壳寡糖吸收与大脑屏障 |
| 1.2.2 壳寡糖对体内外神经细胞的保护作用 |
| 1.2.3 壳寡糖的抗氧化和抗炎活性 |
| 1.3 立题意义 |
| 1.4 研究内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料及仪器 |
| 2.1.1 主要原料与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物分组和给药方法 |
| 2.2.2 新生大鼠体重及脑器官指数的测定 |
| 2.2.3 行为学实验(Morris水迷宫) |
| 2.2.4 新生大鼠脑组织HE染色及TUNEL染色 |
| 2.2.5 新生大鼠脑组织中BDNF与神经递质检测 |
| 2.2.6 新生大鼠脑组织中氧化还原状态检测 |
| 2.2.7 新生大鼠脑组织中炎性因子检测 |
| 2.2.8 RT-PCR检测基因表达 |
| 2.2.9 Western Blot检测蛋白表达 |
| 2.2.10 数据处理与统计方法 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 壳寡糖对新生大鼠生长发育状况以及学习与记忆能力的影响 |
| 3.1.1 壳寡糖对新生大鼠体重增长情况和脑器官指数的影响 |
| 3.1.2 壳寡糖对新生大鼠学习记忆与空间认知能力的影响 |
| 3.1.3 壳寡糖对新生大鼠脑组织病理学切片影响 |
| 3.2 壳寡糖对新生大鼠脑组织中脑神经营养因子与神经递质的影响 |
| 3.2.1 壳寡糖对新生大鼠脑组织中脑神经营养因子水平的影响 |
| 3.2.2 壳寡糖对新生大鼠脑组织中A-c H、A-ch E的影响 |
| 3.3 壳寡糖对新生大鼠脑组织氧化应激反应的影响 |
| 3.3.1 壳寡糖对新生大鼠脑组织中GSH和 MDA水平的影响 |
| 3.3.2 壳寡糖对新生大鼠脑组织中SOD、CAT和 T-AOC活力的影响 |
| 3.3.3 壳寡糖对新生大鼠脑组织中P53、JNK、Nrf2 信号分子的影响 |
| 3.4 壳寡糖对新生大鼠脑组织炎症反应的影响 |
| 3.4.1 壳寡糖对新生大鼠脑组织中炎性因子含量的影响 |
| 3.4.2 壳寡糖对新生大鼠脑组织中炎症介质基因表达的影响 |
| 3.5 壳寡糖对新生大鼠脑组织中 NMDAR、GABAR 和 Bcl/2-Bax-Caspase-3信号通路的影响 |
| 3.5.1 壳寡糖对新生大鼠脑组织中GABAR和 NMDAR的影响 |
| 3.5.2 壳寡糖对新生大鼠脑组织中Bcl/2-Bax-Caspase-3 信号通路的影响 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ:附图 |
| 附录Ⅱ:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 |
（9）肾不藏志不寐的理论及实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 肾不藏志不寐理论研究 |
| 1 肾、志的含义及两者之间的关系 |
| 2 肾藏志对寐寤的调节作用 |
| 3 肾不藏志不寐的因机证治 |
| 4 常用安肾志的方药 |
| 5 小结 |
| 第二部分 肾不藏志不寐大鼠模型研究 |
| 研究一 肾不藏志不寐大鼠氧化应激、凋亡基因、炎性因子和神经递质的实验研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 研究二 肾不藏志不寐大鼠海马转录组学研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 安肾志药物远志对肾不藏志不寐大鼠镇静促眠作用的实验研究 |
| 研究一 远志对肾不藏志不寐大鼠神经递质和炎性因子的影响 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 研究二 远志对肾不藏志不寐大鼠作用的海马转录组学研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 失眠大鼠模型的建立及中药治疗对氯苯丙氨酸致失眠模型大鼠的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（10）基于“嫉妒不孕”理论探讨心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平及早期胚胎发育的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 技术路线图(一) |
| 技术路线图(二) |
| 实验一 心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验操作 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 心理应激对小鼠早期胚胎发育的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验操作 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 心理应激与女性自然生育力及辅助生殖技术结局的研究进展 |
| 1 心理应激与女性自然生育力的相关性 |
| 2 心理应激与辅助生殖技术的相关性 |
| 3 心理应激对女性生殖内分泌的影响机制 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、EFFECTS OF CHRONIC STRESS ON THE ACTIVITIES OF SOD, GSH-Px AND MDA LEVEL IN FEMALE RATS' BRAIN（论文参考文献）
- [1]CircGLI3竞争性结合miR-339-5p调控VEGFA表达在仔猪空肠氧化应激中的作用研究[D]. 李志鑫. 山东农业大学, 2021(01)
- [2]基于T-2毒素所致垂体氧化应激及血脑屏障损伤的研究及小分子拮抗剂的发现[D]. 郭璞. 华中农业大学, 2021
- [3]脱油葵花籽缓解慢性应激小鼠5-羟色胺转化异常及机制研究[D]. 卢肖蒙. 江南大学, 2021(01)
- [4]Au@TPM的构建及抗阿尔兹海默症活性作用的机制研究[D]. 张峻榕. 吉林大学, 2021(01)
- [5]规模化猪场限位饲养致妊娠母猪慢性应激调查及褪黑素疗效观察[D]. 师铭咸. 东北农业大学, 2021
- [6]基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究[D]. 刘玥欣. 长春中医药大学, 2021(01)
- [7]基于脑组织谷氨酸代谢通路和Nrf2信号通路的黄芩叶抗衰老作用机制研究[D]. 李萌茹. 山西大学, 2021
- [8]壳寡糖对新生大鼠酒精性神经损伤的缓解作用研究[D]. 陈逸伦. 江南大学, 2021(01)
- [9]肾不藏志不寐的理论及实验研究[D]. 任小娟. 新疆医科大学, 2020(02)
- [10]基于“嫉妒不孕”理论探讨心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平及早期胚胎发育的影响[D]. 程蕊. 天津中医药大学, 2020(04)